采用异源双链泳动法进行HIV—1亚型分析的研究

目的 探索一种简单,敏感,特异和成本低的ＨＩＶ－１亚型亚型测定方法。方法 采用改良的异源双链泳动法（ＨＭＡ）与ＤＮＡ序列分析法对１４份ＨＩＶ－１抗体阳笥者样本进行亚型测定,分析和比较。结果 用ＨＭＡ改良法明确测定了１４份样本中的１３份样本的亚型。在１４份样本中对１３份样本进行ＤＮＡ序列分析有１２份的结果与ＨＭＡ的相符,符合率达９２．３％。结论 改良的ＨＭＡ测序法是一种简单,敏感,特异和经济的ＨＩＶ     

检测HIV-1耐药株的异源双链泳动分析技术的建立及临床应用

目的探讨利用异源双链泳动分析技术(HMA)检测HIV-1耐药株的可行性和临床应用。方法从接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的HIV-1感染者血浆中抽提RNA,采用套式RT-PCR方法扩增HIV-1的PR和RT基因片段,并对扩增的基因片段进行异源双链泳动分析。结果本方法对血清中HIV-1RNA含量2000copies/ml以上的样本都能有效扩增。在18例参加HAART治疗的HIV感染者中,17例的HMA结果在聚丙烯酰氨凝胶电泳上,没有出现有意义的异源双链泳动带。1例发现有异源双链二聚体,这1例后经序列测定证实,确定有耐药位点的基因变异。结论异源双链泳动分析技术能够及时、间接地反映HIV-1在治疗过程中耐药株的存在。该方法的建立能在临床上为临床医生制定治疗方法提供参考依据。     

中国首例HIV-1 J亚型毒株的鉴定

目的通过对1例来自刚果的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者样品进行序列分析，鉴定其亚型种类。方法从该感染者血浆样品中提取RNA，经逆转录后采用套式PCR扩增HIV env、gag及pol基因的部分区段，PCR产物直接测序，将所获序列与参考序列进行比对分析，计算基因距离及构建系统进化树。结果该感染毒株样品序列与HIV-1J亚型国际参考株J．SE．93及J．SE．94聚在一起，与两参考株序列在env基因区距离均为8．2％，pol基因区距离分别为6．4％和6．3％，gag基因区距离分别为8．9％和8．0％，证实其为HIV-1J亚型。这是国内首次报道检出HIV-1J亚型。结论HIV-1J亚型毒株已随国际旅行者传人我国，加强对国际旅行人员中HIV毒株亚型的监测具有重要意义。     

重庆市HIV-1样本的亚型分析及G亚型HIV-1毒株在我国的发现

目的 分析重庆市高危人群中HIV-1亚型的流行情况。方法 对采自重庆市经性传播和静脉吸毒途径感染的3份HIV-1阳性外周血分离PBMC,扩增env基因C_2-V_3区核酸片段,并进行核苷酸序列分析。结果 在其中一孕妇体内发现一株G亚型HIV-1毒株序列的存在,这是G亚型HIV-1毒株首次在中国被发现,同时有母婴传播的可能;另外两例被证明为E亚型和C亚型HIV-1毒株。结论 这表明HIV在重庆市高危人群中已有流行并且流行情况复杂。     

重庆市HIV-1流行毒株的基因序列测定和亚型分析

目的对重庆市流行的艾滋病（AIDS）病毒1型（HIV-1）进行分子流行病学调查,为艾滋病预防控制策略的制定提供依据.方法用套式聚合酶链反应（nested-PCR）对31份重庆市HIV-1抗体阳性者外周血单个核细胞（PBMC）中前病毒DNA的膜蛋白基因的C2-V3区,及其邻区300个核苷酸序列进行测定和分析.结果31份标本中有21份扩增阳性并得到相应序列,扩增率为67.6%.经过基因离散率计算和系统树分析后证实：1份标本为CRF01-AE流行重组毒株,20份标本为HIV-1 BC重组毒株.结论目前重庆市HIV-1 BC重组病毒为优势流行株,为有效控制HIV流行,需要重点在吸毒人群中开展行为干预措施.     

甘肃省HIV-1毒株基因序列测定和亚型分析

目的对甘肃省流行的艾滋病病毒（HIV）开展分子流行病学调查.方法用套式聚合酶链反应对23份甘肃省HIV-1感染者外周血淋巴细胞中前病毒脱氧核糖核酸（DNA）的膜蛋白基因进行扩增,并对C2-V3及其邻区300个核苷酸序列进行测定和分析.结果甘肃省流行的HIV-1分属B＇亚型（6例）、C亚型（1例）、CRF-BC亚型（16例）.其中CRF-BC亚型（70%）为主要流行毒株.结论甘肃省HIV-1流行亚型以重组毒株CRF-BC为主,在吸毒人群中广为流行;加强对高危人群监控,是遏制艾滋病在甘肃省蔓延的重中之重.     

