QLT0267抑制整合素连接激酶对人皮肤成纤维细胞生物学特征的影响

目的 观察不同浓度的QLT0267抑制整合素连接激酶(ILK)的活性对成纤维细胞(Fb)生物学特征的影响.方法 收集整形手术后剩余的皮肤标本,采用机械法加酶消化法分离培养Fb,随机分为空白对照组、5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组、DMSO组,其中空白对照组常规培养不做任何处理,5 nM组、10 nM组、20 nM组、30 nM组按培养基中QLT0267浓度分别为5、10、20、30 nmol/L加入QLT0267溶液[二甲基亚酮(DMSO)为溶剂],DMSO组加入与30 nM组中QLT0267溶液同体积的DMSO,分组处理12、24、48、72 h后在倒置相差显微镜下观察细胞形态.CellTiter试剂盒检测分组处理24、48、72 h后各组Fb的增殖情况,并与空白对照组比较计算增殖抑制率;在48 h时间点,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及Western Blot法观察Fb表达磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、总蛋白激酶B(tAKT)蛋白的变化.对数据进行LDS-t检验和重复测量设计方差分析检验.结果 经浓度大于10 nmol/L的ILK特异性抑制剂作用下,Fb膨胀,细胞核固缩或破碎,并出现细胞凋亡,随QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,细胞形态的改变更加明显.CellTiter试剂盒检测结果显示10 nmol/L以上的QLT0267能明显抑制Fb的增殖,且随着QLT0267浓度的增高和刺激时间的延长,增殖抑制率也升高(F处理组=94.242,P＜0.05;F时间=240.490,P＜0.05;F处理与时间=11.551,P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示与对照组比较,10 nmol/L以上的ILK特异性抑制剂能诱导Fb凋亡,差异有统计学意义(P＜0.05).Western Blot结果显示在各组tAKT的表达组间差异无统计学意义(P＞0.05)的前提下,不同浓度QLT0267组pAKT的表达比空白对照组低,并随着QLT0267浓度的上升而pAKT蛋白生成下降(P＜0.05).结论 10 nmol/L浓度以上ILK特异性抑制剂QLT0267能刺激Fb发生形态改变,抑制细胞增殖和促进细胞凋亡.推测ILK可能通过影响Fb中pAKT的生成参与创面愈合过程的调控.     

整合素连接激酶和β1整合素在大鼠烫伤创面愈合过程中表达的实验研究

目的探讨大鼠烫伤创面愈合过程中整合素连接激酶（ILK）和β1整合素的表达以及在创面愈合中的作用。方法健康雌性SD大鼠18只,随机选取其中15只作为实验组,建立深Ⅱ度烫伤模型,另外3只为对照组,不做处理。实验组分别于烫伤模型建立后第1、5、10、15、20天随机选取3只大鼠,切取背部两侧全层创面,运用免疫组织化学的方法检测创面中ILK、β1整合素的表达。对照组取背部正常皮肤作为对照。结果实验组烫伤后第5、10、15天大鼠烫伤创面中ILK的表达明显高于对照组和实验组烫伤后第20天（P〈0.05）;创面中β1整合素的表达在烫伤后第5天明显高于对照组（P〈0.05）,实验组烫伤后第10、15天则明显高于对照组和实验组烫伤后第20天（P〈0.05）。结论ILK、β1整合素在大鼠创面愈合过程中表达明显增加,ILK可能通过参与整合素信号通路,在调节创面细胞的增生以及细胞与ECM相互作用中扮演着重要的角色。     

