γ分泌酶抑制剂阻断Notch信号通路对肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的观察γ分泌酶抑制剂MW167阻断Notch信号对肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法正常氧条件下培养肺腺癌细胞A549,通过Western blotting及RT-PCR方法检测Notch受体各亚型的表达。在正常氧条件下,不同浓度(5、10、20μmol/L)MW167处理肺腺癌细胞A549(加药组),48 h后采用Western blotting方法检测Notch1蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测Notch信号通路下游基因HES1mRNA表达的变化,应用MTT法检测MW167对细胞增殖的影响;每个浓度设二甲基亚砜对照组。结果 Notch1～4各亚型在A549细胞均有表达。5、10、20μmol/L MW167处理肺腺癌A549细胞48 h后,各加药组与对照组相比,Notch1蛋白表达升高(P<0.05),而HES1 mRNA表达下降(P<0.05),随MW167浓度升高,对HES1 mRNA表达的抑制率逐渐升高(r=0.927,P<0.01)。MTT法检测结果显示各加药组吸光度高于对照组(P<0.05),且随MW167浓度升高,细胞增殖率相应升高(r=0.904,P<0.01)。结论在正常氧条件下,MW167可阻断Notch信号通路,对A549细胞起促增殖作用;Notch1信号通路可能在A549细胞中起一定抑癌作用。     

STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响

目的：观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法：采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）序列（siRNA1-3）和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果：经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平（P〈0.05）,转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低（P〈0.05）,而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高（P〈0.05）。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关（r=0.854,0.910,P〈0.05）;与BAX蛋白表达程负相关性（r=-0.848,P〈0.05）;与Caspase-9蛋白表达程无相关性（r=-0.787,P〉0.05）。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论：STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。     

抑制survivin基因表达对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究survivin基因与肺腺癌的关系,探讨survivin对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法合成抑制survivin基因的siRNA,通过脂质体转染到肺腺癌A549细胞中,荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞增殖和凋亡指数,Western blot检测survivin编码表达的蛋白,RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果抑制survivin在肺腺癌A549细胞中的表达后,能够抑制A549细胞增殖,诱导细胞的凋亡,survivin基因编码表达的蛋白明显减少。结论应用RNAi抑制survivin基因,可以抑制A549细胞增殖,促进细胞凋亡。survivin能作为治疗肺腺癌的一个潜在的基因靶点。     

RNA干扰介导ABCE1基因沉默对人肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的ABCE1在人肺腺癌A549细胞增殖中的作用进行初步探讨。方法以人肺腺癌A549细胞系为研究对象,针对其ABCE1基因序列设计小干扰RNA片段,重组其短发夹状RNA（shRNA）表达载体,转染入细胞。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）方法分别检测转染后ABCE1的mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测增殖能力。结果RT-PCR和Western blot显示shRNA对ABCE1基因和蛋白水平均有显著的下调作用。人肺腺癌A549细胞的生长速度减慢。结论下调ABCE1基因后,A549细胞的增殖能力得到了明显的抑制,有可能成为临床治疗A549的靶点之一。     

小干扰RNA干扰β连环素表达对肺腺癌A549细胞Wnt信号通路的作用

目的 研究小干扰RNA(siRNA)干扰β连环素(β-catenin)表达对肺腺癌A549细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将A549细胞分为转染β-catenin干扰质粒PGCsil-CTNNB1-siRNA组(干扰质粒组)、转染阴性对照质粒PGCsil-NC-siRNA组(阴性对照组)和未转染质粒组(空白对照组),对各组细胞用实时PCR法检测β-catenin及Wnt/[β-catenin信号通路靶基因细胞周期蛋白(cyclin)D1 mRNA的表达,以噻唑蓝法检测细胞增殖能力,流式细胞术进行细胞周期分析,克隆形成试验检测克隆形成率,Millicell小室试验检测细胞迁徙能力.结果 干扰质粒组细胞β-catenin mRNA 和cyclin D1 mRNA表达均明显低于阴性对照组(0.002 ±0.001比0.023±0.002,P<0.01;0.005±0.002比0.040±0.020,P<0.05)和空白对照组(β-catenin mRNA:0.021±0.003,P<0.01;cyclin D1 mRNA:0.042±0.004,P<0.05);第5～7天细胞增殖能力明显弱于阴性对照组和空白对照组(P<0.05,P<0.01),细胞倍增时间(58.1 h)明显长于阴性对照组(37.9 h,P<0.05)和空白对照组(34.2 h,P<0.05);GO～G1期细胞(86.4%±2.6%)明显多于阴性对照组(73.8%±0.9%,P<0.01)和空白对照组(75.8%±1.5%,P<0.01);细胞克隆形成率(31.6%±7.7%)明显低于阴性对照组(46.9%±7.3%,P<0.05)和空白对照组(44.2%±2.5%,P<0.05),穿过Millicell小室底膜的细胞数(16.0±3.8)明显低于阴性对照组(32.7±3.1,P<0.01)和空白对照组(33.0±2.7,P<0.01).结论 用siRNA干扰β-catenin的表达可抑制肺腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路,降低细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁徙能力.Wnt/β-catenin信号通路可能成为肺癌分子靶向治疗的新靶点.     

