实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血CD4+CD25+T细胞的研究

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)动物模型血CD4 CD25 T细胞的变化及其意义。方法以豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)为抗原免疫Wistar大鼠,建立EAE的动物模型,采用三色流式细胞仪检测EAE和正常大鼠外周血CD4 CD25 T细胞的细胞数并进行比较;通过观察大鼠行为学及脑和脊髓的病理改变确定EAE。结果EAE模型大鼠的成功率为48.9%,EAE大鼠外周血CD4 CD25 T淋巴细胞数(5.29±4.00)显著低于正常对照组(12.61±2.24)(P<0.01)。结论EAE大鼠血CD4 CD25 T细胞数明显减少,CD4 CD25 T淋巴细胞对神经系统脱髓鞘疾病是一种保护因子。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎中细胞凋亡的研究进展

实验性自身免疫性脑脊髓炎 (ex perimentalautoimmuneencephalomyelitis ,EAE)已被公认为人类中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病———多发性硬化(multiplesclerosis ,MS)的经典动物模型 ,是T细胞介导的脱髓鞘疾病。EAE中的细胞凋亡现象既可发生于CNS ,也可发生于外周淋巴器官 ;不仅会发生T细胞凋亡 ,而且巨噬细胞、少突胶质细胞及小胶质细胞均可发生凋亡。因此 ,细胞凋亡对于EAE病程的进展、临床表现及治疗研究等都有重要意义。1　CNS与外周淋巴器官中细胞凋亡的研究概况1.1　CNS的细胞凋亡多种细胞均可在CNS发生凋亡 ,其中自身反应…     

清开灵有效治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的　研究清开灵治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)的可能性及有效性。方法　应用蛋白脂质蛋白1 39- 1 51 ( PLP1 39- 1 51 )免疫 SJL/ J小鼠诱发慢性复发 -缓解性 EAE模型 ,研究清开灵对 PLP1 39- 1 51 诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及 γ-干扰素 ( IFN-γ)分泌的作用 ,并通过神经功能评分观察清开灵治疗 EAE的有效性。结果　清开灵可抑制 PLP1 39- 1 51 诱导的淋巴结细胞增殖反应及 IFN-γ的分泌 ( P <0 .0 0 1 ) ,有效改善 EAE小鼠神经功能评分 ( P <0 .0 1 ) ,使发病时间延迟 ( P <0 .0 1 )。EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少 ,但其差异并无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论　清开灵可有效治疗 EAE,为清开灵用于临床治疗多发性硬化提供了实验依据。     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎外周血及中枢神经系统中CD4+T淋巴细胞的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇（Tri）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）外周血及中枢神经系统中CD4^＋T淋巴细胞的影响，为Tri临床应用提供实验依据。方法 建立EAE大鼠模型，给予Tri预防性治疗．流式细胞术检测大鼠外周血的CD4^＋T淋巴细胞变化，免疫组化观察中枢神经系统中CD4^＋T淋巴细胞的浸润情况。结果 与生理盐水模型组比较，Tri治疗组的发病率显著降低，中枢神经系统中CD4^＋T淋巴细胞的浸润显著减少，而外周血CD4^＋T淋巴细胞的量变化不大。结论 Tri可能通过抑制CD4^＋T淋巴细胞在中枢神经系统的浸润，而阻止EAE的发病，提示Tri在治疗人类多发性硬化方面有一定应用前景。     

TLR9与实验性自身免疫性脑脊髓炎

Toll样受体9(toll-like receptor 9,TLR9)通过识别细菌和病毒DNA中未甲基化的胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG DNA)序列激活天然免疫应答和获得性免疫应答,从而促进宿主抵抗感染性疾病。但一定条件下,TLR9活化亦可促发某些自身免疫性疾病如实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)。该文就TLR9的结构、配体、信号转导通路及TLR9在EAE中的作用机制进行综述。     

雄激素在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的保护作用

多发性硬化(multiple sclerosis, MS)及其动物模型即实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)都具有性别差异,但其确切机制仍不清楚.近年来,大量研究发现雄激素与EAE的发病和病程有一定关系.此文就EAE存在的性别差异及雄激素在其中的作用做一综述.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎的视神经病理改变

