趋化因子CCR5、CCR2和SDF1基因多态性与HBV感染相关性初步研究

HBV引起的肝损伤和机体的免疫应答状态有关,由基因决定的免疫应答能力可以影响感染的持续性、临床症状和结局。趋化因子是低分子量的趋化性细胞因子。它募集白细胞到炎症部位,调节T细胞发育和细胞因子产生,如INF-γ。因此,趋化因子在炎症和感染中起重要作用。近年来发现,CCR5-△32、CCR2b-64I和SDFl-3’A趋化因子多态性除了作为HIV-1的协同受体影响HIV-1感染和致病进程外,还与分枝杆菌结核(Mycobacterium     

中国人HIV-1感染相关的基因CCR5多态性检测和不同方法提取的基因组DNA的比较

目的 检测中国人基因组中HIV-1感染相关的特异性协同受体(CCR5)的基因多态性和比较提取人基因组DNA方法的优缺点。方法 我们分别用常规法和柱层析法从1219名中国人外周血PBMC中提取基因组DNA样品,对纯化后的DNA样品质量进行定性和定量分析;并对其基因组DNA中CCR5基因进行了PCR、Southern杂交和直接DNA测序等分析。结果 在中国人基因组中,检测的CCR5基因多态性是wt/wt 1 210例、wt/△32 3例,未检测到CCR5△32/△32纯合子突变,CCR5等位基因突变率为0.125％。常规法提取的基因组DNA所需的外周静脉血多(5ml);DNA的量较少且不稳定;操作步骤复杂。相反,QIAamp Boold Kit柱层析法提取DNA仅需要外周血200μl,可稳定地获得一定量的DNA,操作简便。结论 首次报道了中国人CCR5等位基因突变率是0.125％,提示我国绝大多数人群对嗜巨细胞HIV-1病毒的遗传易感性较高;同时证实试剂盒法提取的DNA更适合于CCR5基因多态性分析。     

介导HIV—1感染的协同受体（CCR5和CCR2）研究进展

1.概述 HIV-1感染人体后引起进行性的AIDS病变,通常经历三个典型的时期,第一为急性感染期,表现为广泛的病毒血症;接着是无症状期,此时在淋巴器官中大多可检测出病毒的复制;最后是免疫系统破坏,伴随病毒血症的再次出现,并产生继发性感染等而导致病人死亡。引起人体AIDS的HIV-1病毒株     

1例HIV-1感染者HIV辅助受体CCR5基因的核酸序列分析

目的 研究中国人HIV辅助受体CCR5基因变异的频率和类型,观察CCR5基因变异HIV感染和发病的关系。方法 采集6例河北籍HIV感染者和部分配偶、子女的共14份血液标本,分离外周血淋巴细胞,提取mRNA,用RT-PCR方法对CCR5基因进行扩增分析。对其中1例纯合的CCR5缺失缺陷型感染者的扩增片段进行了克隆和序列测定。结果 在所检测的14份样品中,发现1例纯合的CCR5基因缺失缺陷型。对该片段的序列测定表明,其缺失片段为60个碱基,与国外报道的32个碱基缺失有28个碱基重叠。结论 首次在中国人群中发现了纯合的辅助受体CCR5基因缺失缺陷型,对这种基因变异与HIV感染和发病关系的研究正在进行中。     

1型糖尿病患者及其一级亲属趋化因子受体CCR2和CCR5的基因多态性研究

目的　探讨趋化因子受体CCR2、CCR5基因多态性与 1型糖尿病 (T1DM)及其一级亲属之间的关系 ,并与T2DM及非DM对照进行比较。　方法　利用PCR方法检测 48例T1DM及其 5 7名一级亲属CCR5的基因多态性 ,利用BsaBI限制性内切酶的PCR RFLP方法检测T1DM及其一级亲属的CCR2基因多态性。　结果　T1DM组、T1DM一级亲属组、T2DM组分别与非DM对照组比较 ,CCR5Δ32突变的等位基因频率和基因型频率差异无显著意义。T1DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均高于非DM对照组 (P <0 .0 1) ;T2DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均低于T1DM组 (P <0 .0 1)。　结论　CCR5Δ32突变与T1DM无显著相关性。CCR2 6 4I突变与T1DM发病显著相关 ,CCR2基因可能是T1DM一个新的候选基因。     

