人类腺病毒载体介导的基因治疗研究进展与展望

人类腺病毒（Ａｄ）基因治疗载体的独特优点在于，具有携带大片段ＤＮＡ的潜力，很高的体外培养增殖滴度，能感染分裂期后的非复制性细胞，适于感染原位组织，尤其是肺脏等。研究证实，Ａｄ能将外源基因转移到小鼠肝脏和肺上皮、棉鼠气管上皮、大鼠和小鼠脑细胞、人内皮细胞或肌肉组织中，并获得成功表达。因此，Ａｄ载体作为有效的基因治疗载体愈来愈受到重视，如今已成为科技前沿领域的一大研究热点和重点。本文举例介绍了人类腺病     

腺病毒介导的p53基因治疗肝癌的给药途径研究进展

目前腺病毒介导的p53基因（rAd／p53）治疗肝癌主要的给药方式有选择性肝动脉给药、经门静脉给药、瘤内注射以度静脉给药等。就应用rAd／p53的安全性度不同给药途径进行综述。     

腺病毒介导的p53基因治疗肝癌的给药途径研究进展

目前腺病毒介导的p53基因(rAd/p53)治疗肝癌主要的给药方式有选择性肝动脉给药、经门静脉给药、瘤内注射以及静脉给药等.就应用rAd/p53的安全性及不同给药途径进行综述.     

重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因治疗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:评价携带人肝细胞生长因子(HGF)基因的重组腺病毒对大鼠肝纤维化模型的治疗作用。方法:DMN法建立W istar大鼠肝纤维化模型后,将8.6×109pfu的Ad-HGF经尾静脉注射入大鼠体内,对照组注射同剂量的Ad-GFP。第40天心脏采血,检测血清GPT、GOT、TP和TB il,并取肝组织做HE染色,观察两组大鼠肝脏的病理形态。结果:治疗组部分动物肝功能有所改善,对照组不明显。与对照组相比,治疗组大鼠的肝组织损伤程度较轻,汇管区看不到明显的纤维增生,并可见双核肝细胞和分裂相细胞。结论:腺病毒介导的HGF基因可能有部分治疗大鼠肝纤维化的作用。     

腺病毒介导人p53抑癌基因对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响

研究腺病毒介导入野生型Ｐ５３抑制肝癌细胞系ＨｅｐＧ２生物学行为的影响。构建含人野生型Ｐ５３抑癌基因的生组腺病组载体，导入肝癌细胞系ＨｅｐＧ２后，分别用光镜，电镜ＴＵＮＥＬ法检测细胞凋亡发生和在裸鼠体内的成瘤性改变。     

人骨形态发生蛋白12基因重组腺病毒载体的构建

目的:构建及制备人骨形态发生蛋白12(BMP12)基因重组腺病毒,证明其可感染脂肪组织来源干细胞并表达蛋白。方法:将包含有BMP12cDNA全长序列的BMP12-pED6质粒用限制性内切酶EcoRI进行酶切,得到一个1260bp大小的含有BMP12cDNA的目的基因片段。将目的基因片段插入质粒pcDNA3.1后,用KpnI和PmeI进行双酶切,插入pAdtrack-CMV。插入目的基因片段的穿梭质粒pAdtrack-CMV-BMP12用PmeI进行酶切线性化后与腺病毒骨架载体pAdEasy-1一起电转化入感受态BJ5183菌株。用PCR及多种酶切方法鉴定重组体。最终将线性化的重组质粒利用脂质体转入293A细胞中进行病毒包装。BMP12基因随着重组腺病毒在感染的293A细胞中扩增而得到复制,并通过CsCl梯度离心法得以纯化。Elisa法检测Ad-BMP12感染脂肪组织来源干细胞后BMP12的蛋白表达。结果:pAdtrack-CMV-BMP12经酶切证实有1260bp的插入片段。酶切及PCR鉴定证实BMP12基因重组腺病毒载体构建成功。GFP(green fluorescent protein)表明重组腺病毒扩增成功并制备出高滴度重组病毒。该重组病毒可成功感染脂肪来源组织干细胞并表达BMP12蛋白。结论:BMP12基因能够重组于腺病毒载体,可以进行有效扩增,产生高浓度的重组腺病毒,从而用于BMP12基因治疗的研究。     

