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套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患… 总被引:3,自引:0,他引:3
为了更准确,简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性肝病患者的病因,建立了套式和免疫套式聚合酶链反应(PCR)检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的技术,结合丙型肝炎病毒(HCV)感染指标的检测,对HBsAg阴性肝病患者的病因进行了研究,发现套式PCR能将单次PCR的敏感性稳定地提高1000倍;免疫套式PCR可检测到0.1~0.01pg/L水平,检测HBsAg阴性肝硬化22例(A组) 相似文献
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聚合酶链反应检测乙型肝炎患者肝外组织中的乙型肝炎病毒DNA 总被引:21,自引:0,他引:21
应用巢式聚合酶链(PCR)技术对18例石蜡包埋的胆囊、肾、脾、肾上腺、心、睾丸、胰腺及肝脏组织的乙型肝炎病毒(HBV)DNA进行了检测,并与其免疫组化及原位杂交方法作比较。二组引物检测的结果表明:肝组织中均有HBV感染,其中5例有HBV的复制。肝外组织中HBV检出率分别为胆囊85.7%、75.0%、肾72.7%、肾上腺66.7%、心脏55.6%、睾丸55.6%和胰腺54.5%,但均未检测出HBV的复制,PCR检测发现与免疫组化及原位杂交结果基本一致。HBV可以感染肝外组织但并不在这些组织中复制的发现可以解释受感染的肝外组织可以作为肝外感染源,但并不引起这些脏器出现明显的病理变化。 相似文献
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用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清… 总被引:13,自引:0,他引:13
为了解乙型肝炎(乙肝)疫苗接种后不产生抗-HBs的原因,作者用套式聚合酶链反应(PCR)技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后15例不产生抗-HBs和20例产生抗-HBs者血清的HBV DNA,同时用Abbott试剂检测血清的HBeAg。结果发现,不产生抗-HBs者的15例中有6例(40%)第2次PCR扩增HBV DNA为阳性,其中3例(50%)为HBeAg阳性,产生抗-HBs者的20例其血清HBV 相似文献
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聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA 总被引:4,自引:0,他引:4
应用巢式聚合酶链反应(PCR)技术检测了18例乙型肝炎(乙肝)患者石蜡包埋心、肝组织中的HBV DNA,并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明:在肝组织中均有HBV感染,其中5例有HBV复制。心肌组织中HBV DNA的检出率为55.6%,不存在HBV的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变,如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及PCR检测结果无相关性 相似文献
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三种乙型肝炎病毒DNA定量聚合酶链反应试剂比较及其假阴性原因分析 总被引:1,自引:0,他引:1
乙型肝炎e抗原(HBeAg)是乙型肝炎病毒(HBV)复制的一个标志,乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性、HBeAg阳性、抗-HBc阳性的患者体内HBV DNA亦较高。有报道所有该类标本均可检测到HBV DNA,且绝大部分(83.33%)的HBV DNA滴度高于10^6拷贝/ml。然而,我们在对临床标本进行HBV DNA定量检测中发现,相当一部分该类血清标本不能检测到HBV DNA或检测结果低于试剂盒检测下限。为了排除所用试剂盒缺陷造成的可能,我们对目前国内医疗机构常用的三种HBV DNA荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂进行了比较与分析。 相似文献
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利用免疫学和聚合酶链反应(PCR)方法,对35例血液透析(血透)、14例腹膜透析(腹透)患者的84份血清进行了检测。血透组抗-HCV阳性率82.9%,HCVRNAPCR阳性率51.4%;腹透组抗-HCV阳性率仅7.1%,HCVRNAPCR均阴性。HBsAg和(或)HBeAg在二组的阳性率分别为25.7%和21.4%;HBVDNAPCR阳性率分别为45.7%和64.2%。透析患者HCV和HBV感染率显著高于一般人群。血、腹透两组HCV感染率相差非常显著,血透患者抗-HCV和HCVRNAPCR阳性高于腹透患者,表明血透过程在丙型肝炎传播方面起重要作用。作者还采用多重和套式PCR方法,将HBVDNA和HCVRNA在合并的逆转录和PCR扩增系统中,连续进行逆转录和第一轮多重PCR扩增,再进行第二轮多重PCR,具有特异、敏感、简便、快速和经济等特点,适于临床应用。 相似文献
