鸡冠花黄酮类对成骨细胞矿化和IGF-1的作用

目的　通过研究鸡冠花黄酮类化合物对成骨细跑体外培养矿化作用和IGF -1表达的影响 ,探讨鸡冠花黄酮类化合物对大鼠成骨细胞的作用机理。方法　体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,茜素红染色方法 (ARS)研究对成骨细胞矿化的影响 ,SP免疫组化方法测定成骨细胞中IGF -1的表达情况 ,用HPIAS -10 0 0图象分析仪对各组表达进行定量分析。结果　鸡冠花黄酮类化合物促进大鼠成骨细胞矿化结节形成及IGF -1阳性表达 ,鸡冠花黄酮类化合物组的IGF -1平均光密度都显著高于阴性对照组 (P <0 0 5)。结论　鸡冠花黄酮类化合物可增强新生大鼠成骨细胞矿化和IGF -1的表达     

大豆异黄酮与大鼠成骨细胞BMP2PCR产物表达

目的探讨大豆异黄酮对体外培养大鼠成骨细胞骨形态发生蛋白2（BMP2）表达的影响.方法制作新生大鼠颅骨成骨细胞体外培养模型,用不同浓度的大豆异黄酮刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP2基因cDNA,同时扩增β-actin cDNA作为内对照,扫描RCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin cDNA的积分吸光度比值,推算BMP2基因相对表达水平;并通过免疫组化方法观察成骨细胞BMP2的表达,用HPIAS-2000图象分析仪对各组表达进行定量分析.结果大豆异黄酮增加体外培养成骨细胞BMP2的水平,并且在基因转录水平促进大鼠成骨细胞BMP2表达,呈剂量-效应关系（P〈0.01）.结论大豆异黄酮对成骨细胞形成BMP2表达有显著促进作用.提示大豆异黄酮促进成骨细胞增殖、分化的作用可能与通过增加BMP2基因的表达有关.     

大豆异黄酮类对体外培养大鼠成骨细胞的影响

目的 :　探讨大豆异黄酮类提取物预防骨质疏松症在细胞水平的作用机制。方法 :　以经口给予大鼠大豆异黄酮类提取物后分离的血清作为干预物 ,加入新生 SD大鼠颅骨分离培养的成骨细胞 (OB)中。以噻唑蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖情况 ;用对硝基酚磷酸盐法测定 OB碱性磷酸酶 (ALP)活性、用放免法测定 OB骨钙素 (BGP)含量 ,以反映 OB的分化状况 ;酶联免疫(ELISA)法检测 OB分泌细胞因子 IL-6的水平。。结果 :　以大豆异黄酮类提取物灌胃的大鼠血清可使体外培养大鼠成骨细胞 MTT吸光值明显增加 ,成骨细胞 ALP活性显著升高 ,成骨细胞BGP分泌显著增加 ,而其对 IL-6的分泌无明显影响。结论 :　大豆异黄酮类提取物可明显促进体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化 ;对骨吸收似无明显影响。推测大豆异黄酮类对骨质疏松的预防作用机制是促进骨细胞的增殖和分化     

大豆异黄酮和钙对大鼠成骨细胞增殖分化和矿化的作用

为探讨大豆异黄酮和钙对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化和矿化的作用 ,体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞 ,然后用噻唑盐 (MTT)法测定大豆异黄酮和葡萄糖酸钙对体外培养成骨细胞的增殖作用 ,氨基安替比林测酚法测成骨细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,茜素红染色方法 (ARS)研究对成骨细胞矿化的影响。结果单纯补钙组大鼠成骨细胞增殖、分化和矿化无显著促进作用。大豆异黄酮可显著地促进成骨细胞的增殖和分化 ,并促使成骨细胞形成矿化结节 ,而补充大豆异黄酮同时补钙可使矿化结节团块增大。大豆异黄酮可以提高成骨细胞的增殖和分化 ,补大豆异黄酮并补钙更有利成骨细胞的矿化     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨形成蛋白的影响

