PCR-SSP基因分型技术在ABO疑难血型定型中的应用

目的 研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PC-SSP)基因分型技术在ABO疑难血型鉴定中的应用.方法 收集8例来自广东省肇庆市无偿献血者的ABO疑难血型样本,采用正反定型实验、吸收放散试验等一系列血型血清学方法进行检测;提取基因组DNA,并用PCR-SSP基因分型技术,特异性扩增ABO基因片段,根据有无PCR产物以及产物长度,判断样本的基因型.结果 通过凝胶电泳检测PCR反应的特异性产物,判断样本1～6号ABO基因型为A/O型,样本7,8号为B/O型.8例疑难ABO基因分型结果与其血型的血清学分型结果吻合.结论 ABO疑难血型定型的解决是一个复杂的难题,而PCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,对于解决ABO疑难血型鉴定非常有用.     

PCR-SSP与血清学技术用于ABO血型分型的比较

目的 探讨ABO血型基因分型技术应用于临床检验的可行性.方法 随机抽样100例江西健康汉族个体,并收集20例正反定型不符的标本,采用血清学和序列特异性引物PCR法(PCR-SSP)鉴定血型.结果 100例健康个体的基因分型结果与血清学分型结果一致,19例正反定型不符标本的基因分型结果准确.分型结果表明江西地区以O型为多,100例健康个体中,O型36例(36%),A型32例(32%),B型24例(24%),AB型8例(8%),基因频率:p(A)基因为0.225 3,q(B)基因为0.175 3,r(O)基因为0.599 8,且符合Hardy-Weinberg平衡.结论 基因分型技术应用于临床检验具有可行性,在鉴定疑难血型方面可以作为血清学分型的补充.     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的研究中国汉族人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用PCR-SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1、B、A101(A267c)和A102/103(A467r)四种等位基因,其基因频率分别为0.5827、0.1846、0.0096、0.2231.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A201O1,其余均为A102/A103O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟三人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论ABO RCR-SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,与血型血清学相比有着显著优势.研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异.     

ABO基因定型在疑难血型鉴定中的应用

Landsteiner1 90 0年发现的 ABO血型 ,是目前最具临床意义的血型系统。常规使用的定型技术是采用单克隆或多克隆抗体与红细胞凝集试验进行测定 ,疑难者再附加吸收放散试验、唾液定型等试验项目 ,但由于血型血清学技术的局限性 ,致使一些疑难标本难以及时、准确判定。作者参考国外文献 [1] ,建立了稳定的 PCR ABO基因分型技术 [2 ] ,在实际工作中解决了一些疑难血型鉴定病例 ,现报告如下。材料与方法1　血型血清学试验　按照文献[3 ] 操作。抗 - A、抗 -A1、抗 - B由卫生部长春生物制品研究所制备 ,抗 -H、抗球蛋白试剂由上海输血研究…     

北京地区汉族人群ABO血型基因分型研究

本研究建立ABO基因分型技术，研究北京地区汉族人群中ABO基因型的分布，以了解该人群基因分布特点及规律。通过Multiplex·PCR·RFLP技术和PCR·SSP技术建立起稳定的ABO血型基因分型方法．应用该方法开展对北京地区汉族人群ABO基因分型的研究。研究结果表明，A102、O1、B为北京地区汉族人群中较为常见的等位基因；在北京汉族人群中A型以A102为主，占绝对优势；未检测到A201等位基因，但发现3例O2基因样本，此结果提示在北京汉族人群中存在O2基因。结论：通过研究初步了解了北京地区汉族人群ABO基因分型规律．为ABO血型系统的深入研究提供了参考依据。     

中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景:ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的:研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计:随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位:一所市级血液中心输血医学研究所.对象:选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法:快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标:260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果:在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论:ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

