谷树叶不同提取物对高脂血症大鼠血脂及血管内皮细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的探讨不同谷树叶提取物对高脂血症模型大鼠血脂水平及血管内皮细胞Bax和Bcl-2表达的影响。方法选取60只正常雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、高脂血症模型对照组、辛伐他汀组及谷树叶不同提取物组(水提组、水提醇沉组和醇提组),每组10只;高脂饲料喂养8周造模,造模同时分别进行相应药物干预。分别于第4周和第8周检测大鼠血脂各项指标的水平,并检测血管内皮细胞Bax和Bcl-2的表达。结果与模型组大鼠比较,谷树叶各提取物组的TC和LDL-C水平均降低,HDL-C的水平升高,谷树叶水提醇沉组的作用最为显著。谷树叶不同提取物组均可以不同程度地下调Bax蛋白表达、上调Bcl-2蛋白表达。结论谷树叶提取物能够降低高脂血症大鼠的血脂,并可以通过调节凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达来对抗高脂模型大鼠所致的血管内皮细胞凋亡。     

基于瞬时受体电位香草素亚家族4信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响

目的:基于瞬时受体电位香草素亚家族4(transient receptor potential vanilloid 4,TRPV4)信号通路探讨牛蒡子苷元对体外培养软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖表达的影响。方法:自新生SD大鼠膝关节软骨组织提取软骨细胞,进行体外培养,取第1代软骨细胞分别加入不同培养液进行干预。空白组仅加入常规培养液,牛蒡子苷元组加入含10μmol牛蒡子苷元的培养液,牛蒡子苷元联合阻断剂组加入含10μmol牛蒡子苷元和10μmol GSK205的培养液,激动剂组加入含1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂联合激动剂组加入含10μmol GSK205和1μmol 4α-PPD的培养液,阻断剂组加入含10μmol GSK205的培养液。分别于干预24 h和72 h后以CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,48 h后以Western blot法检测软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平。结果:(1)软骨细胞增殖测定结果。干预24 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.03±0.72,1.32±0.11,1.01±0.05,1.33±0.34,1.04±0.50,1.10±0.06;F=18.309,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组、阻断剂组的吸光度与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.632,P=0.840,P=0.164);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.834);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.498);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。干预72 h后,6组的吸光度比较,差异有统计学意义(1.66±0.02,2.21±0.05,1.84±0.04,1.92±0.07,1.71±0.10,1.74±0.08;F=37.629,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的吸光度均高于空白组(P=0.000,P=0.001,P=0.000);阻断剂联合激动剂组、阻断剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.326,P=0.104);牛蒡子苷元组的吸光度高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组及阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的吸光度低于激动剂组(P=0.010),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.098);激动剂组的吸光度高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。(2)软骨蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白水平测定结果。5组软骨细胞中软骨蛋白聚糖水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,20.74±5.01,4.20±0.66,22.87±1.82,2.09±0.63;F=194.544,P=0.000)。牛蒡子苷元组、激动剂组的软骨蛋白聚糖水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组与空白组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.136,P=0.593);牛蒡子苷元组的软骨蛋白聚糖水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元组与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.305);牛蒡子苷元联合阻断剂组的软骨蛋白聚糖水平低于激动剂组(P=0.000),与阻断剂联合激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.310);激动剂组的软骨蛋白聚糖水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。5组软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白水平比较,差异有统计学意义(1.00±0.00,2.94±0.11,1.92±0.17,2.04±0.12,0.78±0.09;F=58.701,P=0.000)。牛蒡子苷元组、牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);阻断剂联合激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平低于空白组(P=0.032);牛蒡子苷元组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于牛蒡子苷元联合阻断剂组、激动剂组、阻断剂联合激动剂组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);牛蒡子苷元联合阻断剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000),与激动剂组比较,差异无统计学意义(P=0.193);激动剂组的Ⅱ型胶原蛋白水平高于阻断剂联合激动剂组(P=0.000)。结论:牛蒡子苷元可通过TRPV4信号通路促进体外培养软骨细胞的增殖及软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白和软骨蛋白聚糖的表达。     

六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响

目的:观察六味地黄丸对兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原表达的影响。方法:将80只新西兰兔随机分为空白组、假手术组、模型组和六味地黄组,每组20只。模型组、六味地黄组手术暴露L4~5和L5~6椎间隙,随机选择1个椎间盘注射肿瘤坏死因子α进行椎间盘退变造模,并以咬骨钳咬除该椎间盘上位椎体横突进行标记;假手术组经相同手术入路暴露L4~5和L5~6椎间隙,不做任何处理后缝合;空白组不进行任何手术干预。造模术后3 d开始,六味地黄组按26 mg·kg-1以六味地黄胶囊混悬液灌胃,其余3组以等量生理盐水灌胃,每天1次,共8周。分别于药物干预开始后2、4、6、8周,从各组随机选取5只兔子处死,模型组和六味地黄组手术取出造模椎间盘,空白组和假手术组随机选择L4~5或L5~6椎间盘取出。分别采用聚合酶链式反应法和Western Blot法测定椎间盘组织中Ⅰ、Ⅱ型胶原的mRNA和蛋白表达水平。结果:药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.064 8±0.009 8),(0.068 6±0.012 7),(0.192 0±0.040 6),(0.124 6±0.012 0),F=49.752,P=0.000;(0.066 0±0.010 0),(0.077 1±0.011 8),(0.252 4±0.039 9),(0.164 1±0.018 1),F=79.537,P=0.000;(0.071 2±0.011 2),(0.089 1±0.008 1),(0.326 3±0.028 5),(0.176 3±0.015 0),F=236.726,P=0.000;(0.094 1±0.012 0),(0.155 0±0.003 8),(0.451 4±0.039 6),(0.205 8±0.018 1),F=201.055,P=0.000];模型组Ⅰ型胶原mRNA表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=50.563,P=0.132;F=80.352,P=0.634);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=193.635,P=0.000;F=284.736,P=0.000),Ⅰ型胶原mRNA表达水平均逐渐增高(P=0.004,P=0.002,P=0.000;P=0.000,P=0.003,P=0.001)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原mRNA表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.042 7±0.008 0),(0.041 2±0.005 8),(0.011 6±0.002 1),(0.031 7±0.005 6),F=42.696,P=0.000;(0.038 8±0.004 3),(0.037 3±0.004 3),(0.011 5±0.001 8),(0.031 1±0.003 5),F=108.110,P=0.000;(0.030 3±0.005 7),(0.025 9±0.008 3),(0.007 9±0.002 7),(0.017 2±0.002 1),F=52.436,P=0.000;(0.029 3±0.006 9),(0.023 7±0.004 6),(0.005 3±0.001 0),(0.014 8±0.001 8),F=51.375,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原mRNA表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=70.463,P=0.122;F=90.362,P=0.089);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=110.364,P=0.001;F=86.362,P=0.004),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原mRNA表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.005,P=0.003;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅰ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.575 9±0.135 6),(0.599 5±0.037 4),(0.620 0±0.072 0),(0.609 6±0.032 1),F=9.288,P=0.001;(0.593 9±0.108 0),(0.647 1±0.044 8),(0.807 0±0.061 6),(0.659 9±0.105 5),F=28.883,P=0.000;(0.614 0±0.224 6),(0.685 6±0.066 5),(1.129 1±0.097 4),(0.700 1±0.086 5),F=34.957,P=0.000;(0.614 8±0.139 3),(0.742 3±0.165 3),(1.322 4±0.351 7),(0.806 0±0.094 3),F=3.296,P=0.048];模型组Ⅰ型胶原蛋白表达水平高于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.000,P=0.015,P=0.002,P=0.000;P=0.013,P=0.002,P=0.000,P=0.015;P=0.002,P=0.012,P=0.000,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=37.485,P=0.365;F=10.376,P=0.583);模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=70.362,P=0.000;F=6.375,P=0.001),模型组和六味地黄组的Ⅰ型胶原蛋白表达水平均逐渐增高(P=0.005,P=0.002,P=0.000;P=0.004,P=0.001,P=0.000)。药物干预2、4、6、8周后,4组兔子椎间盘组织Ⅱ型胶原蛋白表达水平比较,组间差异均有统计学意义[(0.605 8±0.066 5),(0.550 0±0.117 9),(0.278 0±0.053 2),(0.498 6±0.149 1),F=10.224,P=0.001;(0.553 7±0.126 5),(0.523 4±0.078 4),(0.258 2±0.037 8),(0.479 7±0.090 8),F=11.627,P=0.000;(0.546 8±0.120 8),(0.494 8±0.139 8),(0.219 0±0.099 2),(0.440 5±0.052 7),F=13.543,P=0.003;(0.494 8±0.042 5),(0.433 7±0.061 9),(0.131 9±0.012 8),(0.392 9±0.107 0),F=13.979,P=0.000];模型组Ⅱ型胶原蛋白表达水平低于空白组、假手术组和六味地黄组(P=0.002,P=0.001,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.001,P=0.002,P=0.013,P=0.000)。空白组和假手术组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均无统计学意义(F=17.364,P=0.092;F=15.573,P=0.175);模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平各时间点间比较,差异均有统计学意义(F=17.753,P=0.001;F=13.674,P=0.000),模型组和六味地黄组的Ⅱ型胶原蛋白表达水平均逐渐降低(P=0.002,P=0.004,P=0.001;P=0.000,P=0.001,P=0.000)。结论:六味地黄丸能适度下调兔椎间盘退变模型椎间盘组织中Ⅰ型胶原的表达、上调Ⅱ型胶原的表达,可在一定程度上延缓椎间盘退变进程。     