目的 研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的视神经病理改变.方法 足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆和完全弗氏佐剂(CFA)混合物制作Wismr大鼠EAE模型,于发病后第6d将大鼠处死,取视神经、脑和脊髓,行HE和LFB染色,光镜和电镜下观察其病理改变.结果 病理检查发现EAE模型组大鼠脑、脊髓有不同程度的炎症反应和脱髓鞘改变;均有视神经病变,光镜主要表现为炎症反应和脱髓鞘,视神经髓鞘脱失重于炎症反应;电镜主要表现为髓鞘稀疏,少突胶质细胞数量减少、胞核固缩,其周围包裹的髓鞘板层松解,轴突髓鞘分离.结论 EAE大鼠存在明显的视神经病变,主要为视神经炎症反应和脱髓鞘改变.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎的历史和现状

<正> 多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一种中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病,其确切的发病机制仍不清楚,研究MS的实验动物模型成为探索该病病因学的最佳途径和方法。MS的实验动物模型主要分为免疫介导模型和病毒诱导模型两种,其中以免疫介导模型多用,该模型主要是通过注射CNS髓鞘蛋白(或分子肽段)与抗原佐剂的乳化复合物诱导动物对抗原反     

T细胞疫苗接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠免疫机制的调节作用

目的　探讨 T细胞疫苗 ( TCV)接种对实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)免疫机制的调节作用。方法　取正常及 EAE大鼠腹股沟淋巴结细胞 ,经 MBP抗原诱导 ,制备 MBP特异的 TCV用于接种 ,以 HE染色观察髓鞘病变 ,MTT法检测细胞毒反应 ,FACS方法检测 T细胞亚群 ,ELISA方法检测血清中细胞因子含量。结果　接种 TCV后 ,CD8 细胞百分率上升 ,T细胞对脑细胞的杀伤率下降 ,血清中 IFN-γ与 TNF-α含量下降以及脑髓质炎症反应减弱 ,EAE发病率下降。结论　特异性 TCV接种可降低自身免疫反应性。 TCV通过淋巴细胞亚群的变化及细胞因子的调节 ,发挥对 EAE的免疫预防和治疗效应     

MOG诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的建立及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞检测

目的 探讨采用分子克隆技术合成MOGIgd-TrxA融合蛋白免疫C57BL/6小鼠并建立多发性硬化(MS)动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的可行性;通过检测EAE小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞数量初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在EAE发病机制中的作用.方法 (1)分子克隆技术合成MOGIgd-TrxA融合蛋白,纯化、超滤浓缩后用Bradford法测定蛋白浓度.(2)C57BL/6小鼠分为MOGIgd-TrxA组(MOG组)、豚鼠脊髓匀浆组(GPSCH组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组) 4组,12只/组,各组以相应抗原乳剂免疫小鼠制作EAE模型后评估其临床神经功能、组织病理学改变(HE染色和髓鞘Luxol fast blue染色)并评价模型质量. (3)流式细胞仪(FACS)检测小鼠脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞百分比.结果 (1)纯化浓缩后MOGIgd-TrxA蛋白纯度达98%左右,浓度约2.3 mg/mL.(2)MOG组小鼠与GPSCH组小鼠在临床神经功能评分等方面差异无统计学意义(P>0.05).两组发病动物组织切片HE染色和髓鞘染色均有不同程度病理改变.(3)CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+ T细胞比例MOG组为(4.71±1.61)%,GPSCH组为(1.44±0.65)%,均明显低于正常对照组[(9.22±1.24)%]和TrxA组[(8.97±1.20)%](P<0.01).结论 (1)分子克隆技术合成的MOGIgd蛋白免疫C57BL/6小鼠能够成功诱导出EAE模型,且模型稳定、发病率高,这为进一步研究MS免疫发病机制并采取有效治疗措施提供了一定依据.(2)CD4+CD25+调节性T细胞数量与EAE小鼠临床表现呈相关关系.     