RNA干扰HO-1表达对肺腺癌A549细胞生物学行为的影响研究

目的应用RNA干扰技术特异性抑制血红蛋白加氧酶-1（HO-1）的表达,观察HO-1对肺腺癌A549细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法将体外构建的HO-1小分子RNA（siRNA）转染入肺腺癌A549细胞,分为空白对照组（blank组）、脂质体组（mock组）、阴性对照组（NC组）、HO-1siRNA组;应用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测HO-1mRNA和蛋白表达水平;分别以CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖能力和凋亡率,用Transwell试验检测细胞迁移能力。结果细胞培养48、72h后,与blank组、mock组、NC组比较,HO-1siRNA组细胞存活率均降低（均P＜0.05）,细胞凋亡率均增高（均P＜0.05）,G0期/G1期细胞比例均增高（均P＜0.05）,Transwell试验中穿膜细胞数均减少（均P＜0.05）。结论RNA干扰HO-1基因表达后能有效调控肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为,抑制肺腺癌A549细胞的增殖,促进凋亡,降低细胞的侵袭能力。     

肺腺癌A549细胞STAT3基因沉默对细胞周期分布和凋亡水平变化的影响

目的：研究沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期分布状况和细胞凋亡水平变化及其意义。方法：利用流式细胞仪（FCM）检测RNA干扰（RNAi）技术沉默STAT3基因表达前后肺腺癌A549细胞的细胞周期状况和细胞凋亡水平变化。结果：STAT3沉默后,肺腺癌A549细胞大量处于G0／G1期（P〈0．05）,而S、G2／M期的细胞相对减少（P〈0．05）;并且细胞凋亡明显增多,前48h增长明显（R0．05）,48h后增长趋于平稳（P〉0．05）,但仍能较长时间维持较高水平。结论：STAT3siRNA能阻断A549细胞的细胞周期,使细胞周期停留在G0／G1期,不能进入S期,不能完成DNA的合成,无法进入M期,未完成细胞的分裂,并能诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,提示STAT3的表达与A549细胞的细胞周期和凋亡密切相关。     

RNA干扰技术抑制人肺腺癌A549细胞株EGFR基因表达

目的：建立质粒表达载体转录介导的RNAi技术,为开发阻断表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)信号通路的新途径和EGFR下游信号通路研究奠定基础。方法:化学合成siRNA-EGFR序列,构建并鉴定重组载体pSciencer 2.0 U6-shRNA-EGFR,转染A549人肺腺癌细胞株,免疫印迹和RT-PCR检测沉默效果,用四甲基偶氮唑盐比色法、DAPI染色法、Annexin V/PI 双标记法观察基因沉默后细胞生物学特性改变。结果：shRNA-EGFR使EGFR表达明显下调,转染细胞后,显著抑制细胞增殖,诱发凋亡。DAPI染色示细胞核着色增强,胞核缩小,核膜皱缩,染色质凝聚、边缘化、破碎;Annexin V/PI示凋亡早期细胞比例增高;细胞周期分析见 shRNA-EGFR各组 G0-G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。结论：化学合成法和体内转录质粒载体法介导的RNAi可序列特异性下调A549细胞株EGFR 基因转录和表达。shRNA-EGFR重组质粒通过下调EGFR 表达可抑制细胞增殖和诱发凋亡,部分逆转 NSCLC 细胞的恶性表型,有望成为NSCLC 基因治疗和功能研究的工具。     

SOCS3基因对肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的影响

目的探讨SOCS3基因对人肺腺癌细胞株A549中c-Myc表达的调控作用。方法以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至人肺腺癌细胞株A549,RT-PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达;Westernblot检测STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化;sqRT-PCR测定转染前后细胞中c-MycmRNA的表达。MTT法检测转染前后细胞增殖变化。结果RT-PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中SOCS3稳定表达;Westernblot证实pEFSOCS3转染组细胞STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平明显降低(P <0.01);sqRT-PCR显示pEFSOCS3转染组细胞中c-MycmRNA的表达显著降低。MTT法结果示pEFSOCS3转染组细胞增殖明显受到抑制。结论SOCS3蛋白可能通过抑制A549细胞中STAT3蛋白的酪氨酸磷酸化从而下调c-Myc基因的表达,最终抑制A549增殖。     