跳骨片含药血清抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨跳骨片含药血清抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制。方法:将10只8周龄雄性SD大鼠随机分为跳骨片组和空白组,跳骨片组以0.32 g·kg-1剂量的跳骨片灌胃,空白组给予等量生理盐水灌胃;每天灌胃1次,连续7 d;末次灌胃1 h后,经腹主动脉取血,分别制备跳骨片含药血清和空白血清,低温保存备用。从10只4周龄SD大鼠膝关节软骨中分离软骨细胞并培养,光学显微镜下观察软骨细胞形态,并用Ⅱ型胶原酶免疫组化鉴定。将培养好的第2代软骨细胞随机分为空白血清组、模型组、跳骨片含药血清组,其中空白血清组以含10%空白血清的培养基(dulbecco modified eagle medium,DMEM)培养;模型组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%空白血清的DMEM培养;跳骨片含药血清组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%跳骨片含药血清的DMEM培养;3组均连续干预培养8 h,采用酶联免疫吸附法检测软骨细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)3、MMP9含量,采用荧光定量RT-PCR法检测软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达水平,采用Western blot法检测软骨细胞中β-链蛋白(β-catenin)、卷曲蛋白-2(Frizzled-2)的蛋白表达量,采用免疫荧光检测法检测软骨细胞中β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthasc kinase-3β,GSK-3β)、蛋白多糖1(proteoglycans 1,PGS1)的蛋白表达量。结果:(1)软骨细胞免疫组化鉴定结果。第2代软骨细胞胞浆及细胞膜呈棕黄色阳性染色,具有典型的软骨细胞生物学特征。(2)软骨细胞MMP3、MMP9含量。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组的软骨细胞MMP3、MMP9含量比较,组间差异均有统计学意义[(34.019±1.036)ng·mL-1,(44.645±2.473)ng·mL-1,(32.941±1.792)ng·mL-1,F=36.060,P=0.000;(1.348±0.038)ng·mL-1,(1.562±0.112)ng·mL-1,(1.331±0.015)ng·mL-1,F=11.319,P=0.000];模型组软骨细胞MMP3、MMP9含量均高于空白血清组(LSD-t=-7.016,P=0.000;LSD-t=-3.768,P=0.003);跳骨片含药血清组软骨细胞MMP3、MMP9含量均低于模型组(LSD-t=7.652,P=0.000;LSD-t=4.066,P=0.002);空白血清组软骨细胞MMP3、MMP9含量与跳骨片含药血清组比较,差异均无统计意义(LSD-t=0.635,P=0.549;LSD-t=0.299,P=0.770)。(3)软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量比较,组间差异均有统计学意义(1.000±0.275,2.258±0.206,1.431±0.304,F=36.709,P=0.000;1.000±0.133,0.417±0.104,0.842±0.094,F=29.259,P=0.000;1.000±0.191,1.737±0.238,1.445±0.337,F=7.027,P=0.015;1.000±0.341,3.801±0.579,1.876±0.388,F=71.903,P=0.000;1.000±0.309,2.208±0.708,1.441±0.421,F=64.178,P=0.000);模型组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均高于空白血清组(LSD-t=-8.431,P=0.000;LSD-t=-3.723,P=0.005;LSD-t=8.062,P=0.000;LSD-t=-11.235,P=0.000),GSK-3β基因表达量低于空白血清组(LSD-t=7.397,P=0.000);跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均低于模型组(LSD-t=5.541,P=0.000;LSD-t=1.477,P=0.017;LSD-t=8.062,P=0.000;LSD-t=6.882,P=0.000),GSK-3β基因表达量高于模型组(LSD-t=-5.387,P=0.000);空白血清组软骨细胞中β-catenin、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均低于跳骨片含药血清组(LSD-t=-2.289,P=0.018;LSD-t=-3.658,P=0.005;LSD-t=-4.352,P=0.002);空白血清组软骨细胞中GSK-3β、Frizzled-2基因表达量与跳骨片含药血清组比较,差异均无统计学意义(LSD-t=2.009,P=0.075;LSD-t=-3.658,P=0.051)。(4)软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2的蛋白表达。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(0.449±0.063,0.746±0.156,0.549±0.056,F=5.323,P=0.026;1.348±0.038,1.562±0.112,1.331±0.015,F=6.291,P=0.034);模型组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量高于空白血清组(LSD-t=-11.235,P=0.005;LSD-t=-3.104,P=0.021);跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量低于模型组(LSD-t=6.883,P=0.037;LSD-t=3.039,P=0.023);空白血清组软骨细胞中β-catenin蛋白表达量低于跳骨片含药血清组(LSD-t=-4.352,P=0.002);空白血清组软骨细胞中Frizzled-2蛋白表达量与跳骨片含药血清组比较,差异无统计学意义(LSD-t=-0.065,P=0.950)。(5)软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1的蛋白表达。脂多糖干预8 h后,软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1蛋白染色明显,呈绿色;空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(0.014±0.002,0.029±0.006,0.018±0.002,F=9.910,P=0.013;0.380±0.011,0.237±0.015,0.287±0.002,F=56.639,P=0.000;0.034±0.003,0.022±0.002,0.029±0.003,F=27.232,P=0.001);模型组软骨细胞β-catenin蛋白表达量高于空白血清组(LSD-t=-4.103,P=0.006),GSK-3β、PGS1蛋白表达量低于空白血清组(LSD-t=1.048,P=0.000;t=7.365,P=0.000);跳骨片含药血清组软骨细胞β-catenin蛋白表达量低于模型组(LSD-t=-3.548,P=0.012),GSK-3β、PGS1蛋白表达量高于模型组(LSD-t=-3.657,P=0.011;LSD-t=-3.273,P=0.017);空白血清组软骨细胞中β-catenin蛋白表达量与跳骨片含药血清组比较,差异无统计学意义(LSD-t=-0.554,P=0.599);空白血清组软骨细胞中GSK-3β、PGS1蛋白表达量高于跳骨片含药血清组(LSD-t=6.827,P=0.000;LSD-t=4.092,P=0.010)。结论:跳骨片含药血清可以抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应,延缓关节软骨退变。其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关,其中β-catenin、Frizzled-2、GSK-3β、Wnt-4、CKI-ε基因可能是该信号通路的重要靶点。但是由于引起OA的因素众多且跳骨片含药血清成分多且复杂,有待于进一步研究证实。     

