他克莫司预防兔耳瘢痕增生的实验研究

目的：研究他克莫司对兔耳瘢痕增生的影响。方法：选10只新西兰白兔雌雄各半,按本研究组建立的改良方法制作兔耳瘢痕模型,左耳为空白对照组涂凡士林软膏,右耳为实验组涂他克莫司软膏。伤后14天、21天、28天、35天及49天采集标本,行苏木精-伊红（HE）及Masson三色法染色,统计成纤维细胞密度,实时定量PCR（Real-time PCR）检测细胞外基质成分Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ;ColI）和纤维连接蛋白（fibronectin;Fn）,CD4＋辅助性T细胞-2（Th2）产生的重要纤维化基因IL-4及参与T细胞早期活化的重要基因巨噬细胞集落刺激因子（macrophage colony stimulating factor;M-CSF）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factorα;TNF-α）的表达。结果：HE及Masson三色法染色可见实验组较对照组胶原沉积明显减少,PCR结果可见ColI、Fn、IL-4、M-CSF和TNF-α在实验组中的表达较对照组在各时间点均减少。结论：应用他克莫司可通过下调IL-4、M-CSF和TNF-α的表达来抑制兔耳瘢痕增生。     

高压氧对兔耳增生性瘢痕形成的影响

目的：探讨高压氧（Hyperbaric oxygenation,HBO）对兔耳增生性瘢痕形成及对血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）表达的影响。方法：选取20只新西兰大白兔建立兔耳瘢痕模型,每耳6个创面,随机分成实验组和对照组2组,每组10只,共120个创面,实验组术后立即给予HBO处理,对照组处于常压环境中。术后第29天切取瘢痕组织,测量瘢痕增生指数（hypertrophic index,HI）,并用HE染色观察瘢痕形态学变化,免疫组织化学方法检测TGFβ1及VEGF的表达。结果：实验组HI值明显低于对照组（P〈0．01）;HE染色结果示实验组成纤维细胞数目较对照组明显减少（P〈0．01）;免疫组织化学检测结果示实验组VEGF、TGFβ1的表达量较对照组显著降低（P〈0．01）。结论：HBO可降低VEGF、TGFβ1的表达,对兔耳增生性瘢痕有明显抑制作用。     

反义TGF-β1抑制兔耳增生性瘢痕的实验研究

目的：探讨反义TGF-β1脱氧寡核苷酸对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中瘢痕生成的抑制作用，研究局部使用反义。TGF-β1的有效给药途径。方法：成年日本大耳白兔20只，建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型。采用组织形态学的方法对比研究反义TGF-β1在兔耳增生性瘢痕形成中的影响，并用原位杂交法技术检测兔耳增生块内TGF-β1 mRNA、Ⅰ型胶原蛋白(colla-genⅠ)mRNA、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ)mRNA的表达水平。结果：兔左耳增生性瘢痕局部注射反义TGF-β1后，按时间段取材，HE和Masgon染色显示真皮层变薄，成纤维细胞数量明显减少，胶原排列趋于一致。增生块的相对增生高度低于对照组。原位杂交显示TGF-β1 mRNA、collagenⅠmRNA、collagenⅢ mRNA阳性细胞表达率明显降低。结论：反义TGF-β1能抑制兔耳增生性瘢痕的增殖过程，使瘢痕组织纤维化程度明显减轻。局部注射裸DNA治疗瘢痕的给药途径是可行的。     

吡非尼酮抑制兔耳增生性瘢痕作用的研究

目的探索局部注射吡非尼酮对兔耳增生性瘢痕的抑制作用。方法选取健康新西兰大耳白兔36只,在兔耳双侧分别构建增生性瘢痕模型后,将36只兔子随机平均分为溶剂对照组(A组)、吡非尼酮实验组(B组)和曲安奈德阳性对照组(C组)。待创面完成上皮化后开始给药。B组注射含150μg吡非尼酮的DMSO溶液,共30μl;A组注射等体积的DMSO;C组注射曲安奈德30μl,1次/d,连续注射3 d后改为1次/周,共2次。给药后第45天取材固定,常规HE染色及组织病理学分析,并计算瘢痕增生指数。通过Masson染色分析胶原纤维排列,PCR检测瘢痕组织中TGF-β1、TGF-β2和Col-Ⅰ等基因表达情况。结果 B组和C组与A组相比,吡非尼酮和曲安奈德均可显著降低兔耳瘢痕增生指数,减少瘢痕的高度,其颜色更加接近正常皮肤,胶原组织排列也更为整齐有序;瘢痕组织中TGF-β1、TGF-β2和Col-Ⅰ等的m RNA表达也均明显下降。结论吡非尼酮对兔耳增生性瘢痕的形成具有明显的抑制作用,其初步作用机制可能与抑制瘢痕组织中的TGF-β1和TGF-β2的表达有关。吡非尼酮可能通过下调TGF-β1与TGF-β2等基因的表达抑制了兔耳增生性瘢痕的形成。     

