三七不同部位化学成分的差异性研究

目的:通过分析三七中不同部位化学成分的差异,为三七药材不同部位的充分合理应用提供初步的理论依据。方法:运用UPLC法同时测定三七药材中不同部位(剪口、侧根、绒根、表皮、皮层、木质部)中5种皂苷-三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd成分的含量;应用Metaboanalyst和SIMCA-P+11.0对三七药材不同部位的数据进行主成分分析、偏最小二乘判别分析和聚类分析,以探讨三七不同部位化学成分的差异性。结果:在所建立的色谱条件下,5种人参皂苷能够达到良好分离,线性关系、稳定性、精密度、重复性、加样回收试验均符合中药质量分析要求;三七剪口中5种皂苷含量最高,绒根含量最低,三七主根中除人参皂苷Re在表皮分布较多之外,其余四种皂苷类成分在表皮、皮层以及木质部等部位的分布均无显著性差异;三七样品的不同部位在一定程度能够区分,其中绒根、剪口、表皮以及木质部均具有一定的区分度,而侧根和皮层区分度较低;在区分三七样品的不同部位时,Rg1、Rb1和Rd化学成分对于区分三七样品不同部位具有较强的贡献度。结论:三七不同部位的化学成分存在差异性,该研究可为三七不同部位的合理应用提供一定的参考。     

杠柳不同药用部位的显微鉴定

目的:对香加皮原植物杠柳的不同药用部位进行显微鉴定,为其药材鉴别提供科学依据,不断丰富其生药学研究内容。方法:采用生药显微鉴定技术观察、描述、绘制各部位的显微特征。结果:阐明了杠柳不同部位根、茎、茎皮、叶、果实的组织横切面及粉末显微特征,并描绘出相应的显微墨线图。结论:本研究结果可为杠柳不同部位的生药鉴定提供依据。     

三七多糖的含量测定方法及不同部位多糖的含量变化研究

目的:建立三七多糖的检测方法,分析测定三七茎叶、筋条、花和剪口的多糖含量,为三七的质量评价提供依据.方法:用80％乙醇提取还原性糖,然后用水提取三七多糖,采用蒽酮-硫酸比色法于528 nm波长处用分光光度法测定多糖的含量.结果:三七不同部位中多糖含量有明显差异,三七筋条中多糖含量最高,三七茎叶中多糖含量最低.结论:所用含量检测方法简便、快速、准确,可用于不同部位三七多糖的质量检测和控制,三七筋条、花、茎叶和剪口都有一定的多糖开发价值.     

超细三七粉质量标准研究

目的：建立超细三七粉饮片质量评价方法。方法：采用HPLC法测定超细三七粉中单体皂苷R1、Rg1、Rb1的含量结果：样品在线性范围内有良好的线性关系．三七皂苷R1的平均回收率为100．02％．RSD为2．20%；人参皂苷Rg1的平均回收率为99．25%．RSD)为2．39%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98．49％．RSD为2．31％(n=5)结论：HPLC、梯度洗脱法能将多种皂苷很好地分离检测．提高了时效．减少了误差．结果表明该方法准确可靠．重现性好．结果稳定。     

姜三七的显微鉴别研究

目的:对姜三七进行显微鉴别研究.方法:对姜三七的块根、根茎横切面及粉末进行显微观察,并描绘组织详图及粉末图.结果:姜三七块根及根茎横切面有明显的显微鉴别特征.结论:块根及根茎横切面组织特征可作为其生药学鉴定依据.     

包装对三七粉和熟三七粉稳定性的影响研究

目的:通过考察不同包装下三七粉和熟三七粉外观性状、水分及有效成分含量等变化情况,确定包装对三七粉和熟三七粉稳定性的影响。方法:在恒温恒湿箱中对三七粉和熟三七粉进行加速试验,于0、1、2、3、6月对三七粉和熟三七粉外观性状及含水量进行考察,同时以皂苷类成分的含量作为检测指标,利用本课题组前期建立的高效液相色谱法,对三七粉和熟三七粉中的皂苷类有效成分含量进行检测,并统计分析。结果:所有样品经6个月加速试验后观察未见霉变、虫蛀等现象,外观性状基本一致,水分含量增高但其含量仍符合《中华人民共和国药典》（2015版）规定（水分含量≤14%）。三七粉中人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1含量的总和及熟三七粉中人参皂苷Rk1、Rh4含量的总和无显著减少。真空与非真空2种包装状态对饮片有效成分含量的影响较小,但对饮片的吸湿性有影响。结论:PTE/PE复合而成的食品级铝塑复合膜是较理想的包材,能保证三七粉和熟三七粉质量的稳定,真空包装可以显著降低样品的吸湿程度。     