参麦注射液对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响

目的:观察参麦注射液(SMI)对加入IL-1β诱导下软骨细胞Bcl-2/Bax mRNA表达的影响,探讨其防治软骨退变的作用机制。方法:分离培养体外软骨细胞,随机分成3组:空白组、IL-1β诱导组和参麦组,空白组采用含10%胎牛血清的培养基培养,IL-1β诱导组采用含浓度为10ng/mL IL-1β的培养基培养,参麦组采用含浓度为10ng/mL IL-1β和10%参麦注射液的培养基培养,采用反转录/聚合酶链反应(RT-PCR)法检测参麦注射液对软骨细胞Bax和Bcl-2 mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,IL-1β诱导组Bcl-2 mRNA表达明显减少(P0.01),Bax mRNA表达增多(P0.01),均有统计学意义;与IL-1β诱导组比较,参麦组Bcl-2 mR-NA表达明显增多(P0.01),Bax mRNA表达减少(P0.01)。结论:参麦注射液可能通过降低促凋亡基因BaxmRNA表达,增加凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,从而调节Bcl-2/Bax mRNA的比例,抑制软骨细胞凋亡。     

林蛙油治疗绝经后骨质疏松症的临床研究

目的：观察林蛙油治疗绝经后骨质疏松症的临床疗效,并探讨其作用机制.方法：将60例绝经后骨质疏松症患者随机分为治疗组和对照组,每组30例,治疗组采用口服林蛙油治疗,对照组采用口服仙灵骨葆胶囊治疗.治疗6个月后,观察2组患者治疗前后临床症状体征评分改变及骨密度、骨代谢指标变化情况.结果：①症状体征评分.治疗前2组患者症状体征评分比较,差异无统计学意义（t=1.781,P=0.113）;治疗6个月后,2组患者症状体征评分均较治疗前降低[（17.67 ±3.67）分,（6.44±2.46）分,t=13.808,P=0.000;（20.22 ±2.17）分,（11.89±1.90）分,t=15.811,P=0.007],治疗组降低更明显[（11.23±2.44）分,（8.33±1.58）分,t=2.760,P=0.025].②骨密度.治疗前和治疗6个月后,2组患者骨密度比较,组间差异均无统计学意义（t =0.824,P=0.425;t=0.767,P=0.457）;治疗6个月后,2组患者骨密度与治疗前比较,差异均无统计学意义[（-2.37±0.84）g· cm-2,（-2.65±0.91）g·cm-2,t=0.811,P=0.432;（-2.19±0.83）g·cm-2,（-2.41±0.56）g· cm-2,t =0.727,P=0.479].③骨代谢指标.治疗前2组患者骨碱性磷酸酶、雌二醇、白细胞介素-6、骨钙素血清含量比较,组间差异均无统计学意义（t=1.622,P=0.127;t=1.114,P=0.284;t=1.554,P=0.143;t=1.185,P=0.160）.治疗6个月后,2组患者血清骨碱性磷酸酶含量[（17.13±2.13）单位·L-1,（7.80±1.82）单位·L-1,t=12.594,P=0.000;（16.40±1.80）单位·L-1,（10.73±2.12）单位·L-1,=8.324,P=0.000]、血清白细胞介素-6含量[（125.20±13.86） μg·L-1,（88.13±10.20） μg·L-1,t=5.795,P=0.000;（131.93±11.07）μg· L-1,（107.40±7.74） μg·L-1,t=9.648,P=0.000]、血清骨钙素含量[（6.19±0.96） ng·L-1,（3.54±1.12）ng·L-1,t=6.504,P=0.000;（5.80 ±0.56）ng·L-1,（5.15±0.51）ng·L-1,t=6.733,P=0.000]均较治疗前降低,治疗组降低更明显[（9.33±2.87）单位·L-1,（5.67 ±2.64）单位·L-1,t=7.416,P=0.000; （37.17±19.08） μg·L-1,（24.53 ±9.85）μg·L-1,t=2.253,P=0.041;（2.65±1.53）ng·L-1,（0.64 ±0.37）ng·L-1,t =4.820,P=0.000];2组患者血清雌二醇含量均较治疗前升高[（21.73±5.55） pg·mL-1,（43.40±5.65） pg·mL-1,t=8.208,P=0.000;（24.27±7.72）pg·mL-1,（34.13±5.75）pg· mL-1,t=5.006,P=0.000],治疗组升高更明显[（21.67±10.22）pg· mL-1,（9.87±7.63）pg·mL-1,=4.209,P=0.001].结论：林蛙油在短期内未能提高绝经后骨质疏松症患者的骨密度,但可以明显提高其血清雌二醇水平,降低其血清骨碱性磷酸酶、白细胞介素-6和骨钙素水平,这可能是林蛙油可以明显改善PMOP患者的临床症状与体征的作用机制之一.     

自拟骨伤复元汤对胸腰椎骨折术后早期白介素-2、纤维蛋白原表达及疼痛的影响

目的：观察自拟骨伤复元汤对胸腰椎骨折术后早期白介素-2、纤维蛋白原表达及患者疼痛的影响。方法：将符合要求的80例胸腰椎骨折患者随机分为2组。对照组40例,术后给予补充血容量、抗感染等常规治疗;观察组40例,术后给予常规治疗联合口服自拟骨伤复原汤治疗。分别于术后第1天、第7天及第14天,比较2组患者血浆中白介素-2、纤维蛋白原含量的变化情况及疼痛视觉模拟评分变化情况。结果：1血浆白介素-2含量。不同时间点间血浆白介素-2的差异有统计学意义（F=98.792,P=0.000）。2组血浆白介素-2的组间差异总体上有统计学意义（F=18.916,P=0.000）。进一步比较显示,术后第1天2组患者血浆白介素-2含量的差异无统计学意义[（6.20±1.03）ng·L-1,（6.50±0.85）ng·L-1,t=-0.714,P=0.475];术后第7天、第14天2组患者血浆白介素-2含量比较,组间差异有统计学意义[（8.30±0.95）ng·L-1,（9.70±0.67）ng·L-1,t=-2.950,P=0.030;（10.20±1.32）ng·L-1,（11.90±1.29）ng·L-1,t=-2.431,P=0.015];时间因素与分组因素存在交互效应（F=12.417,P=0.011）。2血浆纤维蛋白原含量。不同时间点间血浆纤维蛋白原含量的差异有统计学意义（F=118.439,P=0.000）。2组患者血浆纤维蛋白原含量的组间差异总体上有统计学意义（F=0.896,P=0.049）。进一步比较显示,术后第1天2组血浆纤维蛋白原含量比较,差异无统计学意义[（3.29±0.31）mg·dL-1,（3.34±0.23）mg·dL-1,t=0.277,P=0.741）];术后第7天、术后第14天,2组血浆纤维蛋白原含量比较,组间差异有统计学意义[（2.98±0.16）mg·dL-1,（2.39±0.18）mg·dL-1,t=1.487,P=0.042;（2.77±0.13）mg·dL-1,（2.11±0.12）mg·dL-1,t=8.952,P=0.039];时间因素与分组因素存在交互效应（F=22.248,P=0.000）。3术后疼痛视觉模拟评分。不同时间点间术后疼痛视觉模拟评分的差异有统计学意义（F=264.972,P=0.000）。2组术后疼痛视觉模?     