小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用机制

目的探讨小胶质细胞活化在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病机制中的作用。方法利用同种脑脊髓匀浆诱导EAE模型。采用免疫组化法、免疫组织荧光染色观察小胶质细胞对EAE不同病期炎性脱髓鞘病灶的反应,采用免疫组化法、ELISA法观察脑组织及外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果EAE发病前小胶质细胞即开始激活并持续至高峰期,形态学上表现为从正常的细小分枝状逐渐演变为高度分枝状、阿米巴状。免疫组化染色显示TNF-α阳性细胞多为小胶质细胞。EAE大鼠发病前脑组织中小胶质细胞、TNF-α阳性细胞数及外周血TNF-α水平已升高并持续至高峰期。结论小胶质细胞活化伴随EAE发病的整个过程。活化后的小胶质细胞可能通过合成和释放多种炎症介导物及细胞因子如TNF-α,进一步扩大炎症反应,进而促使髓鞘病变。     

WAR-5、Fasudil治疗EAE的疗效比较及作用机制研究

目的比较WAR-5与盐酸法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果,并探究其作用机制。方法采用小鼠髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)免疫雌性C57BL/6小鼠建立慢性EAE模型,并随机分为EAE对照组、WAR-5治疗组和Fasudil治疗组。于免疫后第3天开始,分别腹腔注射WAR-5、Fasudil及生理盐水,比较各组小鼠体质量变化和临床评分。于免疫后第28天处死各组动物,制作脊髓冰冻切片进行CD4+T细胞、CD68+巨噬细胞及核转录因子-κB(p-NF-κB/p65)染色,观察其在脊髓中的表达。提取脑组织的蛋白用Western blot法检测Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)Ⅱ和p-NF-κB/p65蛋白表达,并采用Griess法检测脾细胞培养上清液的一氧化氮(NO)释放水平。结果与EAE对照组(108.70±20.26、399.00±25.94)比较,WAR-5治疗组(13.67±4.041、52.67±13.43)及Fasudil治疗组(15.33±5.033、31.00±13.45)脊髓内CD4+T细胞和CD68+巨噬细胞数目均减少(均P0.01),WAR-5与Fasudil两治疗组相比,差异无统计学意义。与EAE对照组(1.9500±0.3976、0.5885±0.05982)比较,WAR-5组(0.6137±0.1778、0.0096±0.0015)及Fasudil组(1.1960±0.2225、0.3574±0.1496)脑内ROCKⅡ、p-NF-κB/p65表达均降低,WAR-5治疗组脑内ROCKⅡ、p-NF-κB/p65表达亦均低于Fasudil治疗组(均P0.05)。WAR-5和Fasudil治疗组上清液NO含量分别为(16.40±0.5247)μmol/L、(17.69±0.2833)μmol/L,均低于EAE对照组〔(20.07±0.6116)μmol/L;均P0.001〕,且WAR-5治疗组低于Fasudil治疗组(P0.01)。与Fasudil治疗组比较,800μg及1600μg药物注射后,WAR-5治疗组小鼠的存活状态明显较好;800μg药物注射后,WAR-5治疗组小鼠的脚趾无明显血管扩张反应。结论 WAR-5对EAE的治疗效果与Fasudil相近,且其治疗安全性较好,扩张血管作用较小,其作用机制可能与WAR-5抑制小鼠ROCKⅡ的表达及抑制炎性反应相关。     

钙激活中性蛋白酶抑制剂对实验性自身免疫性脑脊髓炎的保护作用

目的　建立豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)病理模型 ,研究钙激活中性蛋白酶 ( calpain)对 EAE的作用。方法　将牛脊髓匀浆与等量完全福 (氏 )佐剂充分混合 ,注射于豚鼠后肢足底诱发 EAE。发病豚鼠分别注射 calpain抑制剂与地塞米松 ,观察其对 EAE临床症状及病理变化的影响。结果　模型组豚鼠免疫致敏后相继出现明显的 EAE症状 ,表现为行动困难 ,摄食减少 ,体重进行性下降 ,肢体瘫痪 ,发病率为 87.5 % ( 2 8/3 2 )。豚鼠注射 calpain抑制剂后可观察到脱髓鞘病变明显减轻 ,神经元丢失减少 ,但炎性细胞浸润仍然存在。结论　calpain参与了 EAE的神经病理损伤过程 ,calpain抑制剂对 EAE有一定保护作用     

己酮可可碱对实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的：观察己酮可可碱抑制急性EAE豚鼠发病，病情程度，以及对血清TNF，IL－6活性和PRL水平的影响。方法：将EAE模型豚鼠随机分为处理组和对照组，分别肌注己酮可可碱30mg/(kg.d)和等容量生理盐水，观察发生EAE的数目，临床评分，病灶计数及检测血清TNF，IL－6活性及血清PRL水平，并对数据进行显著性检验和相关性分析。结果：处理组豚鼠发病数减少，临床表现及病理变化明显减轻，血清TNF，IL－6活性及PRL水平较对照组显著降低。结论：己酮可可碱可能通过抑制TNF活性抑制EAE的发病。     