与HIV-1感染相关的MBP基因多态性分析

分析中国汉族和维吾尔族人群中ＭＢＰ基因的等位基因多态性特点 ,初步探讨ＭＢＰ基因多态性与ＨＩＶ 1感染的遗传易感性之间的关系。从 4 2 0例中国汉族和维吾尔族个体的全血中提取基因组ＤＮＡ样品 ,应用ＰＣＲ ＲＦＬＰ方法进行ＭＢＰ基因外显子 1密码子 52、54和 57这 3个等位基因多态性进行检测 ,并经遗传分析仪进行ＤＮＡ序列分析验证。结果发现 ,中国汉族人群的ＭＢＰ 54等位基因突变频率为 0 .189,维吾尔族为 0 .12 1,该等位基因多态性分布在中国汉、维两个民族中均符合Ｈａｒｄｙ Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡 ,两个民族之间基因型分布和突…     

中国人HIV—1感染相关的基因CCR5多态性检测和不同方法提取 …

目的 检测中国人基因组中ＨＩＶ－１感染相关的特异性协同受体（ＣＣＲ５）的基因多态性和比较提取人基因组ＤＮＡ方法的优缺点。方法 我们分别用常规法和柱层析法从１２１９名中国人外周血ＰＢＭＣ中提取基因组ＤＮＡ样品,对纯化后的ＤＮＡ样品质量进行定笥和定量分析,并对其基因组ＤＮＡ中ＣＣＲ５基因进行了ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和直接ＤＮＡ测序等分析。     

中国汉族人HIV—1辅助受体等相关基因CCR5、CCR2b、CXCR4和SDF1编码区SNP位点调查

目的：调查中国汉族人群中HIV－1感染相关基因CCR5、CCR2b、CXCR4及SDF1编码区的基因多态性特点，为我国的艾滋病防治提供基础数据。方法：CCR5用2对引物进行PCR扩增，用PCR产物做模板直接测序。CCR2b编码区经PCR扩增后，用测序引物逐段分别测序。CXCR4（cDNA编号AF147204）编码区用2对引物进行PCR扩增，然后测序。SDF1编码区用4对引物进行PCR扩增，然后分别测序。样本总数为45例，测序结果用DNAstar综合分析，寻找和鉴定SNP位点。结果：CCR5基因编码区共发现6个SNP位点，4个引起氨基酸改变，1个单碱基缺失，引起移码突变和翻译提前终止。184A→G、503G→T、668G→A、999→T等位基因频率分别为1．1％、21．1％、8．9％和10．0％。CCR2b编码区共发现8个SNP位点，6个错义突变，即43位G→C、190位G→A、260－位C→A、302位C→A、315位G→C、433位G→A，突变频率分别为：30．0％、27．8％、32．2％、5．6％、10．0％和3．3％。CXCR4编码区共发现7个SNP位点，3个错义突变即38位C→T、90位A→T、712位A→C，1个终止突变：106位G→T，基因突变频率分别为：4．4％、4．4％、10．0％和3．3％。在SDF1编码区发现1个错义SNP位点：192位G→T，突变频率为8．9％；1例单碱基缺失：100位T缺失（100ΔT），引起34位氨基酸移码突变。结论：中国汉族人HIV－1相关基因编码区有自己的多态性特点。4个HIV－1相关基因编码区共工到22个SNP位点，17个为首次报道；2个单碱基缺失均导致移码突变和翻译提前终止，1个已经报道。它们对HIV－1感染和艾滋病病程的影响值得进一步研究。     

广东省吸毒人群新发HIV-1感染pol基因多态性和耐药分析

目的研究广东省部分吸毒人群2007年新发现的艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者pol基因的多态性耐药突变。方法选取2007年吸毒人群中新发现的HIV感染者63例,从血浆中提取病毒RNA,运用一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和套式聚合酶链反应（Nested—PCR）扩增HIV pol基因段,并对扩增的目的片段进行测序,将测序结果与斯坦福大学耐药数据库比对,获得耐药和基因多态性相关信息。结果在63例HIV感染者中,有效扩增并且测序成功49例。检出耐药者2例,占4．1％,分别为低度和潜在耐药,耐药突变类型分别为V179D和Q151LQ。pol基因耐药突变的发生率为38．7％,主要突变类型为：L33I、A71V、A71T、T69S。其中T69S为主要的耐药突变位点,占耐药突变的33％。在不同的基因亚型中,pot基因蛋白酶区和逆转录酶区的突变的多态差异较大。结论广东省吸毒人群2007年新发现HIV感染者耐药发生率仍处于较低水平,为4．1％,但耐药突变的发生率较高。     