目的　探讨大豆异黄酮和钙对去卵巢大鼠无机盐、骨形成蛋白 2 (BMP2 )和转移生长因子 - β1(TGF - β1)的影响。方法　取 2 8只雌性SD大鼠随机分为 4组 :假手术组、去卵巢组、去卵巢补钙组〔5 0mg/ (kg·d)〕和去卵巢加大豆异黄酮组〔大豆异黄酮 10 0mg/ (kg·d)〕 ,10周后测骨密度、血清和尿液钙、钠、钾含量。用免疫组化法测骨骼中BMP2 和TGF - β1的表达。结果　去卵巢组大鼠血清和尿钙、钠含量显著增高 ,而骨密度、血清和尿钾及骨BMP2 和TGF - β1表达降低 ;去卵巢加大豆异黄酮后大鼠血清钙和尿钙、钠显著降低 ,骨密度和骨BMP2 、TGF - β1显著性升高(P <0 0 5或P <0 0 1)。单纯补钙组与去卵巢组相比只有TGF - β1有显著性差异 (P <0 0 5 )。结论　大豆异黄酮可调节去卵巢大鼠无机盐代谢 ,促进BMP2 和TGF - β1表达 ,预防去卵巢大鼠的骨质疏松     

大豆异黄酮抗高脂型大鼠主动脉血管壁粥样硬化斑块形成研究

目的　研究高含量的大豆异黄酮 (ISO)与高脂型动脉硬化 (AS)体内发生过程中iNOS基因表达之间的关系。方法　采用总异黄酮含量为 72 4%的大豆异黄酮作为受试物 ,设 3 0mg/kg、 90mg/kg、 2 70mg/kg 3个剂量组 ,同时设雌激素 (己烯雌酚 )对照组 ,与AS高脂模型组、正常饲料对照组 ,喂饲Wistar大鼠 ,随时观察对大鼠体征 (体重、脏体比值 )的影响 ,运用光学显微镜检测HE染色的主动脉壁横切面病理改变 ,采用RT -PCR、Western -blot法检测血管壁内iNOS的mRNA和蛋白表达 ,并运用生化法检测血清中NO含量以及NOS活力。结果　大豆异黄酮可以剂量 -效应地抑制高脂饲料诱导的大鼠主动脉血管壁病理变化 ,增加血液中NO和NOS活力 ,显著增进血管壁内iNOS的mRNA和蛋白表达 (与高脂模型对照组相比P <0 0 5 )。结论　高脂饲料可以诱导大鼠主动脉壁形成动脉粥样斑块 ,并降低血清中NO含量和NOS活力 ,减少iNOS基因在主动脉内的表达 ,大豆异黄酮可以减轻高脂饲料诱导的主动脉壁病理变化 ,增进血清中NO含量和NOS活力 ,促进iNOS基因在主动脉内的表达 ,且这种作用可能与植物雌激素作用无关 ,与抗氧化分子结构有关     

哺乳期母鼠暴露大豆异黄酮对仔鼠卵巢类固醇受体表达的影响

目的研究大豆异黄酮对新生儿期雌性大鼠卵巢发育的影响。方法将孕鼠随机分至大豆异黄酮0、10、50、100、150和200mg/kg bw染毒剂量组中,在母鼠产后第5~10天通过给母鼠灌胃使新生儿期大鼠间接暴露大豆异黄酮,在产后第11天分离子代雌性大鼠的卵巢进行病理检查,并用免疫组织化学和RT-PCR方法测定卵巢中雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)、孕激素受体(PR)和增殖细胞核抗原(PCNA)及其mRNA的表达水平。结果与对照组比较,大豆异黄酮100、150和200mg/kg bw剂量组的卵巢/体重显著增加,卵泡发育加快;150mg/kg bw和200mg/kg bw剂量组卵巢ER及其mRNA和PCNA蛋白表达显著增加,而PR mRNA表达显著降低;但卵巢AR、PR蛋白及AR mRNA的表达各处理组与对照组差异无显著性。结论新生儿期暴露大豆异黄酮的雌性大鼠卵巢发育表现出明显的不良作用,这种作用至少涉及到雌激素敏感受体ER、PRmRNA的转录。     

氟对原代培养的大鼠成骨细胞分化相关指标的影响

目的研究氟对原代培养的大鼠成骨细胞的细胞活性及对成骨细胞分化相关指标的影响。方法取出生24 h内的大鼠胎鼠的颅盖骨,采用胰酶和Ⅱ型胶原酶交替消化的方法获得原代成骨细胞。分别加入终浓度为0(对照组)、10-7、10-6、10-5、10-4mol/L氟化钠进行染毒72 h,采用MTT法检测细胞活性;染氟72 h后,采用Real-time RT-PCR法检测成骨细胞分化标志物COL1A1、ALP和ON mRNA的表达情况;染氟5 d后,采用染色法检测成骨细胞ALP蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10-6~10-4 mol/L染氟组成骨细胞存活率及10-7~10-5 mol/L染氟组成骨细胞ALP蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着NaF染毒浓度的升高,成骨细胞存活率和ALP蛋白的表达水平均呈先升高后下降的趋势。与对照组相比,各浓度NaF染毒组成骨细胞ALP、ON mRNA的表达水平及10-7、10-6 mol/L NaF染毒组成骨细胞COL1A1 mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论本实验条件下,较低剂量的氟可促进大鼠成骨细胞的分化。     

