足细胞相关蛋白在糖尿病肾病中的表达及氯沙坦的干预

目的:研究Nephrin、Podocin在糖尿病肾病大鼠肾组织中表达的变化,并探讨氯沙坦的干预作用。方法:60只健康雄性SD大鼠,采用小剂量STZ(25mg/kg)联合完全弗氏佐剂腹腔注射建立DN大鼠模型,反复测量三次血糖值均≥16.7mmol/L视为造模成功。采用随机数字表的方法将造模成功的大鼠分配至对照组、模型组、氯沙坦组。12周末处死大鼠,收集大鼠尿液测定24h尿白蛋白排泄率;光镜观察肾脏病理;western blot检测肾组织中Nephrin、Podocin蛋白的表达。结果:(1)与对照组比较,模型组大鼠24h尿白蛋白排泄率(UARE)均明显升高(P<0.01);与模型组比较,氯沙坦组大鼠24hUARE明显下降(P<0.01);(2)肾脏病理显示对照组肾组织结构基本正常,模型组肾组织损伤明显,经氯沙坦干预后,肾脏病理损伤减轻;(3)western blot检测结果:模型组与正常对照组比较,肾组织中Nephrin、Podocin蛋白表达明显降低(P<0.01),氯沙坦组与模型组相比,肾组织Nephrin、Podocin蛋白均有明显的提高(P<0.01)。结论:(1)糖尿病肾病大鼠足细胞Nephrin、Podocin蛋白表达的减少;(2)氯沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏有明显的保护作用,可以减少蛋白尿。(3)氯沙坦可以通过上调DN大鼠肾组织Nephrin、Podocin蛋白的表达而减轻蛋白尿。     

雷公藤甲素干预足细胞 snail1、nephrin 表达的研究

目的：通过观察高糖刺激对小鼠足细胞 snail1、nephrin 表达的影响及雷公藤甲素（triptolide,TP）的干预作用,探讨 TP 保护足细胞的分子机制。方法：以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为正常糖组、高糖组、甘露醇组、TP 干预组,培养时间为48 h。采用荧光定量 PCR 法和 western blot 分别检测各组足细胞 snail1、nephrin mRNA 和蛋白的表达量。结果：与正常糖组相比,高糖刺激可以上调足细胞 snail1表达、下调 nephrin 表达;与高糖组相比,TP 干预组 snail1表达减少,而 nephrin 表达增加。结论：TP 可以减轻高糖引起的 snail 表达上调和 nephrin 表达下调,这可能是雷公藤甲素发挥足细胞保护作用的重要分子机制。     

雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠足细胞病变的影响

目的 探讨雷公藤多苷（TWP）对糖尿病肾病大鼠足细胞病变的影响。 方法 SD大鼠100只,按随机数字表法分为正常对照组（A组）、糖尿病组（B组）与TWP治疗组（C组）。并将C组按4、8、16 mg?kg-1?d-1不同给药剂量分为3组（Ca、Cb、Cc）。糖尿病组与TWP治疗组大鼠分别给予链脲菌素（STZ）一次性腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。12周后检测24 h尿蛋白量、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、外周血白细胞（WBC）、血糖（Glu）、肾质量/体质量（KW/BW）的变化;HE染色检测肾组织病理变化;透射电镜测量足细胞超微结构变化;免疫荧光法检测肾皮质nephrin和podocin蛋白表达。 结果 （1）与A组比较,B组及C组Scr、BUN增高（P ＜ 0.05）;Glu、KW/BW和24 h尿蛋白量显著增高（P ＜ 0.01）,除Cc组（3/20）出现肝酶（ALT、AST）增高及WBC下降外,各组ALT、AST、WBC差异无统计学意义;肾脏皮质nephrin和podocin蛋白表达减少,肾小球、小管间质及足细胞病变明显。（2）与B组比较,C组KW/BW和24 h尿蛋白量降低（P ＜ 0.01）,肾脏皮质nephrin和 podocin蛋白表达增高（均P ＜ 0.01）,肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻,并随雷公藤多苷剂量的增加而越加明显。 结论 TWP对糖尿病大鼠足细胞病变具有保护作用,并与剂量相关。其部分机制可能与上调nephrin和podocin蛋白表达有关。     

雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠蛋白尿和nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(TP)对IgA肾病(IgAN)大鼠尿蛋白和足细胞nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响。方法:采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法建立IgAN大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、洛丁新组、TP剂量组、TP中剂量组、TP高剂量组,每组10只。于0,10,14周收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白定量,血生化指标,分别采用实时定量PCR及ELISA法检测肾组织nephrin、podocin mRNA和蛋白表达。结果:(1)实验前各组大鼠尿蛋白差异无统计学意义(P>0.05),第10周末各造模组蛋白尿均明显高于正常组(P<0.01),第14周末TP各剂量组及洛丁新组蛋白尿均较模型组明显减少(P<0.01),TP高剂量组Alt值高于其余各组(P<0.05);(2)与正常组相比,模型组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达明显降低(P<0.01);TP各剂量组及洛丁新组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达均较模型组明显增高(P<0.05);TP中、高剂量组较洛丁新组nephrin、podocin蛋白浓度显著增高(P<0.05);TP各剂量组与洛丁新组及TP各剂量组间nephrin、podocin mRNA表达均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP能够明显减轻IgAN大鼠的蛋白尿,且能明显提高肾组织nephrin、podocin mRNA及蛋白的表达。提示TP能调节IgAN足细胞相关分子nephrin、podocin基因及蛋白的表达,减少足细胞损害,减少尿蛋白。     

高糖对足细胞转分化和Smad7表达的影响

目的：通过观察高糖刺激下的足细胞表达synaptopodin、desmin和Smad7的变化,探讨高糖对足细胞的损伤机制。方法：将培养的小鼠足细胞分为正常糖组、高糖组、甘露醇组。倒置显微镜下观察足细胞的形态变化,采用RT—PCR和Western印迹技术分别检测synaptopodin、desmin、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果：高糖刺激48h后的足细胞形态发生改变,并且synaptopodin、Smad7mRNA和蛋白表达较对照组减少,desminmRNA和蛋白表达较对照组增加（P〈O．01）。结论：高糖能够诱导足细胞发生转分化,并且这一作用可能与Samd7表达减少有关。     

高糖刺激对体外培养小鼠足细胞snail表达和转分化的影响

目的：研究高糖刺激对体外培养的小鼠足细胞snail表达及上皮细胞-间充质细胞转分化的影响.方法：以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为正常糖组、高糖刺激组、甘露醇对照组,培养时间为48 h.倒置显微镜下观察各组足细胞形态,采用荧光定量PCR法检测各组足细胞snail、synaptopodin、α-平滑肌肌动蛋（α-SMA）mRNA的表达,采用免疫细胞化学和western blot检测各组足细胞snail、synaptopodin、α-SMA蛋白的表达量.结果：正常状态下足细胞呈树枝分叉状,几乎不表达snail,高糖刺激48 h后足细胞形态发生明显改变,并且snail、α-SMA mRNA和蛋白表达量较对照组明显上调,synaptopodin表达较对照组减少（P＜0.05）.结论：高糖刺激可诱导足细胞snail的表达和转分化的过程,这可能参与了糖尿病肾病的发生、发展过程.     

高糖对小鼠肾小球足细胞podocalyxin mRNA表达的影响

目的探讨高糖对小鼠肾小球足细胞podocalyxin mRNA表达的影响。方法以体外培养的小鼠足细胞为研究对象,将细胞分组,即正常对照组（NG组）：D-葡萄糖5．56mmol／L;高糖培养组（HG组）;D-葡萄糖25．0mmol／L。应用逆转录-PCR技术,检测高糖培养不同时间点对足细胞表达podocalyxin mRNA的影响;Western blot印迹分析检测细胞转录因子WT-1蛋白变化。结果①逆转录-PCR技术显示随着高糖培养时间增加,HG组肾小球足细胞与WG组比较、以及HG组（第6、12、24h）组间比较,podocalyxin mRNA表达均减少（P〈0．05）。②培养的足细胞表达基础水平的WT-1蛋白,但在经高糖培养2h后其表达即开始下降（P〈0．05）。结论高糖培养使小鼠肾小球足细胞podocalyxin mRNA和转录因子WT-1蛋白表达下降。     

雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠的治疗作用及对肾系膜区CD71表达的影响

目的：观察雷公藤内酯醇（triptolide,TP）对IgA肾病（IgAN）大鼠肾系膜区CD71表达的影响及其对IgAN的治疗作用。方法：将雄性SD大鼠随机分为正常组、IgAN模型组（模型组）、IgAN＋TP干预组（TP组）、IgAN＋泼尼松干预组（Pred组）,每组8只。采用牛血清白蛋白（BSA）＋葡萄球菌肠毒素（SEB）＋四氯化碳（CCl4）的方法建立IgAN大鼠模型,TP组给予TP100μg·kg^-1·d^-1,Pred组给予Pred5.0mg·kg^-1·d^-1灌胃。分别于0、7、11周测24h尿蛋白定量及尿红细胞计数。12周处死大鼠取血测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）;肾组织行光镜、荧光、电镜观察病理学改变。并对系膜区IgA沉积及CD71表达水平作半定量分析。RT-PCR法检测CD71mRNA在肾组织中的表达水平。结果：造模7周后模型组、TP组、Pred组大鼠尿蛋白及红细胞均较正常组显著增多,第11周时TP组及Pred组尿蛋白及红细胞较模型组显著减少,TP组尿红细胞下降尤为明显。模型组大鼠光镜下肾系膜基质增生,系膜细胞增多,部分毛细血管攀闭塞;荧光下IgA呈团块状在系膜区沉积;电镜下足突融合,系膜增生,有块状电子致密物沉积,TP组及Pred组病理较模型组显著改善,正常组未见病理改变。CD71的蛋白及mRNA水平在模型组大鼠肾组织高表达,TP组及Pred组表达显著减弱,正常组微弱表达。CD71在肾系膜区的表达与IgA的沉积呈正相关。结论：IgAN大鼠肾系膜区CD71高表达,与IgA的沉积呈正相关,TP能显著减少CD71在肾系膜区的表达,减少IgA沉积,改善临床及病理损伤指标。可见TP通过下调系膜区中CD71的表达,进而减少IgA的沉积是TP治疗IgAN的机制之一。     

雷公藤内酯醇在器官移植中的研究进展

国内外研究表明,雷公藤内酯醇在抗同种移植排异反应中具有疗效好、适应范围广、不良反应少等优点,被认为是器官移植领域中一种很有应用前景的药物。     

百令胶囊对糖尿病肾病大鼠肾组织足细胞Nephrin表达的研究

目的：探讨百令胶囊对糖尿病肾病（DN）大鼠肾组织足细胞nephrin表达的影响。方法：制作DN实验模型,分为正常对照组、DN组、百令胶囊组及贝那普利组。百令胶囊组及贝那普利组按100 mg·kg^-1·d^-1分别给予百令胶囊及贝那普利灌胃,实验周期12周。12周后观察各组血糖（BS）、肾重/体重（KW/BW）、24 h尿蛋白定量、肌酐清除率（Ccr）等,同时还观察肾脏病理形态学变化。并采用免疫组化和RT-PCR观察肾组织nephrin蛋白及基因表达的变化。结果：与正常对照组相比,DN组大鼠BS、KW/BW、24 h尿蛋白定量、肾小球硬化指数和肾小管损伤指数均显著上升（P〈0.05）,Ccr显著下降（P〈0.05）,经过12周治疗后观察百令胶囊组上述指标除血糖外均明显改善。与正常对照组相比,DN组大鼠肾组织足细胞nephrin表达明显下调（P〈0.05）,百令胶囊治疗后观察nephrin表达明显增加,与DN组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：百令胶囊对DN大鼠具有一定的肾脏保护作用,其机制可能与恢复肾组织足细胞nephrin表达有关。     

