3种拟除虫菊酯类农药拟雌激素样活性的子宫增重实验研究

[目的]研究国内广泛使用的3种拟除虫菊酯类农药氰戊菊酯、氯氰菊酯和甲氰菊酯在体内的拟雌激素样作用。[方法]在不产生严重中毒的剂量以下,给刚断乳的雌性昆明种小鼠皮下注射不同浓度的3种拟除虫菊酯类农药连续3 d,氰戊菊酯25,50,100mg/(kg·d),氯氰菊酯20,40,80mg/(kg·d),甲氰菊酯4,8,16mg/(kg·d),观察它们对小鼠子宫和阴道的影响。[结果]高浓度氰戊菊酯组,小鼠阴道开口率(20%),阴道黏膜上皮细胞高度(2.84±0.35) μm,子宫重量(9.58±1.01)mg,脏器系数(0.79±0.09)%,子宫内膜上皮细胞高度(1.25±0.16)μm,基质层厚度(5.28 ±0.72)μm及腺体数量(2.98±0.32);高浓度氯氰菊酯组,小鼠阴道开口率(20%),阴道黏膜上皮细胞高度(2.78±0.30) μm,子宫重量(9.94±1.10)mg,脏器系数(0.83±0.10)%,子宫内膜上皮细胞高度(1.25±0.14)μm,基质层厚度(5.06 ±0.62)μm及腺体数量(3.16±0.43);高浓度甲氰菊酯组,小鼠阴道开口率(40%),阴道黏膜上皮细胞高度(3.01±0.33) μm,子宫重量(10.07±1.52)mg,脏器系数(0.85±0.18)%,子宫内膜上皮细胞高度(1.29±0.15)μm,基质层厚度(5.34 ±0.58)μm及腺体数量(3.21±0.34)。3种拟除虫菊酯类农药各浓度组与阴性对照组比较,上述各项指标差异均无显著性。[结论]3种拟除虫菊酯类农药对子宫和阴道无明显影响,未显示出拟雌激素样活性。而小鼠阴道黏膜上皮细胞高度可以作为检测化学物拟雌激素样活性的一个指标。     

子宫营养试验检测对-壬基酚的雌激素样活性

目的 :检测对 -壬基酚 (p- NP)的雌激素样活性。方法 :采用子宫营养试验 ,以使此法作为我国筛查环境内分泌干扰物 (EEDs)的常规方法。未成年 SD雌性大鼠 (2 1d～ 2 2 d) 10 0只 ,分为 p- NP 6 0 m g/ kg、 12 0 m g/ kg和 2 4 0 m g/ kg3个剂量组 ,溶剂对照组 (花生油 )和阳性对照组 (苯甲酸雌二醇 ,E2 B) 0 .4 m g/ kg,每天一次灌胃给药 ,连续给 3d和 7d。于末次给药的第 2 4 h处死动物 ,取子宫。结果 :3d和 7d两个时段 ,E2 B、 p- NP 12 0 mg/ kg和 2 4 0 mg/ kg 2个剂量组子宫湿重、子宫 /体重比、平滑肌厚度和宫腔上皮高度与溶剂对照组相比均增高 (P<0 .0 1) ,且有明显的剂量效应关系。给 p- NP7d的未成年 SD雌性大鼠阴道开口时间提前。结论 :p- NP具有弱雌激素样活性 ,3d幼雌 SD大鼠子宫营养试验在我国作为EEDs常规筛检方法是可行的     

子宫增重法检测壬基酚、双酚A雌激素样活性及其联合作用

目的应用子宫增重法检测壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性并评价其联合作用。方法选择性未成熟雌性昆明种小鼠110只,体重10~13g,按体重随机分为11组:NP240mg/kg、120mg/kg、60mg/kg剂量组,BPA480mg/kg、240mg/kg、120mg/kg剂量组,联合240mg/kgBPA 120mg/kgNP、120mg/kgBPA 60mg/kgNP、60mg/kgBPA 30mg/kgNP剂量组,阴性对照组、阳性对照组(苯甲酸雌二醇1·47μg/10g),皮下注射染毒3d,称子宫湿重,计算子宫重量系数。用金正均法评价联合作用的性质。结果NP和BPA可致子宫重量系数增大,呈剂量-效应关系(分别为r=0·8192,P<0·01;r=0·6898,P<0·01);两者联合染毒致子宫重量系数增大,亦呈剂量-效应关系(r=0·5465,P<0·01)。各染毒组与阴性对照组比较,差异有统计学意义(P<0·05或P<0·01),其联合作用性质在混合低剂量组呈协同作用(Q=1·41),混合中、高剂量组呈相加作用(Q=0·88,Q=0·87)。结论NP、BPA具有雌激素样活性,其联合作用性质在较低剂量呈协同作用,较高剂量呈相加作用。     

