二苯乙烯苷对TGF-β1诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其机制

探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D葡糖苷,TSG)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并研究其相关机制。用消化法培养新生SD大鼠CFB,建立TGF-β1诱导新生大鼠CFB纤维化模型。采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测CFB增殖情况;乳酸脱氢酶(LDH)法检测药物对细胞毒性作用;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞仪测定细胞周期;Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COL Ⅲ)、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、p-ERK、ERK、p-P38、P38、p-JNK、JNK的蛋白表达。结果表明,终浓度为0.1~100 μmol/L的TSG无明显细胞毒性作用;在一定浓度范围内,TSG可明显抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,抑制细胞由G₀/G₁期向S期的转变,抑制TGF-β1诱导的CFB核内PCNA的蛋白表达,降低α-SMA、COLⅠ和COL Ⅲ的过度表达,并抑制TGF-β1诱导的Smad3、ERK和P38的磷酸化。因此推测一定浓度的TSG能抑制TGF-β1诱导的CFB增殖和胶原合成,其机制可能与干预Smad3、ERK和P38信号通路有关。     

转化生长因子β1对L929细胞增殖转分化及细胞外基质代谢的影响

目的 探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对L929细胞增殖的影响,为体外研究预防食管内镜黏膜下剥离术(endoscopic submucosal dissection,ESD)术后狭窄提供理论基础.方法 实验分为两组,①空白对照组:L929细胞不做处理;②TGF-β1组,用10 ng/mL TGF-β1 持续刺激L929细胞,依据刺激时间不同又分为24、48、72、96、120 h 5个亚组.观察各组对细胞增殖的影响.用CCK-8法检测细胞增殖,qPCR检测α-SMA及Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、MMP1、TIMP1 mRNA 表达,Western blot检测α-SMA、MMP1、TIMP1蛋白水平,ELISA检测Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原合成.结果 与空白对照组比较,TGF-β1组细胞增殖能力显著增高(P＜0.05),TGF-β1组α-SMA、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、MMP1、TIMP1 mRNA表达均显著升高(P＜0.05);TGF-β1刺激24 h组Ⅰ型前胶原合成增加(P＜0.05),TGF-β1组Ⅲ型前胶原合成增加(P＜0.05);TGF-β1组MMP1、TIMP1蛋白表达增加(P＜0.05).结论 TGF-β1能促进L929细胞增殖,并诱导L929细胞向肌成纤维细胞转分化,同时促进Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原以及MMP1、TIMP1合成.     

人参皂苷Rg1对高糖培养的心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响

目的 建立体外高糖培养心肌成纤维细胞(CFs)的方法,观察人参皂苷Rg1对高浓度葡萄糖培养的心肌成纤维细胞增殖和蛋白分泌及Wnt信号通路的影响.方法 采用体外高糖诱导心肌成纤维细胞增殖模型,应用MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞增殖周期;ELISA法观察细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原及肿瘤生长因子β1(TGF-β1)蛋白的分泌;Western blot法检测β-catenin、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(P-GSK-3β)的蛋白表达水平以观察人参皂苷Rg1对于心肌成纤维细胞Wnt信号通路的影响.结果 人参皂苷Rg1可以抑制细胞增殖(P＜0.05);降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原分泌(P＜0.05);减少TGF-β1的合成(P＜0.01);在分子水平上可以抑制β-catenin的表达(P＜0.05),上调P-GSK-3β的表达(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg1能抑制心肌成纤维细胞的增殖,减少高糖培养心肌成纤维细胞胶原和TGF-β1的分泌,抑制Wnt信号通路的异常表达,具有潜在的抗心肌纤维化作用.     