重组腺病毒介导mIL-12 基因转染的 EL-4细胞生物学特性的研究

目的：观察 ｍ Ｉ Ｌ１２ 基因转染的小鼠 Ｅ Ｌ４ 细胞（ Ｃ５７ Ｂ Ｌ／６ 小鼠 Ｔ 淋巴瘤细胞株）体外生物学特性的改变。方法：阳离子脂质体协同 Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染 Ｅ Ｌ４ 细胞。结果及结论：基因转染的 Ｅ Ｌ４ 细胞有 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达,培养上清中可以检测到 ｍ Ｉ Ｌ１２ 的生物学活性。与野生型 Ｅ Ｌ４ 细胞相比,ｍ Ｉ Ｌ１２ 重组腺病毒感染的 Ｅ Ｌ４ 细胞形态及体外增殖能力无明显改变, 转染细胞的成瘤性降低。此外,研究结果还表明,阳离子脂质体能显著提高腺病毒的感染效率。     

肝癌的免疫基因治疗

免疫基因治疗主要通过加强肿瘤细胞的免疫原性或机体免疫效应细胞的效应性达到治疗的目的 ,随着研究的深入 ,许多成果从实验室走向了临床。笔者从免疫效应细胞和肿瘤细胞两个角度 ,对肝癌免疫基因治疗予以综述。1　针对免疫效应细胞的治疗利用基因工程技术 ,将细胞因子基因导入免疫效应细胞 ,当效应细胞回输体内时 ,细胞因子以自分泌或旁分泌方式在局部达到较高浓度 ,从而协同免疫细胞发挥抗肿瘤效应。淋巴因子激活的杀伤细胞 (ＬＡＫ细胞 )和白介素 2 (ＩＬ 2 )的联合应用已在多种肿瘤治疗中取得了一定效果。肿瘤浸润淋巴细胞 (ＴＩＬ)因…     

恶性肿瘤的基因治疗联合放射治疗的研究进展

近些年在恶性肿瘤的基因治疗与常规治疗联合应用进行的一系列实验研究中,人们已发现基因治疗可加强肿瘤的放射敏感性,且两者可有协同作用.综述了基因治疗联合放射治疗用于恶性肿瘤治疗的研究进展及其分子机制.     

pcEgr-IFNγ基因治疗联合放射治疗抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨pcEgr-IFNγ基因－放射联合治疗对修黑色素瘤B16小鼠的抗肿瘤作用及其免疫学机理。方法：肿瘤局部注射脂质体包裹的pcEgr-IFNγ重组质粒后36h,接受20GyX射线照射,观察放疗后不同时间肿瘤大小,放疗后3d瘤内IFNγ转录水平和15d部分免疫学指标。结果pcEgr-IFNγ基因－放射联合治疗后第3－15天,肿瘤生长速率明显低于单纯照射组,照第第9－15天明显低于单纯基因治疗组和空质料对照组;治疗后第3天,pcEgr-IFNγ基因－放射联合治疗组瘤内IFNγ表达水平明显高于单纯基因治疗组;脾脏NK毒胞毒活性、IL－2和IFNγ分泌活性均明显高于单纯放疗组和单纯基因治疗组。结论：pcEgr-IFNγ基因－放射联合治疗抗肿瘤作用明显优于单纯放疗和单纯基因治疗组,其机理可能与放疗诱导瘤内IFNγ基因表达增强,激活荷瘤机体抗肿瘤免疫功能有关。     

放疗联合光动力疗法治疗肿瘤的研究进展

放疗联合光动力疗法(PDT)在治疗肿瘤方面日益受到人们的关注,从细胞水平、动物水平及临床应用等方面的研究进展来看,放疗联合传统PDT可以提高肿瘤治疗效果,降低放疗剂量,减少不良反应的发生。尤其近年发展起来的自发光光动力疗法可以不再需要额外的光源,与放疗的联合应用在降低辐射剂量的同时,亦有效解决了外部光源穿透力弱、诱发PDT效应差的弊端。自发光光动力疗法比放疗与传统PDT的简单联合应用更具优势,是目前研究的热点。就放疗联合光动力疗法治疗肿瘤的研究进展予以综述。     