实验性变态反应性脑脊髓炎的启动过程

实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）发病机制十分复杂，实验证据表明EAE是自身免疫性CD4^＋ T细胞即Th1细胞激活后介导的一系列级联免疫反应。在疾病过程中大量细胞因子作用于特异的免疫细胞，或细胞因子之间相互作用，形成复杂免疫网络，并贯穿疾病的始终。至于细胞因子是如何作用于特异的免疫细胞，从而启动这一中枢免疫级联反应的，是国内外研究一直关注的焦点。本文就近2年这一领域的研究进展进行了总结和分析，进一步揭EAE的发病机制。     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑和脊髓ICAM-1表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑和脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福(氏)完全佐剂诱发大鼠急性EAE,治疗组在此基础上给予不同剂量Tri[0.2 mg/(kg.d),0.4 mg/(kg.d)],观察其临床表现并进行评分。采用Loyez(氏)髓鞘染色法观察髓鞘病理改变,免疫组化法检测脑和脊髓ICAM-1表达。结果高剂量Tri治疗组大鼠未出现临床症状,其髓鞘结构完整;低剂量Tri治疗组临床症状较模型组轻且发病时间延迟,其髓鞘部分脱失。高剂量Tri治疗组ICAM-1阳性血管数为2.31±1.23,与模型组和低剂量Tri治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Tri对EAE的治疗作用与其抑制ICAM-1表达有关。     

基质金属蛋白酶-9在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9．MMP-9）在多发性硬化（MS）动物模型-实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis．EAE）大鼠脑脊髓中的表达和作用。方法 应用豚鼠脑脊髓匀浆与完全福（氏）佐剂（CFA）混匀于Wistar大鼠颈背部皮下注射诱导建立EAE模型．同时将单独注射CFA或NS的大鼠设为对照组。采用半定量免疫组化方法检测Wistar大鼠发病后72h内及7、14d不同时间段脑脊髓中MMP-9的表达．并与对照组比较。结果 经免疫组化方法检测结果显示EAE大鼠脑脊髓内有特异的MMP-9表达．与对照组比较差异有显著性。发病72h内MMP-9表达高于发病后7d（P〈0．05）及发病后14d（P〈0．01）。结论 EAE大鼠脑脊髓的单核淋巴样细胞有特异MMP-9表达．且发病早期MMP-9阳性细胞率高于发病后期、恢复期及对照组．提示MMP-9与EAE发病有关。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血-脑脊液屏障功能及动态变化

目的　探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)大鼠血 -脑脊液屏障功能的动态变化及其作用 ,以求进一步揭示 EAE发病机制。方法　检测 EAE大鼠免疫后第 4、6、8、1 0、1 2、1 4、1 6、1 8、2 0天血清和脑脊液 ( CSF)中清蛋白 ( ALB)含量 ,其 CSF与血清 ALB比值 ( QA)作为评价血 -脑脊液屏障损害的指标。结果　 QA值免疫后第 8天即出现显著性升高 ,早于临床症状出现 ;随免疫时间的延长 QA值呈逐渐增高后缓慢下降趋势 ,并且 QA值与EAE大鼠病情评分呈显著正相关 ( r =0 .81 ,P =0 .0 0 1 )。结论　血 -脑脊液屏障的早期损害在 EAE发病过程中具关键作用。     

一种新的基质金属蛋白酶抑制剂ONO-4817对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

目的　探讨一种新合成的含氧肟酸的基质金属蛋白酶 ( MMP)抑制剂 ONO-481 7对实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)的治疗效果。方法　给 EAE大鼠口服 ONO-481 7,观察临床症状、T淋巴细胞增殖以及血清肿瘤坏死因子 ( TNF) -α水平。结果　 ONO-481 7能显著改善 EAE临床症状 ( P <0 .0 1 ) ,同时明显抑制 T淋巴细胞增殖 ( P <0 .0 1 ) ,显著降低大鼠血清 TNF-α水平 ( P <0 .0 5 )。结论　研究表明 ,ONO-481 7通过抑制 MMPs活性、T淋巴细胞增殖和减少 TNF-α生成 ,进而能显著减轻血脑屏障 ( BBB)的破坏 ,又可抑制炎细胞浸润和髓鞘破坏 ,从而有效缓解 EAE。