心肌成纤维细胞Wnt信号通路在高糖环境下的调控变化

目的:观察乳鼠心肌成纤维细胞在高浓度葡萄糖作用下胶原蛋白分泌和细胞增殖及Wnt信号通路调控的变化。方法:基于高糖刺激诱导心肌成纤维细胞体外增殖的培养方法,CCK8法检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞的增殖周期;ELISA法观察细胞TGF-β1蛋白及I型、Ⅲ型胶原的分泌能力;western blot法检测蛋白β-catenin,GSK-3β,P-GSK-3β的表达水平;观察心肌成纤维细胞在高糖环境中Wnt信号通路传导的变化。结果:高浓度葡萄糖环境可以引起细胞的增殖(P0.01);促进TGF-β1的合成(P0.01);提高细胞I型、Ⅲ型胶原分泌的能力(P0.01);在分子水平上可以增强β-catenin的表达(P0.01),抑制P-GSK-3β的表达(P0.05)。结论:心肌成纤维细胞在高糖环境中增殖明显,心肌成纤维细胞TGF-β1和胶原的分泌会增加,引发Wnt信号通路的异常表达。研究其作用机制,对糖尿病心肌纤维化的防治及研究具有重大意义。     

京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响

【目的】研究京尼平苷对大鼠前列腺成纤维细胞增殖的影响,并探讨其机制。【方法】培养SD大鼠前列腺成纤维细胞,取对数生长期的细胞随机分成4组：对照组、京尼平苷10mg/L、20mg/L和40mg/L组。不同浓度的京尼平苷孵育大鼠前列腺成纤维细胞48h后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,ELISA法测定Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原与转化生长因子β1（TGF-β1）蛋白的含量。【结果】与对照组比较,京尼平苷20mg/L和40mg/L可显著抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,促进其凋亡（P〈0.01）,同时减少TGF-β1的分泌和胶原的合成（P〈0.05或P〈0.01）。【结论】京尼平苷可抑制大鼠前列腺成纤维细胞的增殖,可能与其减少TGF-β1的分泌和胶原的合成、促进前列腺成纤维细胞的凋亡有关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

bFGF反义寡核苷酸对大鼠肺成纤维细胞增殖信号通路的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸(AODN)对大鼠肺成纤维细胞增殖、转化信号通路的影响。方法:分离成年大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组(未转染肺成纤维细胞);TGF-β1组(未转染肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+AODN组(转染AODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激);TGF-β1+RODN(正义寡核苷酸)组(转染RODN肺成纤维细胞+5ng/ml TGF-β1刺激)。每组设3复孔,并作细胞爬片,镜下计数肺成纤维细胞数量,绘制生长曲线。MTT比色法测定肺成纤维细胞增殖率。免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)。通过ELISA法检测培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量。用RT-PCR法分析肺成纤维细胞Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原mRNA表达水平。结果:1细胞计数显示:TGF-β1+RODN组各时段成纤维细胞的数目均较对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组明显增多(P<0.05);TGF-β1+AODN组中成纤维细胞增殖数比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。2MTT结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞光密度值明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞光密度值明显比TGF-β1组减低(P<0.05)。3免疫细胞化学染色结果显示:TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞与对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组比较,α-SMA染色的平均光密度值(IOD)明显增加(P<0.05);TGF-β1+AODN组中肺成纤维细胞α-SMA染色的平均光密度值(IOD)比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。4 ELISA法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞培养液中bFGF、CTGF及Ⅰ型胶原蛋白含量比TGF-β1组明显减低(P<0.05)。5RT-PCR法检测结果显示:在TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显高于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad3mRNA及Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显比TGF-β1组明显减低(P<0.05);TGF-β1+RODN组肺成纤维细胞Smad7mRNA表达明显低于对照组、TGF-β1组、TGF-β1+AODN组(P<0.05);TGF-β1+AODN组肺成纤维细胞Smad7 mRNA表达比TGF-β1组明显增加(P<0.05)。结论:bFGF反义寡核苷酸可抑制肺成纤维细胞的增殖、转化及胶原合成,bFGF反义寡核苷酸可能通过下调TGF-β1-Smad信号通路来发挥作用。     

