胃癌组织中Ki—67抗原表达的意义

目的：通过检测Ki-67抗原，观察与胃癌组织发生，分化及预后的关系。方法：用S－P免疫组化方法，对40例胃癌组织，23例癌旁组织，13年正常胃粘膜，进行Ki-67检测，观察Ki-67检测指数与胃癌发生，分化及预后的关系结果：40例胃癌组织中阳性表达为33．33％（5／15），23例癌旁组织中阳性表达21．74％（5／23），13例胃粘膜中无一例阳性表达。且高中分化腺癌，癌旁组织及正常胃粘膜组织均与低分化腺癌中Ki-67差异有显著性（P＜0．05），恶性度低，Ki-67指数低，恶性度高，则指数高。结论：增殖核抗原Ki-67的检测，一定程度上能反映细胞的增殖活性和细胞分化水平，但对其预后的判断还需协同其它癌基因的检测，Ki-67检测可作为胃癌预后的一项指标。     

HPA通过上调MCP-1/CCR2促进胃癌发生侵袭和转移

目的 检测乙酰肝素酶(HPA)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)和趋化因子受体2(CCR2)在人胃癌中的表达,探讨HPA诱导人胃癌细胞发生侵袭和转移的分子机制。方法 免疫组织化学方法检测74例人胃癌组织中HPA、MCP-1和CCR2蛋白的表达。培养人胃癌MGC803细胞、MGC803-HPA细胞(过表达HPA蛋白细胞株)、SGC7901细胞和SGC7901-HPA(-)细胞(敲低HPA蛋白细胞株)。MGC803细胞和SGC7901细胞作为实验组,MGC803-HPA细胞和SGC7901-HPA(-)作为对照组,MTT实验检测CCR2抑制剂(RS504393)作用于人胃癌MGC803-HPA细胞的最适抑制浓度,Western blot实验检测人胃癌细胞中各种蛋白的表达,划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果 人胃癌组织中HPA、MCP-1/CCR2蛋白阳性表达与人胃癌发病部位、分化程度、侵袭深度以及淋巴结转移相关(P<0.05)。人胃癌组织中HPA蛋白表达与MCP-1/CCR2蛋白表达呈正相关(P<0.05)。HPA过表达可促进细胞迁移和侵袭(P&...     

PPARγ配体Ciglitazone对人胃癌MGC803细胞增殖的影响及其机制

目的探讨PPARγ配体Ciglitazone对人胃癌MGC803细胞增殖的影响及其机制。方法RTPCR检测MGC803细胞PPARγ mRNA。MTT及流式细胞术检测Ciglitazone对MGC803细胞增殖及凋亡的影响。相差倒置显微镜和Hoechst33342染色观察凋亡的形态学变化。免疫组化和流式细胞术检测PPARγ、Bcl-2、Bag-1及Bax蛋白表达和变化。结果PPARγ配体Ciglitazone（5、10、20和50μmol／L）可抑制MGC803细胞增殖和诱导其凋亡,增殖的抑制和凋亡的诱导有平行性,且有浓度和时间依赖性。随20μmol／L Ciglitazone作用时间的延长,MGC803细胞的PPARγ mRNA及蛋白表达、Bax蛋白表达及Bax／Bcl-2蛋白的比值升高,Bcl-2和Bag-1蛋白表达降低。结论Ciglitazone可能主要通过激活PPARγ抑制人胃癌MGC803细胞增殖和诱导其凋亡。Bax蛋白表达和Bax／Bcl-2蛋白表达比值升高,Bcl-2和Bag-1蛋白表达降低在Ciglitazone诱导人胃癌MGC803细胞凋亡中起重要作用。提示Ciglitazone可能对治疗胃癌有效。     

Id-1、Ki-67在CIN病变组织中的表达及与CIN病变程度的关系

目的 探讨细胞分化抑制因子-1(Id-1)、细胞增殖核抗原Ki-67在宫颈上皮内瘤变(CIN)组织中的表达及其与CIN病变程度的关系.方法 选取经病理学确诊的109例CIN患者的CIN组织为CIN组,选取经病理学确诊的60例健康妇女的正常宫颈黏膜组织为正常对照组,采用免疫组化SP染色方法检测两组标本中Id-1、Ki-67蛋白的表达,并探讨Id-1、Ki-67蛋白表达与CIN分级的关系.结果 CIN组的Id-1、Ki-67蛋白阳性表达率分别为34.86％、43.12％,均明显高于正常对照组的6.67％、10.00％(P﹤0.001);CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级与Id-1蛋白阳性表达率呈正相关(r=0.818,P﹤0.05);CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级与Ki-67蛋白阳性表达率呈正相关(r=0.794,P﹤0.05).结论 Id-1、Ki-67蛋白在CIN组织中的阳性表达率增高,并且与CIN病变程度具有相关性.     