江西地区汉族人群Diego和Dombrock血型基因频率调查

目的调查200名江西地区汉族随机献血者的Diego(Di)和Dombrock(Do)2个稀有血型系统,取得相应基因频率资料,为临床输血提供相应资料。方法采集200名江西地区汉族随机献血者,应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法检测Di和Do 2个血型系统。结果 200名随机献血者中Di血型查出2种基因表现型,分别为Dia-b+196例、Dia+b+4例,Dia+b-及Dia-b-未检出;Dia基因频率为0.01,Dib基因频率为0.99。Do血型查出3种基因表现型,分别为Doa+b-2例,Doa+b+16例,Doa-b+182例;Doa基因频率为0.05,Dob基因频率为0.95。结论本地区Di血型系统的表现型多数为Dia-b+、少数为Dia+b+,Dia+b-及Dia-b-未见;Do血型系统的表现型多数为Doa-b+、少数为Doa+b+和Doa+b-。     

中国人群ABO血型系统基因分型研究与应用

背景ABO血型是输血医学中最重要的血型系统,血型血清学定型技术具有简单实用的特点已广泛应用于ABO血型中的鉴定中,但是血清学试验存在局限性,而基因技术在某种程度上克服了血清学试验的缺点.目的研究中国人群ABO基因多态性,并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题.设计随机选取样品,与常规血型血清学结果相比较,分析基因型结果.单位一所市级血液中心输血医学研究所.对象选择2002-03/2002-12在深圳市血液中心参加捐血的无血缘关系的中国汉族无偿献血者个体260人为研究对象,其中男110人,女150人,年龄18～50岁.1例血清学技术正反定型不符的标本来自本血液中心并调查其家系,6例血清学疑为A2型的标本来自第二人民医院等4个本市医院输血科.方法快速盐析法提取外周血中的DNA,采用聚合酶链反应-序列特异性引物基因方法对ABO血型定型,并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上,用聚合酶链反应-序列特异性引物法扩增ABO血型的等位基因.主要观察指标260人份样品ABO血型系统的基因型及疑难血型样品的血清型与基因型.结果在中国汉族符合Hardy-Weinberg平衡的随机群体(260人)中,检出O1,B,A1O1(A467C)和A1O2/1O3(A467T)4种等位基因,其基因频率分别为0.582 7,0.184 6,0.009 6,0.223 1.在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中,只有2例基因分型确定为A2O1O1,其余均为A1O2/A1O3O1型,在一家系疑难血型鉴定中,兄弟3人均为类孟买型,ABO基因分型分别为A1O2B,A1O2B,A1O2O1.结论ABO聚合酶链反应-序列特异性引物基因分型是一种方便、快速、可靠的技术,可以弥补血型血清学鉴定方法的不足.     

徐州汉族人ABO血型及HAB分泌型基因分型研究

目的　研究徐州汉族人群ABO血型及HAB分泌型基因多态性分布特征并用于解决临床输血中血型血清学鉴定难题。方法　用快速盐析法提取外周血标本中的DNA ,用PCR SSP扩增ABO血型、HAB分泌型等位基因。结果　 1 0 4名健康、无血源关系的徐州汉族人ABO血型基因频率分别为A1:0 .1 53 8,A2 :0 .0 962 ,B :0 .2 4 52 ,O1:0 .50 4 8,O2 :未检测到 ( χ2 =6.73 2 3 ,P >0 .2 5,符合Hardy Weinberg公式 ) ;HAB分泌型基因频率分别为分泌基因Se:0 .980 8,非分泌基因se:0 .0 1 92 ( χ2 =0 .0 4 2 1 ,P >0 .75,符合Hardy Weinberg公式 )。 1份用血清学方法不能确定ABO血型的标本 ,用基因分型定为BO1型。结论　PCR SSP是一种方便、可靠的血型基因定型技术 ,与血型血清学方法相比本文非分泌基因se的频率显著偏低 ,4例血清学定为非分泌型个体用该方法鉴定基因型为Se/Se,间接提示G4 4 7A和G757A突变不能完全覆盖我国汉族人群的非分泌基因se。     

