两种筛查宫颈肿瘤方法的比较:ELISA检测宫颈脱落细胞p16~(INK4a)蛋白与FQ-PCR检测8种共用型HPV DNA

目的:探讨用ELISA方法检测p16INK4a蛋白在宫颈脱落细胞的表达,筛查宫颈癌。方法:选取宫颈组织活检标本1523例,活检前用棉拭子从标本中获取宫颈脱落细胞。用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测宫颈活检组织中8种亚型HR-HPV DNA,用ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a蛋白的表达。结果:HR-HPV DNA阳性率在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌中,分别为91.9%,92.8%,94.4%,91.7%,其阳性率与宫颈病变严重程度无显著相关(P=0.893);非肿瘤性病变人群HR-HPV DNA阳性率16.3%;FQ-PCR方法的特异性83.7%。ELISA方法检测宫颈脱落细胞中p16INK4a表达用于筛查宫颈癌及CIN的总体敏感性和特异性分别为87.4%和92.4%,且宫颈病变级别越高,p16INK4a表达越强(r=0.773,P0.001)。结论:FQ-PCR检测HR-HPV DNA用于筛查宫颈癌及CIN,敏感度高但特异性较低;ELISA检测p16INK4a蛋白表达具有较高的灵敏度和特异性,有望成为宫颈癌新的筛查方法在临床推广使用。     

p16^INK4a基因与宫颈癌

p16^INK4a基因在细胞周期调控RB通路中发挥着负反馈调节作用，决定着细胞周期的正常运转和细胞增殖、分化及凋亡，并与多种人类肿瘤的发生、发展、治疗与预后密切相关。综述p16^INK4a基因及其蛋白的表达在宫颈癌中的研究现状，发现p16^INK4a基因甲基化是宫颈癌发生的早期事件，p16^INK4a在HPV阳性的宫颈上皮内瘤样病变，宫颈腺上皮内病变，宫颈鳞癌及腺癌（ADCA）中呈高表达，且随着病变加重表达增强，而正常宫颈上皮、间质、化生和炎性细胞p16^INK4a表达呈阴性，这一特性使得其在检测宫颈癌及其癌前病变、预测病变进展及判断预后等方面有潜在的临床应用价值。     

细胞块技术检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达对评价宫颈病变的意义

目的探讨将细胞块技术应用于宫颈细胞学诊断并检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达,对评价宫颈病变的意义.方法采用链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)法,检测79例细胞块上的宫颈脱落细胞及相应的宫颈活检组织中p16INK4A表达.结果在宫颈脱落细胞中,p16INK4A在正常、未明确意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)阳性表达率分别为0%、18.18%、46.43%、89.66%、100%.在相应活检组织中,p16INK4A在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC中阳性表达率分别为0%、61.90%、87.50%、100%、100%.p16INK4A在宫颈脱落细胞和组织中表达的符合率为87.34%,宫颈脱落细胞p16INK4A免疫组化染色使检出宫颈高度病变的敏感性提高了21.95%.结论细胞块技术可用于宫颈细胞学诊断,检测宫颈脱落细胞p16INK4A表达可以提高宫颈高度病变的检出率,减少漏诊率.     

宫颈癌及癌前病变中p16^INK4A与HPV的关系

高危型人乳头瘤状病毒（HR—HPV）持续感染宫颈后，通过其基因产物干扰正常的细胞周期调节，导致细胞的连续增殖与恶性转化。p16^INK4A基因产物是细胞周期素依赖性激酶抑制物（CDKI），负性调节细胞周期，由于HPVE7蛋白阻断了p16^INK4A的细胞周期调节级联，因此在HR—HPV感染的宫颈癌及癌前病变组织中出现p16^INK4A过表达。p16^INK4A与HPV联合监测将提高宫颈癌筛查的有效性，有助于宫颈癌的诊断与鉴别诊断。     

HPV16 18 E6蛋白在宫颈脱落细胞中的表达研究

目的 探讨人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16和(或)18 E6蛋白在宫颈脱落细胞中的表达与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)的关系.方法 采用免疫印迹(Western blot)方法检测2003年6月至2005年6月中国医科大学第一附属医院CSCC 30例、CIN 52例和16例正常宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6蛋白的表达.结果 在上述各组宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6表达阳性率分别76.7%(23/30)、51.9%(27/52)和12.5%(2/16);其中在CSCC宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6明显高于正常对照组的表达(P＜0.01);CINⅡ、Ⅲ组的表达也显著高于对照组(P＜0.05),而CINⅠ组与正常对照组比较差异无显著性意义(P＞0.05).结论 宫颈脱落细胞标本存在HPV16和(或)18 E6癌基因的表达.宫颈脱落细胞中HPV16和(或)18 E6癌基因的过度表达与CSCC及CINⅡ、Ⅲ密切相关.     