压力对增生性瘢痕形成及TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的研究压力对增生性瘢痕(HTS)形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Sma和Mad同源物蛋白(Smad)信号通路的影响。方法健康成年新西兰大白兔12只(空军军医大学动物实验中心提供), 用直径为1 cm的圆形打孔器在每侧兔耳腹侧标记出4个圆形创面, 用手术小圆刀沿标记线切开皮肤全层至兔耳软骨膜, 分离软骨膜及全层皮肤, 刮除创面残留组织, 暴露创面, 术后第28天观察瘢痕形成情况。兔耳HTS模型构建成功后进行分组, 采用自身对照研究, 兔左耳设为实验组, 右耳为对照组, 用抽签法于每侧兔耳选取2个HTS模型作为研究对象, 每组24个。实验组:使用4-0尼龙丝线将直径为1.5 cm的圆形钕铁硼磁铁垫上压力垫片缝合至兔耳软骨上, 使用Flexiforce压力传感器测量压力大小并每周进行调整, 将压力控制在20～25 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),每天持续时间≥23 h;对照组:不做处理。在施加压力后第40天观察兔耳瘢痕大体形态, 并切取组织行HE、Masson染色进行组织学研究, 计算瘢痕增生指数(SEI)、成纤维细胞数、角质层厚度;采用荧光定量PCR检测TGF-β1...     

ALA-PDT对兔耳增生性瘢痕抑制效应及作用机制的初步研究

目的：观察ALA-PDT（5-氨基酮戊酸光动力疗法）对兔耳增生性瘢痕形成的抑制作用及对转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响。方法：在兔耳腹侧面做直径1cm大小全层皮肤缺损创面3个/侧,共60个。随机分为以下三组：高浓度ALA-PDT组（n=20）：20%ALA介导PDT治疗;低浓度ALA-PDT组（n=20）：10%ALA介导PDT治疗;对照组（n=20）：不做治疗,待创面自然愈合。在创面形成术后的第6天、第13天分别进行ALA-PDT治疗,观察治疗组与对照组之间的瘢痕形成率、瘢痕增生指数、胶原纤维含量及TGF-β1表达情况的差异。结果：ALA-PDT治疗降低了瘢痕形成率,其中药物高浓度ALA-PDT组与对照组的差异有统计学意义（P〈0.01）;药物高浓度ALA-PDT组和药物低浓度ALA-PDT组的瘢痕增生指数、胶原纤维含量与对照组的差异有统计学意义（P〈0.05）;药物高浓度ALA-PDT组与对照组之间的TGF-β1的表达差异具有统计学显著性（P〈0.05）。结论：ALA-PDT对兔耳增生性瘢痕的形成有抑制作用,从而预防创伤后增生性瘢痕形成,该作用可能通过减少TGF-β1的产生而实现。     

"黑布膏药"治疗增生性瘢痕的实验研究

目的 探讨"黑布膏药"防治增生性瘢痕的作用机制,为该药临床推广研发提供理论依据.方法 黑布膏药是一种外用中药制剂,其药物组成为黑醋、五倍子、蜈蚣、蜂蜜、冰片.利用兔耳腹侧面建立增生性瘢痕模型,将瘢痕随机分为实验组、康瑞宝埘照组和空白对照组3组,将药膏作用在兔耳瘢痕表面,分别于用药14 d和28 d取材,进行局部标本形态比较,应用HE染色进行瘢痕指数比较,应用免疫组化ABC法对比研究TGF-β1、aFGF细胞因子的变化.结果 空白对照组瘢痕彤成较厚,实验组和康瑞保组较薄,实验组和康瑞保对照组瘢痕增生发生率明显低于空白对照组;实验组和康瑞保对照组的瘢痕增生指数均明显低于空白对照组;兔耳瘢痕组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达明显降低;酸性成纤维细胞生长因子aFGF表达增高.结论 "黑布膏药"有明显抑制兔耳增生性瘢痕的作用.     