槲皮素对去卵巢大鼠血清骨钙素和股骨Ⅰ型胶原蛋白水平的影响

目的:观察槲皮素对去卵巢大鼠血清骨钙素和股骨Ⅰ型胶原蛋白水平的影响。方法:将50只6月龄清洁级健康雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、尼尔雌醇组、槲皮素高剂量组和槲皮素低剂量组,每组10只。假手术组大鼠开腹找到卵巢后即关闭腹腔,其余4组切除双侧卵巢。造模手术1周后,假手术组和模型组以生理盐水灌胃,每天1次,每次4 m L;尼尔雌醇组按1.5 mg·kg-1以尼尔雌醇灌胃,每周1次;槲皮素高剂量组和槲皮素低剂量组分别按200 mg·kg-1和100 mg·kg-1以槲皮素灌胃,每天1次。3个月后以酶联免疫吸附测定法测定各组大鼠血清骨钙素水平,以Western Blot法测定股骨干骺端Ⅰ型胶原蛋白水平。结果:至药物干预结束时,模型组、尼尔雌醇组及槲皮素高剂量组各有1只大鼠死亡,槲皮素低剂量组2只大鼠死亡,死亡原因均为肺部感染。5组大鼠血清骨钙素水平比较,差异有统计学意义[(2.562±0.671)ng·m L-1,(5.763±0.612)ng·m L-1,(2.674±1.170)ng·m L-1,(2.722±1.063)ng·m L-1,(3.574±1.914)ng·m L-1,F=98.527,P=0.000]。假手术组、尼尔雌醇组、槲皮素高剂量组、槲皮素低剂量组血清骨钙素水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.005);槲皮素高剂量组与尼尔雌醇组比较,差异无统计学意义(P=0.361);槲皮素低剂量组高于尼尔雌醇组(P=0.047);槲皮素低剂量组与槲皮素高剂组比较,差异无统计学意义(P=0.106)。5组大鼠股骨干骺端Ⅰ型胶原蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(2.718±0.362,1.492±0.228,2.624±0.296,2.497±0.274,1.713±0.327,F=10.726,P=0.000)。假手术组、尼尔雌醇组、槲皮素高剂量组股骨Ⅰ型胶原蛋白表达水平均高于模型组(P=0.000,P=0.000,P=0.000);槲皮素低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P=0.056);槲皮素高剂量组与尼尔雌醇组比较,差异无统计学意义(P=0.217);槲皮素低剂量组低于槲皮素高剂量组和尼尔雌醇组(P=0.000,P=0.000)。结论:槲皮素具有类雌激素样作用,可有效降低去卵巢大鼠的血清骨钙素水平、提高股骨Ⅰ型胶原蛋白水平,其作用效果与剂量有关。     

负载microRNA-27b-骨髓间充质干细胞来源外泌体的软骨细胞-聚乳酸羟基乙酸共聚物骨软骨复合体移植治疗软骨缺损的实验研究

目的:探讨负载microRNA-27b(miR-27b)-骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源外泌体(exosomes,exo)的软骨细胞(chondrocytes,chon)-聚乳酸羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]骨软骨复合体移植治疗软骨缺损的效果及作用机制。方法:(1)培养BMSC并制备BMSC来源exo(BMSC-exo),观察BMSC-exo的形态,测定BMSC-exo的粒径和Zeta电位,并采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测BMSC-exo表面标记蛋白CD9和CD63。(2)将培养至第2或第3代的BMSC分为2组,BMSC组于RPMI-1640培养基中培养,不进行干预,miR-27b-BMSC组采用miR-27b过表达的重组腺病毒感染;培养24 h后,制备BMSC-exo和miRNA-27b-BMSC-exo,并分别提取BMSC、BMSC-exo、miRNA-27b-BMSC、miRNA-27b-BMSC-exo的RNA,采用实时定量PCR检测miR-27b的表达。(3)分别采用Dil细胞膜红色荧光探针和Hoechst33258染色试剂给miR-27b-BMSC-exo和大鼠软骨细胞染色,于荧光显微镜下观察大鼠软骨细胞对miR-27b-BMSC-exo的摄取情况。(4)将大鼠软骨细胞分为2组,BMSC-exo组接种于BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中,miR-27b-BMSC-exo组接种于miR-27b-BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中;培养4 h后,采用实时定量PCR检测miR-27b的表达。(5)将大鼠软骨细胞分为4组,对照组于RPMI-1640培养基中培养,不进行干预,白细胞介素(interleukin,IL)-1β组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养,miR-27b-BMSC-exo组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1、miR-27b-BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养,BMSC-exo组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1、BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养;分别于培养0 h、1 h、2 h、3 h、4 h和8 h,采用MTT法测定各组大鼠软骨细胞活力;培养24 h后,提取各组大鼠软骨细胞总蛋白,采用Western Blot检测软骨损伤相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspartic acid specific protease,caspase)-3、caspase-9、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13的表达。(6)取18只8周龄SD雌性大鼠,于SD大鼠的左后肢股骨远端滑车沟槽制造直径4.5 mm、深度1 mm的软骨缺损,建立软骨缺损SD大鼠模型;将18只软骨缺损SD大鼠模型随机分为3组,对照组植入chon-PLGA骨软骨复合体,miR-27b-BMSC-exo组植入miR-27b-BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体,BMSC-exo组植入BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体;饲养12周后处死SD大鼠,观察软骨修复效果,免疫组织化学染色检测软骨损伤修复标志蛋白Ⅱ型胶原蛋白、MMP-13的表达;提取SD大鼠软骨组织总蛋白,采用Western Blot检测软骨损伤相关蛋白caspase-3、caspase-9、MMP-13的表达。结果:(1)BMSC-exo的鉴定结果。BMSC-exo为圆盘形囊泡状膜结构,粒径92~115 nm,数量占比最高的BMSC-exo的粒径为106 nm;BMSC-exo的Zeta电位为(-22.13±2.1)mV。BMSC-exo表面标记物CD9和CD63在BMSC-exo组的表达量显著高于BMSC组(相对灰度值:6.513±0.714,1.001±0.021,t=18.902,P=0.000;7.564±0.636,1.026±0.027,t=25.158,P=0.000)。(2)miR-27b表达的检测结果。miR-27b在miR-27b-BMSC组BMSC中的表达量高于BMSC组(相对表达量:46.785±8.153,1.000±0.280,t=13.748,P=0.000);miR-27b在miR-27b-BMSC组exo中的表达量高于BMSC组(相对表达量:34.825±8.612,1.000±0.325,t=9.621,P=0.000)。(3)miR-27b-BMSC-exo的摄取情况。大鼠软骨细胞和miR-27b-BMSC-exo共培养4 h,miR-27b-BMSC-exo被大鼠软骨细胞摄取。(4)共培养后大鼠软骨细胞中miR-27b表达的检测结果。miR-27b在miR-27b-BMSC-exo组大鼠软骨细胞中的表达量高于BMSC-exo组(相对表达量:3.315±0.523,1.000±0.244,t=9.826,P=0.000)。(5)大鼠软骨细胞活力测定结果。时间因素与分组因素存在交互效应(F=2.836,P=0.049)。4组大鼠软骨细胞活力总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=11.345,P=0.049)。培养前及培养1 h、2 h,大鼠软骨细胞活力的组间差异无统计学意义(F=0.047,P=0.406;F=0.765,P=0.189;F=2.095,P=0.063);培养3 h、4 h、8 h,大鼠软骨细胞活力的组间差异有统计学意义(F=4.720,P=0.039;F=7.421,P=0.021;F=95.348,P=0.000),IL-1β组的大鼠软骨细胞活力小于对照组、miR-27b-BMSC-exo组、BMSC-exo组(3 h:P=0.002,P=0.011,P=0.026;4 h:P=0.002,P=0.002,P=0.006;8 h:P=0.004,P=0.004,P=0.011),miR-27b-BMSC-exo组的大鼠软骨细胞活力大于对照组和BMSC-exo组(3 h:P=0.019,P=0.023;4 h:P=0.015,P=0.002;8 h:P=0.003,P=0.029)。不同时间点大鼠软骨细胞活力总体比较,差异无统计学意义,即不存在时间效应(F=0.258,P=0.083)。(6)大鼠软骨细胞中软骨损伤相关蛋白表达的检测结果。切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量组间比较,差异有统计学意义(F=15.691,P=0.024;F=98.021,P=0.002;F=76.312,P=0.004),IL-1β组大鼠软骨细胞中切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均高于对照组、miR-27b-BMSC-exo组、BMSC-exo组(切割-caspase-3:P=0.025,P=0.020,P=0.006;切割-caspase-9:P=0.011,P=0.008,P=0.036;MMP-13:P=0.034,P=0.003,P=0.009);miR-27b-BMSC-exo组大鼠软骨细胞中切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均低于BMSC-exo组(P=0.023,P=0.010,P=0.007)。(7)SD大鼠软骨缺损修复效果。直视下观察,miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨缺损修复效果优于对照组和BMSC-exo组。病理染色结果显示,对照组软骨层较薄,边缘不规则,软骨下骨和软骨无界限;miR-27b-BMSC-exo组和BMSC-exo组软骨层较厚,边缘光滑,软骨下骨和软骨界限清晰,且miR-27b-BMSC-exo组透明软骨修复效果优于BMSC-exo组。(8)软骨损伤修复标志蛋白表达的检测结果。免疫组织化学染色显示,对照组和BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中MMP-13高表达,miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中MMP-13低表达;对照组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白低表达,BMSC-exo组和miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白高表达。MMP-13、Ⅱ型胶原蛋白表达阳性率的组间比较,差异有统计学意义(F=126.178,P=0.002;F=209.24,P=0.001)。miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组和BMSC-exo组(P=0.005,P=0.012),MMP-13的表达量低于对照组和BMSC-exo组(P=0.029,P=0.014)。(9)SD大鼠软骨组织中软骨损伤相关蛋白表达的检测结果。切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13表达量的组间比较,差异有统计学意义(F=15.126,P=0.026;F=33.151,P=0.019;F=53.522,P=0.016),miR-27b-BMSC-exo组切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均低于对照组和BMSC-exo组(切割-caspase-3:P=0.003,P=0.006;切割-caspase-9:P=0.001,P=0.019;MMP-13:P=0.007,P=0.008)。结论:miR-27b-BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体移植治疗软骨缺损,治疗效果显著,其作用机制可能与抑制caspase-3、caspase-9以及MMP-13的表达、促进Ⅱ型胶原蛋白的表达有关。     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响