内皮抑素基因联合放射治疗对大鼠Walker-256细胞种植性肿瘤的抑制作用

目的探讨鼠源性内皮抑素（endostatin）基因联合放射治疗对大鼠种植性肿瘤的抑制效应。方法制作大鼠乳腺癌Walker-256细胞种植性肿瘤的动物模型，通过检测肿瘤重量和肿瘤生长速率观察内皮抑素基因治疗联合放疗的抑瘤效应。体外采用Western blot检测构建pCMV-endostatin质粒转染的Walke-256细胞endostatin蛋白表达，体内采用BT-PCR观察各组endostatin mRNA表达。结果基因治疗组和基因治疗联合放射治疗组均可见到endostatin mRNA及其蛋白明显表达，但两组间表达无统计学意义；基因与放射联合组肿瘤的生长速率和重量均明显小于单纯基因治疗和放疗组（P〈0．01），后两组其肿瘤的生长速率和重量明显低于对照组（P〈0．01），但二者之间差异无统计学意义。结论pCMV-endostatin在Walker-256细胞内有明显表达endostatin mRNA及其蛋白；endostatin基因治疗有明显的抑瘤作用，但endostatin基因联合放疗的抑瘤效应更明显，促进放疗的抑瘤效果。     

HSV-TK/GCV自杀基因系统联合γ射线放射治疗宫颈癌的实验研究

目的 探讨HSV-TK／GCV自杀基因系统协同^60Coγ射线放射治疗对人宫颈癌细胞系的体内外联合杀伤作用，以及HSV-TK／GCV对放射治疗的增敏作用。方法 分别以HSV-TK／GCV、^60Coγ射线放射治疗及两者联合治疗人宫颈癌HeLa细胞系和裸鼠宫颈癌移植瘤模型，比较治疗效果；利用增敏效应比值（E／O）、克隆形成实验评价体内外HSV-TK／GCV对放射敏感性的影响。结果 在体外实验中，自杀基因对宫颈癌HeLa细胞生长的抑制率为45．8％，单纯放疗的抑制率为42．4％，而基因治疗与放疗联用的抑制率为87．5％，与前两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；且联合治疗组对射线敏感性较单独治疗组明显增加，克隆形成率明显下降（P〈0．05）；在体内实验中，单纯基因治疗与放疗对HeLa细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑瘤率分别为39．5％和35．8％，而基因治疗放疗联用的抑瘤率达到87．9％，与前两者比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；增敏效应比值（E／O）为3．2（〉1．4），提示HSV-TK／GCV对放疗具有增敏作用。结论 HSV-TK／GCV自杀基因系统具有放射增敏作用，二者联合治疗可作为宫颈癌综合治疗的有效补充方法。     

Ad-Rb94联合照射对体外人大肠癌细胞的抑瘤作用

目的 探讨人视网膜母细胞瘤Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-Rb94)联合γ射线照射对体外人大肠癌细胞生长的联合抑瘤作用及其机制.方法 将Ad-Rb94于体外转染大肠癌HT29细胞,转染后12h进行4Gy 137Csγ射线照射.实验分组为5组:对照组、β-半乳糖苷酶基因重组腺病毒载体组(Ad-lacZ组)、Ad-Rb94组、照射组和Ad-Rb94联合照射组.用噻唑蓝法检测HT29细胞的生长,用流式细胞术检测HT29细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化.结果 当Ad-Rb94有效转染HT29细胞后,从转染第4日开始,照射组和联合照射组细胞生长速率较对照组和Ad-lacZ组缓慢;与Ad-Rb94组和照射组相比,Ad-Rb94联合照射组细胞的生长表现出更强的抑制效应(t=15.02、17.30,P＜0.01).细胞周期结果表明,与对照组、Ad-lacZ组和Ad-Rb94组相比,照射组大量细胞停留在G2期,各组间差异有统计学意义(t=18.65、15.23、16.38,P＜0.01);但Ad-Rb94联合照射组停留在G2期细胞更多(约40％),远高于照射组(t=7.78,P＜0.05).细胞凋亡结果表明,与对照组相比,Ad-Rb94组和照射组细胞凋亡率明显增加(t=16.19、10.72,P＜0.01);Ad-Rb94联合照射组细胞凋亡率最高(21％),与Ad-Rb94组和照射组相比,差异有统计学意义(t=6.17、9.25,P＜0.05).结论 腺病毒介导的Rb94基因联合照射对大肠癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,其机制可能是促进细胞G2期阻滞和凋亡.     