整合素连接激酶(ILK)通过调控自噬影响深度烧伤创面愈合北大核心CSCD

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在大鼠深度烧伤创面的表达变化及其对创面愈合的影响和机制。方法:10只Wistar大鼠随机分为正常组和实验组,每组5只,实验组大鼠建立背部皮肤深Ⅱ度烧伤模型,正常组大鼠不做任何处理,免疫组化染色和Western blot检测烧伤创面ILK表达;另取45只大鼠建立背部皮肤深Ⅱ度烧伤模型后随机分为对照组、阴性对照组和ILK组,每组15只,阴性对照组和ILK组大鼠创面分别注射pEGFP-C1慢病毒和pEGFP-C1-ILK慢病毒,对照组注射等量生理盐水;于1 d、7 d、10 d、14 d、21 d观察创面愈合情况,10 d时取创面组织,ELISA测定创面组织TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10表达;21 d时取创面组织,HE染色观察创面组织形态变化,免疫组化染色检测创面组织自噬标志蛋白轻链蛋白3(LC3)表达,Western blot检测自噬相关蛋白表达。结果:烧伤大鼠创面组织ILK表达较正常大鼠皮肤组织显著升高(P<0.05);ILK组大鼠创面愈合率在第7、14、21天时均显著高于对照组和阴性对照组(P<0.05);与对照组和阴性对照组比较,ILK组大鼠创面组织病变坏死程度明显降低,炎症细胞浸润减少,TNF-α、IL-1β及IL-6含量均显著降低(P<0.05),IL-10含量显著升高(P<0.05),LC3阳性表达平均光密度值显著降低(P<0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ显著降低(P<0.05),Beclin-1蛋白表达显著下调(P<0.05),p62蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:ILK在深度烧伤大鼠创面组织表达增加,过表达ILK可减轻创面炎症反应,抑制自噬,促进烧伤创面愈合。     

整合素连接激酶高表达对新生大鼠心肌细胞增殖的影响

背景：整合素连接激酶在调节细胞生存、抗凋亡以及促进细胞迁移、增殖、分化等方面发挥重要作用。 目的：观察整合素连接激酶在新生大鼠心肌细胞内高表达后对心肌细胞增殖能力的影响。 方法：取新生3 d内SD大鼠心脏,体外分离、培养心肌细胞72 h后,分别转染重组腺病毒载体或重组腺病毒载体+整合素连接激酶基因。 结果与结论：转染48 h,与转染重组腺病毒载体比较,转染重组腺病毒载体+整合素连接激酶基因的新生大鼠心肌细胞内DNA合成增加(P < 0.05),有丝分裂增多(P < 0.05),心肌细胞数量增多(P < 0.05)。在整合素连接激酶的作用下,新生大鼠心肌细胞的增殖能力明显提高。     

自噬对烧伤创面愈合的影响

细胞自噬是细胞在应激状态下应用溶酶体对自身损伤细胞器等物质进行分解,将产生的大分子物质予以回收利用,从而保留细胞活性的降解过程。自噬在细胞的发育和分化进程中起着至关重要的作用。烧伤创面经历炎症期、细胞增殖期和组织重塑期3个时期完成组织愈合。细胞自噬在烧伤创面愈合过程中,具有促进病原体清除,参与新生血管增殖、肉芽组织形成,改善上皮的角质化以及瘢痕重塑的作用。调控自噬,可影响烧伤创面愈合。本文综述细胞自噬在烧伤创面愈合中的研究进展。     

马桑提取物促进大鼠烧伤创面愈合的作用和机制

 目的：探讨马桑提取物(CSME)对大鼠烧伤创面愈合的影响及机制。方法：随机将40只SD雄性大鼠分成生理盐水（NS）组、白凡士林（WPJ）组、磺胺嘧啶银（SSD）组和CSME组,每组10只。将大鼠麻醉后,制备背部深Ⅱ度皮肤烧伤创面。而后分别用NS敷料、WPJ敷料、SSD敷料和CSME敷料覆盖治疗21 d。在第1 d、3 d、7 d、14 d和21 d,观察动物的临床症状和创面状况（上皮化速率、结痂及被毛等）后,分别取出创面组织,用于组织学观察,检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,检测表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）蛋白水平及胶原mRNA表达。结果：CSME组新生上皮生长高度活跃,有大量新生被毛生长,创面上皮化速率明显高于其它各组 (P<0.05)。SSD组创面中央新生被毛稀疏而细小,而CSME组创面中央被毛密集,大部分被毛接近正常。CSME组镜下可见全部被多层上皮细胞覆盖,新生胶原纤维充分分化,排列整齐,组织结构明朗,皮脂腺和毛囊增生极其活跃等,显著优于其它各组。本研究显示,烧伤后从第1 d到21 d,CSME组早期EGF和bFGF水平显著高于其它各组,后期迅速下降,低于其它组（P<0.05或P<0.01）。SSD组Ⅰ型与Ⅲ型胶原mRNA表达的比值显著高于其它各组和正常组织,CSME治疗组显著低于其它各组和正常组织(P<0. 05)。结论：本研究表明,CSME可诱导烧伤创面无瘢痕愈合。CSME的这种作用与其早期增强EGF和bFGF蛋白水平,后期抑制两者的水平有关,也可能与其抑制烧伤创面Ⅰ型胶原而增强Ⅲ型胶原mRNA表达密切相关。     