年轻女性子宫颈上皮内瘤变2级组织中p16^INK4a的表达及意义

目的探讨年轻女性宫颈上皮内瘤变（CIN）2级组织p16^INK4a的表达与病变级别及转归的相关性。方法选取2010年1—12月在北京大学第一医院妇产科门诊就诊的年龄≤35岁、经病理诊断的CIN2患者36例,按照年龄将其分为〈30岁组（12例）和30-35岁组（24例）,采用免疫组化法对其宫颈活检组织进行p16^INK4a检测,并采用两个结果判断标准对患者的转归进行随访。结果CIN2组织中p16^INK4a阴性、弱阳性和阳性（〉50％）的表达率分别为11．1％（4／36）、8．3％（3／36）和80．6%（29／36）;美国下生殖道鳞状上皮病变项目（LAST projet）分流标准p16^INK4a连续弥漫全层阳性的表达率为63．9％（23／36）。其中年龄〈30岁组p16^INK4a〉50％阳性和弥漫全层阳性患者中,宫颈环状电切术（LEEP）后诊断为CIN3的比例分别为1／9和1／7;而30-35岁组两者的比例分别为4／18和3／16,两者比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。36例患者平均随访（13．4±3．9）个月,未发现病变进展。结论对CIN2组织中p16^INK4a阳性患者进一步行LEEP或锥切是必要的;p16^INK4a对预测CIN转归的意义仍需进一步研究。     

液基细胞标本中宫颈鳞状细胞核p16^INK4a染色计数的评价

p16^INK4a基因产物强烈表达于异常宫颈上皮细胞。为探讨p16^INK4a作为一种判断宫颈涂片或液基细胞标本中异常细胞的生物学标记物的价值进行研究。     

P16^INK4A、△NP63与Brn－3a作为宫颈上皮内瘤变标志物的研究

目的：探讨肿瘤抑制基因P16^INK4A、凋亡相关基因异构体△NP63和细胞转录因子Bm-3a在各级宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）的TCT标本中的表达及其作为CIN生物标志物的可行性和临床意义。方法：利用SP免疫组化法检测71例TCT标本中P16^INK4A和△NP63的表达；用RT—PCR法检测各标本中Bm-3a mRNA的转录，分析它们与CIN病理分级的关系。结果：各级病理学诊断中P16^INK4A与△NP63阳性率分别为炎症（4．76％／4．76％），CINI（89．47％／84．21％），CINⅡ（100％／100％），CINⅢ（100％／100％），各级CIN与炎症的P16^INK4A和△NP63阳性率之间，差异有极显著性（P〈0．001），各级CIN的阳性率之间，差异无统计学意义（P〉0．05）。Brn-3a的表达阳性率分别为炎症（0％），CINⅠ（5．26％），CINⅡ（50％），CINⅢ（90．48％），CINⅢ的Bm-3a阳性率明显高于与炎症、CINI组（P〈0．01），炎症与CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：P16^INK4A、P63与Brn-3a可作为CIN的标志物，辅助细胞学筛查，Brn-3a可能成为间接反映CIN发展的生物学指标。     

宫颈鳞癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

目的探讨宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及其在宫颈鳞癌早期诊断中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌Hela细胞株(细胞组)以及2008年4-10月广东省妇幼保健院经临床和病理证实的31例宫颈鳞癌(病例组)、21例正常或宫颈炎症(对照组)宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERT mRNA的表达作为定性、定量参照;对病例组及对照组同时采用液基薄层细胞学(TCT)检查。结果 (1)在病例组和对照组宫颈脱落细胞中hTERT mRNA阳性表达率分别为80.6%和9.5%,其相对定量表达水平NhTERT分别为0.4646～13.7823和0.0093～0.0816,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)采用宫颈脱落细胞hTERT mRNA表达进行宫颈鳞癌筛查的灵敏度和特异度分别为80.6%和90.5%。结论宫颈鳞癌患者脱落细胞hTERT mRNA的阳性表达率及表达水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达,有助于宫颈鳞癌的早期诊断。     

