Ghrelin对THP-1细胞泡沫化过程中酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1表达的影响

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达以及细胞内胆固醇酯的影响。方法: 体外培养人源单核细胞系（THP-1）,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA水平,Western blotting法检测ACAT-1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇酯含量。结果: Ghrelin可明显减少THP-1源性泡沫细胞内脂滴的形成,显著降低细胞内胆固醇酯含量,并能显著降低单核/巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA 水平和蛋白表达,且此干预作用呈浓度依赖性。结论: Ghrelin可能通过ACAT-1转录翻译水平的下调延缓动脉粥样硬化的发生。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象, 探讨ABCA1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法:用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT-PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果:氧化型低密度脂蛋白可增加THP-1巨噬细胞胆固醇流出, 22(R)-羟基胆固醇剂量依赖性增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出, 而DIDS剂量依赖性减少THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出;逆转录聚合酶链反应显示, 22(R)-羟基胆固醇可增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达, DIDS可抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论:ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用, 并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。     

可溶性Klotho蛋白抑制THP-1源性泡沫细胞形成

目的:探讨可溶性Klotho(KL)蛋白对THP-1源性泡沫细胞形成的影响。方法:THP-1单核细胞与160 nmol/L佛波酯孵育48 h后,诱导分化为THP-1源性巨噬细胞,给予THP-1源性巨噬细胞不同浓度(25、50、100和200μg/L)的可溶性KL蛋白预处理后,再由氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导其转变为泡沫细胞。油红O染色观察细胞内脂滴形成情况,通过液体闪烁计数法测定THP-1源性泡沫细胞内胆固醇流出情况,酶荧光法检测细胞内游离胆固醇及胆固醇酯的含量,并分别用Western blot法及RT-qPCR法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)和ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的蛋白及mRNA表达。结果:可溶性KL蛋白能增加THP-1源性巨噬细胞内胆固醇流出,抑制THP-1源性泡沫细胞形成,且可溶性KL蛋白呈一定浓度依赖性地抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成过程中ACAT1表达的上调和ABCA1表达的下调(P<0.05)。结论:可溶性KL蛋白能够抑制THP-1源性泡沫细胞形成,其机制可能与靶向调控细胞内ACAT1和ABCA1的表达有关。     

内脂素对THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响

目的：观察内脂素（visfatin）对人单核细胞株THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1（ABCA1）表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法：THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,予不同浓度和时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞浆脂滴变化,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测各组细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇（TC）和游离胆固醇（FC）含量,TC与FC之差为胆固醇酯（CE）含量。结果：与对照组比较,visfatin干预组细胞浆脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加（均P<0.05）。Visfatin呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1 mRNA和蛋白表达（P<0.05）。结论：Visfatin下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导泡沫细胞的形成。     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。     

肺炎衣原体通过下调ABCA1和ABCG1诱导THP-1源性泡沫细胞形成

目的:观察ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和ABCG1在肺炎衣原体(C.pn)诱导THP-1源性泡沫细胞形成中的作用,以初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的分子机制.方法:C.pn在Hep-2细胞内增殖,将不同浓度的C.pn(1×105 ～1×106 IFU)分别感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞0～72小时,运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化,分别运用RT-PCR和Western blot检测ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达.结果:高浓度的C.pn(5×105和1×106 IFU)感染THP-1单核细胞源性巨噬细胞48小时后,细胞浆内的脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).C.pn感染呈浓度和时间依赖性地下调ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达(P＜0.05).结论:ABCA1和ABCG1表达下调是C.pn诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制之一,这可能为C.pn感染致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据.     

硫酸吲哚酚对THP-1源性泡沫细胞ATP结合转运子A1和G1表达的调控

目的观察硫酸吲哚酚（is）是否调节巨噬泡沫细胞脂滴的蓄积，以及对巨噬泡沫细胞ATP结合转运子Al（ABCAl）和ATP结合转运子G1（ABCGl）表达的影响。方法体外佛波酯（PMA）诱导人源单核细胞系THP．1分化为巨噬细胞，随后加入氧化低密度脂蛋白（OX．LDL）刺激下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的IS以及OX．LDL共同作用24h，油红O染色法观察细胞内脂滴的含量，RT．PCR法检测ABCAl和ABCGlmRNA水平．Western blotting法检测ABCAl和ABCGl蛋白表达。结果Is干预可明显促进细胞内脂滴蓄积。下调单核／巨噬细胞泡沫化过程中ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，且此作用呈浓度依赖性。结论IS可通过下调ABCAl和ABCGlmRNA和蛋白的表达，增加细胞内脂滴蓄积，从而促进动脉粥样硬化的发生发展。     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的：以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出, 高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量, 运用逆转录-多聚酶链反应和Western 印迹分别检测ABCA1 mRNA 与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。 结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少, 而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1 mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin 和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatin A、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。 结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 蛋白质水平, 增加细胞内胆固醇流出, 降低细胞内胆固醇聚积。     