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应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用. 相似文献
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多重和套式聚合酶链反应检测血液,腹膜透析患者血清中HBV D… 总被引:3,自引:0,他引:3
利用免疫学和聚合反应(PCR)方法,对35例血液透析(血透),14例腹膜透析(腹透)患者的84份血清进行了检测。血透组抗-HCV阳性率82.9%,HCV RNA PCR阳性率51.4%;腹透组抗-HCV阳性率仅7.1%,HCV RNA PCR均阴性。HBsAg和(或)HBeAg在二组的阳性率分别为25.7%和21.4%;HBVDNAPCR阳性率分别为45.7%和64.2%。透析患者HCV和HBV感 相似文献
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目的 :了解 HBe Ag阴性慢性乙型肝炎 (乙肝 )血清乙肝病毒 (HBV) DNA含量及与临床的关系。方法 :用免疫荧光定量 PCR法检测 35 0例 HBe Ag阴性慢性乙肝 HBV DNA含量。结果 :HBV DNA总阳性率为 5 8% ,临床分型中 HBV携带者阳性率为 2 5 .6 % ,慢性活动性肝炎 (慢活肝 )、肝硬化及肝癌阳性率为 82 .8%~ 10 0 %。前者DNA含量为 10 ( 4.4 2± 1 .35) 拷贝 / m l,后三者为 10 5.2 5~ 10 5.88拷贝 / m l(P <0 .0 1) ,慢活肝又高于肝硬化及肝癌 (P <0 .0 5 ) ,阳性者血清丙氨酸转氨酶 <10 0 U / L者 DNA含量较低 (P <0 .0 5 )。结论 :HBe Ag阴性慢性乙肝多数仍存在病毒活动性复制 ,其病情活动程度与血清 DNA含量有关 相似文献
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聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
应用PCR对171例肝病血清检测结果,HBVDNA阳性率59.1%,EliSA检测HBsAg阳性率43.27%,二者比较有显著性差异(P〈0.01),HBsAg(+)/HBeAg(+)组HBVDNA阳性率79.5%,而HBsAg(+)抗-HBe(+)组主57.9%,HBsAg(-)/抗-HBs(+)组,HBVDNA阳性率36.8%。 相似文献
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定室间质量评价 总被引:1,自引:1,他引:1
乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测是国内开展最早也最为普遍的临床聚合酶链反应(PCR)检验项目,其定性、定量检测分别对处于HBV感染“窗口期”的患者确诊、乙型肝炎患者抗病毒治疗的动态观察,具有重要的应用价值。卫生部临床检验中心(以下简称部中心)从1998年开始对全国的HBV DNA临床PCR测定进行室间质量评价,近年PCR测定技术的临床应用发展颇快,使用的方法主要有实时荧光PCR和PCR-ELISA两种方法,临床测定正在进入规范化的轨道。 相似文献
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目的探讨荧光定量聚合酶链反应法定量检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸的临床应用价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应定量检测1962例乙型肝炎患者血清HBV DNA水平并与血清HBV标志物进行比较,并对35例乙型肝炎患者在拉米夫定治疗前后血清HBV DNA含量及相关指标作动态观察。结果乙型肝炎患者HBVDNA定量范围在6.79×102~1.95×109拷贝/毫升之间,在HBeAg阳性患者,其检出率和定量拷贝数较高。拉米夫定治疗后患者外周血HBV DNA载量下降明显。结论荧光定量PCR法是一种相对准确、灵敏度高、特异性强的定量检测HBV DNA的技术,对乙型肝炎诊断、指导、临床用药和疗效监测方面具有实用价值。 相似文献
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目的 应用反向聚合酶链反应(inverse polymerase chain reaction,IPCR)法检测肝细胞癌(HCC)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA整合。方法 提取手术切除石蜡包埋入肝癌组织中DNA,根据IPCR原理,选用HBV DRl区无酶切位点的限制性内切酶酶切,通过连接反应形成环化DNA分子,以此作为模板进行PCR扩增得到已知序列的旁侧序列。琼脂糖凝胶电泳观察PCR扩增产物片段。结果 19例HCC标本中有14例检出整合型HBV DNA,2例同时存在游离型HBV DNA。结论 IPCR可以准确测定肝细胞中HBVDNA的整合。该方法为研究HBV DNA在肝细胞中的整合机制提供一简单、快速、经济途径。 相似文献
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