表柔比星诱导的保护性自噬抑制了胃癌MGC803细胞的凋亡

目的：明确表柔比星作用胃癌MGC803细胞后自噬的存在,探讨自噬在表柔比星诱导胃癌细胞凋亡中的作用。方法：表柔比星处理胃癌MGC803细胞,MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测蛋白表达。结果：1.2μg/ml的表柔比星作用MGC803细胞24h,细胞凋亡率为（23.56±3.49）%,并且多聚ADP-核糖聚合酶（PARP）蛋白发生了裂解。与此同时,1.2μg/ml的表柔比星导致了微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）蛋白的提高和细胞自噬体的增多。提示表柔比星同时诱导了凋亡和自噬的发生。与单药表柔比星相比,自噬抑制剂氯喹联合表柔比星明显提高了细胞增殖抑制率[（71.79±4.34）%vs（47.70±3.67%）,P〈0.05]。而且,氯喹联合表柔比星诱导了更明显的MGC803细胞凋亡[（43.98±4.67）%vs（25.09±3.29%）,P〈0.05]。结论：表柔比星诱导的保护性自噬抑制了胃癌MGC803细胞的凋亡。自噬抑制剂联合表柔比星为胃癌提供了新的治疗策略。     

基因对胃癌MGC 803细胞的抑制作用及其可能的机制

目的:研究沉默乳腺癌相关抗原1（breast cancerassociated antigen 1,BRCAA1)基因对胃癌细胞株MGC803的抑制作用及其可能的机制。方法：构建BRCAA1基因shRNA载体，将构建的shRNABRCAA1质粒与阴性对照质粒shRNAN转染胃癌MGC803细胞，24 h后用荧光显微镜观察转染效率，实时定量PCR检测 BRCAA1和GAPDH基因mRNA表达水平。MTT法检测转染后24、48与72 h的细胞增殖水平，AnnxinV PE/7AAD检测转染24 h后的细胞凋亡水平，Western blotting检测转染48 h后细胞的凋亡相关蛋白表达水平。结果：BRCAA1 siRNA表达质粒转染MGC803细胞24 h 的转染效率为（81.2±2.6）％ 。转染后48 h MGC803细胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4％，MGC803细胞增殖的抑制率达45.0%，转染siRNA细胞的凋亡率明显高于未转染细胞和对照质粒转染细胞\[（14.4±１.6）% vs（5.4±2.0）％，（4.4±2.5）％，P<0.05\]。转染siRNA细胞的凋亡相关蛋白Rb与Bax的表达量显著增加（P<0.05），Bcl2的表达量显著减少（P<0.05）。结论：BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC803细胞的增殖和诱导细胞凋亡，其机制与其促进Rb和Bax蛋白表达、抑制Bcl2蛋白表达有关。     

胃癌组织中Ki-67抗原表达的意义

目的　通过检测Ki -67抗原 ,观察与胃癌组织发生、分化及预后的关系。方法　用S -P免疫组化方法 ,对 40例胃癌组织、2 3例癌旁组织、13例正常胃粘膜 ,进行Ki -67检测 ,观察Ki -67检测指数与胃癌发生、分化及预后的关系。结果　 40例胃癌组织中阳性表达为 3 3 3 3 % (5 /15 ) ,2 3例癌旁组织中阳性表达 2 1 74% (5 /2 3 ) ,13例胃粘膜中无一例阳性表达。且高中分化腺癌、癌旁组织及正常胃粘膜组织均与低分化腺癌中Ki-67差异有显著性 (P <0 0 5 )。恶性度低 ,Ki -67指数低 ;恶性度高 ,则指数高。结论　增殖核抗原Ki-67的检测 ,一定程度上能反映细胞的增殖活性和细胞分化水平 ,但对其预后的判断还需协同其它癌基因的检测 ,Ki -67检测可作为胃癌预后的一项指标     

紫杉醇提高胃癌MGC803细胞对TRAIL的敏感性

目的：研究紫杉醇对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5（DR5）在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用。方法：采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,western blot检测蛋白表达。结果：在MGC803细胞中,100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100ng/ml）联合紫杉醇（3.41g/ml）引起明显的增殖抑制和细胞凋亡（P〈0.05）。TRAIL单药没有改变死亡受体5（DR5）的表达,而3.41g/ml紫杉醇作用MGC803细胞后明显上调了DR5的表达。结论：紫杉醇通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。     