内脂素通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号转导通路下调ATP结合盒转运蛋白A1的表达

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路在内脂素(visfatin)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的visfatin和PPARγ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及PPARγmR-NA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组油红O染色显示细胞内脂滴形成增加,PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞内FC含量升高(P<0.05);相关分析显示,visfatin呈浓度依赖性下调PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白的表达。与visfatin干预组比较,罗格列酮组ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05),细胞内FC含量降低(P<0.05);相关分析显示,罗格列酮呈浓度依赖性上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达。结论:visfatin通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1的影响

目的： 以THP-1源性泡沫细胞为研究对象，探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达、细胞内胆固醇含量及胆固醇流出的影响。方法: 运用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测AngⅡ对ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白表达的影响，采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量，应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果: AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著升高(P<0.05)、ABCA1表达显著减少（P<0.05），AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦（Irb）能显著减少细胞内胆固醇含量(P<0.05)、促进细胞内胆固醇流出及减轻AngⅡ对ABCA1的抑制作用(P<0.05)。结论: AngⅡ有通过其受体抑制ABCA1表达，促进泡沫细胞形成，加速动脉粥样硬化的作用。     

Ghrelin inhibits foam cell formation via simultaneously down-regulating the expression of acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1 and up-regulating adenosine triphosphate-binding cassette transporter A1

BackgroundGhrelin, an endogenous ligand of the growth hormone secretagogue receptor (GHS-R), revealed cardioprotective effects in both experimental models and human. There is far less information on the mechanisms that produce antiatherogenic effects. We assessed the expression of acyl-coenzyme A:cholesterol acyltransferase 1 (ACAT-1) and  adenosine triphosphate (ATP)-binding cassette transporter A1 (ABCA1), which have been implicated in regulating cellular cholesterol homeostasis and therefore play critical roles in foam cell formation, in THP-1-derived foam cells in the presence of various concentration of ghrelin.MethodsAfter 48 h of culture in the presence of phorbol myristate acetate, THP-1 monocytes differentiated to macrophages. After another 24 h of culture with ox-LDL, the differentiated cells transformed to foam cells. Different concentrations of ghrelin and other intervention factors were added, respectively. The expression of ACAT-1 and ABCA1 was detected by a technique in molecular biology. The content of cellular cholesterol was measured by zymochemistry via a fluorospectrophotometer.ResultsGhrelin could down-regulate the expression of ACAT-1 and up-regulate the expression of ABCA1 in a dose-dependent manner simultaneously. Ghrelin also decreased cellular cholesterol content and increased cholesterol efflux. These effects could be abolished by the specific antagonist of GHS-R and a peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ)-specific inhibitor, respectively.ConclusionsThe results suggest that ghrelin inhibited foam cell formation via simultaneously down-regulating the expression of ACAT-1 and up-regulating ABCA1. Those effects may be achieved via pathways involving GHS-R and PPARγ.     

血管紧张素-(1-7)通过AC-cAMP途径增加THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达并减少细胞胆固醇含量

目的: 构建THP-1源性泡沫细胞模型,探讨血管紧张素-(1-7) 和腺苷酸环化酶抑制剂MDL对THP-1源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白——ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达和胆固醇含量的影响。方法: 将THP-1源性单核细胞诱导为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)建立泡沫细胞模型。实验分为4组:正常泡沫细胞组、MDL组、Ang-(1-7)组和MDL+Ang-(1-7)组。处理24 h后,分别通过ELISA法、荧光定量PCR法和Western blotting检测各组细胞cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量,闪烁计数法检测各组细胞胆固醇流出率,高效液相色谱法检测各组细胞胆固醇含量。结果: (1)Ang-(1-7)组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显升高(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显增高(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。(2)MDL组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显降低(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显降低(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组增高(P<0.05)。(3)MDL+Ang-(1-7)组数值介于Ang-(1-7)组与泡沫细胞组之间。结论: (1)Ang-(1-7)能促进泡沫细胞ABCA1的表达增加,促进胆固醇外流,减少泡沫细胞胆固醇含量,逆转泡沫细胞的形成。(2) MDL可以抑制腺苷酸环化酶的活性,减少cAMP的生成,从而部分拮抗Ang-(1-7)的上述作用,但不能完全阻断Ang-(1-7)的作用。