A型肉毒毒素对兔耳增生性瘢痕组织中P物质、β1转移生长因子、α平滑肌肌动蛋白的影响

目的探讨A型肉毒毒素（botuliniumtoxintypeA,BTA）对兔耳增生性瘢痕组织中P物质（substanceP,SP）、β1转移生长因子（transforminggrowthfactorbeta一1,TGF—β1）和α平滑肌肌动蛋白（alphasmoothmusleactinA,αSMA）的影响及意义。方法12只日本大耳白兔,体重3kg,建立兔耳增生性瘢痕模型。将兔耳创面分为BTA注射组（I组）和瘢痕组（S组）,每组72个创面。大体观察创面愈合时间和瘢痕增生情况,统计术后14d时的创面愈合率。术后28d时,同法另取6只兔子的兔耳腹面正常皮肤为空白对照组（C组）,收集3组标本。实时定量PCR检测各组标本中SP、TGF-β1和α—SMA的mRNA含量,Western印迹法检测α—SMA的蛋白表达。结果（1）术后14d,Ⅰ组与S组的创面愈合率的差异无统计学意义;（2）1组SP和TGF一β1、α—SMA的mRNA含量较S组显著降低,但仍高于C组（P〈0．05）;（3）蛋白水平上,3组的α—sMA表达两组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,且S组〉Ⅰ组〉C组。结论BTA注射不延迟创面愈合,并减少了兔耳增生瘢痕中SP、TGF-β1和α—SMA的mRNA表达,为其治疗增生性瘢痕的临床应用提供了一定的理论依据。     

机械张力对兔耳增生性瘢痕的形成及转化生长因子β1/Smad信号通路的影响

目的探讨机械张力对兔耳增生性瘢痕的形成及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响。方法采用实验研究方法。取6只3～5个月龄雌雄不拘新西兰大白兔, 于每侧兔耳腹面制作5个全层皮肤缺损创面。观察术后0(即刻)、7、14、21、28 d所有兔耳创面外观。术后28 d, 计算瘢痕形成率。将每只兔左耳的3个成熟瘢痕纳入张力组并采用螺旋扩弓器持续扩弓, 将每只兔右耳的3个成熟瘢痕纳入假张力组并仅缝合螺旋扩弓器不扩弓, 每组共18个瘢痕。经机械张力处理(以下简称处理)40 d, 观察2组兔耳瘢痕组织颜色、质地。处理40 d, 观察并计算瘢痕增生指数(SEI), 分别行苏木精-伊红染色观察组织形态、Masson染色观察胶原形态, 采用实时荧光定量反转录PCR法检测瘢痕组织中TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达, 采用蛋白质印迹法检测瘢痕组织中TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA的蛋白表达和Smad3磷酸化水平。以上实验各组样本数均为3。对数据行独立样本t检验。结果术后0 d, 所有兔耳均形成5个新鲜创面;术后7 d, 可见创...     

重组血管生成抑制剂Ad-METH-1对兔耳增生性瘢痕的抑制

目的 将已经成功构建、携带有METH-1基因的腺病毒表达载体pAdEasy-meth1,转染增生性瘢痕动物模型,研究血管靶向基因治疗对增生性瘢痕的抑制作用.方法 复制兔耳增生性瘢痕模型,于创面上皮化后10天,兔耳瘢痕局部注射携带有目的基因METH-1的重组腺病毒颗粒,30天后,用激光多普勒血流仪观察兔耳瘢痕微循环的变化,标本取材,行HE染色、CD34染色、核仁区嗜银颗粒染色,研究分析血管靶向基因治疗对兔耳瘢痕组织血管生成、微循环血流灌注及成纤维细胞增殖的影响.结果 与对照组相比,血管靶向治疗30天后,兔耳瘢痕微血管生成、微循环血流灌注及成纤维细胞增殖受到明显抑制.结论 在瘢痕形成早期,应用Ad-METH-1进行血管靶向治疗,对兔耳增生性瘢痕的形成,有明显的抑制作用.     

兔耳解剖特点与成功建立增生性瘢痕模型的相关性实验研究

目的 观察兔耳不同部位的解剖结构特点,探讨不同手术方式以及术后处理方法对兔耳增生性瘢痕形成的影响,为成功建立增生性瘢痕动物模型提供理论依据.方法 新西兰白兔25只,切取5只兔10只耳60份全层组织标本,进行正常组织学观察;20只兔40只耳,每只兔耳腹侧各建立直径为8mm的全层皮肤缺损6个,总计240个创面.其中10只兔120个创面随机分为4组,手术后7d给予不同处理;另外10只兔120个创面术后不做处理.连续观察创面愈合以及瘢痕增生情况6个月,分别于手术后4、8周留取瘢痕组织行病理学检查和测量瘢痕增生指数.结果 正常兔耳不同部位的解剖结构特点不一致;建立兔耳瘢痕模型,部位宜选择在双侧兔耳腹侧内侧缘中、下侣部位,创伤深度宜破坏软骨膜,瘢痕形成率高,瘢痕增生指数高,持续时间长;术后剥痂可促进创面愈合,不利于瘢痕形成与增生.结论 兔耳自身的解剖结构特点与成功建立增生性瘢痕模型有一定的相关性,选择合适的建模部位、合理的创伤深度、术后恰当的处理均可影响瘢痕的形成和增生程度,可以提高增生性瘢痕建模成功率.     

