丹酚酸B对肿瘤坏死因子α损伤大鼠微血管内皮细胞的影响

目的:观察丹酚酸B(SalB)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)损伤大鼠微血管内皮细胞(CMEC)的影响。方法:采用CMEC的体外培养技术,建立TNF-α损伤的模型,观察乳酸脱氢酶(LDH)活性、内皮素(ET)及丙二醛(MDA)含量的变化以及SalB的保护作用。结果:SalB可显着降低LDH活性及MDA含量,有减少ET分泌的趋势。结论:SalB对TNF-α损伤的CMEC具有直接保护作用,其作用可能与其稳定细胞膜、抗脂质过氧化有关。     

丹酚酸B和丹参酮ⅡA不同配比对肿瘤坏死因子α损伤大鼠心脏微血管内皮细胞的影响

目的 观察不同配比的丹酚酸B(SalB)、丹参酮ⅡA(TanⅡA)对体外肿瘤坏死因子α(TNF—α)损伤大鼠心脏微血管内皮细胞(CMEC)的影响。方法 采用CMEC体外培养技术，建立TNF—α损伤模型，以细胞活力，细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)释放、一氧化氮(NO)合成、内皮素(ET)分泌、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的变化为评价指标，观察SalB和TanⅡA不同配比(10：0，8：2，5：5，2：8，0：10)对TNF-α损伤CMEC的保护作用。结果 SalB和TanⅡA(5：5)组明显提高细胞活力，SalB和TanⅡA(8：2)组显著降低LDH释放水平，TanⅡA促进NO合成、降低ET分泌以及抗氧化的作用最好。结论 SalB和TanⅡA的各配比组均能明显改善细胞的损伤，最佳配比根据检测指标的不同而不同。     

丹酚酸B对内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的:研究丹酚酸B对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用,并探讨其对HUVECs CD54表达和中性粒细胞黏附率的影响.方法:以H2O2为损伤剂,观察丹酚酸B对HUVECs培养上清中LDH、NO、MDA含量的影响,并利用免疫组化方法和显微计数法观察该药对H2O2存在下CD54表达和中性粒细胞黏附率的影响.结果:丹酚酸B可剂量依赖性地减少H2O2所致内皮细胞LDH外漏和MDA生成,并提高NO释放,还能有效抑制H2O2存在下CD54表达和增加中性粒细胞黏附率.结论:丹酚酸B具有减轻H2O2所致内皮细胞的氧化性损伤,降低血管内皮细胞表面细胞黏附分子表达和抑制中性粒细胞黏附的作用,这一作用可能是丹酚酸B抗心肌缺血/再灌注损伤的作用机制之一.     

茯苓酸抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活

【摘要】目的 探讨茯苓酸（PA）对过氧化氢（H2O2）诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及增殖的影响。方法 体外培养小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3,随机分为NC组（正常培养细胞）、H2O2组（H2O2浓度为100 μmol/L）、H2O2+PA 10 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为10 μmol/L）、H2O2+PA 20 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为20 μmol/L）、H2O2+PA 40 μmol/L组（H2O2浓度为100 μmol/L,PA浓度为40 μmol/L）。采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH Px）、活性氧（ROS）的水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase 3）的表达量。结果 与NC组比较,H2O2组细胞存活率及CAT、SOD、GSH Px的水平显著降低（P＜005）,LDH、MDA、ROS的水平显著升高（P＜005）,细胞凋亡率与Cleaved caspase 3蛋白水平显著升高（P＜005）;与H2O2组比较,H2O2+PA 10 μmol/L组、H2O2+PA 20 μmol/L组、H2O2+PA 40 μmol/L组细胞存活率及CAT、SOD、GSH Px的水平显著升高（P＜0.05）,LDH、MDA、ROS的水平显著降低（P＜005）,细胞凋亡率与Cleaved caspase 3蛋白水平显著降低（P＜005）。结论 茯苓酸可抑制H2O2诱导的脑微血管内皮细胞凋亡及促进细胞存活。     

丹酚酸A对实验性肺纤维化大鼠的保护作用研究

目的观察丹酚酸A对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的保护作用及可能机制。方法气管单次给予博来霉素注射液复制大鼠肺纤维化模型,第2天开始给予丹酚酸A,连续28天,记录体重与一般体征变化;处死大鼠,测定血清自由基、肺功能及观察组织透射电镜等情况。结果造模后给予丹酚酸A可改善肺纤维化大鼠一般体征状况;提高血清SOD、GSH-Px活性和降低MDA含量;改善肺功能;减轻肺泡炎症,缩小肺泡间隔宽度;电镜观察发现给予肺纤维化大鼠丹酚酸A后,胶原纤维生成减少,Ⅱ型肺泡上皮细胞增生减弱。结论丹酚酸A对博来霉素诱导的实验性肺纤维化有一定的保护作用,其机制可能与丹酚酸A抗氧化作用有关。     