IMP3、p53在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:研究IMP3及p53在宫颈癌中的表达,探讨其与宫颈癌发生发展的关系及临床病理意义。方法:采用免疫组化方法检测20例正常宫颈组织(NCE)、43例宫颈上皮内瘤变(CIN)、56例宫颈鳞状细胞癌(SCC)中IMP3及p53的表达情况。结果:IMP3蛋白阳性表达主要定位于细胞胞浆,p53蛋白阳性表达主要定位于细胞胞核。IMP3在NCE、CIN和SCC中的阳性表达率分别为10.0%、53.5%和75%,两两比较差异均有显著性(P<0.05)。p53在NCE、CIN和SCC中的阳性表达率分别为15.0%、58.1%及73.2%,NCE组与CIN、SCC组比较,差异均有显著性(P<0.01)。SCC中IMP3、p53蛋白阳性表达率均与淋巴结转移相关(P<0.05),IMP3蛋白与p53蛋白的表达无相关性(r=0.023,P>0.05)。结论:IMP3与p53阳性表达可能作为预测SCC转移潜能的生物学指标,两者共同表达预示SCC具有较强的侵袭转移能力。     

p16~(INK4A)蛋白及HPV感染与宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌的关系研究

目的:通过检测慢性宫颈炎(chronic cervicitis)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈鳞癌(squamous carcinoma of the cervix,SCC)组织中p16INK4A蛋白表达与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的状况,探讨p16INK4A蛋白和HPV感染与宫颈鳞癌发生发展的关系。方法:采用免疫组化PV-9000方法检测114例宫颈组织标本的p16INK4A表达,用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术(HybriMax)检测21种HPV DNA。结果:(1)慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、SCC组织中p16INK4A蛋白表达阳性率分别为0%、45.83%、72.73%、84.00%、91.30%,随着宫颈病变程度加重,p16INK4A蛋白表达阳性率逐渐增高,表达强度增加,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)慢性宫颈炎、CINI、CINⅡ、CINⅢ、SCC中HPV感染阳性率分别为20.00%、37.50%、54.55%、56.00%、73.91%,HPV感染在不同宫颈病变组织中差异有统计学意义(P<0.05)。随宫颈病变程度加重,HPV阳性率呈递增趋势,不同病变组织中位于前3位的HPV感染型别分别为:CINⅠ组,HPV16、18、58;CINⅡ～Ⅲ组,HPV16、33、52;宫颈鳞癌组,HPV16、18,52。(3)相关分析结果显示,病变组织中p16INK4A蛋白表达与HPV感染呈正相关(r=0.268,P<0.05)。结论:p16INK4A蛋白表达与宫颈病变程度有关,p16INK4A可能参与了HPV相关的宫颈癌发生。二者联合检测对宫颈癌筛查和预防具有重要意义。     

hTERC基因表达在宫颈癌筛查中的意义

目的:探讨宫颈病变脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(hTERC)的表达及hTERC基因检测在宫颈癌筛查中的临床意义。方法:收集宫颈病变患者的宫颈脱落细胞标本129例,依据组织病理学结果分为3组:宫颈上皮内瘤变低度病变组(CINⅠ)、高度病变组(CINⅡ/Ⅲ)、宫颈癌组(SCC);同时选择健康妇女的宫颈脱落细胞标本20例作为对照组建立实验室阈值;应用荧光原位杂交技术(FISH)检测两组标本hTERC基因的扩增情况,最终以病理学诊断为金标准,比较FISH检测结果。结果:研究各组中CINⅠ,CINⅡ/Ⅲ,SCC的hTERC基因阳性表达率分别为7.31%,56.25%,75.00%,hTERC基因扩增比例随病变进展而增加;研究组与对照组hTERC基因阳性表达率差异有统计学意义(P0.05);研究各组两两比较,hTERC基因阳性表达率低度病变组与高度病变组、宫颈癌组差异有统计学意义(P0.05),而高度病变组与宫颈癌组的差异无统计学意义(P0.05)。结论:FISH方法检测hTERC基因可用于筛查宫颈高度病变及宫颈癌,其阳性扩增信号多倍体型可能是宫颈病变进展的预测性指标。     