硫化氢对糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合的影响

目的:探讨硫化氢对糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合的影响。方法:将30只健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组(NDC组)、糖尿病对照组(UDC组)和硫化氢处理组(TDA组),每组10只。腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)柠檬酸缓冲液(p H 4.5)建立糖尿病大鼠模型。1周后,将正常大鼠及糖尿病大鼠背部剪开直径为20mm的圆形切口,正常组和糖尿病组大鼠的溃疡创面以空白基质处理,硫氢化处理组则用2%的硫氢化钠涂抹溃疡创面。分别在给药后第5、10、15、20天测定伤口愈合率。21 d后处死大鼠,分别收集血浆以及肉芽组织,检测血浆的凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、凝血酶时间(thrombin time,TT)及纤维蛋白原(fibrinogen,FIB),白细胞和淋巴细胞计数,ELISA检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量,Western blot检测肉芽组织中血红素加氧酶1(HO-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;肉芽组织进行HE染色,光镜观察组织形态的变化。结果:与糖尿病组比较,硫氢化钠处理明显加快大鼠伤口愈合(P0.01),提高了血清SOD活性(P0.01),同时降低了MDA水平(P0.01);血液学检测显示,硫氢化钠明显降低白细胞及淋巴细胞数量,延长PT及TT,降低FIB水平。病理切片观察显示,糖尿病对照组大鼠肉芽组织有炎症细胞浸润,胶原纤维排列疏松且不规则,而硫化氢组大鼠肉芽组织中胶原排列整齐,血管生成增多(P0.05)。此外,TDA组HO-1表达明显高于UDC组,而TNF-α的水平则显著低于UDC组。结论:硫化氢可促进糖尿病大鼠伤口愈合,其机制可能与其提高抗炎及抗氧化作用、改善微循环进而修复组织损伤有关。     

LED红光对糖尿病大鼠创面愈合的影响

目的探讨LED红光照射对糖尿病大鼠创面愈合的作用及相关机制。 方法将30只4周龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常创面组、糖尿病创面组、红光治疗糖尿病创面组,每组10只。红光治疗糖尿病创面组及糖尿病创面组大鼠高脂饮食4周,正常创面组大鼠正常饮食。饲养4周后对红光治疗糖尿病创面组及糖尿病创面组大鼠按50 mg/kg的量腹腔注射10 mg/mL的链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,2组大鼠均造模成功。造模成功后在3组大鼠的背部两侧各制造2个1.5 cm×1.5 cm的全层皮肤缺损创面,每2 d对大鼠创面进行酒精消毒1次,红光治疗糖尿病创面组大鼠每次消毒后对创面进行LED红光照射5 min,能量密度为20 J/cm²,另外2组大鼠不进行LED红光照射。在观察第7、10、14、21天,观察红光治疗糖尿病创面组大鼠创面有无出现皮疹、红肿、水疱、烫伤等光照不良反应;肉眼观察3组大鼠创面愈合情况;统计3组大鼠创面愈合率。观察第10天从各组随机取2只大鼠,处死后取背部创面组织,固定后,进行苏木精-伊红染色观察创面新生血管情况及肉芽组织生长情况;采用免疫荧光法检测各组大鼠创面组织中CD34、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达情况。数据比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。 结果观察第7、10、14、21天,红光治疗糖尿病创面组大鼠经LED红光照射后皮肤未见皮疹、红肿、水疱、烫伤等光照不良反应。在各个观察时间点,肉眼观察正常创面组及红光治疗糖尿病创面组创面愈合情况均优于糖尿病创面组,且正常创面组创面愈合情况略优于红光治疗糖尿病创面组;观察第7、10、14、21天,正常创面组的创面愈合率分别为(34.62±2.116)%、(53.83±7.92)%、(70.20±5.41)%、(95.65±2.58)%,红光治疗糖尿病创面组创面愈合率分别为(31.76±2.44)%、(50.48±4.54)%、(66.26±11.35)%、(93.96±2.80)%,糖尿病创面组创面愈合率分别为(23.67±4.18)%、(42.71±3.40)%、(53.77±7.74)%、(84.07±4.43)%,3组比较差异均有统计学意义(F＝34.69、10.35、10.32、34.40,P<0.05);观察第7、10、14、21天,正常创面组及红光治疗糖尿病创面组创面愈合率始终高于糖尿病创面组,差异均有统计学意义(P<0.05);观察第7、10天,正常创面组创面愈合率高于红光治疗糖尿病创面组,差异均有统计学意义(t＝2.80、3.26,P<0.05),观察第14、21天,正常创面组创面愈合率仍高于红光治疗糖尿病创面组,但差异均无统计学意义(t＝1.16、1.40,P>0.05)。观察第10天,创面组织苏木精-伊红染色显示,正常创面组内含大量新生毛细血管,肉芽组织内胶原及细胞排列紧密有序;红光治疗糖尿病创面组见较多新生毛细血管,肉芽组织内胶原及细胞较多,但少于正常创面组;而糖尿病创面组新生血管最少,肉芽组织内细胞及胶原稀疏。免疫荧光法检测创面组织中CD34、VEGF表达情况可见,正常创面组CD34、VEGF表达高于红光治疗糖尿病创面组,而红光治疗糖尿病创面组表达高于糖尿病创面组。 结论LED红光可促进糖尿病大鼠创面组织中CD34、VEGF表达,促进血管新生,进而促进创面愈合。     