CRAMP对小鼠心脏成纤维细胞激活、增殖和胶原分泌功能的影响

目的:探讨CRAMP对小鼠心脏成纤维细胞激活、增殖和胶原分泌功能的影响。方法:分离培养小鼠心脏成纤维细胞。第一部分实验将细胞分为3组：对照组、转化生长因子β1(TGF-β1)组(10 mg/L 48 h)、CRAMP组(TGF-β1处理后给予CRAMP 0.5 mg/L 24 h),采用MTT法检测细胞增殖活性,采用免疫荧光染色检测α-SMA、Ⅲ型胶原和PCNA蛋白表达水平,采用RT-PCR检测Ⅲ型胶原和α-SMA mRNA表达水平,采用Western blot检测Smad信号通路蛋白表达水平。第二部分实验将细胞分为3组：TGF-β1组(10 mg/L 48 h)、SIS3组(TGF-β1处理后给予SIS3 10μmol/L 24 h)、CRAMP+SIS3组(TGF-β1处理后给予CRAMP 0.5 mg/L和SIS3 10μmol/L 24 h),采用免疫荧光染色和RT-PCR检测Ⅲ型胶原和α-SMA蛋白及mRNA表达水平。结果:TGF-β1组成纤维细胞增殖活性,PCNA、Ⅲ型胶原、α-SMA蛋白表达水平,Ⅲ型胶原、α-SMA mRNA表达水平,p-Smad2、p-Smad3和Sm...     

麦冬多糖抑制TGF-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型的转化

研究麦冬多糖对转化生长因子-β₁(TGF-β₁)诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响,并初步探讨其分子机制。方法 采用TGF-β₁诱导人胚胎肺成纤维细胞(HEL)转化,同时给予麦冬多糖进行干预;采用CCK-8检测细胞的增殖率,电镜观察细胞的超微结构,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ 型胶原蛋白(COL I)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白的表达,实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COL Ⅰ mRNA的表达。结果 25、50、100 μg.ml^-1浓度的麦冬多糖对HEL细胞均无明显毒性,并能抑制TGF-β₁诱导所致的成纤维细胞增殖(P＜0.05);与对照组相比,麦冬多糖干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少; 同时下调α-SMA、COL I、Smad2、p-Smad2蛋白的表达量和α-SMA、COL I的mRNA表达水平(P＜0.05)。结论 麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。     

黄芩苷对大鼠结肠成纤维细胞增殖及TGF-β1、CTGF表达的影响

目的探究黄芩苷对大鼠结肠成纤维细胞增殖及对转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响。方法将大鼠结肠成纤维细胞分为不同浓度(25、50、100、200、400、800μmol/L)黄芩苷组,分别于培养24、48、72 h取样本。MTT法检测各组大鼠结肠成纤维细胞增值抑制率;大鼠结肠成纤维细胞分为空白组、阳性对照组和黄芩苷高、中、低浓度组,加药培养48 h取样。ELISA检测各组细胞上清液中TGF-β1含量,Western blotting检测各组细胞中TGF-β1和CTGF的表达水平。结果 MTT检测结果显示,与25μmol/L黄芩苷组比较,其他5组大鼠结肠成纤维细胞增殖抑制率显著升高(P 0.01),并呈浓度和时间依赖性;ELISA检测结果显示,与空白组比较,黄芩苷各组细胞上清液中TGF-β1含量显著降低(P 0.01);Western blotting检测结果显示,与空白组比较,黄芩苷各浓度组细胞中TGF-β1和CTGF的表达水平明显降低(P 0.01)。结论黄芩苷能抑制大鼠结肠成纤维细胞增殖,并显著降低细胞中TGF-β1和CTGF的表达,其作用机制可能与转化生长因子β信号通路有关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