目的：研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨细胞基质金属蛋白酶-1及基质金属蛋白酶-3mRNA表达的影响。方法：取膝骨关节炎患者膝关节软骨进行细胞培养,将培养的软骨细胞分离传代后取第3代细胞,通过HE染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定,并进行基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色。观察软骨细胞退变情况后将其分为6组,A组不进行干预;B组加入25 mmol.L-1黄芪甲苷;C组加入50 mmol.L-1黄芪甲苷;D组加入75 mmol.L-1黄芪甲苷;E组加入100 mmol.L-1黄芪甲苷;F组加入500 mmol.L-1黄芪甲苷。分别于培养开始后4 h、8 h、24 h、48 h、72 h 5个时间点,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组退变软骨细胞内基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3mRNA表达的情况。结果：①形态观察。原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜,细胞纤丝较长。HE染色细胞质为红色,胞膜呈蓝色;甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色;Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光,细胞核采用4’,6-二脒基-2-苯基吲哚复染,在不同波段荧光激发下,胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光,证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原,主要分布在胞浆和细胞膜上,证明所培养的细胞为软骨细胞。基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3免疫荧光染色可见清晰绿色荧光,软骨细胞以多角形多见。②基质金属蛋白酶-1mRNA表达。不同时间点间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异（F=11.027,P=0.000）;不同组间软骨细胞基质金属蛋白酶-1mRNA表达水平有差异（F=102.345,P=0.000）,A组高于B组、C组、D组、E组（P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000）,F组高于A组、B组、C组、D组、E组（P=0.009;P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000）;时间因素和组间因素存在交互效应（F=8.258,P=0.000）。③基质金属蛋白酶-3mRNA表达。不同时间点间软骨细胞基质金属蛋白酶-3mRNA表达水平有差异（F=12.316,P=0.000）;不同组间软骨细胞基质金属蛋白酶-3mRNA表达水平有差异（F=66.112,P=0.000）,A组高于B组、C组、D组、E组（P=0.008;P=0.000;P=0.000;P=0.000）,F组高于A组、B组、C组、D组、E组（P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000;P=0.000）;时间因素和组间因素存在交互效应（F=14.846,P=0.000）。结论：低浓度的黄芪甲苷能通过抑制退变软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3,延缓软骨细胞退变;浓度过高则会促进退变软骨细胞合成基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-3,加速软骨细胞退变。     

柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的影响

目的：探讨柚皮苷对体外培养骨髓间充质干细胞Runx-2和Osterix表达及骨质疏松模型大鼠骨强度的作用.方法：采用髓腔冲洗离心法从雌性Lewis大鼠股骨获取骨髓间充质干细胞,将传代培养后的细胞分为5组.A组不进行干预,B组加入二甲基亚砜,C、D、E组分别加入浓度为1 μg·mL-1、10 μg·mL-1、100 μg·mL-1的柚皮苷.培养6 h后收集细胞采用RT-PCR法测定各组细胞Runx-2和Osterix的mRNA表达水平.将24只雌性SD大鼠的卵巢切除,3个月后将其随机分为4组,每组6只.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组分别以60 mg·kg-1、300 mg·kg-1和1 500 mg·kg-1柚皮苷灌胃,Ⅳ组给予等体积的PBS灌胃,每天灌胃1次,持续2个月.药物干预结束后,测定大鼠股骨强度和胫骨骨小梁面积.结果：①Runx-2 mRNA和Osterix mRNA表达水平.B、C、D、E组大鼠骨髓间充质干细胞Runx-2 mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[（1.10±0.02）,（2.05±0.31）,（2.76±0.14）,（1.82±0.10）,F=44.021,P=0.000].进一步两两比较,C、D、E组Runx - 2 mRNA表达水平高于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;D组高于C组和E组（P=0.001,P=0.000）;C组和E组比较,差异无统计学意义（P=0.153）.B、C、D、E组Osterix mRNA表达水平比较,差异有统计学意义[（1.02±0.10）,（1.11±1.35）,（3.24±0.30）,（2.55±0.35）,F=7.037,P=0.012].进一步两两比较,D组和E组Osterix mRNA表达水平高于B组（P=0.031,P=0.005）;C组和B组比较,差异无统计学意义（P=0.886）;C组低于D组和E组（P=0.006,P=0.039）;D组和E组比较,差异无统计学意义（P=0.267）.②股骨生物力学强度.4组骨质疏松模型大鼠股骨强度比较,差异有统计学意义[（773.36±9.21）N·mm-1,（805.66±16.00）N·mm-1,（766.70±38.96）N·mm-1,（707.46±15.88）N·mm-1,F=37.776,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组股骨强度均高于Ⅳ组（P=0.000,P=0.000,P=0.000）;Ⅰ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义（P=0.509）;Ⅱ组高于Ⅰ组和Ⅲ组（P=0.004,P=0.001）.③胫骨骨小梁面积.4组骨质疏松模型大鼠胫骨骨小梁面积比较,差异有统计学意义[（22.26±2.32）,（25.10±2.18）,（23.66±3.26）,（15.63±2.00）,F=14.168,P=0.000].进一步两两比较,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组胫骨骨小梁面积均大于Ⅳ组（P=0.001,P=0.000,P=0.000）;Ⅰ组与Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异均无统计学意义（P=0.090,P=0.387）;Ⅱ组和Ⅲ组比较,差异无统计学意义（P=0.374）.结论：柚皮苷可促进体外培养的骨髓间充质干细胞中Runx - 2和Osterix的表达,增强骨质疏松模型大鼠的骨强度,增大骨小梁面积.     