建立更加稳定和有效的兔耳瘢痕模型

目的：建立更加稳定和有效的兔耳瘢痕模型。方法：选用16只新西兰大耳白兔,分别在兔耳腹侧中段作1cm×1cm的全层皮肤缺损共192个,以形态学、瘢痕增生指数及羟脯氨酸（HPr）的含量变化对创面愈合后形成的增生块,进行动态组织病理学、细胞增殖活性及胶原纤维合成等检测。结果：兔耳腹侧中段创面可产生类似于人类的增生性瘢痕,其发生率为91．5％,增生块最长持续时间可达120多天。结论：采用本实验的模型复制方法,可以得到更加稳定和有效的兔耳增生性瘢痕。     

Imiquimod regulating Th1 and Th2 cell‐related chemokines to inhibit scar hyperplasia

Immunological factors play important roles in the occurrence of hypertrophic scars. Imiquimod can be used as an immunosuppressive agent to regulate the function of T‐helper (Th) cell subsets Th1 and Th2. In this article, we explored the impact of imiquimod on scar hyperplasia through Th cells. A rabbit ear hypertrophic scar model was built. Four round wounds were cut in each rabbit's ears ventrally with a diameter of 1 cm and bilateral symmetry. All the right ear wounds were treated with 5% imiquimod cream. The blank control group contained all the left ear wounds, which were treated with Vaseline ointment at the same time. Haematoxylin and eosin and Masson staining showed that imiquimod collagen deposition was significantly reduced compared with the control group, scar index (SEI) showed that the proliferative degree reached its peak on the 28th day after operation in blank group, and the degree of hyperplasia was significantly higher than that of the imiquimod group (P < .05). Real‐time Polymerase chain reaction results showed that the imiquimod induced the expression of Th2 cell‐related chemokines CCL2, CCL3, CCL5, CCL7, and CCL13 at each time point, which were significantly lower than that of the blank control group, and the expressions of Th1 cell‐associated chemokines CXCL10 and CXCL12 at each time point was significantly higher than the blank control group (P < .05). Imiquimod can be used to regulate the expression of Th1 and Th2 cell‐associated chemokines to control scar hyperplasia.     

Skin wounds in the MRL/MPJ mouse heal with scar

Adult MRL/MpJ mice regenerate cartilage during repair of through-and-through ear punch wounds. However, the ability of this mouse strain to heal isolated cutaneous wounds by regeneration or with scar is unknown. The purpose of this study was to characterize the rate of reepithelialization and collagen architecture in dermal wounds from MRL/MpJ mice compared with C57bl/6 and Balb/c strains. Full-thickness incisional (5 mm) and excisional (2 mm diameter) skin wounds were made on the dorsum of 7-week-old MRL/MpJ, C57bl/6, and Balb/c mice. Ear punch wounds were made simultaneously on each animal. Reepithelialization was complete by 48 hours for incisional skin wounds in each strain. All excisional wounds showed incomplete reepithelialization at 24, 48, and 72 hours. At 14 days, all skin wounds had grossly healed. In contrast to the ear wounds made in C57bl/6 and Balb/c mice, MRL/MpJ ear wounds were completely healed by day 28. Dorsal skin wound sections at 14 and 28 days revealed dense collagen deposition and similar degrees of fibrosis between the three strains of mice. In conclusion, in contrast to wound healing in the ear, MRL/MpJ mouse dorsal cutaneous wounds heal similarly to C57bl/6 and Balb/c mice with dermal collagen deposition and scar formation.     

增生性瘢痕动物实验模型的建立与应用

目的建立由动物自身产生的增生性瘢痕实验模型.方法选用47只日本大耳白兔,在耳腹侧面制作6mm圆形全层皮肤缺损创面、1.5cm×4.5cm长方形创面以及耳背圆形创面共388个,进行组织学等多项观察.结果70%兔耳圆形创面可发生与人增生性瘢痕类似的增生块,增生块持续时间最长为150d;长方形创面增生块发生率为80%以上,持续时间已超过262d.增生块内有特征性的结节或漩涡状结构.创基注入TGF-β1、IFN-y,可以促进或抑制增生块的发生.原位杂交,查明内源性TGF-β1mRNA为强阳性表达.利用此模型证实成纤维细胞凋亡在病理性瘢痕发生、发展过程中起着重要的调控作用.结论兔耳可以产生与人增生性瘢痕类似的病理改变,可以用作瘢痕研究的实验模型.     