醋柳黄酮缓释片的药动学初步研究

目的:研究醋柳黄酮缓释片在家犬体内的药动学过程,测定其药动学参数,计算缓释片相对于普通片的生物利用度。方法:将实验动物分为两组,分别用醋柳黄酮缓释片和普通片进行口服给药,用高效液相色谱法测定血浆药物浓度,应用3P97软件求算药动学参数。结果:醋柳黄酮缓释片及普通片的tm ax分别为4.87 h和2.87 h,Cm ax分别为每小时0.46μg.L-1和每小时0.56μg.L-1,缓释片的相对生物利用度为111.7%。结论:醋柳黄酮缓释片与普通片均符合一室模型,缓释片与普通片具有生物等效性,且醋柳黄酮缓释片有明显的缓释效果。     

主动脉窦瘤破裂的外科治疗

报告２０例主动脉窦瘤破裂修复术的结果。１７例男性，３例女性。年龄７～５６岁。痊愈１９例，另一例因急性肾功能衰竭一周后死亡。作者就发病机理，诊断和合并畸形的处理进行了讨论。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

扩张兔皮肤超微结构的变化

目的：动态观察扩张兔皮肤超微结构的变化。方法：选用2--3kg新西兰大白兔64只，分为2大组，快速扩张组和常规扩张组，每组32只，每大组再分为4组，为扩张完成后即时、1周、12周、24周组。每组8只，其中4只为实验组，另4只植入扩张器不扩张作为对照组。透射电子显微镜观察各组皮肤超微结构的变化。结果：表皮扩张后经历--由扩张刺激引起的创伤至完全修复的过程。扩张后即时真皮中成纤维细胞大量增生，功能由静止转向活跃，胶原纤维碎裂成片，弹力纤维部分断裂，炎症细胞浸润；扩张后1周常规扩张组基底膜连续性基本恢复。显示成纤维细胞合成功能活跃。扩张后12周、24周，成纤维细胞趋于稳定、形态狭长，部分胶原排列紊乱，部分有似癜痕样改变。结论：扩张刺激可致兔皮肤创伤。扩张后真皮不可完全修复。     

芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用

目的观察芹黄素对大鼠缺血视网膜功能恢复的作用。方法30只Long-Evans大鼠用动脉结扎法造成视网膜缺血模型,其中治疗组20只腹腔注射芹黄素,对照组10只注射溶媒二甲基亚酚。用视觉电生理仪检查视网膜功能恢复情况。结果芹黄素治疗组视网膜功能恢复明显好于对照组(P<0.05)。结论芹黄素能促进大鼠缺血视网膜的功能恢复。      

上颌骨牙源性囊肿刮除手术的疗效观察

目的探讨对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术的临床疗效。方法对我科在2010年1月～2017年9月收治的73例上颌骨牙源性囊肿患者行囊肿彻底刮除手术治疗,对患者术区肿胀消退、术后伤口感染、伤口愈合、牙龈再附着、术后复发、骨质改建、骨质修复等情况随访观察。结果 73例患者术后肿胀消退时间为1～4 d。73例患者术后均未发生伤口感染,伤口均一期愈合。所有患者牙龈再附着情况好,术后均未见复发。术后未见并发症。骨质改建效果好,骨质修复的效果因影像学资料过少,缺乏客观依据,暂不下有效结论。结论对上颌骨牙源性囊肿患者进行囊肿彻底刮除手术,术后患者的恢复情况良好,值得在临床治疗上进行推广。     

阴道炎1236例病原检查分析

对１２３６例阴道炎患者的阴道分泌物作直接镜检和病原菌分离培养检查；结果，细菌感染９００例，念珠菌２３４例，滴虫１０２例。９００例细菌经鉴定；葡萄球菌３００例，阴道加特纳菌２７６例，淋病奈瑟菌１７０例，其它细菌１２４例。结果表明，葡萄球菌，阴道加特纳菌，淋病奈瑟菌是细菌性阴道炎最常见的致病菌。