放化同步治疗局部进展期胰腺癌

目的评价放化综合治疗局部进展期胰腺癌（LAPC）的疗效.方法36例局部进展期胰腺癌采用放化同步治疗,化疗的方案分为：①5-Fu 500 mg,2次/周（13例）;②5-Fu 500 mg＋DDP30mg,1次/周（16例）;③健择（GEM）600mg,1次/周（7例）;所有病人均完成3～7周的化疗.20例采用常规放射治疗,中位照射剂量50 Gy（21～60 Gy）,16例采用三维适形放疗（3D-CRT）多野（3～5野）照射或补量,中位照射剂量60 Gy（50～70 Gy）.结果临床受益反应（CBR）：15例,占41.6%;全部患者近期疗效：CR 0,PR 4例占11.1%,SD 24例占66.6%,PD 8例占22.2%,其中3D-CRT的有效率（16.6%）高于常规放疗（5%,P=0.017）;全部病人生存率为：1年33.1%、2年11.2%.中位生存时间9.6个月（3～26个月）;1年生存率3D-CRT和常规放疗分别是41.2%和27.7%（P=0.41）;1～2度骨髓抑制41.6%（15例）,3度骨髓抑制8.3%（3例）,急性放射性胃肠炎1～2度52.8%（19例）,3度2.8%（1例）.结论对局部进展期胰腺癌采用放化综合治疗可取得一定的疗效,且毒副作用可耐受.     

晚期非小细胞肺癌靶向治疗后失败模式及联合放疗临床意义

目的 探讨晚期非小细胞肺癌患者经表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗后的失败模式及联合放疗的意义。方法 分析北京大学肿瘤医院2009年1月至2013年6月接受EGFR-TKIs治疗的晚期伴EGFR外显子突变的非小细胞肺癌患者,采用Kaplan-Meier法分析不同失败模式及联合放疗对患者生存的影响。结果 符合入组条件患者111例,中位年龄59岁（35~80岁）,中位随访时间27.7个月（6.6~85.3个月）,中位无进展生存（PFS）10.3个月（6.2~30.5个月）,中位总生存（OS）29.8个月（7.1~90.7个月）。其中主要失败模式为原有病灶进展（65例,58.6%）,主要失败部位为胸腔内病灶进展（57例,51.4%）。寡进展患者（耐药时病灶数目1~3个）与≥4个病灶进展者比较,生存期明显延长,中位OS分别为32.5、26.7个月,差异有统计学意义（χ²=4.888,P<0.05）。仅胸腔内进展43例,放疗9例,未放疗34例,两组患者再治疗的中位PFS分别为9.6、5.7个月,联合放疗组明显延长,差异有统计学意义（χ²=9.013,P<0.05）;失败后再治疗的中位OS分别为28.1、13.2个月,两组间差异无统计学意义（P>0.05）。48例寡进展患者,放疗12例,未放疗36例,中位PFS分别为9.6、4.2个月,联合放疗组较未放疗组明显延长,差异有统计学意义（χ²=5.482,P<0.05）;失败后再治疗的中位OS分别为26.0、11.8个月,两组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 对于EGFR-TKIs治疗后仅胸腔内进展及寡进展的患者,联合局部放疗可以改善患者PFS。因此在1代EGFR-TKIs原发耐药的患者中,T790 M突变阴性或没有条件进行相应检测的这部分患者,在出现胸腔内进展或寡进展时,进行局部干预是非常重要的。     