全反式视黄酸对新生鼠头盖骨成骨细胞的影响

目的 :　探讨全反式视黄酸 ( ATRA)对体外培养的新生大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :　从新生大鼠颅骨分离出成骨细胞 ,细胞增殖实验采用噻唑盐 ( MTT)比色试验法 ;细胞分化实验采用氨基安替比林法 (金氏法 )测定碱性磷酸酶 ( ALP)的活性 ,并用免疫细胞化学法检测细胞周期调控蛋白 Cyclin D1表达的影响 ,研究 ATRA对成骨细胞代谢的影响及部分作用机制。结果 :　培养液中加入 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7、1 0 -8和 1 0 -9mol/L ATRA培养 72 h对成骨细胞有促细胞增殖作用 ,而 1 0 -5、1 0 -6、1 0 -7mol/L的 ATRA在 2 4、48、72 h均能显著促进成骨细胞分化 ,免疫细胞化学染色 Cyclin D1蛋白表达降低。结论 :　ATRA对成骨细胞具有促增殖和诱导分化作用 ,细胞周期调控蛋白可能在 ATRA诱导成骨细胞增殖和分化过程中发挥重要作用。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2mRNA影响

目的 探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响.方法 Wistar大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、大豆异黄酮高剂量组及低剂量组.采用原位末端标记法及原位杂交方法检测阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA,并应用图像分析系统进行测定.结果 雌二醇组、大豆异黄酮高、低剂量组均可使去卵巢大鼠阴道重量增加,分别为(0.125±0.024),(0.123±0.020),(0.109±0.022)g,与模型组(0.074±0.046)g比较,差异均有统计学意义(P<0.01);假手术组未见凋亡细胞,其余各组均可见凋亡细胞,大豆异黄酮高、低剂量组凋亡细胞数与雌二醇组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组、大豆异黄酮高、低剂量组的Bcl-2 mRNA平均灰度值与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但大豆异黄酮高、低剂量组的Bcl-2mRNA平均灰度值与雌二醇组比较,差异均无统计学意义.结论 大豆异黄酮可以抑制阴道上皮细胞的凋亡,通过上调Bcl-2 mRNA的表达是其作用途径之一.     

氟铝联合对MC3T3-E1细胞Runx2、Osterix mRNA表达的影响

目的观察氟铝单独及联合对小鼠成骨样细胞MC3T3-E1细胞增殖、分化及Runx2、Osterix mRNA表达的影响。方法在细胞培养液中加入50μmol/L氟化钠或/和5μmol/L氯化铝,观察MC3T3-E1细胞增殖和分化能力,用RT-PCR法测定MC3T3-E1细胞Runx2和Osterix mRNA表达的情况。结果与对照组相比,氟铝联合染毒可显著提高MC3T3-E1细胞增殖和分化能力(P<0.05),MC3T3-E1细胞Runx2和OsterixmRNA的表达水平也显著提高(P<0.05),且氟铝具有协同作用(P<0.05)。结论氟铝联合通过刺激成骨细胞增殖、分化,提高成骨细胞Runx2和Osterix基因表达水平,从而促进骨形成。     

Effect of red clover-derived isoflavone supplementation on insulin-like growth factor, lipid and antioxidant status in healthy female volunteers: a pilot study