下调整合素连接激酶表达抑制鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f的增殖

目的探讨整合素连接激酶(ILK)在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f中的表达水平。用下调ILK表达水平和使用ILK特异性小分子抑制剂方法,研究ILK表达对鼻咽癌细胞增殖的影响及意义。方法用免疫组化法检测鼻咽癌组织和普通鼻咽组织中ILK的表达情况,用qRT-PCR和Western blot检测ILK在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f中RNA和蛋白表达水平,用MTT法检测对鼻咽癌细胞增殖的影响。结果 ILK的表达水平在NPC组织中呈阳性或弱阳性,普通鼻咽组织中呈阴性。在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f细胞中siILK能显著降低ILK的表达水平(P0.05),siRNA下调ILK表达能抑制鼻咽癌细胞增殖能力(P0.05),ILK特异性小分子抑制剂(Cdp22)能够显著抑制鼻咽癌细胞系增殖能力(P0.05)。结论下调ILK表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖,为鼻咽癌患者提供新的治疗靶点。     

阿霉素对老年大鼠血浆及皮肤创面TNFα含量的影响

目的:TNFα参与伤口愈合的生物学调节的多个环节,本实验以老年大鼠为模型,观察阿霉素导致的慢性伤口愈合过程中血浆、组织TNF α的变化.方法:24月龄大鼠在实验前4 d尾静脉注射阿霉素8 mg/kg体重 ,然后背部切除直径为1.5 cm的皮肤,观察伤口区和血浆中TNFα在伤口愈合过程中的变化.结果:阿霉素可导致伤口愈合强度由对照组的(8.68±1.56) kg/cm2降至(6.36±1.36) kg/cm2(P＜0.05),表现为伤口愈合障碍.阿霉素攻击后血液白细胞在第7 d降至最低,第12 d回升至最高.此时阿霉素攻击第7 d血浆TNFα由实验前的(0.71±0.68) ng/L降至(0.65±0.10) ng/L,第11 d为(0.68±0.15) ng/L,与实验前相比P＜0.05.而生理盐水对照组则由实验前的(0.74±0.10) ng/L升至第11 d (0.85±0.12) ng/L(P＜0.05),与白细胞的变化趋势相近.阿霉素攻击后组织TNF α在第7 d为(4.62±1.86) ng/g,与对照组(9.95±2.16) ng/g相比P＜0.05,实验第11 d两组TNFα都有升高,尤其阿霉素组升高至(10.6±1.12) ng/g,比实验7 d时显著升高(P＜0.05),也与白细胞的变化相关.结论:阿霉素造成的白细胞的变化是导致血浆及组织TNFα变化的主要原因,阿霉素导致的TNFα下降导致了伤口愈合强度的降低,从而影响伤口的正常愈合.     

外源性透明质酸对创面愈合影响的研究进展

对透明质酸参与创面修复过程及其机制的研究进展进行综述,回顾、总结与分析透明质酸盐的理化性质、代谢途径及代谢产物与创面修复的关系。透明质酸盐在创面修复过程中具有清创、抗炎、促进创伤愈合重要作用,其代谢产物能够促进血管生成及成纤维细胞增殖,调控胶原合成。透明质酸盐凭借在创面修复的重要作用,将会在创面修复及组织工程等领域得到广泛的应用。     