乏氧靶向性自杀基因治疗系统增强胰腺癌放疗效果的实验研究

目的 探讨乏氧靶向性自杀基因治疗系统对胰腺癌放射治疗的增强效应。方法 借助DNA重组技术构建乏氧依赖性表达的重组腺病毒载体Ad-5HRE/hCMVmp-BCD。用Westernblot检测细菌胞苷脱氨酶(BCD)的表达,细胞生长抑制实验检测人胰腺癌MIA-PACA2细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性,裸鼠移植瘤实验观察Ad-5HRE/hCMVmp-BCD/5-FC单独或联合放射治疗对MIA-PACA2细胞移植瘤的杀伤效应。结果 MIA-PACA2细胞感染Ad-5HRE/hCMVmp-BCD后,乏氧处理可诱导BCD蛋白的表达,并显著提高细胞对5-FC的敏感性。裸鼠移植瘤实验结果显示,Ad-5HRE/hCMVmp-BCD/5-FC与放射治疗均可抑制胰腺癌移植瘤的生长,但两者联合可显著增强对移植瘤的抑制效应。结论 乏氧靶向性的Ad-5HRE/hCMVmp-BCD/5-FC自杀基因系统可显著增强胰腺癌细胞的放疗效果,具有良好的临床应用前景。     

MRI对微波固化治疗肝癌疗效的评价

目的评价1.5TMRI平扫和动态增强对肝癌微波固化治疗后表现和疗效随访的价值。方法回顾性分析26例32个病灶肝癌微波固化治疗后MRI表现,并与AFP和DSA结果进行对照。结果微波固化治疗3天后的MRI平扫表现,T1WI呈相对高信号,T2WI呈相对低信号,病灶周围可见长T1,长T2水肿带。微波固化治疗1月后的MRI表现①单独行微波固化治疗的19个病灶以凝固性坏死为主,平扫T1WI呈相对等高信号,T2WI呈相对低信号或等信号,动态增强扫描无强化;②多种介入方法联合应用的5个病灶,特别是与TACE联合治疗的病灶,以凝固性坏死、液化性坏死合并存在,表现为局部T1WI呈相对低信号,T2WI呈相对高信号,但动态增强扫描无强化;③8个病灶不完全坏死:在T1WI上呈相对高信号的病灶周边有低信号结节或同时伴新月形低信号带,在T2WI上则表现为等低信号病灶周边出现相对高信号结节或新月形高信号带,在动态增强扫描时呈快进快出强化表现。结论 MRI平扫和动态增强评价微波固化的疗效可靠、准确,微波固化术后定期MRI随访具有重要意义。     

Improved survival of mice bearing liver metastases of colon cancer cells treated with a combination of radioimmunotherapy and antiangiogenic therapy

We attempted to determine whether the combined regimen of radioimmunotherapy (RIT) and antiangiogenic therapy would favorably affect the survival of animals bearing liver metastases of colon cancer cells. Daily antiangiogenic therapy with 2-methoxyestradiol (2-ME), 75 mg/kg, was initiated at 3 days following intrasplenic cell inoculation of LS180 colon cancer cells. RIT with 7 MBq of ¹³¹I-A7, an IgG1 anti-colorectal monoclonal antibody, or ¹³¹I-HPMS-1, an irrelevant IgG1, was conducted at 7 days. Production of vascular endothelial growth factor (VEGF) by LS180 cells was assessed in vitro. All nontreated mice died by 31 days following cell inoculation (n=5). Monotherapy comprising 2-ME treatment resulted in slightly better survival of mice (n=8) (P<0.05). ¹³¹I-A7 RIT displayed a marked therapeutic effect (n=8) (P<0.001); however, all animals eventually died due to metastases by 99 days. The combined regimen of ¹³¹I-A7 RIT and antiangiogenic therapy demonstrated a superior therapeutic effect in comparison to monotherapy consisting of either RIT or antiangiogenic therapy (n=10) (P<0.05); three mice survived the entire 160-day observation period. The combination of antiangiogenic therapy and ¹³¹I-HPMS-1 RIT failed to provide an appreciable benefit (n=5). Treatment with 2-ME decreased VEGF production by LS180 cells in a dose-dependent fashion. In conclusion, a combination regimen comprising RIT and antiangiogenic therapy initiated at the early stage of metastasis would be of great benefit in terms of improvement of the therapeutic efficacy with respect to liver metastases.     

乳腺癌辅助放疗后甲状腺功能减退的研究进展

甲状腺功能减退(HT)是乳腺癌放射治疗后的并发症之一,对患者的生活质量产生严重影响,但在过去这一并发症并未得到放疗医生的关注。近年来,许多研究开始致力于乳腺癌放疗中甲状腺的保护,并得出了一些结论,这些结论能够指导合理限制放疗中甲状腺的剂量,从而降低HT的发生率。