用MCF-7细胞检测多氯联苯拟雌激素样活性

目的观察多氯联苯（PCB）对MCF-7细胞增殖及生长曲线的影响。方法选用多氯联苯（1254）进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验。结果PCB组细胞增殖指数均明显高于溶剂对照组，10ng／LPCB可诱导MCF-7细胞最大增殖（P〈Q01）。生长曲线分析也显示，PCB、E2生长曲线明显上移，有明显刺激MCF-7细胞增殖的类雌激素活性。结论提示PCB具有拟雌激素样活性。     

环境雌激素活性物质的检测

本文从整体、细胞，受体和分子水平等各层次、对子宫生长试验、雌激素受体阳性细胞培养、肝细胞卵黄素生成实验、雌激素受体竞争性结构测定、雌激素受体重组酵母实验以及荧光偏振实验等雌激素活性物质的检测方法进行综述。并指出了部分方法的优缺点及该检测体系尚待完善之处。     

用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性

目的 观察常用有机磷农药对MCF-7细胞增殖以及对雌激素受体基因和pS2基因表达的影响。方法 选用乐果、乙酰甲胺磷、久效磷、马拉硫磷、对硫磷、对氧磷6种有机磷农药进行MCF-7人乳腺癌细胞增殖实验和转录活化实验。结果 6种有机磷农药不能诱导MCF-7人乳腺癌细胞增殖,但乐果却能使pS2基因表达上调。结论 乐果可能具有拟雌激素样活性,且引起pS2基因表达上调不通过雌激素受体介导。     

双酚A和β-六氯环己烷对小鼠雌激素活性的实验研究

目的　利用无内源性雌激素模型小鼠 ,探讨双酚A(BPA)和 β-六氯环己烷 (β -HCH)单独与联合投予时的雌激素活性。方法　手术切除小鼠双侧卵巢 17天后 ,给予不同剂量雌二醇 (17β -E2 )并建立其与子宫脏器系数和POD(过氧化物酶 )活性的剂量效应关系。单独或联合腹腔注射给予BPA和 β -HCH ,测定雌激素活性。 结果　 17β -E2剂量与子宫脏器系数和POD活性之间有剂量效应关系。BPA高剂量组子宫脏器系数和POD活性均升高 (P <0 0 5、P <0 0 1)。β -HCH高剂量组使子宫脏器系数升高 (P <0 0 1) ,而POD活性升高无显著性差异 (P >0 0 5 )。在联合投予实验中 ,子宫脏器系数均未见协同作用。而BPA和 β -HCH剂量为 10 0和 5 0 0 μmol/kg体重时对POD活性呈现出协同作用。结论　BPA和 β -HCH单独作用时 ,在一定剂量范围内有雌激素活性。两者联合作用时 ,在一定浓度下表现出协同作用。     

五种多环芳烃对大鼠子宫雌激素受体影响的实验研究

采用大鼠子宫湿重实验和体外雌激素受体结合实验评价了 5种多环芳烃的拟雌激素活性。结果表明苯并 (a)芘、7,12 -二甲基苯并蒽和 2 ,3,6 ,7-二苯并蒽的中、高剂量可导致初断乳大鼠子宫湿重明显增加 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。苯并 (a)蒽和 1,2 -苯并菲各剂量均不引起大鼠子宫湿重明显增加 (P >0 0 5 )。苯并 (a)芘、7,12 -二甲基苯并蒽和 2 ,3,6 ,7-二苯并蒽能明显抑制雌二醇与雌激素受体的结合 (P <0 0 1)。苯并 (a)蒽和 1,2 -苯并菲各剂量均不能明显抑制雌二醇与雌激素受体的结合 (P >0 0 5 )。通过体内外实验表明苯并 (a)芘、7,12 -二甲基苯并蒽和 2 ,3,6 ,7-二苯并蒽具有明显的拟雌激素活性 ,而苯并 (a)蒽和 1,2 -苯并菲没有检测到拟雌激素活性     