辛伐他汀对高脂血症大鼠肾小管间质病变及其ILK表达的影响

目的： 探讨辛伐他汀对高脂诱导的大鼠肾组织整合素连接激酶（ILK）的表达及其对肾小管间质损害的影响。方法：54只Wistar大鼠随机分3组：高脂饮食组给予高脂饲料喂养,辛伐他汀组用高脂饲料喂养同时,给予辛伐他汀10 mg·kg-1·d-1干预,正常对照组给予正常饮食。实验第4周、10周及20周后各组分别随机取6只大鼠处死,取血清及肾组织标本,测定血脂水平、HE染色观察大鼠肾小管-间质损害程度,用Western印迹及免疫组化染色观察大鼠肾间质ILK的表达。结果：与正常对照组比较,从第4周开始,高脂饮食组及辛伐他汀组大鼠血脂水平升高,肾小管上皮细胞逐渐出现融合、浊肿、坏死,肾小管萎缩,管腔结构消失,炎症细胞浸润,间质纤维化,残余的小管上皮出现空泡变性,管壁变薄,代偿性扩张,肾组织ILK的表达明显增加,且随着喂养时间延长,上述指标变化更加明显;而辛伐他汀组与相同时点高脂饮食组比较,上述指标均明显减轻。结论: 高脂饮食大鼠存在有明显的肾小管间质损害,并可能与肾组织ILK表达明显增多密切相关,辛伐他汀可能通过抑制肾小管间质ILK的表达,减轻高脂饮食大鼠肾小管间质病变。     

富林密伤口愈合凝胶在Ⅱ度烧伤及供皮区创面的应用

目的观察富林密伤口愈合凝胶（Flamigel）对Ⅱ度烧伤创面和供皮区创面愈合的影响。方法2003年2月～2007年2月选择70例浅Ⅱ度烧伤、50例深Ⅱ度烧伤和40例供皮区创面作为治疗组，局部创面清创后外用富林密伤口愈合凝胶，无菌敷料覆盖包扎。同期选70例浅Ⅱ度烧伤、50例深Ⅱ度烧伤和40例供皮区创面作为对照组进行常规治疗，观察创面愈合时间、创面局部及全身反应情况。结果70例浅Ⅱ度烧伤创面的愈合时间治疗组和对照组分别为7．9±3．5天和11．3±2．4天；50例深Ⅱ度烧伤创面的愈合时间治疗组和对照组分别为16．4±2．2天和21．4±3．1天；40例供皮区创面的愈合时间治疗组和对照组分别为12．3±3．3天和16．3±2．5天；显示治疗组创面愈合时间明显提前，经统计学处理，有显著性差异（P〈0．05）。结论富林密伤口愈合凝胶有明显促进烧伤创面和供皮区创面愈合的作用。     

姜黄素对创面愈合作用的影响及其机制的初步探讨

目的 观察姜黄素(Curcumin,Cur)对大鼠皮肤创面愈合作用的影响及其机制.方法 取30只雄性SD大鼠,用6 mm打孔器在每只大鼠背部制作4个直径为6 mm大小创面模型.每只大鼠的每个创面每天施加不同浓度姜黄素(30、15、0mg/mL)及PBS干预创面的愈合.在术后第1、3、7、10、14 d随机取6只大鼠计算各创面愈合速率,采用免疫组织化学法检测各组中不同时间点各创面中血管内皮生长因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)表达量,采用免疫荧光法检测各组中不同时间点各创面中M1型及M2型巨噬细胞含量.结果 溶媒剂对创面愈合未见明显影响;与对照组相比,Cur15组及Cur30组创面愈合明显增快;Cur15组及Cur30组术后第7天和第10天创面VEGF免疫组化平均光密度数值均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05);Cur15组术后第3、7和10天及Cur30组术后第7天和第10天bFGF免疫组化平均光密度数值均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P ＜0.05);Cur15组及Cur30组术后第3和7天创面CD68与诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide sythase,iNOS)双阳性细胞百分比均少于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05);Cur15组术后第3和7天及Cur30组术后第3、7、10和14天创面CD68与精氨酸酶1(arginase-1,Arg-1)双阳性细胞百分比均多于相同时间点Cur0组及PBS组(P＜0.05).结论 Cur能够明显促进创面愈合,其机制可能与Cur对M1与M2型巨噬细胞的极化调节有关;Cur浓度为15 mg/mL时创面愈合速率最快.     