低氧降低肺癌A549细胞对培美曲塞的药物敏感性

目的 研究低氧环境下非小细胞肺癌A549细胞对化疗药物培美曲塞(Pe)敏感性变化的影响.方法 将A549细胞分组培养,分为常氧对照组、常氧溶剂组、常氧加药组、低氧细胞组、低氧溶剂组、低氧加药组.用MTT法检测Pe对A549细胞增殖能力的影响,并筛选出Pe的适宜实验浓度;用Hoechst染色观察6组细胞凋亡情况;用Wes...     

二甲双胍联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究二甲双胍（metformin,Met）联合培美曲塞（pemetrexed,Pem）对人肺腺癌A549细胞株的增殖及凋亡的影响。方法：不同浓度Met（0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mmol/L）、Pem（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 μmol/L）48 h下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率并确定Met及Pem的半抑制浓度（IC50）;Met（IC50）及Pem（IC50）单用或联用,不同时间（24、36、48 h）下处理A549细胞,CCK?8法检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 检测Bcl?2、Bax、Mcl?1、Noxa蛋白表达。结果：①不同浓度Met及Pem对A549 细胞均有增殖抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;②Met+Pem组作用A549细胞增殖抑制率优于单药组（P＜0.05）,呈时间依赖性（P＜0.05）;③Met+Pem组作用 A549细胞的凋亡率（30.6 ± 0.4）%优于Met组凋亡率（13.3 ± 0.3）%和Pem组凋亡率（12.9 ± 0.1）%（P＜0.05）;④与单药组相比,Met+Pem组明显下调Bcl?2、Mcl?1蛋白表达,上调Bax、Noxa蛋白表达（P＜0.05）。结论：Met联合Pem可抑制A549细胞增殖、诱导凋亡,其效果优于单药,机制可能与下调Bcl?2、Mcl?1蛋白,上调Bax、Noxa蛋白的表达有关。     

二氯化钴所致缺氧对A549细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:探讨CoCl2作用不同时间所致缺氧对体外培养的人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响。方法:对肺腺癌细胞A549分别进行常氧和氯化钴模拟缺氧培养,采用MTT法检测CoCl2作用不同时间所致缺氧对A549细胞增殖的影响;半定量RT-PCR法测定缺氧不同时间HIF-1αmRNA表达水平的变化。AnnexinV-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测CoCl2作用不同时间缺氧肿瘤细胞凋亡情况。结果:CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间依赖性抑制作用。常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1αmRNA的表达,随着CoCl2作用时间的延长,HIF-1αmRNA水平呈升高趋势,与正常对照组比较,各缺氧组差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,正常对照组、CoCl2作用4、12、24、48 h组细胞凋亡率分别为(0.60±0.10)%、(1.10±0.10)%、(8.63±0.75)%、(12.80±0.85)%和(19.33±0.80)%。结论:CoCl2对A549细胞具有上调HIF-1αmRNA表达作用,可抑制细胞的增殖和一定的凋亡诱导作用,这些说明HIF-1α可能在肺癌的发展中扮演着重要的作用。     

PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子( PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析 A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/ L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF 浓度的增加,PEDF 对 A549细胞的增殖抑制率递增(P <0.05);相同PEDF 浓度(80、160、320、640 nmol/ L)情况下,除了80、160 nmol/ L PEDF 作用24 h 和48 h 的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF 作用时间的延长,PEDF 对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P <0.05)。上述不同浓度的PEDF 处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF 浓度的升高呈递增趋势(P <0.05)。结论摇PEDF 在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF 抑制细胞增殖作用可能和PEDF 浓度及作用时间有关,PEDF 诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF 浓度有一定关系。     