环境雌激素辛基酚检测的研究进展

环境雌激素辛基酚(OP)广泛用于工业、农业及日常生活中，可造成水体、鱼类、贝类的污染，正确监测环境中OP的含量并评估其雌激素活性，有助于评估其对人体健康产生的不良影响。本从OP在环境和食物中的分布、化学仪器监测和雌激素活性检测等方面介绍近年来所取得的进展。     

雌激素和雌激素受体在脂肪组织中的作用

雌激素介导雌激素受体在白色脂肪组织的调节中起重要作用。在男性和女性脂肪组织中，尤其在白色脂肪组织均存在雌激素受体，通过雌激素受体α敲除鼠的研究发现，雌激素受体是白色脂肪组织发育的抑制图子。植物雌激素有益于调节白色脂肪组织，植物雌激素和雌激素受体有望用于肥胖症的治疗。     

改良的环境化学物雌激素干扰活性检测方法的建立和应用

目的建立雌激素受体(ER)介导的荧光素酶(Luc)报告基因试验方法,为化学物拟(抗)雌激素活性的检测提供研究工具。方法将受雌激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pERE-aug-Luc和表达ER的质粒rERα/pCI转染Vero细胞,建立ER报告基因试验。以雌激素(E2)为阳性对照检测该方法的筛选效率。Vero转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雌激素干扰活性。结果雌激素对转染两种质粒的Vero的诱导作用表现为:10-7 mg/L的雌激素显著诱导Luc的表达,最大诱导倍数为100.959倍,半数效应浓度EC50为3.57×10-6 mg/L。化学物BPA可诱导Luc的表达,其中在0.01mg/L时即可显著性的诱导Luc表达,未发现BPA具有雌激素拮抗作用。结论本研究建立的ER报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有拟激素活性。     

DBP、DEHP及其代谢物MBP、MEHP的体内雌激素样活性分析

[目的]探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二丁酯(DBP)和邻苯二甲酸-2-乙基己基酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸单丁酯(MBP)和邻苯二甲酸-单-乙基己基酯(MEHP)的雌激素样活性。[方法]按照经济合作与发展组织(Organization for Economic Gooperation and Development，OECD)推荐的标准试验方法，采用背部皮下注射的方式对出生后18d雌性未成熟大鼠连续给药3d，末次给药24h后处死，观察化学物对大鼠体重、子宫重量、滤纸吸干后子宫重和子宫粘液重量等相关指标的变化。[结果]虽然未观察到DBP、MBP、DEHP及MEHP有明显的促子宫增重作用，但MBP和MEHP对未成熟雌性大鼠的毒性大于DBP和DEHP，40～1000mg／kgMBP和1000mg／kg MEHP可减缓大鼠的体重增长速度，200和1000mg／kg MEHP则可明显降低大鼠子宫的粘液分泌量。[结论]DBP、DEHP及其代谢产物MBP和MEHP均无雌激素样活性，MBP可减缓大鼠体重增长速度，而MEHP则可影响大鼠子宫发育过程和子宫功能。     

邻苯二甲酸二丁酯对对羟基苯甲酸酯类雌激素活性效应的增强作用

目的评价对羟基苯甲酸丙酯(PP)、对羟基苯甲酸丁酯(BP)和邻苯二甲酸二丁酯(DPB)的单独和联合处理的雌激素活性效应。方法应用未成熟雌性Wistar大鼠连续3天皮下染毒的子宫增殖试验。通过重量及系数,判定PP、BP和DPB的单独处理和两两联合处理后的雌激素活性效应。结果实验中PP和BP雌激素活性最小可观察作用剂量(LOEL)分别为400mg/kg和200mg/kg,DPB在400~100mg/kg范围内没有发现雌激素活性。PP+BP等效应剂量配比联合处理中1LOEL和1/2LOEL具有子宫增殖作用,1/4LONEL未发现子宫增殖作用。PP和BP分别与子宫增殖试验中未见雌激素效应的DBP进行联合处理,在100mg/kgPP(1/4LOEL)+400mg/kgDBP,200mg/kgPP(1/2LOEL)+400mg/kgDBP和100mg/kgBP(1/2LOEL)+400mg/kgDBP联合处理下的子宫增殖试验出现雌激素活性。结论DBP具有增加PP和BP雌激素活性的效应,并且DBP对PP的雌激素活性的增强作用大于对BP的雌激素活性增强作用。     