与HIV-1感染相关的甘露糖结合蛋白基因多态性分析

目的：分析中国汉族和维吾尔族人群中甘露糖结合蛋白（MBP）基因的等位基因多态性特点，初步探讨MBP基因多态性与艾滋病病毒1型（HIV－1）感染之间的相关性。方法：从856例个体（汉族606例、维吾尔族250例）的外周血中提取基因组脱氧核糖核酸（DNA），应用聚合酶链反应－限制性内切酶片段长度多态性（PCR－RFLP）分析检测MBP基因外显子1区域第52、54、57密码子部位的3个等位基因多态性，并随机抽样经DNA直接测序进行验证。结果：在健康人群中，MBP－54等位基因突变频率汉族为0．189，维吾尔族为0．121。该等位基因多态性分布在这两个民族中均符合Hardy-Weinberg平衡，两个民族在健康人群中的基因型分布和突变基因频率差异均有显著的统计学意义（x^2=5.53,P=0.022)。汉族的HIV－1感染组、高危对照组和相应的健康人群之间，MBP－54等位基因的突变频率差异无显著的统计学意义。维吾尔族高危对照组与健康人群相比，MBP－54基因的突变频率差异亦无显著的统计学意义。维吾尔族HIV－1感染组与高危对照组以及与相应的健康人群相比，MBP－54基因的突变频率的差异均有显著的统计学意义。在所检测的人群中，均未发现MBP基因的第52、57密码子部位有基因突变。结论：在汉族和维吾尔族人群中MBP－54等位基因突变频率以及基因多态性存在差异；维吾尔族人群中MBP基因第54密码子突变可能与HIV－1的易感性相关，确切机理尚待进一步研究。     

抗人CCR5多克隆抗体体外阻断HIV-1假病毒感染的研究

目的制备鼠抗人CC型趋化因子受体5(CCR5)特异性Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)中和抗体。方法用稳定表达人CCR5的CHO-R5细胞腹腔免疫BALB/c小鼠;流式细胞术的方法分析免疫血清对GHOST-R5细胞的结合;纯化免疫血清总IgG抗体,HIV-1假病毒中和试验分析血清总IgG的中和活性。结果流式细胞术的结果显示,CHO-R5细胞免疫组小鼠血清,对GHOST-R5结合的平均荧光强度显著高于对照组(P0.001);HIV-1假病毒中和试验的结果发现,纯化的CHO-R5细胞组小鼠免疫血清总IgG,可抑制HIV-1假病毒在体外感染GHOST-R5细胞,抑制作用具有剂量依赖性,最高抑制率达到92%。结论成功诱导出具有中和HIV-1活性的鼠抗人CCR5的多克隆抗体。     

山东省男男性行为者趋化因子受体5基因多态性与HIV-1感染相关性分析

正近年来,MSM已成为HIV感染的高危人群[1],研究[2]表明,趋化因子受体5(CCR5)多态性与HIV感染易感性相关,且突变发生率因地域、种族而异,这些单核苷酸多态性可以影响宿主的疾病进程。MSM易感性研究较少,工作中发现不是所有暴露于HIV的人都会被感染,少数有暴露史的MSM多性伴无保护性行为一直未感染,了解MSM的CCR5编码区△32(rs333)和启动子区59029A/G(rs1799987)多态性变化与HIV-1感染的关系,以便今后更好地为艾滋病防控工作服务。     

中国HIV-1感染人群和普通人群四种基因多态性分布的差异分析

目的　艾滋病病毒 (HIV) 1型感染辅助受体CCR5、CCR2和SDF 1等基因的多态生与HIV 1感染和发病过程有密切的关系 ,但上述基因对中国人群易感性的影响尚不清楚 ,为此 ,研究了中国HIV 1感染者四种基因型的分布特点 ,以了解其对中国人群HIV 1易感性的影响。方法　HIV 1感染者被分为经血液传播途径感染和经性传播途径感染的两类人群 ,应用PCR RFLP技术分析HIV感染者CCR5Δ32、CCR2 6 4I、SDF1 3′A、CCR5m30 3四种基因多态性 ,使用SPSS11 0统计分析软件分析HIV感染者与中国正常人群上述基因型分布的差异。结果　在189例HIV 1感染者中 ,没有发现CCR5Δ32和CCR5 m30 3突变基因型 ;SDF1 3′A等位基因突变频率为 2 6 14 % ,CCR2 6 4I的突变频率为 19 82 %。χ2 检验的结果发现 ,中国HIV 1感染者SDF1 3′A、CCR2 6 4I基因多态性分布与中国正常人群没有显著性差异 (χ2 =1 2 6 6、0 138,P值均 >0 5 )。对血液传播途径感染人群和性传播途径感人群分别进行统计 ,同样发现与中国正常人群SDF1 3′A、CCR2 6 4I基因型的分布没有显著性差异。结论　SDF1 3′A、CCR2 6 4I基因多态性突变 ,对于中国人群HIV 1X经血液途径和性途径的感染没有明显的阻断作用。     