九江市HIV-1流行毒株基因序列测定和亚型分析

目的了解九江市艾滋病病毒1型(HIV-1)流行毒株的亚型分布情况。方法对采集的6份九江市HIV-1感染者的血浆样品进行RT-PCR扩增,获得gag基因的核酸片断进行核苷酸序列分析。结果在6份样品中发现B’亚型HIV-1毒株4株,B亚型和A/E重组亚型HIV-1毒株各1株。结论HIV-1流行毒株亚型在九江市分布情况复杂,防控形势严峻。     

MSM人群急性HIV-1感染者病毒亚型分析

目的研究2007-2009年男男性行为人群（MSM）艾滋病病毒-1型（HIV-1）的基因亚型,以监测MSM人群HIV病毒株的最新流行情况。方法采集95例MSM急性HIV-1感染者的外周全血,从外周全血浓缩白细胞中提取脱氧核糖核酸（DNA）,用巢式聚合酶链反应（Nested-PCR）对HIV-1的前病毒DNA进行扩增,然后检测并分析PCR扩增产物的核苷酸序列,确定病毒的基因亚型。结果 95例感染者平均年龄为（35.02±9.15）岁,其中20～50岁的青壮年45例（94.74%）,未婚51例（53.68%）,大专或大学及以上文化程度者30例（占31.58%）。感染者中共发现CRF01_AE亚型、B亚型、BC重组亚型（包括CRF07_BC和CRF08_BC）及C亚型4种亚型。其中CRF01_AE重组亚型56例（占58.95%）,B亚型28例（占29.47%）,BC重组亚型10例（占10.53%）,C亚型1例（1.05%）。结论 MSM人群急性HIV-1感染者年轻化,文化程度普遍偏低。小样本流行病学调查显示,急性HIV-1感染者中有CRF01_AE亚型、B亚型、BC重组亚型及C亚型4种亚型病毒株流行,CRF01_AE亚型为MSM人群的主要亚型。     

HIV-1亚型多样性及其对艾滋病防治影响的研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)具有高度变异的特性。HIV-1有9种亚型和78种流行重组型,HIV-1亚型在全球呈不均匀分布。HIV-1亚型多样性可对病毒的传播途径和传播能力、毒力和疾病进展、药物敏感性和耐药性、疫苗研发产生影响,使艾滋病的防治形势面临着严峻的挑战。该文对其研究近况作一综述。     

广州市2004-2005年HIV-1感染者亚型分析

目的 了解广州市艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行株的亚型及分布情况.方法 从2004-2005年采集的92份HIV-1抗体阳性者抗凝全血中,提取前病毒DNA,经套式聚合酶链反应(Nested-PCR)扩增gag和env区基因并测定序列,与国际标准参考序列比较确定亚型.结果 经系统进化树分析,92份样本中34份为CRF01AE,40份为CRF07BC,7份为CRF08BC,3份为欧美B,6份为泰国B(B'),2份为C.结论 广州市HIV-1流行株以CRF01AE和CRF07BC为主,也存在CRF08BC、B、B'及C亚型.     

大连市HIV-1亚型分布及流行特征分析

目的了解大连市近年新确证艾滋病病毒（HIV）感染者HIV-1的基因亚型分布及其流行特征。方法对144份全血标本分离血浆,提取核糖核酸,巢式聚合酸链反应扩增及序列测定,对测得的序列进行生物信息学分析,确定基因亚型,分析流行特征。结果 144份全血标本中,得到103例HIV感染者的有效基因序列,包括CRF01-AE、B（B’）、C、CRF-BC亚型及未确定重组型。其中CRF01-AE重组型占62.14%（64/103）,B（B’）占25.24%（26/103）,C亚型占1.94%（2/103）,BC重组型占9.71%（10/103）,未确定重组型占0.97%（1/103）。系统进化树显示,大连毒株与东北、北京等地区的毒株亲缘关系较近,存在交叉传播。结论大连市HIV感染者中,CRF01_AE为主要流行亚型,性途径尤其是男男同性传播是各亚型主要传播途径,与全国范围分子流行病调查结果有统计学差异。     