新疆牛至不同部位的性状及显微特征

目的:研究新疆牛至植株不同部位的药材性状及粉末的显微特征,为推广这一药物资源提供鉴定依据,为新疆牛至的资源开发利用奠定基础。方法:采用性状鉴定法和显微鉴定法。结果:描述了新疆牛至叶、花、茎的药材性状以及显微特征,并绘制出粉末图。结论:新疆牛至叶、花、茎的性状及粉末显微特征较明显。     

枸骨不同药用部位的显微特征研究

目的研究枸骨不同药用部位的石蜡包埋切片和粉末显微构造,为枸骨资源的综合开发利用奠定基础。方法采用石蜡切片法对枸骨不同药用部位进行切片,采用显微技术观察组织构造及显微特征。结果描述了枸骨叶、树皮、果实、根的显微特征,绘制了横切面图和粉末显微图。结论枸骨各部位的显微特征均较明显,其中,枸骨树皮、种子、根的显微特征属首次报道。     

新疆贝母不同部位的性状及显微特征的研究

目的研究新疆贝母植株不同部位的药材性状及粉末的显微特征,为推广这一药物资源提供了鉴定依据,为新疆贝母的资源开发利用奠定基础。方法采用性状鉴定法和显微鉴定法。结果描述了新疆贝母的药材性状以及粉末显微特征,并绘制出粉末图。结论新疆贝母的药材性状及粉末显微特征属首次报道。     

基于偏最小二乘判别分析建立熟三七粉的质量评价方法

目的 建立熟三七粉的HPLC特征图谱,并对其8种稀有皂苷的含量进行测定,结合偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）和聚类分析,为熟三七粉质量的科学评价提供方法。方法 采用Agilent Zorbax SB-C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈（A）-水（B）为流动相洗脱梯度：0~10 min,19%~33% A;10~30 min,33%~38% A;30~45 min,38%~50% A;45~60 min,50%~60% A,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温40℃,进样量10 μL,建立熟三七粉的HPLC特征图谱,并对其人参皂苷20（S）-Rh₁、20（R）-Rh₁、Rk₃、Rh₄、20（S）-Rg₃、20（R）-Rg₃、Rk₁和Rg₅共8种指标性成分定量测定方法进行方法学考察,对63批熟三七粉进行含量测定。结果 建立了熟三七粉的HPLC特征图谱,共标定19个共有峰。同时测定8种稀有皂苷成分含量,色谱峰达到了较好的分离,且线性关系良好,8种皂苷线性回归方程的相关系数分别为0.999 9、0.999 5、0.999 4、0.999 3、0.999 1、0.999 3、0.999 1、0.999 3;平均加样回收率为95%~105%;RSD值均低于2%。63批样品按色泽分为棕红色与淡黄色2组,棕红色组质量明显优于淡黄色组。结论 熟三七粉的质量优劣与色泽有关,该方法灵敏、准确、重现性好,可为熟三七粉的质量评价提供参考。     

三七总皂苷注射液的超滤工艺考察

目的:探索三七总皂苷注射液的超滤工艺。方法:采用HPLC测定人参皂苷Rg1,Rb1及三七皂苷R1的含量,通过单因素试验考察不同相对分子量超滤膜、药液质量浓度、温度、洗液体积对三七总皂苷注射液超滤工艺的影响。结果:确定的超滤工艺为三七总皂苷水溶液质量浓度100 g.L-1,选用10 kDa超滤膜,超滤温度70℃,洗液体积1 200 mL,人参皂苷Rg1,Rb1及三七皂苷R1各组份透过率均>90%。结论:优选的超滤工艺用于三七总皂苷注射液的纯化是可行的。     