PCR—SSP基因分型技术在Rh血型鉴定中的应用研究

目的研究聚合酶链式反应-特异性序列引物（polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP）基因分型技术在Rh血型鉴定中的应用。方法收集广东省肇庆市无偿捐血者RhD阴性血型样本2例、RhD阳性样本1例,采用盐水法进行C、c、D、E、e抗原分型,对D抗原阴性的样本采用抗人球蛋白法进行确认。提取样本基因组DNA,并应用PCR-SSP基因分型技术特异性扩增RhD以及RhCE基因片段,并对D外显子进行检测。根据有无PCR产物以及产物长度,判断样本的基因型。结果1例RhD阳性样本以及ccdee样本的血清学分型与基因分型结果相符合,1例Ccdee样本的血清学分型与基因分型结果不相符。结论PCR—SSP基因分型技术在RhD血型鉴定中能识别血清意义上的假阴型,在临床输血实践中具有广阔的应用前景。     

徐州地区汉族人群血小板HPA基因多态性的研究

目的 采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测徐州地区汉族人群血小板特异性抗原(HPA)基因多态性.方法 2010年期间对徐州地区100名无血缘关系的汉族成年人进行HPA1～17基因及新等位基因Caba+分型研究.根据HPA基因分型试剂盒的要求,调整DNA模板浓度;根据人类生长激素基因(HGH)的保守片段设计内参引物进行PCR-SSP,在包含引物混合液的96孔反应板中,按照相同的循环条件扩增PCR产物;用x2检验比较基因分布期望值与观察值,以验证是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡.结果 在徐州地区汉族人群的HPA1～17系统中,呈多态性分布的等位基因是HPA1a,HPA2a,HPA3a,HPA4a,HPA5a,HPA6a和HPA15a,其频率分别为0.995 0,0.935 0,0.590 0,0.9950,0.980 0,0.975 0和0.575 0,HPA7～14,16～17及新等位基因Caba+呈单线性分布.结论 徐州地区汉族人群HPA的基因有地区特点,人类血小板抗原HPA的基因具有民族多态性.     

60名上海汉族人群ABO血型系统基因型研究

目的：建立ABO血型系统基因分型方法，研究上海汉族人群ABO血型的基因型分布，并对A等位基因进行较为深入的研究。方法：采用多重聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性（RFLP）方法，单管扩增ABO基因第6和第7外显子，然后用KpnⅠ和MspⅠ两种限制性内切酶同时消化多重PCR产物。结果：在中国汉族符合Hardy-Weinber平衡的随机群体（60人）中，检出A102，A101，B、O1四种等位基因，其基因频率分别为20．8％、2．5％，24．2％，52．5％。基因型频率为BB10．0％、O1O1 21．7％、A102A102 1．7％、A101A102 1．7％、A102O1 33．％、A101O1 3．3％、BO1 25．0％、A102B 3．3％，未检测到O2基因。3名血清学疑为A2亚型的个体中有1名经PCR－序列特异性引物（SSP）法证实存在A467（C→T）及1060位单个碱基C缺失的移码突变。结论：上海汉族人群A型以A102占优势。     

北京地区汉族人群ABO血型基因分型研究

本研究建立ABO基因分型技术,研究北京地区汉族人群中ABO基因型的分布,以了解该人群基因分布特点及规律.通过Multiplex-PCR-RFLP技术和PCR-SSP技术建立起稳定的ABO血型基因分型方法,应用该方法开展对北京地区汉族人群ABO基因分型的研究.研究结果表明,A102、O1、B为北京地区汉族人群中较为常见的等位基因;在北京汉族人群中A型以A102为主,占绝对优势;未检测到A201等住基因,但发现3例O2基因样本,此结果提示在北京汉族人群中存在O2基因.结论:通过研究初步了解了北京地区汉族人群ABO基因分型规律,为ABO血型系统的深入研究提供了参考依据.     