氯胺酮对人肺癌A549细胞生长的影响及相关机制研究

目的:探讨麻醉类药物氯胺酮和吗啡对人肺癌A549细胞生长的影响及相关作用机制?方法:体外培养肺癌细胞系A549,细胞培养24 h后,随机分为3组:对照组(NC组,加0.9% NaCl处理)?氯胺酮组(K1?K2?K3组,分别加氯胺酮100?200?400 ?滋g/mL处理)和吗啡组(M1?M2?M3组,分别加吗啡25?50?100 ?滋g/mL处理)?持续作用24 h后,Transwell小室培养体系测定肿瘤细胞的迁移率;双荧光素酶报告基因法测定NF-κB转录活性;48 h后MTT法测定细胞增殖抑制率;Western blot技术测定NF-κB P65的蛋白表达;QPCR技术检测细胞内IL-1β和COX-2的mRNA表达?结果:①与NC组比较,M1?M2组表现为促进A549细胞迁移(P < 0.05),M3组作用不明显;K1?K2?K3组表现为抑制A549细胞迁移(P < 0.05);②与NC组比较,M1?M2组表现为促进A549细胞增殖(P < 0.05),M3组作用不明显;K2?K3组表现为抑制A549细胞增殖(P < 0.05),K1组不明显;③与NC组比较,M1?M2?M3组表现为促进IL-1β?COX-2的mRNA表达(P < 0.05);K2?K3组表现为抑制IL-1β?COX-2的mRNA表达(P < 0.05),K1组不明显;④与NC组比较,M1?M2?M3组表现为促进P65的转录和蛋白表达(P < 0.05),K1?K2?K3组表现为抑制P65的转录和蛋白表达(P < 0.05)?结论:与阿片类药物不同,氯胺酮通过NF-κB信号通路及其下游因子IL-1β和COX-2抑制人肺腺癌细胞A549的迁移和增殖,可能更适用于肺癌患者的术后镇痛?     

Effects of paclitaxel on cell proliferation and apoptosis and its mechanism in human lung adenocarcinoma A549 cells

INTRODUCTION Primary bronchogenic carcinoma is one of thecommonest malignancy tumors in the world.The incidence and mortality rate are rising in recent30 years. Adenocarcinoma accounts for about 25%of all primary bronchogenic carcinomas, the curativerate is not ideal by traditional chemotherapy and ra-diotherapy[1-4]. Paclitaxel is a extensive anti-cancerdrug whose mechanism is anti-microtubules and sta-bilizes cell microtubules specially, and has also beenused widely in ovarian cancer, b…     

吡咯烷二硫氨基甲酸对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的:探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及可能机制。方法:不同浓度PDTC(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)干预A549细胞24h、48h、72h后,MTT法检测细胞生长抑制率,Westernblot和免疫细胞化学法分别检测PDTC干预48h后A549细胞凋亡抑制基因bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:随着PDTC干预浓度的增大和时间延长,A549细胞生长抑制率增加(P<0.05、0.01);PDTC干预后Bcl-2及PCNA蛋白表达均下降,呈剂量依赖性(r=-0.980,P<0.01;r=-0.977,P<0.01)。结论:PDTC可抑制人肺腺癌A549细胞生长,其机制可能与Bcl-2表达下调及抑制细胞增殖有关。     

紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的观察紫草素抑制人肺腺癌A549细胞的增殖及其机制。方法用不同浓度紫草素处理A549细胞,CCK-8方法检测紫草素对A549细胞生长增殖的抑制作用;细胞周期检测试剂盒测定细胞周期的变化;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白（pAkt）的表达。结果紫草素能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞G1期向S期的发展。pAkt蛋白表达量在紫草素处理48 h后明显减少。结论紫草素可以抑制肺腺癌A549细胞的增殖,诱导凋亡,机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

目的：观察肺腺癌A549细胞培养上清液（TSN）对人单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响。方法：制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原；人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组，分别于培养全程或晚期（第7d）加入TSN或第4d加入冻融抗原冲击致敏，制备MoDC瘤苗，第9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应（MLR）、MoDC诱导的细胞毒性T细胞（CTL）抑瘤活性、培养上清液中IL－12含量。结果：培养全程加TSN的MoDC，相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原（HLA－DR）明显下调，凋亡率明显升高，同时，激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL－12的量均显著低于正常培养组；培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC，均无上述影响；脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗，表型明显上调、各项免疫指标明显升高，诱导出了高效的抗A549免疫应答。结论：TSN能干扰MoDC成熟过程，下调基表型表达，诱导其凋亡发生、抑制其介导的抗肿瘤免疫应答；而脱离TSH影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高铲的抗瘤免疫应答。     

磷脂酰肌醇3激酶信号通路影响细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中的作用

目的探讨PI3K信号通路在肿瘤群集耐药中的作用.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌A.549细胞体外立体培养,通过Western blot、原位细胞凋亡检测、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法检测Akt、Bcl-2、Bad的表达、细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性.结果①立体培养细胞存在Akt的高表达;②同平面培养比较,立体培养细胞存在Bcl-2高表达,Bad低表达,细胞凋亡率低,对ADM敏感性低的特征,阻断PI3K信号通路后,两者差异明显缩小.结论PI3K信号通路可通过抑制细胞凋亡在肺腺癌A549细胞群集耐药中发挥作用,阻断PI3K信号通路可能逆转该耐药现象.