两种手术方式治疗老年股骨转子间骨折的围手术期失血量比较

目的：比较股骨近端防旋髓内钉和动力髋螺钉内固定治疗老年股骨转子间骨折的围手术期失血量。方法：回顾性分析接受手术治疗的316例老年股骨转子间骨折患者的临床资料,采用股骨近端防旋髓内钉固定者189例,采用动力髋螺钉内固定者127例,比较2组患者的围手术期失血量,并分别比较2组中不同年龄范围患者的围手术期失血量。结果：①2组患者围手术期失血量比较结果。2组患者术前隐性失血量比较,差异无统计学意义[（138．29±40．46）mL,（141．76±42．57）mL;t=0．931,P=0．189];动力髋螺钉组的术后隐性失血量小于股骨近端防旋髓内钉组[（301．75±110．13）mL,（210．36±42．59）mL;t=8．129,P=0．000];2组患者术后显性失血量比较,差异无统计学意义[（101．68±22．40）mL,（97．13±20．38）mL;t=1．453,P=0．098]。②股骨近端防旋髓内钉组中不同年龄范围患者围手术期失血量比较结果。股骨近端防旋髓内钉组中年龄≥80岁患者的术前隐性失血量和术后隐性失血量均大于年龄〈80岁的患者[（158．29±48．26）mL,（87．27±32．13）mL;t=14．178,P=0．000;（326．84±100．63）mL,（215．26±32．27）mL;t=9．406,P=0．000];但两者术后显性失血量比较,差异无统计学意义[（104．47±17．50）mL,（99．44±21．11）mL;t=1．603,P=0．082]。③动力髋螺钉组中不同年龄范围患者围手术期失血量比较结果。动力髋螺钉组中年龄≥80岁患者的术前隐性失血量和术后隐性失血量均大于年龄〈80岁的患者[（149．76±50．16）mL,（94．67±28．93）mL;t=11．296,P=0．000;（246．67±38．69）mL,（190．00±21．52）mL;t=15．082,P=0．000];但两者术后显性失血量比较,差异无统计学意义[（96．29±16．96）mL,（97．25±19．93）mL;t=0．128,P=0．293]。结论：动力髋螺钉内固定治疗老年股骨     

虎潜丸对去卵巢大鼠骨质疏松模型骨密度及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨虎潜丸治疗骨质疏松症的作用机制.方法：雌性SD大鼠40只,体质量180～220 g,中位数200 g,随机分为虎潜丸组、雌激素组、模型组、假手术组,每组10只.虎潜丸组、雌激素组、模型组切除双侧卵巢造模.7 d后,虎潜丸组予以虎潜丸水煎液灌胃,雌激素组予以尼尔雌醇混悬液灌胃,模型组、假手术组予以蒸馏水灌胃;每100 g体质量0.875 mL,每日灌胃1次,连续干预12周.比较各组大鼠椎骨骨密度及椎骨、肾组织中转化生长因子β1的表达.结果：虎潜丸组和雌激素组各有1只大鼠死亡,共纳入研究38只.干预12周后,各组大鼠椎骨骨密度值比较,差异有统计学意义[（0.210±0.028）g·cm-2,（0.205±0.030）g·cm-2,（0.171±0.036）g·cm-2,（0.205±0.034）g·cm-2;F=7.561,P=0.001];虎潜丸组、雌激素组、假手术组均高于模型组（P=0.002,P=0.002,P=0.013）;虎潜丸组与雌激素组、假手术组相比,差异均无统计学意义（P=0.459,P=0.224）;雌激素组与假手术组相比,差异无统计学意义（P=0.231）.各组大鼠椎骨转化生长因子β1灰度值比较,差异无统计学意义（169.060±5.545,167.420±6.238,162.400±3.882,168.130±7.899;F=2.176,P=0.109）.各组大鼠肾组织转化生长因子β1光密度值比较,差异有统计学意义（172.600±5.019,158.200±8.038,155.130±4.542,157.570±5.524;F=15.568,P=0.000）;虎潜丸组高于雌激素组、模型组和假手术组（P=0.000;P=0.000;P=0.000）;雌激素组与模型组、假手术组比较,差异均无统计学意义（P=0.478,P=0.490）;假手术组高于模型组（P=0.038）.结论：虎潜丸可增加大鼠腰椎椎骨骨密度,上调肾组织中转化生长因子β1的表达,可能是其治疗骨质疏松症的机制之一.     

单枚与双枚椎间融合器植骨融合联合椎弓根钉棒系统内固定治疗腰椎滑脱的对比研究

目的：比较单枚与双枚椎间融合器植骨融合联合椎弓根钉棒系统内固定治疗腰椎滑脱的临床疗效及安全性.方法：回顾性分析134例腰椎滑脱患者的病例资料,其中采用单枚椎间融合器植骨融合联合椎弓根钉棒系统内固定71例（单枚组）,采用双枚椎间融合器植骨融合联合椎弓根钉棒系统内固定63例（双枚组）;Meyerding Ⅰ度滑脱40例,Ⅱ度滑脱57例,Ⅲ度滑脱37例;L3～4滑脱10例,L4～5滑脱94例,L5S1滑脱30例.记录并比较2组患者的手术时间、术中出血量、术后引流量、腰椎疼痛视觉模拟评分、腰椎Oswestry功能障碍指数、椎间植骨融合率及术后并发症的发生情况.结果：①一般指标.单枚组的手术时间、术中出血量及术后引流量均小于双枚组[（90.0±25.0）min,（115.0±35.0） min,t=-4.797,P=0.000; （210.0±100.0） mL,（320.0±120.0）mL,t=-5.786,P=0.000;（80.0±50.0） mL,（130.0±45.0） mL,t=-6.054,P=0.000].术后6个月,单枚组椎间植骨融合71例,双枚组椎间植骨融合63例;2组患者椎间植骨融合率比较,差异无统计学意义（P =1.000）.②腰椎疼痛视觉模拟评分.术后4周,2组患者的腰椎疼痛视觉模拟评分均较术前降低[（8.0±1.3）分,（2.3±0.8）分,t=31.465,P=0.000; （8.1±1.1）分,（2.2±1.0）分,t=31.501,P=0.000];2组患者腰椎疼痛视觉模拟评分下降幅度比较,差异无统计学意义[（5.7±1.2）分,（5.9±1.3）分,t=-0.926,P=0.356].③腰椎Oswestry功能障碍评分.术后4周,2组患者的腰椎Oswestry功能障碍评分均较术前降低[（35.0±4.5）分,（8.1±1.4）分,t=48.096,P=0.000;（34.5±4.3）分,（8.0±1.1）分,t=47.390,P=0.000];2组患者腰椎Oswestry功能障碍评分下降幅度比较,差异无统计学意义[（26.9±4.8）分,（26.5±3.9）分,t=0.525,P=0.6003.④安全性指标.2组患者均未发生内固定松动、断裂.单枚组1例患者发生脑脊液漏;双枚组7例患者发生脑脊液漏,5例患者发生感染.单枚组?     