BACKGROUND: Isoflavones are estrogen-like plant compounds that may protect against cardiovascular disease and endocrine-responsive cancer. Isoflavones may, because of their ability to act as selective estrogen receptor modulators, alter insulin-like growth factor (IGF) status. OBJECTIVE: The aim of this study was to assess the effect of 1-month isoflavone supplementation (86 mg/day red clover-derived isoflavones) on IGF status. DESIGN AND SUBJECTS: Healthy pre- (n=16) and postmenopausal (n=7) women were invited to take part in a randomised, placebo-controlled crossover study with a minimum 2-month washout period. RESULTS:: For premenopausal subjects, the change in IGF-1, IGF-BP1 and IGF-BP3 assessed at different points of the menstrual cycle did not differ between isoflavone and placebo phase. However, the change in IGF-1, when examined pre- and post-supplementation, was nonsignificantly reduced (P=0.06) on the isoflavone supplement compared to placebo. For postmenopausal subjects, the change in IGF-1, IGF-BP1 and IGFBP-3 concentrations over the supplementation period did not differ between isoflavone or placebo phase. Isoflavones increased HDL in postmenopausal women compared to placebo (P=0.02) but did not alter either cholesterol or triacylglycerol concentrations, and had no effect on antioxidant status. CONCLUSIONS: This study shows that 1-month supplementation with red clover isoflavones has a positive effect on HDL cholesterol, but at most a small effect on IGF status in premenopausal and no effect in postmenopausal subjects. Further studies are required to ascertain the role these dietary compounds may have to play in breast cancer prevention.     

大豆异黄酮和补充钙对去卵巢大鼠骨密度及肝IGF-1mRNA表达的影响

目的 利用卵巢切除大鼠模型,研究大豆异黄酮和钙对卵巢切除大鼠骨密度及肝脏IGF-1基因表达的影响.方法 将6月龄雌性SD大鼠,按体重随机分成5组假手术组(Sham)、卵巢切除阴性对照组(OVX)、单纯大豆异黄酮组(SI)、单纯碳酸钙组(Ca)、大豆异黄酮加碳酸钙组(SI+Ca).所有大鼠饲以钙含量为3.732g/kg的低钙饮食喂养12周.实验结束时,利用双能X线骨密度扫描仪测量右侧股骨骨密度(BMD),采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定肝脏胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达水平.结果 SI+Ca组股骨远心端BMD为(0.263±0.007)g/cm2,Sham组为(0.267±0.008)g/cm2,两组间差异无统计学意义,但这两组BMD均显著性高于OVX(0.245±0.005)g/cm2、SI(0.258±0.011)g/cm2和Ca(0.255±0.004)g/cm2组(P＜0.05).肝脏IGF-1mRNA表达水平在Sham(0.200±0.023)g/cm2、SI(0.278±0.019)g/cm2、Ca(0.302±0.026)g/cm2及SI+Ca(0.231±0.025)g/cm2组中均显著性低于OVX(0.362±0.031)g/cm2,P＜0.05,SI+Ca组IGF-1mRNA表达水平(0.231±0.025)g/cm2低于SI(0.278±0.019)g/cm2和Ca(0.302±0.026)g/cm2两组,并差异有统计学意义.结论 SI+Ca能比单纯喂饲SI或Ca更好地防止卵巢切除大鼠股骨BMD的减小.37.95 mg/kg剂量的SI能够显著抑制由于卵巢切除引起的肝脏IGF-1 mRNA表达水平的上升.     

Gene expression profiles in the liver of mice irradiated with 60Co gamma rays and treated with soybean isoflavone

PURPOSE: To better understand the molecular mechanisms underlying the radio-protective effect of soybean isoflavone that we observed in our recent animal experiments. MATERIALS AND METHODS: We utilized a cDNA microarray to investigate the expression profiles of 4,096 known genes in the livers of irradiated-mice with or without soybean isoflavone treatment. Dye swap approach was employed to control for gene-specific dye bias and quantitative real-time RT-PCR was performed on several genes to validate the cDNA microarray data. RESULTS: Compared with the control group, 68 genes were up-regulated and 28 genes were down-regulated in mice treated with irradiation alone, whereas only 6 genes were down-regulated and 35 genes were up-regulated in mice treated with soybean isoflavone. Interestingly, some of the down-regulated genes in the irradiated group, such as DNA repair and stress response genes and cytoskeleton-associated genes, which are markers of cellular damage after irradiation, were maintained at close to normal expression levels after soybean isoflavone treatment. CONCLUSIONS: Comparison of gene expression profiles in the livers of irradiated-mice treated with or without soybean isoflavone suggested that soybean isoflavone may be an efficient tool to reverse irradiation damage of the liver through multiple-pathways and also provides important clues to further pursue the molecular mechanisms underlying the radio-protective activity of soybean isoflavone.     