MMP-9/TIMP-1表达在糖尿病鼠皮肤伤口愈合过程中的变化及意义初探

目的：观察基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达和MMP-9/TIMP-1比值在糖尿病组和正常组大鼠皮肤伤口愈合过程中不同时点表达的动态变化，探讨其可能的作用机制。 方法:糖尿病大鼠形成6周后行皮肤伤口造模，采用HE染色、Masson染色和免疫组织化学方法评估伤口形成后3、7、14 d伤口组织的再上皮化、炎症细胞浸润、肉芽组织厚度、新生血管形成和胶原纤维密度的情况；通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测术后不同时点MMP-9、TIMP-1在伤口组织中的表达情况。结果:糖尿病大鼠伤口愈合明显迟缓。术后第3 d两组间胶原纤维、肉芽组织、新生血管和再上皮化没有差异，术后第7 d糖尿病组以上指标得分均低于正常组，第14 d这种趋势更加明显；而第3 d至14 d，糖尿病组的单核巨噬细胞浸润得分均低于正常组。术后第3 d两组MMP-9表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组MMP-9表达水平在各时点均高于正常组；术后第3 d两组TIMP-1表达均达高峰，第7、14 d呈逐渐下降趋势，糖尿病组TIMP-1表达水平在各时点均低于正常组；正常组MMP-9/TIMP-1蛋白水平比值始终维持在一个动态平衡的稳定水平，而糖尿病组却长期处于高水平状态。结论:异常的胶原产生、新生血管重建、炎症反应、再上皮化、肉芽形成可能是糖尿病鼠创面愈合减慢的组织病理学基础；皮肤组织MMP-9/TIMP-1的平衡性改变可能是这种组织病理学异常的重要原因之一。     

碱性调宁蛋白对糖尿病大鼠烧伤创面成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中的表达情况及其对成纤维细胞增殖与凋亡的影响。 方法选64只雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为实验组和对照组,每组32只。实验组大鼠,腹腔注射链脲佐菌素60 mg/kg,制作糖尿病大鼠模型;对照组大鼠,腹腔注射0.9%氯化钠溶液1.0 mL。适应性饲养2周后将2组大鼠均制作为深Ⅱ度烫伤模型(以下称为烧伤),伤后立即液体复苏、常规治疗。观察两组大鼠的创面愈合时间及在伤后第7、14、21、28天的创面愈合率,创周切取组织、制作切片,行苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,免疫组织化学SP法分析碱性调宁蛋白表达,成纤维细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,原位末端转移酶标记(TUNEL)法测定成纤维细胞凋亡情况。对数据行方差分析和t检验。 结果实验组大鼠创面平均愈合时间[(25.6±2.8) d]长于对照组大鼠创面平均愈合时间[(19.1±2.1) d],差异有统计学意义(t＝10.49,P<0.05);在伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠创面愈合率分别为(18.8±4.6)%、(37.6±7.9)%、(66.3±11.4)%、(85.4±4.8)%,明显小于对照组[(40.8±4.5)%、(62.1±6.7)%、(90.2±9.7)%、(95.4±5.5)%,差异均有统计学意义(t＝9.69、6.69、4.51、3.87,P值均小于0.05)。伤后第7、14、21天,两组大鼠创面逐渐愈合,创面组织中成纤维细胞、新生微血管均逐渐增多,且对照组大鼠未愈合创面组织中成纤维细胞、新生微血管均较实验组增多。伤后第7、14、21、28天,实验组大鼠碱性调宁蛋白在烧伤创面组织中的表达分别为1.43±0.07、1.17±0.11、0.73±0.06、0.77±0.07,均高于对照组大鼠(0.75±0.09、0.60±0.10、0.63±0.06、0.64±0.10),差异均有统计学意义(t＝17.58、10.92、3.44、3.10,P值均小于0.05)。实验组大鼠成纤维细胞PCNA在烧伤创面组织中表达分别为654.19±102.80、820.84±112.86、766.68±156.63、232.75±55.37,较对照组(766.85±73.30、1322.22±121.44、1112.35± 142.32、740.79±106.90)低,差异均有统计学意义(t＝2.52、8.55、4.62、11.94,P值均小于0.05)。伤后第7、14、21、28天,实验组细胞凋亡数分别为58.51±10.89、41.53±9.95、27.28±6.58、20.13±4.23,较对照组(30.70±6.41、25.31±5.74、17.46±5.36、15.29±4.10)高,差异均有统计学意义(t＝6.23、4.00、3.27、2.32,P值均小于0.05)。 结论碱性调宁蛋白在糖尿病大鼠烧伤创面愈合过程中表达水平增高,可能调控创面组织中成纤维细胞的增殖和(或)凋亡水平,是糖尿病创面延迟愈合的原因之一。