宫颈脱落细胞hTERC基因扩增的初步研究

目的探讨人类染色体端粒酶RNA（hTERC）基因扩增在宫颈癌发生发展中的作用及其对CIN2及以上病变筛查的临床意义。方法应用荧光原位杂交（FISH）法检测17例宫颈癌、39例CIN3、7例CIN2、14例CIN1及33例慢性宫颈炎患者宫颈脱落细胞hTERC基因扩增情况,同时对检测hTERC基因异常扩增与宫颈液基薄层细胞学检查（TCT）和高危型HPV-DNA检测诊断CIN2及以上病变的特异性和敏感性进行比较。结果 hTERC基因在慢性宫颈炎、CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌中的异常扩增率分别为18.19%、14.29%、35.29%、71.79%和94.12%,差异有统计学意义（χ2=41.415,P=0.000）。其中,慢性宫颈炎组和CIN1组hTERC基因扩增率比较,差异无统计学意义（P=1.000）,但均显著低于CIN2、CIN3组和宫颈癌组（P=0.001）。而且,检测宫颈脱落细胞hTERC基因扩增诊断CIN2及以上病变的敏感性为68.49%（50/73）,特异性为86.21%（50/58）,而TCT诊断CIN2及以上病变的敏感性为63.01%（46/73）,特异性为74.19%（46/62）;高危型HPV-DNA检测诊断CIN2及以上病变的敏感性为90.41%（66/73）,特异性为62.26%（66/106）。结论 hTERC基因扩增在宫颈癌的发生发展中起重要作用。FISH检测宫颈脱落细胞中hTERC基因扩增在一定程度上可反映CIN2及以上病变存在,可弥补TCT和HPV检测的不足。     

p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈病变组织中的表达及其相关性研究

目的 探讨p16INK4A、p53、Ki-67及雌激素受体(ER)在不同程度宫颈病变中表达及相关性.方法 采用SP法检测宫颈鳞状细胞癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)、尖锐湿疣及正常宫颈组织中p16INK4A、p53、Ki-67及ER蛋白的表达.结果 p16INK4A、p53、Ki-67及ER在宫颈鳞癌组中的阳性率分别为100%、86.4%、86.4%及4.6%;在CIN Ⅲ中为92.5%、75.0%、100%、20.0%;在CIN Ⅱ中为90.5%、64.3%、100%及23.9%;在CINⅠ中为71.8%、43.6%、100%、79.5%;在尖锐湿疣组中为39.0%、43.9%、26.9%、61.0%.p16INK4A在宫颈鳞癌、CIN Ⅲ、Ⅱ组中,以强阳性表达为主;尖锐湿疣组仅为弱阳性表达.Ki-67在宫颈鳞癌、CINⅢ组中,以强阳性表达为主.宫颈鳞癌、CINⅢ、Ⅱ、Ⅰ、尖锐湿疣中p16INK4A、p53、Ki-67、ER阳性表达率与对照组比较差异有高度显著性(P＜0.05).结论 p161NK4A、p53蛋白高表达与宫颈鳞癌、CIN的发生发展密切相关;p16INK4A、p53、Ki-67阳性率与宫颈病变严重程度呈正相关,ER的阳性率与其呈负相关.     

荧光原位杂交技术检测宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中TERC基因的扩增及临床意义

目的:应用荧光原位杂交(FISH)技术检测宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈癌中TERC基因的扩增,探讨其在宫颈病变筛查中的意义.方法:筛选门诊就诊宫颈疾病患者宫颈脱落细胞标本120例,其中液基细胞学检查正常者20例,病理学检查CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌各25例.采用双色间期FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因扩增,以正常标本的检测结果建立阈值.结果:①CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌中每例的异常细胞百分率均大于阈值(P<0.05),异常细胞百分率随病理学分级病变严重程度增高而增高(P<0.01).②2:3、2:4、2:5和4:4以上类型在CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌所占百分率比较,差异有高度统计学意义(均P<0.01),其中宫颈癌与CIN Ⅰ比较,2:3类型所占比例明显下降(P<0.001),2:4、2:5和4:4以上类型所占比例明显升高(JP<0.001).③不同细胞学分级中,异常细胞百分率随其病变严重程度增高而增高(P<0.01),2:3、2:5和4:4以上类型在ASCUS、LSIL和HSIL中的百分率差异有高度统计学意义(均P<0.01),其中HSIL与ASCUS比较,2:3类型所占比例明显下降(P<0.01),2:5和4:4类型所占比例明显升高(P<0.01).④在低级别及高级别CIN中,细胞学LSIL及HSIL检出率分别为10例(40.00%,10/25)及31例(62.00%,31/50),FISH技术检测出低级别与高级别CIN的敏感度均明显高于细胞学检查(P<0.05).结论:CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌均有TERC基因扩增,其拷贝数随病理学及细胞学分级严重程度增加而增加.应用FISH技术检测宫颈脱落细胞TERC基因扩增对宫颈病变筛查及对病变进展预测具有一定价值.     