大豆异黄酮诱导食管癌细胞凋亡作用研究

目的 在体外实验中，探讨大豆异黄酮诱导食管癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bel-2和bax之间的关系。方法 采用MTT比色法测定大豆异黄酮对食管癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和。TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与食管癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 大豆异黄酮对食管癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见食管癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可见，经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，食管癌EC-9706细胞凋亡数明显随时间延长而增加。免疫组织化学法发现经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，食管癌EC-9706细胞的bcl-2蛋白阳性率减少，bax蛋白阳性率增加。经大豆异黄酮处理24、48、72、96h后，经RT—PCR检测发现食管癌EC-9706细胞bcl-2和bax的mRNA表达阳性，并显示bcl—2mRNA条带密度随时间的延长而递减，bax mRNA条带密度随时问的延长而增强。结论 诱导食管癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗食管癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导食管癌细胞发生凋亡。     

葡多酚、大豆异黄酮和大豆皂苷对亚硝酸盐的清除作用

目的:研究葡多酚、大豆异黄酮、大豆皂苷对亚硝酸盐(NO2-)的清除作用,并观察PH、温度对NO2-的清除效果的影响。方法:在反应条件下,参照GB/T5009.33-2003方法,测定一定量的NO2-与葡多酚、大豆异黄酮、大豆皂苷反应后的残留量,计算清除率。结果:葡多酚、大豆异黄酮、大豆皂苷对NO2-均有清除作用。在一定范围内,随反应体系中葡多酚、大豆异黄酮浓度增加而清除能力提高。pH、温度对NO2-的清除效果有一定影响。结论:葡多酚、大豆异黄酮、大豆皂苷均具有清除NO2-的作用,在体外模拟人胃液条件下清除效果明显,提示对胃内NO2-的清除及肿瘤的防治具有较大意义。     

大豆异黄酮诱导胃癌细胞凋亡作用研究

目的：体外实验探讨大豆异黄酮诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性，揭示该凋亡发生与bcl-2和bax之间的关系。方法：采用MTT比色法测定大豆异黄酮对胃癌细胞的生长抑制率；以透射电镜和TUNEL染色法，定性、定量地研究大豆异黄酮与胃癌细胞凋亡的关系；通过免疫组织化学法和RT－PCR检测凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：大豆异黄酮对胃癌细胞有明显抑制作用，随大豆异黄酮浓度增加和培养时间的延长而增强；透射电镜可见胃癌细胞出现典型的凋亡细胞形态，如细胞核染色质致密浓缩，或聚集于核膜呈新月形小体；TUNEL染色法可染色阳性的胃癌细胞出现细胞核碎裂，核质固缩，细胞膜突出形成质膜小泡等凋亡细胞形态学变化。免疫组织化学和RT－PCR法发现大豆异黄酮下调bcl-2的表达，上调bax的表达。结论：诱导胃癌细胞发生凋亡是大豆异黄酮抗胃癌作用的机制之一，大豆异黄酮可能通过下调bcl-2的表达和上调bax的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

胰岛素样生长因子-1对脓毒症大鼠血浆应激激素和胰岛素样生长因子-1受体表达的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对脓毒症大鼠血浆应激激素及骨骼肌IGF-1受体（IGF-1R）蛋白质和mRNA表达的影响。方法选择71只SD大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立腹腔感染及颈静脉置管肠外营养（PN）模型后，将存活的30只大鼠随机分为脓毒症组（n=10）、PN组（n=10）及IGF-1组（n=10），另设正常组（n=10）。正常组和脓毒症组给予生理盐水，PN组给予营养支持，IGF-1组为PN＋IGF-1静脉注射，连续5天。第6天行颈动脉置管，开腹取门静脉血测定胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇和IGF-1水平；免疫组织化学法及实时定量PCR法测定肝脏和骨骼肌IGF-1R蛋白质和mRNA的表达。结果与对照组相比，脓毒症组大鼠血浆胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素、皮质醇水平显著升高，IGF-1显著下降（P〈0．01）；IGF-1组前5项指标较脓毒症组和PN组显著降低，IGF-1则显著升高（P〈0．05，P〈0．01）。脓毒症组肝脏和骨骼肌IGF-1R蛋白质及mRNA表达较对照组显著增强（P〈0．05，P〈0．01）；IGF-1组的IGF-1R蛋白质及mRNA表达较脓毒症组和PN组显著降低（P〈0．01）。结论IGF-1可改善应激激素之间的平衡，降低脓毒血症大鼠IGF-1R在蛋白质和mRNA水平的表达，从而有利于血糖的控制。