The in vitro estrogenic activities of polyfluorinated iodine alkanes

Background: Polyfluorinated iodine alkanes (PFIs) are important intermediates in the synthesis of organic fluoride products. Recently, PFIs have been detected in fluoropolymers as residual raw materials, as well as in the ambient environment.Objectives: High production volumes and potential environmental releases of PFIs might become a concern, but the exposure risk and toxicity of these chemicals are still unclear. In this study, we investigated the potential estrogenic effects of PFIs.Methods: We studied the estrogenic effects of fluorinated iodine alkanes (FIAs), fluorinated telomer iodides (FTIs), and fluorinated diiodine alkanes (FDIAs) using the E-screen and MVLN assays and the evaluation of estrogen-responsive genes in MCF-7 cells.Results: FIAs have an iodine atom at one end of the perfluorinated carbon chain. 1-Iodoperfluorohexane (PFHxI) and 1-iodoperfluorooctane (PFOI) promoted the proliferation of MCF-7 cells, induced luciferase activity in MVLN cells, and up-regulated the expression of TFF1 and EGR3. In these assays, other FIAs gave negative responses. FDIAs have an iodine atom at each end of the perfluorinated carbon chain, and all the FDIAs showed estrogenic effects. The estrogenic potencies of FIAs and FDIAs correlate well with the carbon chain length of the chemicals. The optimum chain length for estrogenic effects is six carbons, and then eight and four carbons. All FTIs have a single iodine atom at the end of a partially fluorinated carbon chain. None of the FTIs showed estrogenic effects in the tests.Conclusions: The estrogenic effects of PFIs are dependent on the structural features of iodine substitution and chain length. This research will be helpful in further understanding the estrogenic effects of perfluorinated compounds.     

Evaluation of estrogenic activities of pesticides using an in vitro reporter gene assay

The estrogenic activities of 32 pesticides in agricultural products were evaluated using the E-CALUX assay system developed by Xenobiotic Detection Systems Inc (North Carolina, USA). This system utilizes human ovarian carcinoma cells (BG1) stably transfected with an estrogen-responsive luciferase reporter gene plasmid. It was found that tolclofos-methyl, prothiofos, diazinon, Thiabenclazole (TBZ) and pyriproxyfen had estrogenic activity. Several pesticides are often present in agricultural products. Therefore the estrogenicity of the mixtures of two kinds of pesticides was evaluated. The activity of diazinon/tolclofos-methyl, pyriproxyfen/prothiofos and TBZ/o-phenylphenol (OPP) was increased up to 1.2-5.3 fold. On the other hand, chlorfluazuron, imazalil and chlorfenapyr had anti-estrogenic activity. Further, to evaluate the change in the estrogenic activity of pesticide metabolites, an experimental system was established using a rat S9 mixture. Metabolites of permethrin and OPP had no estrogenic activity, but they had weak activity after the metabolism. On the other hand, the metabolites of TBZ exhibited less estrogenic activity than the original compounds.     

报告基因方法对壬基酚、双酚A雌激素样活性的体外研究

目的利用基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素检测方法对壬基酚(NP)、双酚A(BPA)的雌激素样活性及作用机制进行研究。方法合成人雌激素反应元件(ERE)核心片断并将其插入pGL3promoter载体的多克隆位点构建而成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERELuc,用脂质体转染法将pERELuc及内对照质粒phRLSV40瞬时转染MCF7细胞,用17β雌二醇(E2)、三苯氧胺(Tam)、壬基酚、双酚A等处理后检测报告基因荧光素酶的表达。结果转染pERELuc的MCF7细胞的报告基因表达与E2呈明显的剂量-反应关系,1×10-11molLE2可引起报告基因的表达,至1×10-9molL可达到最大表达值,而未转染pERELuc时与E2无明显反应,三苯氧胺可以显著抑制E2引起的报告基因的表达。1×10-6molL以上NP和BPA出现雌激素样作用。NP的雌激素样活性略强于BPA。结论本试验建立并采用的基于报告基因的体外雌激素检测方法是可行的,NP和BPA有一定的雌激素样活性作用。     