中国汉族人群ABO血型系统基因分型研究与应用

目的 研究中国汉族人群ABO基因多态性，并将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题：方法 快速盐析法提取外周血中的DNA，采用聚合酶链反应—序列特异性引物(PCR—SSP)基因方法对ABO血型定型，并且在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，用PCR—SSP法扩增疑难ABO血型的等位基因：结果 在中国汉族符合Hardy—Weeinberg平衡的随机群体(260人)中，检出O1、B、A101(A267c)和A102／103(A467r)四种等位基因，其基因频率分别为、0.5827,0．1．846、0.0096、0.2231：在疑难血型鉴定中6份血清学定为A2的标本中，只有2例基因分型确定为A201O1，其余均为A102／A103O1型，在一家系疑难血型鉴定中，兄弟三人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、A102O1.结论 ABO RCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显著优势：研究发现中国汉族人群A2等位基因构成与国际报道的基因构成存在差异。     

ABO血型基因分型方法的进展与应用

ABO血型系统是临床输血中最重要的血型系统.血清学技术是检测ABO血型常规检测方法,但对于鉴定如抗原或抗体减弱、血浆蛋白异常、多凝集或冷凝集素等较为复杂的ABO疑难样本,血清学存在着一定的局限性.随着分子生物学技术的发展,ABO血型基因被克隆,建立了以DNA为基础的ABO血型基因分型技术,出现了PCR-SSP、Drop...     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ABO血型系统的分子基础及在此基础上对ABO血型系统的基因分型的几种主要方法:PCR-DNA测序法、PCR-限制性内切酶酶切法、PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)、PCR-序列特异性引物(SSP)、PCR-单链构象多态性(SSCP)等。另外还介绍了基因分型技术在ABO亚型研究中的应用。     

HLA-DQB1 PCR-SSP基因分型技术

HLA-Ⅱ(DR,DQ,DP)配型对提高异基因骨髓移植存活率减少GVHD有重要意义。既往HLA-DQ采用血清学技术检定表型,近年国外转向基因分型,不少实验室已将其列为常规。国内近年来有人报告聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP),限制性片断长度多态性     

ABO血型基因分型技术用于胎儿产前血型鉴定

在新生儿溶血病、脐血移植或亲子鉴定中 ,有时需要作胎儿产前血型鉴定 ,而 ABO血型是最具临床意义的血型系统。笔者采用 ABO基因分型技术 ,成功地用于羊水 ABO血型鉴定 ,现报告如下。材料与方法1　研究对象　例 1 ,女 ,妊 2产 1 ,第 1胎男性 ,3岁 ,AB型 ,患地中海贫血 ;第 2胎妊娠 8个月 ,计划分娩时采集脐血对第 1胎作造血干细胞移植。申请产前鉴定胎儿 ABO血型。例2 ,女 ,妊 2产 1 ,第 1胎男性 ,6岁 ,A型 ,患急性淋巴细胞白血病 ,经化疗后缓解 ;第 2胎妊娠 9个月 ,计划分娩时采集脐血对第 1胎作造血干细胞移植 ,申请产前鉴定胎儿 A…     

寡核苷酸DNA芯片用于ABO血型基因分型的研究

目的 对寡核苷酸芯片用于ABO血型基因分型的技术进行研究。方法 常规的酚／氯仿法提取标准血样基因组DNA，在ABO座位的外显子6和7区域各设计一对引物，经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5-dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针，将探针固定在APS－PDC法制作的DNA芯片上，用标记的PCR产物与之杂交，扫描仪对杂交结果进行扫描，Imagene软件对杂交图象进行分析。结果 本实验共检测了100份已知血型血样的ABO基因型，结果证明本实验研制的ABO基因分型芯片快速、准确、灵敏。结论 寡核苷酸DNA芯片用于ABO的基因分型与其他方法相比更具有灵敏、直观、高通量和集成化的优势。