同型半胱氨酸对大鼠脑微血管内皮细胞抑制的实验研究

目的通过培养的大鼠脑微血管内皮细胞(BMVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响。方法将培养的BMVEC分成两大组,将其与不同浓度的Hcy(50、200μmol/L和1、2 mmol/L)和(或)无CuSO4(4μmol/L)共同培养18 h,分别利用噻唑蓝、细胞苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察BMVEC细胞的生长及凋亡情况。结果BMVEC在CuSO4的协同下与不同浓度的Hcy培养18 h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过1 mmol/L的Hcy对BMVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加。结论高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长。     

丹酚酸B对AGEs诱导高脂内皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨丹酚酸B对糖基化终末产物（AGEs）诱导高脂内皮细胞凋亡的保护作用。方法：以AGEs和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）联合作用诱导人脐静脉内皮细胞凋亡,通过hochest 33258染色,观察不同浓度丹酚酸B（10-4、2×10^-4mol/L）作用不同时间（12、24、36、48、72h）,对内皮细胞凋亡的影响。结果：研究表明丹酚酸B能够明显抑制AGEs诱导高脂内皮细胞凋亡,并有一定剂量效应性和时间效应性。结论：提示丹酚酸B对防治糖尿病合并动脉粥样硬化具有一定作用。     

丹蒌片对Aβ1-40致脑微血管内皮细胞损伤模型活性的影响

目的:观察丹蒌片对β淀粉样蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)致脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMEC)损伤模型活性的影响。方法:培养BMEC,用Aβ_(1-40)造成BMEC损伤,加入不同剂量的丹蒌片含药血清,6 h、12 h、24 h后用CCK8染色法检测细胞活性,并检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的漏出量。结果:与正常对照组比较,模型组细胞活性降低,细胞培养上清液中LDH释放量增加(P0.01)。与模型组比较,12 h后各剂量丹蒌片含药血清组细胞活性显著升高,12 h细胞活性高于24 h的细胞活性(P0.05);丹蒌片含药血清各组细胞培养上清液中LDH水平降低,12 h上清液中LDH水平显著低于6 h、24 h(P0.05);高剂量、中剂量含药血清组细胞上清液LDH水平显著降低(P0.05)。结论:丹蒌片能提高Aβ_(1-40)致BMEC损伤后细胞的活性,减少细胞LDH的漏出量,起到保护脑微血管内皮的作用。     

总丹酚酸对小鼠和大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察总丹酚酸（Sal)对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法：采用小鼠和大鼠脑缺血再灌注模型。结果：在小鼠和大鼠全脑缺血再灌注模型上,Sal10,20mg/kg iv及Sal5,10mg/kgiv可显著提高脑组织乳酸脱氢酶（LDH）及超氧化物歧化酶（SOD）活性,明显降低丙二醛（MDA）含量。在大鼠局灶性脑缺血2h再灌注24h模型上,Sal5,10mg/kgiv可明显缩小梗死灶面积,改善神经功能缺损,并显著抑制缺血脑组织中LDH和SOD活性降低,减少MDA的地量产生。结论：Sal对小鼠和大鼠脑缺血再灌注损伤有显著保护作用,其机制与其抗氧自由基作用有关。     

加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞保护作用研究

目的：观察加减清营汤对H2O2损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养内皮细胞ECV304,用380μmol／LH2O2损伤细胞,大鼠随机分成正常组、模型组、加减清营汤组和阳性药物对照组,用血清药理学方法给药,检测各项指标。结果：与模型组比较,加减清营汤含药血清组的NOS活性、T-AOC显著提高,MDA含量、LDH活力显著降低（P〈0．05）。结论：加减清营汤可降低H202对ECV304的损伤程度,具有明显的保护作用,其机理可能与维持细胞膜结构的完整性、提高抗氧化能力以及提高NOS活性等途径有关。     

大鼠吸入性损伤血清对肺微血管内皮细胞的损伤作用

肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）体外培养法的建立对于研究吸入性损伤具有重要意义。以大鼠肺为材料，采用弹力蛋白酶消化法以获取ＰＭＶＥＣ，培养５ｄ～６ｄ后即可融合成片，经Ⅷ因子相关抗原染色鉴定，纯度可达９０％以上。以此为模型，加入大鼠烟雾吸入伤血清，可使ＰＭＶＥＣ分泌功能明显变化，血清ＮＯ及ＬＤＨ增高，同时细胞内ｃＡＭＰ含量降低，［Ｃａ２＋］ｉ水平明显升高，即信息传递系统受损。提示ＰＭＶＥＣ是吸入性损伤中肺损伤的重要靶细胞     