IgA肾病患者血清aIgA1对足细胞增殖及nephrin分子表达的影响

目的：观察IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）患者与正常人的血清热聚合IgA1（aggregated IgA1,aIgA1）对足细胞增殖及nephrin分子表达的影响。方法：利用亲和层析联合分子筛层析法分离获得原发性IgAN患者与健康人血清单体IgA1（monomeric IgA1,mIgA1）,将mIgA1热聚合为aIgA1,分别刺激小鼠MPC5足细胞株,利用MTT法检测aIgA1对足细胞增殖的影响,用RT-PCR法检测aIgA1干预后足细胞nephrin分子基因表达水平的改变。结果：不同浓度aIgA1刺激组间足细胞MTT吸光度的差异有统计学意义（P〈0.05）。RT-PCR实验发现正常人及患者的aIgA1刺激足细胞后,均可以时间依赖性及剂量依赖性的方式下调nephrin mRNA的表达,且患者的aIgA1下调nephrin表达的作用更明显（P〈0.01）。结论：IgAN患者与正常人的aIgA1均可以影响足细胞增殖,并下调足细胞nephrin mRNA的表达。患者aIgA1对足细胞nephrin mRNA表达的下调作用较正常人明显,在疾病过程中IgA1可能是加重足细胞损伤的原因之一。     

复方积雪草2号对IgA肾病大鼠肾组织电镜形态及Nephrin表达的影响

目的：观察复方积雪草2号对IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织病理电镜及Nephrin表达的影响。方法：复合免疫法制造IgAN大鼠模型,分设正常对照、模型、模型＋缬沙坦、模型＋复方积雪草2号高剂量、模型＋复方积雪草2号中剂量、模型＋复方积雪草2号低剂量6组。观察各组大鼠肾脏病理及肾组织Nephrin表达的变化。结果：（1）造模各组大鼠尿蛋白、镜下红细胞增多;免疫荧光镜下造模各组肾小球系膜区有不同程度IgA荧光,提示造模成功;（2）电镜下模型组系膜细胞增生,基质明显增多、有足突融合;而各治疗组足突融合情况均较模型组明显改善（P〈0.05）;（3）免疫组化法检测Nephrin显示模型组几乎没有阳性表达;RT-PCR显示模型组NephrinmRNA表达明显弱于正常组和其他各治疗组（P〈0.01）。结论：（1）Nephrin的下降可能是IgAN足细胞损伤、产生蛋白尿的病理机制之一;（2）Nephrin可能是复方积雪草2号、缬沙坦发挥肾小球足细胞保护作用的分子靶点之一。     

阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrin mRNA的表达及来氟米特对其表达的影响

目的:观察阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrinmRNA的表达及来氟米特对其表达的影响,探讨nephrin在蛋白尿发生发展中的作用以及来氟米特治疗肾脏病的可能机制。方法:建立阿霉素肾病模型,第4周进一步将模型组分为治疗组和非治疗组,治疗组给予来氟米特管饲。应用光镜、电镜观察不同时期(第2、4、6、8周)各组大鼠肾组织的病理改变;BCA法检测尿蛋白排泄量;半定量RT-PCR的方法检测肾皮质中nephrinmRNA的表达。结果:(1)模型组尿蛋白量逐渐增加,而治疗组第6周和第8周的尿蛋白量均低于同时期的非治疗组水平(P=0.02和P<0.01);(2)模型组nephrinmRNA表达量在2、4、6、8周分别为对照组的0.5、1.0、2.0、1.6倍,并与尿蛋白量呈正相关(r=0.699,P<0.001);(3)模型治疗组nephrinmRNA的表达第8周达非治疗组的1.3倍。结论:(1)随着阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的增加,肾皮质nephrinmRNA的表达发生了显著变化,并与蛋白尿的发生发展之间具有一定的相关性;(2)来氟米特可减少肾病大鼠尿蛋白量,同时增加肾皮质nephrinmRNA的表达。     

阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrinmRNA的表达及来氟米特对其表达的影响

目的：观察阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrin mRNA的表达及来氟米特对其表达的影响，探讨nephrin在蛋白尿发生发展中的作用以及来氟米特治疗肾脏病的可能机制。方法：建立阿霉素肾病模型，第4周进一步将模型组分为治疗组和非治疗组，治疗组给予来氟米特管饲。应用光镜、电镜观察不同时期（第2、4、6、8周）各组大鼠肾组织的病理改变；BCA法检测尿蛋白排泄量；半定量RT—PCR的方法检测肾皮质中nephrin mRNA的表达。结果：（1）模型组尿蛋白量逐渐增加，而治疗组第6周和第8周的尿蛋白量均低于同时期的非治疗组水平（P=0．02和P＜0．01）；（2）模型组nephrin mRNA表达量在2、4、6、8周分别为对照组的0．5、1．0、2．0、1．6倍，并与尿蛋白量呈正相关（r=0．699，P＜0．001）；（3）模型治疗组nephrin mRNA的表达第8周达非治疗组的1．3倍。结论：（1）随着阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的增加，肾皮质nephrin mRNA的表达发生了显著变化，并与蛋白尿的发生发展之间具有一定的相关性；（2）来氟米特可减少肾病大鼠尿蛋白量，同时增加肾皮质nephrin mRNA的表达。     

ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响

目的：观察ERK1/2对高糖环境下足细胞凋亡的作用及来氟米特对其的影响。方法：培养的人足细胞分为正常糖组、高渗对照组、高糖组,高糖组按不同刺激时间又分为0.5h、1h、6h、12h、24h5组,应用Western印迹分析法检测各组足细胞ERK1/2信号途径中ERK1/2蛋白活化的变化。足细胞凋亡检测：将足细胞分为高糖对照组、抑制剂组、抑制剂＋来氟米特（A771726）组、A771726组,将以上各组足细胞培养24h后,分别进行ERK1/2信号途径的检测同前及流式细胞仪检测足细胞的凋亡率。结果：高糖组30min可以活化ERK1/2蛋白,6h开始达高峰,持续活化到24h开始降至基础水平。正常糖及高渗对照组未能活化ERK1/2。与高糖组相比,ERK1/2蛋白抑制剂（PD98059）抑制了ERK1/2的磷酸化,使磷酸化的ERK1/2（P-ERK1/2）蛋白表达明显减少（P〈0.01）,从而影响了下游多种核转录因子的活化,影响目的基因的表达而增加了足细胞的凋亡（P〈0.01）。A771726可以增加P-ERK1/2的表达量（P〈0.01）,从而减少足细胞的凋亡（P〈0.05）。而PD98059可以影响A771726的作用,使其对足细胞的保护作用减弱,其凋亡率比高糖组明显增加（P〈0.01）。结论：ERK1/2信号途径参与了来氟米特对足细胞的保护作用。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的：探讨柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法：通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果：与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高（P〈0.01）,肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。结论：柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。     

糖肾平对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin与CD2AP蛋白及其mRNA表达的影响

目的：观察糖肾平对糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子nephrin和CD2AP表达的影响,探讨其防治DN的作用机制.方法：雄性Wistar大鼠74只,按体重随机分组为正常组10只,造模组64只.造模组大鼠腹腔一次性注射链脲佐菌素（STZ）（45 mg/kg）,72 h后检测大鼠血糖和尿糖,以血糖≥16.7 mmol/L、尿糖（＋＋＋＋）者为DN大鼠造模成功.模型成功的大鼠按体重随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平小、大剂量组,各组分别干预14周.于第14周处死大鼠,无菌取肾,采用原位杂交和免疫组化技术观察肾组织足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP蛋白及其mRNA的表达水平.结果：模型组与正常组相比,nephrin和CD2AP蛋白及mRNA表达水平明显下调（P〈0.01）;与模型组相比,厄贝沙坦、糖肾平干预后糖尿病大鼠肾小球足细胞nephrin和CD2AP蛋白及mRNA水平表达明显增加（P〈0.05）.结论：糖肾平可能通过维持足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin和CD2AP的稳定性,从而发挥对DN肾脏的保护作用.