经皮椎体成形术后骨折椎体生物力学性能和组织形态研究

目的：观察经皮椎体成形术后骨折椎体的生物力学性能和组织形态.方法：将105只新西兰雌兔随机分为3组,每组35只.B组和C组采用卵巢切除加地塞米松肌肉注射法进行骨质疏松造模.造模成功后,在所有实验动物L4和L5椎体上通过手术造成骨缺损,C组实验动物在形成骨缺损的椎体中模拟经皮椎体成形术注射调制好的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥Ⅲ.分别于模拟经皮椎体成形术完成后2周、4周、8周、12周、16周、24周、48周从各组中随机选取5只实验动物处死,取出进行过手术的2个椎体,进行生物力学强度测定.同时,C组作盐酸四环素荧光标记,经甲苯胺蓝染色后进行椎体组织形态观察.结果：①椎体轴向压缩实验结果.除48周外[（0.54±0.14）mm,（0.83±0.26）mm,（0.54±0.16）mm,F=3.744,P=0.054],3组椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周时的轴向压缩位移比较,组间差异均有统计学意义[（0.62±0.10）mm,（0.92±0.22）mm,（0.43±0.09）mm,F=13.489,P=0.001;（0.65±0.17）mm,（1.01±0.16）mm,（0.44±0.08）mm,F=24.843,P=0.000;（0.61±0.12）mm,（1.27±0.23）mm,（0.50±0.11）mm,F=32.262,P=0.000;（0.61±0.15）mm,（1.10±0.10）mm,（0.49±0.13）mm,F=25.488,P=0.000;（0.58±0.19）mm,（1.17±0.16）mm,（0.54±0.10）mm,F=24.730,P=0.000;（0.55±0.17）mm,（1.10±0.28）mm,（0.53±0.15）mm,F=11.998,P=0.001].进一步两两比较,A组和C组各时点轴向压缩位移均小于B组（P=0.009,P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001）;除4周时外（P=0.038）,A组各时点轴向压缩位移与C组比较,差异均无统计学意义（P=0.062,P=0.328,P=0.208,P=0.648,P=0.894）.②椎体三点弯曲实验结果.3组实验动物椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周和48周时的最大载荷比较,组间差异均有统计学意义[（178.0±7.7）N,（130.3±6.2）N,（232.0±1.7）N,F=385.253,P=0.000;（178.3±4.4）N,（127.7±7.1）N,（226.0±5.4）N,F=371.286,P=0.000;（182.4±4.4）N,（131.8±5.2）N,（221.0±3.1）N,F=536.544,P=0.000;（184.0±0.8）N,（137.0±6.6）N,（215.0±3.2）N,F=422.579,P=0.000;（182.9±0.9）N,（140.2±1.5）N,（217.0±4.3）N,F=1 006.122,P=0.000;（189.0±3.2）N,（140.6±1.7）N,（194.0±4.9）N,F=351.372,P=0.000;（191.9±3.9）N,（142.4±2.1）N,（191.0±8.1）N,F=139.682,P=0.000].进一步两两比较,A组和C组各时点的最大载荷均大于B组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000;P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）;除24周和48周外（P=0.054,P=0.724）,C组各时点的最大载荷均大于A组（P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.000）.③椎体抗扭转实验结果.3组实验动物椎体标本术后2周、4周、8周、12周、16周、24周和48周时的扭转角度比较,组间差异均有统计学意义[（3.8°±0.6°）,（5.4°±0.5°）,（2.4°±0.6°）,F=37.977,P=0.000;（4.0°±1.3°）,（5.8°±1.6°）,（2.4°±0.7°）,F=9.408,P=0.003;（3.7°±0.8°）,（5.7°±0.4°）,（2.3°±0.7°）,F=32.229,P=0.000;（3.5°±0.8°）,（5.8°±0.4°）,（2.4°±0.5°）,F=38.685,P=0.000;（3.5°±0.8°）,（5.7°±0.4°）,（2.4°±0.4°）,F=41.931,P=0.000;（3.4°±0.8°）,（5.2°±1.2°）,（2.5°±0.8°）,F=10.072,P=0.003;（3.0°±0.3°）,（5.1°±0.4°）,（2.7°±0.4°）,F=53.166,P=0.000].进一步两两比较,A组和C组各时点的扭转角度均小于B组（P=0.001,P=0.045,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.012,P=0.000;P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.000）;除4周、24周和48周外（P=0.057,P=0.171,P=0.347）,C组各时点的扭转角度均小于A组（P=0.001,P=0.008,P=0.014,P=0.017）.④椎体组织学观察结果.经皮椎体成形术后2周和4周时,聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥Ⅲ与宿主骨交界处有大量软骨细胞和成骨细胞,交界处未见纤维组织;8周时骨水泥与宿主骨结合紧密,软骨组织被新生的类骨质替代,新生骨组织明显增加,交界处未见纤维组织;12周和16周时可见纤维组织,骨水泥与宿主骨结合更加紧密,界面处类骨质减少,矿化骨痂增多,编织骨被板层骨取代;24周和48周时可见少量破骨细胞和骨单位,大部分界面结合处新生骨组织与骨水泥结合紧密.结论：经皮椎体成形术后,凝固的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥能与骨组织形成骨性结合,为骨折椎体提供较好的近期和远期生物力学性能.     

木豆叶煎液外洗治疗四肢创伤创面的临床观察

目的：观察木豆叶煎液外洗治疗四肢软组织缺损的临床疗效.方法：将226例软组织缺损患者随机分为2组,每组113例.清创结束后,治疗组用木豆叶煎液外洗处理创面,对照组用5%呋喃西林溶液处理创面.每日2次.观察2组患者的创面愈合率、创面愈合时间、创面分泌物细菌培养结果及临床疗效.结果：①创面愈合率.治疗后不同时间患者的创面愈合率的差异总体上有统计学意义,即存在时间效应（F=111.562,P=0.000）;2组患者治疗后不同时间创面愈合率的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=1757.082,P=0.000）,治疗组各时间点创面愈合率均高于对照组[（54.43±24.77）,（42.96±19.99）,t=5.171,P=0.006;（83.74±13.79）,（55.81±21.59）,t=15.746,P=0.000;（94.07±9.28）,（65.37±21.80）,t=17.163,P=0.000;（97.49±6.16）,（77.75±20.76）,t=13.875,P=0.000];时间因素和分组因素存在交互效应（F=188.500,P=0.003）.②创面愈合时间.治疗组创面愈合时间比对照组短,差异有统计学意义[（33.47±7.22）,（43.37±11.39）,t=-11.692,P=0.008].③创面分泌物细菌培养结果.治疗前2组患者创面分泌物细菌培养阳性率比较,差异无统计学意义（χ2=0.398,P=0.528）,治疗开始后1周、2周、3周、4周治疗组创面分泌物细菌培养阳性率均低于对照组,差异有统计学意义（χ2=33.275,P=0.000;χ2=20.884,P=0.000;χ2=11.760,P=0.001;χ2=7.706,P=0.006）.④临床疗效.治疗组治愈88例、显效23例、有效2例,对照组治愈12例、显效45例、有效39例、无效17例.治疗组疗效优于对照组（u=1 474.500,P=0.000）.结论：木豆叶煎液能提高创面愈合率,缩短创面愈合时间,抑制创面细菌繁殖,可有效促进四肢软组织创伤创面的愈合.     