MCP-1基因及CCR2基因多态性与河南地区多发性硬化的相关性研究

目的 研究MCP-1基因-2518位点及CCR2基因-190位点多态性与河南地区多发性硬化(MS)的相关性.方法 以来自河南地区的MS患者(MS组)和健康志愿者(对照组)为研究对象,利用PCR技术检测MCP-1基因及CCR2基因扩增产物酶切多态性.结果 MS组和对照组MCP-1基因-2518位点A/A、A/G、G/G三种基因型分布频率无统计学差异(P＞0.05).与对照组相比,MS组有较高的G等位基因频率,但两组差异未达统计学意义(P＞0.05).MS组和对照组CCR2基因- 190位点G/G、A/G、A/A三种基因型分布频率无统计学差异(P＞0.05),与对照组相比,MS组有较低的A等位基因频率,但两组差异未达统计学意义(P＞0.05).结论 未发现MCP-1基因-2518位点及CCR2基因- 190位点多态性与河南地区MS相关.     

新疆维吾尔族人群中CCR5Δ32、CCR2b-64I和SDF1-3′A等位基因多态性分布和意义

目的 调查HIV-1感染相关的等位基因CCR5A32、CCR2b-64I和SDF1-3A在我国新疆维吾尔族人群中的频率和多态性分布。方法 随机采集血样,提取基因组DNA。经PCR或PCR-RFLP分析,计算突变基因频率;并对其群体分布、性别分布和三者的相关性进行统计分析。结果 CCR5△32频率为3.48％,CCR2b-64I为19.45％,SDF1-3A为20.41％。三种突变等位基因群体分布均符合Hardy-Weinberg平衡,性别之间无差异;任何两个基因之间也未发现连锁性。结论 维吾尔族人的SDF1-3A基因突变频率接近于高加索人,CCR2b-64I基因频率则与汉族人相似,CCR5△32高于汉族人低于高加索人,与中亚地区少数民族接近。在维吾尔族人群中以上三种等位基因与艾滋病发病机制和临床预后的关系有待进一步阐明。     

新疆部分维吾尔族HIV-1感染和高危人群RANTESSDF1-3’A基因的多态性分析

目的分析新疆维吾尔族275例艾滋病病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者和275名高危人群,对激活T细胞表达和分泌调节（RANTES）和基质细胞衍生因子（SDF1）-3′A等位基因的多态性和分布特点。方法利用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性分析（PCR-RFLP）法,对维吾尔族高危人群和HIV-1感染者的各275份血液中的RANTES、SDF1-3′A等位基因进行检测。结果在275例高危人群中,RANTES、SDF1-3′A等位基因突变率分别为14.2%、19.7%,在275例HIV-1感染人群中,RANTES、SDF1-3′A等位基因突变率分别为19.6%、24.7%。χ2检验的结果提示,维吾尔族高危人群和HIV-1感染人群中,RANTES、SDF1-3′A基因多态性分布差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 RANTES、SDF1-3′A等位基因突变以及分布提示,在新疆维吾尔族人群HIV-1高危人群和感染人群中无差异性。     

新疆哈萨克族人群CCR5基因多态性的调查及分析

目的研究新疆哈萨克族人群中,艾滋病病毒(HIV)辅助趋化因子受体CCR5△32、CCR5-894C等位基因突变的频率和多态性的特点。方法以143例哈萨克族健康人群为研究对象,应用聚合酶链反应(Polymerasechain reaction,PCR)及脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)直接测序等方法,检测CCR5和CCR5△32、CCR5-894C突变体。结果 143例个体中,CCR5△32扩增分析和CCR5-894C缺失扩增分析结果,均未发现有等位基因突变,均为野生型CCR5。结论由于例数过少,有必要进一步增加样本量,以确定哈萨克族人群是否对HIV有较高的遗传易感性,为有关部门制定相关政策提供准确的依据。