自来水及水源水有机提取物类雌激素活性研究

为了检测自来水及水源水有机提取物的类雌激素活性 ,应用环境雌激素基因重组酵母、细胞增殖和子宫增重等三项短期生物学实验进行测定。结果发现 :水样有机提取物在相当于原水量 50ml时两项体外实验均检出雌激素活性 ,原水量 2 50ml时细胞增殖效应达到最大 ,以后随原水量增大细胞增殖效应逐步减弱。原水量 12 50ml时酵母菌β -半乳糖苷酶活性最强 ,以后随原水量增大 β -半乳糖苷酶活性逐步减弱。水厂水源水有机提取物低、中剂量组受试小鼠子宫湿重增加 ,与对照组比较有统计学意义 ,高剂量组湿重减少。提示水源水有机提取物具有类雌激素活性。采用这三项实验组成的生物学检测程序具有一定的灵敏度 ,且较快速、方便。     

农药咪鲜安雌激素样作用机制体外研究

目的用体外试验检测农药咪鲜安的雌激素样作用,并对其可能的作用机制进行探讨。方法将人乳腺癌细胞株(MCF-7)细胞在含10%小牛血清的RPM11640培养基中进行半开放式贴壁培养,加受试物前2周,改在含10%去激素小牛血清的无酚红RPMI 1640培养基中培养。设溶剂对照组、阳性对照组及5个不同浓度的咪鲜安样品组,采用MCF-7细胞增殖试验、四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)试验和生长曲线观察咪鲜安对MCF-7细胞增殖的影响,并通过雌激素受体(ER)结合试验分析咪鲜安与ER的结合情况,探讨可能的作用机制。结果咪鲜安在10^-7~10^-5mol/L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且存在剂量-效应关系;咪鲜安能竞争性地与ER结合,从而抑制125I-E2与ER结合。结论咪鲜安具有雌激素样作用,其作用机制在于其竞争性地与ER的结合。     

杀螟硫磷体外环境雌激素活性及机制研究

目的 检测杀螟硫磷的环境雌激素活性，并探讨其作用机制。方法 人乳腺癌细胞株（MCF-7）细胞在含10％小牛血清的RPMI1640培养基中进行半开放式贴壁培养，加受试物前2周，改在含10％去激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基中培养。试验设溶剂对照组、阳性对照组及杀螟硫磷5个不同浓度实验组，采用MCF-7细胞增殖试验、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）试验和生长曲线观察杀螟硫磷对MCF-7细胞增殖的影响，并通过雌激素受体（ER）结合试验分析杀螟硫磷与ER的结合情况。结果 杀螟硫磷在10^-9～10^-6mol／L剂量范围内可诱导MCF-7细胞增殖，差异有统计学意义（P〈0．05），且存在剂量-效应关系。杀螟硫磷能与ER结合，抑制^125I-E2与ER结合。结论 杀螟硫磷具有环境雌激素活性，其拟雌激素作用由ER介导而产生。     

大豆异黄酮的雌激素样作用研究

目的探索大豆异黄酮经口摄入内分泌干扰毒性以及剂量-反应关系;通过和染料木素比较探索大豆异黄酮雌激素样作用的主要活性成分。方法采用子宫增重试验,分别经口灌胃给与0.1、0.2、0.5、1.5g/kg的大豆异黄酮和0.05、0.10、0.25、0.75g/kg染料木素,以及3.0μg/kg的雌二醇、水和油对照,连续3天。实验结束称量子宫的湿重和干重,对卵巢、子宫和阴道进行组织病理学检查,并且对相应剂量2种受试物的效应进行比较。结果大豆异黄酮和染料木素均诱导子宫重量明显增加,子宫和阴道的组织病理学明显增生,并有剂量-反应关系。染料木素组和含有等量染料木素的大豆异黄酮组的雌激素作用无差异。结论在子宫增重试验中,染料木素是大豆异黄酮的主要活性成分;经口摄入SIF对未成年青春期前的雌性大鼠产生内分泌干扰毒性,并有剂量-反应关系。