PPARγ激活剂罗格列酮对人胃癌MGC803细胞周期及其PTEN表达的影响

目的探讨不同浓度的罗格列酮对人胃癌MGC803细胞增殖及其PTEN蛋白表达的影响。方法不同浓度的罗格列酮(12.5、25、50、100μmol/L)分别与MGC803细胞系共同培养48 h后,采用流式细胞仪检测罗格列酮对MGC803细胞周期的影响,免疫细胞化学检测MGC803细胞PTEN蛋白表达。结果罗格列酮使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,呈剂量依赖性,并诱导PTEN表达上调。结论罗格列酮可以通过诱导PTEN表达上调,使MGC803细胞停滞于细胞周期G1期,进而抑制人胃癌MGC803细胞生长,这可能是PPARγ激活剂抗肿瘤的机制之一。     

二烯丙基二硫增强胃癌细胞对5-Fu敏感性的研究

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对5-Fu诱导胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用及机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),测定DADS对5-Fu诱导MGC803细胞增殖活性的作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot检测MGC803细胞Bcl-2,Bax,Mcl-1蛋白的表达情况。结果1mg/L、3mg/L的DADS分别与5-Fu联合应用,可增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制作用。DADS(1mg/L)能促进5-Fu诱导MGC803细胞的凋亡。DADS作用于MGC803细胞后,Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平下调,Bax蛋白表达水平上调呈浓度依赖方式。结论ADS能增强5-Fu对MGC803细胞增殖抑制和诱导凋亡,起化疗增敏作用,可能与其下调Bcl-2、Mcl-1蛋白表达水平,上调Bax蛋白表达水平有关。     

9-顺式维甲酸诱导胃癌MGC803细胞周期阻滞和凋亡的作用机制

背景与目的:9-顺式维甲酸(9-cisretinoicacid,9-cisRA)对胃癌的抗癌活性及机制尚不清楚,本研究以MGC803为靶细胞观察9-cisRA对胃癌的作用。方法:采用RT-PCR法检测维甲类X受体α(recinoidXreceptor!,RXRα)、细胞周期蛋白CyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4mRNA表达,流式细胞术检测细胞周期,MTT实验检测9-cisRA作用MGC803细胞后生长抑制情况,Hoechst33342/PI双荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测凋亡,免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达。结果:0.1～10μmol/L9-cisRA作用MGC803细胞96h,能显著抑制细胞增殖。10μmol/L9-cisRA分别作用48、72和96h,G1期细胞随着作用时间的延长而增加,呈明显的G1期阻滞。作用72h后,细胞出现核染色质凝集、DNA片段化等凋亡特征;从作用48h开始,Bcl-2表达即显著下降。在MGC803细胞中RXRα表达较弱,经10μmol/L9-cisRA作用48h其表达水平显著增加(P<0.01);作用96h,细胞中CyclinD1和CDK4表达显著降低(P<0.01)。结论:9-cisRA能明显诱导MGC803细胞周期G1期阻滞和凋亡,该作用可能与其下调细胞周期因子CyclinD1和CDK4表达有关。     

Expression of the surface antigen in human gastric cancer cells and the relation to cell cycles--correlated analysis with flow cytometry

Expression of tumor-associated antigen in different gastric cancer cell lines and different phases of cell cycle was studied cytochemically. The antigen was recognized by the monoclonal antibody (McAb) PC1 against gastric cancer cells. By using the McAb PC1 as first antibody, the indirect immunofluorescence stain and the peroxidase-anti-peroxidase (PAP) stain were done on the gastric cancer cell lines (MGC 803, SGC 7901 and BGC 823). It was shown that PC1 antigen was mainly expressed on the membrane of these cells and only a certain percentage of the cells gave the positive reaction with different intensities. It was obvious that the expression of PC1 antigen was heterogeneous in nature. The heterogeneity of the PC1 antigen expression in gastric cancer cells might be due to either various subpopulations in the cell lines or different phases of cell cycle. In order to go further into the question, we studied quantitatively the expression of PC1 antigen in gastric cancer cell lines (MGC 803, STC 7901 and BGC 823) and the relationship between the antigen expression and cell cycle by double fluorescence stain and two-dimensional flow cytometry. It was found that expression levels of PC1 antigen in these cell lines were in the following order: MGC 803 greater than SGC 7901 greater than BGC 823. The PC1 antigen predominantly expressed on G1 phase for MGC 803 and G1, G2-M phase for SGC 7901 respectively. And uniform low level of PC1 antigen expression was found for BGC 823 throughout the cell cycle. Therefore, the PC1 antigen expression is dependent on cell cycle in MGC 803 and SGC 7901 cell lines.     