三七皂苷类成分及对心血管作用的研究进展

三七为五加科植物三七Panax notoginseng的根及根茎,为常用中药,具有止血、散瘀、消肿、止痛等功能。此外,其茎叶、花、果实在民间也做药用。三七的主要药效成分为达玛烷型皂苷,具有较强的生物活性,引起医药界的广泛关注。现已从三七及其地上部分分离得到近百种皂苷类成分。根据苷元结构的不同,分为4类,分别为PPD型,PPT型,C17侧链变化型以及其他类型。该研究对三七的不同部位中的皂苷类化学成分进行了系统归纳,同时对三七皂苷在心血管方面的药理活性进行综述。     

三七总皂苷脂质体微丸的制备

目的:制备三七总皂苷脂质体微丸.方法:以包封率为考察指标,大豆磷脂-胆固醇、水相-有机相,药物质量浓度,脂类用量为考察因素,通过正交设计优选三七总皂苷脂质体冻干粉的处方工艺,采用塑制法制备三七总皂苷脂质体微丸.结果:三七总皂苷脂质体冻干粉的最佳处方工艺为大豆磷脂-胆固醇(6∶1),水相-有机相(1∶4),药物质量浓度20 g·L-1,磷脂用量150 mg.制备的脂质体微丸溶解后脂质体的平均粒径220.5 nm,Zeta电位-71.21 mV,1h内溶出度达81.41％.结论:制备的三七总皂苷脂质体微丸体外溶出度较高,脂质体的粒径分布较好、质量稳定.     

三七制剂对血小板功能影响的系统评价

该研究采用系统评价的方式,评价三七制剂对血小板相关指标的影响作用。通过计算机检索中文全文期刊数据库(CNKI),万方数据库(Wan Fang),中国生物医学文献数据库(Sino Med),the Cochrane Library,Pub Med,EMbase数据库,搜集三七制剂对血小板相关指标影响的随机对照试验(randomized controlled trial,RCT),检索时限均为建库至2017年5月,由2位研究者独立进行文献筛选、资料提取及纳入研究质量评价。最终纳入36个RCT,结局指标包括血小板聚集率(MPAR)、血小板计数(PLT)、血浆血栓烷B2(TXB2)与不良反应。分析结果显示三七制剂与安慰剂[SMD=1.84,95%CI(1.33,2.35),P0.000 01]与非抗血小板西药[SMD=0.74,95%CI(0.19,1.28),P=0.008]对比可降低MPAR;与非抗血小板西药联用可降低MPAR[SMD=2.34,95%CI(1.14,3.54),P=0.000 1],TXB2(SMD=1.25,95%CI(0.75,1.76),P0.000 01];与抗血小板西药联用可更好降低MPAR[SMD=0.93,95%CI(0.58,1.29),P0.000 01],TXB2[SMD=1.16,95%CI(0.74,1.58),P0.000 01]。在出血性不良反应方面,三七制剂联用抗血小板西药未增加生出血风险。结果表明,三七制剂可降低MPAR与TXB2,且三七制剂与西药常规联用可增加疗效。受纳入研究数量和质量限制,上述结论尚需开展更多高质量研究予以验证。     

基于高通量测序的三七微生物群落结构特征分析

目的获得鲜三七和干三七菌群结构信息。方法以鲜三七和干三七为研究材料,利用Illumina MiSeq平台,采用高通量测序并进行数据分析。结果鲜三七和干三七共获得637个操作分类单元(OTUs),其中15个OTU为共有,鲜三七和干三七特有的OTU数量分别为484、123个。新鲜三七中占比较大的菌门为变形菌门(Proteobacteria,59.7%)、厚壁菌门(Firmicutes,40.1%);干三七中占比较高的菌门为厚壁菌门(Firmicutes,99.8%)。鲜三七中占比较大的菌属为肠杆菌属(Enterobacter,37.4%)、嗜碱菌属(Alkaliphilus,11.5%);干三七中占比较大的菌属是芽孢杆菌属(Bacillus,54.6%),类芽孢杆菌(Paenibaciiius,44.9%)。KEGG功能预测表明干三七的萜类化合物和聚酮类化合物代谢功能菌群的相对丰度高于鲜三七。结论鲜三七菌群多样性高于干三七;干三七中的萜类化合物和聚酮类化合物代谢功能菌群丰富度高于鲜三七,这为三七发酵皂苷菌株筛选提供了重要参考。     