川芎嗪对体外血管内皮祖细胞氧化损伤的保护作用

目的: 研究川芎嗪对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用.方法: 采用密度梯度离心法获取兔外周血单个核细胞,EBM-2完全培养基诱导分化,并对培养7 d的细胞进行免疫荧光及免疫细胞化学方法分析.实验分为正常对照组、H2O2组及H2O2川芎嗪预处理组,以600 μmol*L-1H2O2诱导EPCs氧化应激损伤,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,测定细胞浆中丙二醛(MDA)含量和细胞培养液上清总超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)活力.结果: 兔外周血单个核细胞诱导培养7 d,Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)内吞和荆豆凝集素(FITC-UEA-1)双染色阳性,免疫细胞化学显示培养细胞CD31/CD34/VEGFR-2阳性,证实为EPCs;流式细胞分析显示,H2O2组细胞凋亡率明显高于对照组(P＜0.01),川芎嗪预处理组明显抑制H2O2 诱导的EPCs凋亡(与H2O2组比较,P＜0.05);H2O2可导致 EPCs MDA、LDH含量明显增加和SOD活性下降,而用川芎嗪预处理可明显抑制EPCs的氧化应激反应(与H2O2组比较,P＜0.05).结论: 川芎嗪对H2O2 诱导的EPCs氧化应激损伤有一定的保护作用,其机理可能与其抗凋亡和抗脂质过氧化有关.     

大鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法

目的建立一种简便可靠的脑微血管内皮细胞的培养方法.方法新生SD乳鼠脑皮质经匀浆、过滤、消化和差速贴壁等方法对大鼠脑微血管内皮细胞进行原代培养及传代培养,对培养的细胞进行形态学观察,并用Ⅷ因子相关抗原进行免疫细胞化学鉴定.结果培养的细胞呈单层贴壁生长,约7～9d后呈典型的"铺路石"征象,免疫细胞化学鉴定证实为内皮细胞.结论此种脑微血管内皮细胞培养方法的建立为体外研究脑血管疾病提供了可靠的手段.     

槟榔多酚对大鼠肺微血管内皮细胞低氧损伤的保护作用

目的：探究槟榔多酚对大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）低氧损伤的保护作用。方法：采用氧化应激指标丙二醛和超氧化物歧化酶筛选肺部缺氧损伤细胞模型最适条件;采用细胞计数试剂盒法筛选槟榔多酚最适给药剂量。将PMVEC分为常氧对照组、模型对照组和槟榔多酚组,采用BCA法检测蛋白浓度并测定PMVEC中的氧化应激水平,蛋白质印迹法检测炎症和凋亡相关蛋白的表达,免疫荧光染色法检测闭合蛋白和闭锁小带1等紧密连接蛋白的表达,Transwell小室实验检测跨内皮细胞膜电阻,罗丹明荧光染料检测PMVEC屏障的通透性。结果：1%氧浓度培养PMVEC细胞48 h后成功构建肺部缺氧损伤细胞模型;20μg/mL的槟榔多酚可以显著逆转缺氧损伤细胞模型中PMVEC的存活率下降以及氧化应激水平的升高（均P<0.05）;槟榔多酚对于低氧诱导下PMVEC中炎症相关蛋白核因子κB(NF-κB)和核因子E2相关因子（Nrf）2的上调有显著抑制作用（均P<0.05）;槟榔多酚可以下调低氧诱导下PMVEC中凋亡相关蛋白胱天蛋白酶（caspase）3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的表达（均P<0.05）,从而减轻低...     

谷氨酰胺增强氧化应激时肺微血管内皮细胞热休克蛋白70的表达

目的研究谷氨酰胺（Gln）对氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVEC）热休克蛋白（HSP）70表达的影响。方法采用体外培养Wistar大鼠PMVEC,分为阳性对照组（G组）、生理盐水组（PS组）、谷氨酰胺组（Gln组）、过氧化氢加生理盐水组（H₂O₂+PS组）和过氧化氢加谷氨酰胺组（H₂O₂+Gln组）。Western blotting检测PMVEC HSP70的表达情况,分别记录平均灰度值。结果与PS组（9.05±1.51）相比,Gln组（40.28±10.19）和H₂O₂+PS组（43.89±10.32）PMVEC HSP70表达分别增高4.5倍和5倍（P＜0.01）;与H₂O₂+PS组相比,H₂O₂+Gln组（65.59±14.53）HSP70表达进一步增高,约为PS组的7倍,接近G组（70.56±12.23）表达水平。结论谷氨酰胺可增强氧化应激状态下体外培养肺微血管内皮细胞HSP70表达。     