单克隆抗体PD4诱导人胃癌细胞系MGC-803的凋亡

目的凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种区别于坏死的细胞生理性死亡方式。肿瘤发生与凋亡的异常有十分密切的关系。单克隆抗体ＰＤ４能识别胃癌细胞表面的分子量为４００００的分子（Ｐ４０）。本研究是为了观察单抗ＰＤ４是否具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法我们应用流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记及ＤＮＡ电泳法观察单抗ＰＤ４对胃癌细胞ＭＧＣ－８０３增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＭＧＣ－８０３细胞表面Ｆａｓ抗原的表达情况。结果ＰＤ４有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用,且ＭＧＣ－８０３细胞Ｆａｓ抗原表达为阴性。结论Ｐ４０是一个与细胞凋亡或增殖有关、且不同于Ｆａｓ的肿瘤相关抗原,他的分子克隆有助于抗体诱导细胞凋亡机制的阐明。     

二烯丙基二硫对人胃癌细胞裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用

背景与目的:既往研究发现二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)在体外可抑制多种肿瘤细胞生长,但在体内抗肿瘤作用的研究报道较少。本实验旨在探讨DADS对人胃癌细胞移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响。方法:未经药物处理和经30mg/LDADS处理1天的胃癌细胞MGC803接种于裸鼠皮下;观察体外DADS处理MGC803细胞裸鼠移植瘤的成瘤情况和未处理MGC803细胞移植瘤成瘤后腹腔注射DADS对胃癌移植瘤在BALB/c裸鼠体内生长情况的影响。Westernblot检测瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达情况。结果:30mg/LDADS处理的MGC803细胞移植裸鼠体内无一成瘤。荷瘤裸鼠腹腔注射DADS剂量为50、100和200mg/kg时的抑瘤率分别为27.8%、66.1%和73.0%,同时可抑制移植瘤癌细胞PCNA的表达。结论:DADS可明显降低胃癌细胞裸鼠移植瘤的成瘤性,并对移植瘤生长有明显抑制作用。     

Preparation and identification of monoclonal antibody against the gastric cancer cell line MGC 803

Spleen cells of Balb/c mice, immunized with gastric cancer cell MGC 803, were fused with murine myeloma cell NS-1. After selective culture, screening and subcloning, a hybridoma PC1 which produced monoclonal antibody (McAb) against MGC 803 cells was obtained. McAb PC1 bound strongly with 3/4 gastric cancer and 1/2 hepatoma cell lines, weakly with another gastric cancer and 2/2 lung cancer cell lines, but did not bind with the autologous and allogenic lymphocytes, ABO red blood cells, human fetal lung fibroblasts and normal bone marrow cells. The binding capacity of McAb PC1 to MGC 803 decreased significantly due to the absorption by MGC 803 cells, but was not affected by lymphocytes and CEA. The corresponding antigen of McAb PC1 was expressed on the surface of MGC 803 cells. It may be a gastric cancer-associated antigen.     

Adinbitor对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨Adinbitor对人胃癌MGC803细胞生长及凋亡的作用。方法应用Adinbitor作用于体外培养的人胃癌MGC803细胞,采用MTT比色法分析其对MGC803细胞生长的影响;采用相差显微镜、苏木精-伊红（HE）和Hoechst染色观察不同浓度的Adinbitor诱导MGC803细胞凋亡的形态变化。结果Adinbitor可呈剂量依赖性方式抑制MGC803细胞的增殖,其抑制MGC803细胞增殖的ID50为3.52μmol/L。Adinbito诱导的MGC803细胞凋亡实验,显示出细胞凋亡的典型的形态学特征,如胞间连丝消失,细胞皱缩成团,胞内出现空泡等现象,而且随Adinbitor浓度的增加,凋亡现象越明显。结论Adinbitor对人胃癌MGC803细胞生长具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

Ki-67和TK1在胃癌组织中的表达

目的探讨增殖细胞核抗原67(Ki-67)和胸苷激酶1(TK1)在胃癌组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组化方法检测Ki-67、TK1在71例胃癌组织和20例正常胃组织中的表达。结果胃癌组织中Ki-67、TK1阳性表达率高于正常胃组织,差异有统计学意义(P均<0.05);胃癌组织中Ki-67的阳性表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(P均<0.05);Ki-67和TK1在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.383,P=0.001)。结论 Ki-67和TK1与胃癌的发生、发展有密切关系。