三七香叶基香叶基焦磷酸合酶基因的克隆及表达分析

基于三七转录组测序结果,选择萜类代谢骨架上香叶基香叶基焦磷酸合酶基因(GGPPS),结合RACE技术,克隆得到全长1 203 bp的cDNA序列,最长开放阅读框为1 035 bp,命名为PnGGPPS,GeneBank登录号为KM486564,PnGGPPS基因全长2 370 bp,包含1个内含子和2个外显子,该基因编码344个氨基酸,与蓖麻Ricinus communis、丹参Salvia miltiorrhiza等植物GGPPS的同源性达到73%以上,具有富天冬氨酸区等多个结构域,属于类异戊二烯合成酶超家族。实时荧光定量PCR结果显示,PnGGPPS在一至三年生三七的根、茎、叶和三年生的花等不同器官组织中均有表达,但以三年生叶中具有显著水平的高表达量,暗示其既具有调节三七生长发育的基本功能,也与三七叶绿素和类胡萝卜素的合成、叶绿体的发育、阴生适应性,以及品质的形成有关。     

三七叶多糖的提取分离及结构信息

目的:研究三七叶多糖的提取、分离及初步结构信息。方法:采用单因素试验及正交试验优化三七叶多糖的提取工艺;树脂法及离子交换色谱、凝胶滤过色谱柱色谱法等方法进行纯化分离;纸色谱法和气-质联用色谱法分析单糖组成及骨架结构。结果:三七叶多糖的最佳提取工艺为提取温度80℃,提取时间1 h,料液比1∶12,提取次数3次。纯化分离后得到1个三七叶均一多糖A1,主要由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖这3种单糖组成,其摩尔比为1.00∶1.56∶1.17;主链主要由葡萄糖、半乳糖组成,支链由阿拉伯糖、半乳糖组成。结论:优化了三七叶多糖的热水提取工艺,并采用树脂新技术取代了传统的多糖脱色脱蛋白工艺,效果良好。此外三七叶多糖的单糖组成与三七(根)多糖一致。为三七中多糖成分的综合利用提供理论和实验依据。     

三七几丁质酶基因PnCHI1的克隆及表达特性分析

几丁质酶(chitinase,EC3.2.1.14)广泛存在于多种生物体中,催化水解几丁质(chitin),在抗真菌防卫反应体系中具有重要作用,同时几丁质酶还调控植物的生长和发育,参与细胞的程序性死亡(programmed cell death,PCD)。该实验基于三七Panax notoginseng中编码几丁质酶的EST序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端技术,克隆得到1个新的几丁质酶基因的全长cDNA序列,命名为PnCHI1。PnCHI1的cDNA全长为1 022 bp,含有822 bp的开放阅读框,26 bp 5'-非翻译区以及174bp的3'-非翻译区,编码具有273个氨基酸的蛋白质。该基因编码的蛋白属于糖苷水解酶19家族成员,进化树分析表明PnCHI1编码的氨基酸序列属于IV类几丁质酶。qRT-PCR分析结果显示,植物信号分子水杨酸、茉莉酸甲酯、H_2O_2和乙烯处理可均明显诱导三七根中PnCHI1的转录水平;三七叶片接种人参链格孢Altemaria panax后,PnCHI1的表达量迅速升高,呈波动上升趋势;外源茉莉酸甲酯预处理三七根部,PnCHI1的表达水平上升,接种茄腐镰刀菌Fusarium solani后,PnCHI1的转录水平急剧上升,接种后4 h达到最高转录水平;而无菌水预处理三七受茄腐镰刀菌侵染过程中,PnCHI1的表达量逐渐上升,至48h达到最大值。上述结果表明PnCHI1参与三七对根腐病菌以及黑斑病菌的防卫反应。