15-脱氧-△12,14-前列腺素J2对兔耳增生性瘢痕Ⅰ型胶原表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的配体15-脱氧-△12,14-前列腺素J2(15d-PGJ2)对兔耳增生性瘢痕Ⅰ型胶原表达的影响,探讨15d-PGJ2防治增生性瘢痕的可行性.方法 选取新西兰大白兔18只,在兔耳腹侧面制作2 cm×3 cm全层皮肤缺损创面,每耳2个,共计72个,建立兔耳增生性瘢痕动物模型,随机分组,分别用15d-PGJ2及生理盐水行瘢痕内注射,1次/d,共7次.停药后第14、21天两组同时取材;每组每次切取18个组织块.应用免疫组织化学、荧光定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot检测Ⅰ型胶原的表达.结果 与对照组比较,15d-PGJ2注射后瘢痕体积缩小,变软变平,色泽轻度变浅.Ⅰ型胶原主要分布于真皮的细胞间质、成纤维细胞胞质中,血管壁上亦见阳性信号,在各个时间点15d-PGJ2组Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达均较对照组低,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 PPAR-γ的配体15d-PGJ2可降低瘢痕内Ⅰ型胶原的含量,引起瘢痕萎缩,从而防治瘢痕.     

光动力学疗法对兔耳增生性瘢痕作用的初步研究

目的 探讨光动力学疗法对兔耳增生性瘢痕的作用。方法 建立兔耳增生性瘢痕模型后，将增生性瘢痕块随机分为血卟啉单甲醚（HMME）一光动力学疗法（PDT）治疗组和对照组（n=12）。观察瘢痕生长情况，建模术后28d取材行常规HE染色和胶原纤维VG染色，计算微血管密度，观察PDT对瘢痕的影响。结果 PDT治疗后瘢痕厚度显著降低，真皮层变薄；微血管数量及成纤维细胞数量减少，且主要位于真皮深层；胶原含量下降，胶原纤维排列较规则有序。结论 在瘢痕形成早期，HMME—PDT能够有效抑制兔耳瘢痕的增生，该方法有可能成为瘢痕预防与治疗的有效方法。     

耳后扩张的瘢痕瓣加Medpor支架行耳廓再造术

目的：探讨采用耳后乳突区瘢痕扩张皮瓣和Medpor支架行瘢痕性耳廓缺损再造术的效果。方法：12例因烧伤致耳廓缺损,采用耳后瘢痕扩张皮瓣包裹Medpor支架作耳廓再造术。结果：术后经6个月～3年随访,再造的耳廓瘢痕皮瓣血运皆良好,再造耳外形满意。结论：耳后皮肤瘢痕经扩张后,仍可用于耳廓缺损的再造术。     

Inhibition of prolyl 4-hydroxylase reduces scar hypertrophy in a rabbit model of cutaneous scarring

Hypertrophic scars result from excessive collagen deposition at sights of healing dermal wounds and can be functionally and cosmetically problematic. Pharmacological regulation of collagen synthesis and deposition is a direct approach to the control of scar tissue formation. We tested the ability of the phenanthrolinone derivative FG-1648 (in 0.5% Carbopol 971 PNF gel, pH 6.5), a prolyl 4-hydroxylase inhibitor, to reduce hypertrophic scar formation in a rabbit ear hypertrophic scar model. New Zealand White rabbits were divided into two treatment groups (n = 12 wounds per group with an equal number of controls): low-dose group: 0.5% FG-1648; high-dose group: 1% FG-1648. Left ears were used for treatment and right ear for control. Four 7-mm dermal ulcer wounds were made on each ear. The inhibitor was topically applied to the wound at the time of wounding and once daily up to postoperative day 7. Wounds were harvested at postoperative day 28 and scar hypertrophy quantified by measurement of the scar elevation index. All wounds showed complete healing. Treatment of wounds with 1% prolyl 4-hydroxylase inhibitor decreased the scar elevation index by 26% compared to control wounds (p < 0.01). Wounds treated with 0.5% FG-1648 inhibitor showed no difference in scar elevation compared to control wounds. These results suggest that inhibition of prolyl 4-hydroxylase may be a suitable agent for topical treatment for the prevention of hypertrophic scar tissue.