人宫颈癌脱落细胞端粒酶活性检测的意义

目的 研究宫颈上皮内瘤样病变(CIN )和宫颈癌脱落细胞端粒酶激活的意义。方法 采用端粒酶PCR-ELISA法检测13例CIN和17例宫颈癌脱落细胞端粒酶活性,并与相应的组织标本中端粒酶活性相比较,11例正常宫颈脱落细胞作为对照。结果8例(61.54％)CIN、14例(82.35％)宫颈癌脱落细胞表达端粒酶活性,正常宫颈无端粒酶活性,CIN、宫颈癌及正常宫颈脱落细胞端粒酶活性平均值分别为0.328±0.192、1.329±0.259和0.039±0.084,三组间端粒酶表达率和量存在显著差异。CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级之间端粒酶活性无明显差异。CIN及宫颈癌组织中端粒酶活性和相应脱落细胞一致。结论 端粒酶的激活是宫颈癌的早期改变,在宫颈癌发生发展过程中起重要作用;宫颈脱落细胞和组织中端粒酶活性可能成为宫颈癌早期诊断、预后判断和肿瘤浸润的标记物。     

新疆地区维汉妇女宫颈病变组织中Survivin与p16~(INK4a)表达的研究

目的:探讨新疆地区维汉妇女宫颈疾病及其癌变组织中Survivin蛋白与p16INK4a蛋白的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法,检测240例新疆地区维汉妇女宫颈病变组织中Survivin蛋白和p16INK4a蛋白的表达。维汉妇女各120例,依据病理诊断结果分为4组,非瘤变组(正常及慢性炎症组)30例,CINⅠ组30例,CINⅡ～Ⅲ组30例,宫颈鳞癌组30例。结果:宫颈病变组织中Survivin与p16INK4a蛋白在维、汉族之间的表达差异无显著性(P>0.05);随着宫颈病变程度的上升,不同组别之间Survivin与p16INK4a蛋白的表达有显著差异(P<0.05),但在CINⅡ～Ⅲ组与宫颈鳞癌组之间的表达无统计学意义(P>0.05)。结论:Survivin蛋白和p16INK4a蛋白表达与宫颈疾病及其癌变的发生关系密切,呈正相关;Survivin蛋白和p16INK4a蛋白在新疆地区维汉妇女宫颈病变及其癌变中表达不存在民族差异。     

HER-2在宫颈病变脱落细胞的表达及临床意义

目的:研究癌基因HER-2在不同程度宫颈病变脱落细胞的表达,探讨它在宫颈癌发生发展中的作用及临床意义。方法:用荧光原位杂交(FISH)法检测12例正常宫颈、55例宫颈上皮内瘤变(CIN)及24例浸润性宫颈癌脱落细胞中HER-2的表达。结果:HER-2在正常宫颈脱落细胞中不表达,在CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ及宫颈癌的阳性表达率分别为6.3%、25.6%及58.3%。HER-2在CINⅡ～Ⅲ及子宫颈癌组表达均显著高于正常组(P<0.01),同时宫颈癌组HER-2明显高于CIN组(P<0.01)。HER-2高表达与细胞分级明显相关(P<0.01),与临床分期、病理类型无关。结论:HER-2基因高表达在宫颈癌发生发展中可能起重要作用,在宫颈病变脱落细胞中检测HER-2基因对探讨宫颈病变的进展和预测不良预后可能有重要意义。     

p16与宫颈病变关系的研究进展

p16是近年发现肿瘤抑制基因,其高表达与宫颈病变关系密切,且与人乳头瘤病毒（HPV）感染呈正相关。在宫颈脱落细胞中P16蛋白的表达与HC-2检测一样能够增加细胞学诊断的敏感性。且p16较HC-2检测更能够区分ASCUS细胞中是否存在病变。在一定程度上可以代替HC-2检测．提高子宫颈鳞癌的早期诊断率,从而降低传统宫颈癌筛查法的假阳性率和假阴性率,提高筛查的灵敏度和特异度,值得推广。     

p16与宫颈病变关系的研究进展

p16是近年发现肿瘤抑制基因,其高表达与宫颈病变关系密切,且与人乳头瘤病毒(HPV)感染呈正相关.在宫颈脱落细胞中P16蛋白的表达与HC-2检测一样能够增加细胞学诊断的敏感性,且p16较HC-2检测更能够区分ASCUS细胞中是否存在病变.在一定程度上可以代替HC-2检测,提高子宫颈鳞癌的早期诊断率,从而降低传统宫颈癌筛查法的假阳性率和假阴性率,提高筛查的灵敏度和特异度,值得推广.