四种HIV分子流行病学分析方法的比较研究

目的 比较艾滋病病毒1型(HIV-1)血清学法(PEIA)、异源双链泳动法(HMA)、基因序列分析法(GSA)和基因芯片分析法四种亚型分析方法的准确性及特异性，评价其优劣及对于结果判定的影响。方法 分别用上述四种方法对25份经初筛及确认试验认定为HIV-1阳性的血清标本进行亚型分析。结果 PEIA亚型分析结果：B亚型12份，C亚型7份，E亚型6份；HMA亚型分析结果：B亚型13份，C亚型8份，E亚型4份；GSA亚型分析结果：B亚型13份，C亚型9份，E亚型3份；基因芯片法亚型分析结果：B亚型13份，C亚型9份，E亚型3份。结论 HIV-1四种亚型分析方法敏感性和特异性均较好，其中基因芯片分析法与目前通用的GSA所得结果相同，且操作简单，省时价廉，适用于大规模的标本分析，此法值得推广应用。     

陕西省HIV-1流行株膜蛋白基因 C2-V3区序列特征和亚型分析

目的了解陕西省HIV-1毒株的流行情况和亚型特征.方法用套式聚合酶链式反应(Nested-PCR)对6份采集于陕西省经确认为HIV-1感染者或艾滋病病人外周血淋巴细胞(PBMC)提取核酸,从6份样品中获得了HIV-1膜蛋白(ENV)基因的核酸片段进行扩增,并测定和分析了C2-V3及其邻区共312个核苷酸序列.结果 6份血样中,2份为HIV-1A亚型毒株感染(SHX7、SHX8);4份为HIV-1B'亚型(泰国B'亚型)毒株感染(SHX1、SHX5、SHX6、SHX9).SHX1、SHX5、SHX6、SHX9彼此间基因离散率为5.62%,SHX7与来自卢旺达的U08794之间的基因离散率仅为2.41%.结论陕西省目前存在HIV-1 A、B'两种亚型的毒株,HIV-1 B'亚型由邻近地区传入,HIV-1 A亚型为与非洲人接触传入.     

广州市男男性行为者HIV-1分子流行病学研究

目的了解广州市男男性行为人群（MSM）中,人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）亚型流行状况和基因变异特征。方法从2006～2007年广州市发现的、全部19份经男男性传播感染的HIV-1阳性血清样本,应用套式聚合酶链式反应（Nested—PCR）分别扩增gag和fitly区基因,并测定、分析序列。结果被成功扩增的有17份样本,获得13份env基因序列和17份gag基因序列。经系统进化树分析,11份（64．71％）为CRF01_AE,2份（11．76％）为CRF07_BC,4份（23．53％）为B。各亚型组内基因离散率：在env区,CRF01_AE为（8．27±0．93）,CRF07_BC为（11．04±1．72）,B为（16．65±1．78）;在gag区,CRF01_AE为（5．36±0．68）,CRF07_BC为（4．29±1．14）,B为（11．75±1.35）。V3环顶端四肽分析显示：8份CRF01_AE和2份CRF07_BC V3环顶端四肽均为GPGQ;3份B亚型中2份为GPGR,1份为GWGR。根据V3环关键氨基酸推测辅助受体使用情况,结果显示：所有样本均被预测使用CCR5辅助受体。结论广州市MSM人群HIV-1感染者中,至少存在CRF01_AE、CRF07_BC 2种重组亚型和B亚型的流行,且大部分流行株可能为使用CCR5辅助受体的巨嗜细胞嗜性／NSI毒株。     

河南省艾滋病病毒感染者HIV毒株膜蛋白基因序列研究

对河南省部分地区HIV-1感染者提取外周血单核细胞(PBMC)DNA,经套式PCR扩增env基因片断,对C2—V3区350—450核苷酸序列进行测定和分析.结果表明所采样品均属HIV—1B亚型,与其它国际亚型的基因离散率在20%以上;与流行于云南省的B亚型毒株基因离散率为2.8%左右,样品间的基因离散率很小.结果提示,流行于河南省的HIV属B亚型,并与云南省的流行株密切相关;其在河南省的流行时间在3年左右.     

出入境人群HIVenv基因部分序列特征和亚型研究

目的 对出入境人员中的艾滋病病毒(HIV)感染者进行病毒基因型测定，监测国内外流行的HIV毒株的状况及其变化。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)或直接套式PCR方法扩增HIVenv基因C2-V3区及其邻近的基因片段，然后直接进行核苷酸序列测定，与国际标准亚型序列比较，确定基因型并进行系统分析。结果 2003年确认的19例HIV阳性样品中，15例扩增出目的基因片段并进行了序列测定，确定为B亚型4例，B’亚型2例，D亚型2例，CRF01-AE重组亚型1例，CRF02-AG重组亚型6例。这些不同亚型的HIV-1感染者来自包括中国在内的6个国家。HIV-1基因型的分布与我国国内有很大不同。结论 出入境人群中HIV-1基因型种类多且复杂，监测出入境人群HIV基因型及其变化对于发现和鉴定新型变异毒株十分重要。