过伸牵引弹性按压法联合经皮椎体成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折的临床研究

目的：观察过伸牵引弹性按压法联合经皮椎体成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折的临床疗效和安全性.方法：将符合要求的90例骨质疏松性胸腰椎压缩骨折患者随机分为2组,每组45例.所有患者入院后均卧硬板床,后背垫软枕.治疗组采用过伸牵引弹性按压法联合经皮椎体成形术治疗,对照组单纯采用经皮椎体成形术治疗.比较2组患者治疗前、治疗后24 h及治疗后6个月的伤椎前缘高度、脊柱后凸Cobb＇s角、腰背部疼痛视觉模拟评分、Oswsetry功能障碍指数评分及并发症发生情况.结果：①伤椎前缘高度.治疗前后不同时间伤椎前缘高度的差异有统计学意义,即存在时间效应[治疗组：（15.14±2.61）mm,（26.79±2.25） mm,（26.68±2.53） mm;对照组：（15.98±2.47） mm,（19.85±2.73） mm,（19.68±2.59） mm;F=22.532,P=0.031];2组患者伤椎前缘高度的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=5.421,P=0.000）;除治疗前外（t=2.138,P =0.261）,其余各时点对照组的伤椎前缘高度均小于治疗组（t=4.063,P=0.000;t =6.124,P=0.000）;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F =35.835,P=0.000）.②脊柱后凸Cobb＇s角.治疗前后不同时间脊柱后凸Cobb＇s角的差异有统计学意义,即存在时间效应[治疗组：（27.86°±1.81°）,（8.24°±1.37°）,（8.31°±1.63°）;对照组：（27.43°±1.57°）,（14.62°±1.55°）,（14.75°±1.48°）;F=22.462,P=0.021];2组患者脊柱后凸Cobb＇s角的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=4.736,P=0.000）;除治疗前外（t=1.729,P=0.186）,其余各时点对照组的脊柱后凸Cobb＇s角均大于治疗组（t=2.521,P=0.000;t =4.416,P=0.000）;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F =39.421,P=0.000）.③腰背部疼痛视觉模拟评分.治疗前后不同时间腰背部疼痛视觉模拟评分的差异有统计学意义,即存在时间效应[治疗组：（8.62±1.53）分,（2.05±1.64）分,（1.52±1.24）分;对照组：（8.58±1.73）分,（2.41±1.74）分,（1.78±1.36）分;F=29.361,P=0.003];2组患者腰背部疼痛视觉模拟评分的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=1.104,P=0.032）;除治疗前外（t=0.482,P=0.763）,其余各时点对照组的腰背部疼痛视觉模拟评分均大于治疗组（t=1.116,P=0.024;t=1.048,P=0.041）;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F =30.821,P=0.013）.④Oswsetry功能障碍指数评分.治疗前后不同时间Oswsetry功能障碍指数评分的差异有统计学意义,即存在时间效应[治疗组：（79.68±4.21）分,（30.36±4.83）分,（21.23±4.61）分;对照组：（78.74±4.61）分,（33.72±5.72）分,（24.28±4.42）分;F=33.725,P=0.001];2组患者Oswsetry功能障碍指数评分的组间差异总体上有统计学意义,即存在分组效应（F=3.672,P=0.048）;除治疗前外（t=3.227,P=0.281）,其余各时点对照组的Oswsetry功能障碍指数评分均大于治疗组（t=7.149,P=0.022;t =4.015,P=0.037）;时间因素和分组因素之间存在交互效应（F =26.815,P=0.027）.⑤并发症发生情况.2组患者术中及随访期间均未发生神经、脊髓损伤及感染等并发症.结论：过伸牵引弹性按压法联合经皮椎体成形术治疗骨质疏松性胸腰椎压缩骨折,在恢复伤椎高度、纠正脊柱后凸畸形、缓解腰背部疼痛和恢复脊柱功能方面优于单纯经皮椎体成形术治疗,而且安全性较高.     

综合康复计划在肘部骨折术后康复中的应用

目的：探讨综合康复计划在肘部骨折术后康复中的应用效果。方法：将72例肘部骨折术后患者随机分为2组,观察组35例和对照组37例。观察组采用综合康复计划治疗,对照组采用传统康复锻炼法治疗。分别于术后2周、4周和12周,采用Mayo评分法评价2组患者的肘关节功能。同时,观察对比2组患者肘关节僵硬的发生率。结果：①肘关节功能。不同时间点间肘关节功能Mayo评分的差异有统计学意义（F=143.693,P=0.000）;2组患者肘关节功能Mayo评分的组间差异总体上有统计学意义（t=19.924,P=0.000）,进一步比较显示术后2周、4周、12周观察组的肘关节功能Mayo评分均高于对照组[（48.52±7.78）分,（36.68±5.28）分,t=24.025,P=0.000;（71.92±6.57）分,（55.78±4.72）分,t=25.234,P=0.000;（88.65±9.47）分,（61.36±7.76）分,t=28.338,P=0.000];时间因素与分组因素存在交互效应（F=21.863,P=0.000）。②肘关节僵硬发生率。观察组1例患者术后出现肘关节僵硬而影响日常生活,需返院行关节镜下松解术;对照组15例患者术后出现肘关节僵硬而影响日常生活,需返院行黏连松解术。观察组术后肘关节僵硬的发生率低于对照组（χ2=14.770,P=0.000）。结论：在肘部骨折术后康复中采用综合康复计划,可以预防肘关节僵硬的发生,改善肘关节功能,康复效果确切,值得临床推广应用。     

小切口克氏针内固定和小切口钢板内固定治疗青年锁骨中段A型骨折的对比研究

目的：比较小切口克氏针内固定和小切口钢板内固定治疗青年锁骨中段A型骨折的临床疗效、安全性及卫生经济学指标。方法：回顾性分析接受手术治疗的52例青年锁骨中段A型骨折患者的病例资料,采用小切口克氏针内固定治疗者32例（A组）,采用小切口钢板内固定治疗者20例（B组）。比较2组患者的术中出血量、手术时间、骨折愈合时间、住院时间、住院费用、内固定取出费用、采用肩关节Neer评分评定的肩关节功能及并发症发生率。结果：①一般情况。52例患者均获随访,随访时间9-16个月,中位数11.5个月。2组患者的骨折愈合时间比较,差异无统计学意义[（10.70±2.20）周,（11.30±1.70）周t=0.942,P=0.351];A组患者术中出血量、手术时间、住院时间、住院费用及内固定取出费用均少于B组,差异有统计学意义[（20.32±17.51）mL,（40.73±15.11）mL,t=-5.860,P=0.000;（20.55±10.16）min,（50.12±17.26）min,t=-12.505,P=0.000;（6.63±1.27）d,（8.34±1.11）d,t=-4.182,P=0.000;（3 500.75±500.63）元,（7 500.74±300.85）元,t=-13.317,P=0.000;（1 100.23±350.93）元,（3 500.25±200.32）元,t=-16.708,P=0.000]。②肩关节功能。A组优18例、良12例、中2例,B组优10例、良9例、中1例。2组患者肩关节功能比较,差异无统计学意义（Z=-0.362,P=0.717）。③并发症发生率。A组术后2例患者出现针尾刺激症状,B组1例患者发生钢板远端螺钉拔出。2组患者并发症发生率比较,差异无统计学意义（χ2=0.000,P=1.000）。结论：小切口克氏针内固定和小切口钢板内固定都是治疗青年锁骨中段A型骨折的安全有效的治疗方法,但前者具有创伤小、费用低的优点。