阿魏酸钠对培养大鼠大脑微血管内皮细胞缺氧损伤的保护作用

目的：研究缺氧对脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells,BMEC）的损伤及阿魏酸钠（Sodium ferulate）对它的保护作用.方法：取体外培养的大鼠脑皮质微血管内皮细胞,置于95%N2和5%CO2的缺氧盒中12h造成内皮细胞缺氧.用透射电镜观察BMEC的超微结构变化.用内皮细胞线粒体活性和内皮细胞死亡率来评价内皮细胞活力,并用乳酸脱氢酶（LDH）漏出量作为评价损伤的指标.结果：体外培养大鼠脑皮质BMEC缺氧12h后,细胞超微结构损伤,细胞存活率及线粒体活性明显降低,LDH释放量显著增加.阿魏酸钠可显著对抗缺氧对BMEC的损伤.结论：阿魏酸钠对大鼠脑皮质BMEC缺氧损伤具有保护作用.     

欧芹素乙对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察欧芹素乙 (imperatorin,IMP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用和对缺氧 /复氧诱导人脐静脉内皮细胞ECV30 4凋亡的影响。 方法 :栓线法阻断大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ;以 L onga5分制评分标准对实验大鼠作行为评分 ,以图像分析仪测算实验鼠大脑梗死面积 ,细胞凋亡采用碘化丙啶染色方法 ,流式细胞术检测 ECV30 4细胞的凋亡。 结果 :IMP可显著减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经损伤症状 (行为评分 ) ,缩小脑梗死面积 ;IMP可剂量依赖性降低缺氧 /复氧引起的 ECV30 4细胞的凋亡。 结论 :IMP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ;IMP降低缺氧 /复氧引起的内皮细胞凋亡是其保护机制之一。     

黄芪对培养心肌细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的 :探讨中药黄芪 (Astragalus,AS)对培养的心肌细胞氧化性损伤的保护作用及其机制 .方法 :体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分为 3组 :①对照组 (Normal组 ) ;②H2 O2组 :H2 O2 (0 .2mmol/L)与心肌细胞共育 1h ;③黄芪 +H2 O2组 :黄芪处理心肌细胞 30min后 ,加入H2 O2 与心肌细胞共育1h .心肌细胞损伤以细胞线粒体活性和乳酸脱氢酶 (LDH)活性来表示 ,同时检测心肌细胞超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量 ,均以比色法检测 .结果 :H2 O2 处理细胞后可使细胞LDH活性显著增高 (2 7± 3) μkat/L ,细胞线粒体活性明显下降 0 .36± 0 .0 4 ,SOD活性较正常细胞显著下降(2 31± 2 2 ) μkat/L ,MDA含量显著增高 (1 6± 3) μmol/L .黄芪处理细胞后可显著提高心肌细胞线粒体活性 0 .5 0± 0 .0 5 ,降低LDH活性 (1 6 .4± 1 .8) μkat/L ;并提高细胞抗氧化能力 ,表现为较H2 O2 处理组 ,SOD活性增高 (331± 4 0 ) μkat/L ,MDA含量下降 (1 0 .7± 2 .4 ) μmol/L .结论 :黄芪可对抗H2 O2 对心肌细胞的损伤 ,其机制与提高心肌细胞抗氧化损伤能力有关     

哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢损伤血管内皮细胞的保护作用

目的探讨哈巴苷及哈巴俄苷对过氧化氢（H2O2）损伤人血管内皮细胞的保护作用及其机制。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVECS）,将生长良好的3代～5代细胞用于实验。实验分四组：对照组、H2O2组、哈巴苷干预组及哈巴俄苷干预组,光镜观察细胞形态,用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）检测细胞活力;取细胞上清液,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量。结果哈巴苷及哈巴俄苷干预均使H2O2损伤的HUVECS形态趋于正常,活力增强,细胞膜损伤减轻,减少细胞LDH及MDA产生。结论哈巴苷及哈巴俄苷能对抗H2O2引起的损伤,保护血管内皮细胞。     

组织块法培养大鼠肺微血管内皮细胞的综合鉴定

目的 为组织块法培养的大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells,RPMVECs)建立合理可靠的多指标综合鉴定方案.方法 采用外周肺组织贴块法培养RPMVECs,抽取组织块进行切片观察,以大鼠肺动脉平滑肌细胞和人脐静脉内皮细胞为对照,对培养细胞进行CD34、植物凝集素BSI、Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学鉴定,通过光镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构.结果 组织切片显示组织块源于外周肺组织,CD34免疫细胞化学染色阳性,植物凝集素BSI结合试验阳性,而Ⅷ因子相关抗原染色阴性,透射电镜未见Weibel-Palade小体.结论 Ⅷ因子相关抗原和Weibel-Palade小体并非RPMVECs鉴定的理想指标,联合应用外周肺组织切片、CD34和植物凝集素BSI三指标为组织块法培养的RPMVECs提供了一个简单易行、合理、可靠的综合鉴定方案.