重组人脑钠肽对兔缺血再灌注后心室肌细胞L-钙离子通道电流的影响

目的研究重组人脑钠肽（rhBNP）对缺血再灌注后心室肌细胞L-钙通道电流（ICa-L）的影响,并探讨其细胞学离子机制。方法 45只新西兰大耳白兔随机分为缺血再灌注动物模型组（I-R组,n=15）、rhBNP治疗组（n=15）和假手术组（n=15）。采用酶解方法分离缺血部位心室肌外膜单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录ICa-L。结果①心律失常发生率：与I-R组比较,rhBNP组兔室速、室颤发生率及持续时间明显下降,而且其心律失常的评分也明显低于I-R组[（2.6±0.7）vs.（3.6±0.8）,P〈0.05];②电流密度峰值：I-R组、对照组、rhBNP组ICa-L电流密度峰值（0mV）逐渐升高,分别为（-4.34±0.92）pA/pF、（-3.42±0.76）pA/pF、（-3.13±1.22）pA/pF。结论 rhBNP可降低心肌缺血再灌注期间心律失常的发生率,心肌缺血再灌注后ICa-L明显增高,rhBNP可使ICa-L下调,逆转电重构。     

山莨菪碱对兔缺血再灌注后心室肌细胞瞬间外向钾通道电流的影响

目的建立兔心肌缺血再灌注动物模型,研究山莨菪碱对兔在体缺血再灌注后心室肌细胞Ito的影响,探讨山莨菪碱抗再灌注心律失常的细胞学离子机制。方法45只新西兰大耳白兔随机分为3组：缺血再灌注动物模型组（I—R组,结扎冠脉左前降支30min后再开放120min）,山莨菪碱治疗组（Ani组,手术前1min动物耳缘静脉注射山莨菪碱5mg／kg）和假手术对照组（只开胸不结扎血管）。观察缺血再灌注期间室性心律失常（室早、室速和室颤）的发生率及持续时间。采用酶解的方法分离缺血部位心室肌外膜单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录Ito结果与I—R组比较,Alli组兔室速、室颤发生率及持续时间明显下降,其心律失常的评分明显低于I—R组（2．6±0．7比3．6±0．8,P〈0．05）。对照组、I—R组和Ani组Ito电流密度（＋60mV时）分别为（17．41±3．13）pA／pF（n=15）、（9．49±1．91）pA／pF（n=11）和（16．55±2．86）pA／pF（n=10）,I—R组与对照组相比显著下降（P〈0．01）,Ani组与I—R组相比显著升高（P〈0．01）。结论山莨菪碱可降低心肌缺血再灌注期间心律失常的发生率。心肌缺血再灌注后Ito明显下降,山莨菪碱预处理可使下降的Ito上调,逆转电重构,可能为山莨菪碱降低心律失常发生率的细胞学离子机制。     

缺血/再灌注对心肌细胞瞬间外向钾电流的影响

目的探讨在心肌缺血/再灌注后,瞬间外向钾电流（transientoutsidepotassiumcurrent,Ito）的变化及其在室性心律失常发生中的作用。方法以常规方法制备大鼠心肌缺血/再灌注模型,以酶解法分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察缺血10min和30min后,再灌注组的心室肌细胞Ito的变化,以正常心肌的Ito为对照组。结果缺血/再灌注组心室肌细胞Ito电流密度$C电压关系曲线下移,+70mV的Ito密度对照组为52.2±12.1pA/pF（n=11cells）,缺血10min和30min再灌注组分别为7.2±2.5pA/pF（n=9cells）和6.4±2.7pA/pF（n=10cells）,与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。其失活曲线右移,半数最大失活电位对照组为-60±14mV（n=9cells）,缺血10min和30min再灌注组分别为-58±12mV（n=8cells）和-50±12mV（n=9cells）,与对照组比较,缺血30min再灌注组显著减小（P<0.05）,而缺血10min再灌注组变化不明显（P>0.05）。缺血10min再灌注组Ito失活后再恢复过程较对照组显著减慢（P<0.05）,而缺血30min再灌注组有恢复趋势。结论缺血/再灌注心室肌细胞瞬间外向钾电流受抑制,可能为缺血/再灌注性心律失常发生的机制之一。     

磷酸肌酸钠对急性心肌梗死大鼠心律失常及钠电流的作用

目的探讨磷酸肌酸钠（CP）对急性心肌梗死（AMI）后大鼠心律失常及心室肌细胞钠电流（INa）的影响。方法采用大鼠心肌缺血再灌注致大鼠心律失常动物模型,以BL-420生物机能实验系统观察ECG的相关指标,并进行统计分析。大鼠开胸左前降支结扎造AMI,酶解分离心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术记录左前降支供血区心外膜细胞的INa。结果①CP组与对照组相比较,心肌缺血再灌注大鼠模型的室性早搏和室速均明显减少（n：10,P〈0．05）。②应用cP（20mg／kg）后与AMI组比较,INa峰值从（-4．82±1．91）nA下降到（-2．56±1．59）nA,差异有统计学意义（P〈0．01,n=6）。结论①CP对大鼠心肌缺血再灌注心律失常具有保护作用。②CP可显著降低AMI大鼠心室肌细胞钠电流的幅值。     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的 观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用。方法 选择高血脂SD大鼠36只,随机分为3组,即假手术组、I/R组和缺血后处理组,每组12只。制备大鼠心肌I/R模型。I/R组:收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min。缺血后处理组:缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min。假手术组:开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。用全自动生化仪测定血清肌酸激酶（CK）的含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物岐化酶（SOD）的活性。采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）的含量,用伊文氏蓝-红四氮唑（TTC）染色法测定心肌梗死的范围。结果 ①血清CK活性的测定:再灌注结束后,缺血后处理组和I/R组的活性CK的活性明显高于假手术组［分别为（712.94±20.68）、（946.58±27.43） vs （232.12±18.26）U/L,P<0.05,1 U=16.67 nkat］,缺血后处理组明显低于I/R组(P<0.05)。②血清SOD和MDA的含量:缺血后处理组血清SOD 的含量高于对照组(P<0.05);MDA的含量明显低于对照组(P<0.05)。③心肌梗死范围:再灌注结束后,缺血后处理组和I/R组的心肌缺血区与左室面积的比率无明显差异。缺血后处理组的心肌坏死区与缺血区的比率显著低于I/R组［分别为(25.3±6.6）% vs （39.2±7.1）%,P<0.05］。结论 缺血后处理对高血脂大鼠I/R心肌具有保护作用。     

黄芪对兔急性心肌梗死心室肌细胞钠通道电流的影响

目的 :研究黄芪对兔急性心肌梗死 （AMI）后心室肌细胞钠通道电流 （INa）的影响。方法 :采用结扎兔冠状动脉左前降支的方法建立 AMI动物模型 ,应用膜片钳全细胞记录方法 ,观察 AMI后 1周心外膜梗死区心肌细胞 INa的变化。结果 :AMI后 1周 INa的 I- V曲线明显上移。对照组 INa电流密度峰值 （- 30 m V）为 4 5 .5 0± 5 .33p A/ p F（n=12 ） ,AMI组为 2 2 .4 8± 4 .6 2 p A/ p F（n=14 ） ,显著低于对照组 （P<0 .0 1） ;黄芪组为 37.14± 3.79p A / p F（n=15 ） ,与 AMI组相比 ,显著增大 （P<0 .0 5 ）。结论 :AMI后 1周梗死区心室肌细胞 INa明显下降 ,黄芪可以使 AMI后下降的 INa趋于正常 ,逆转 AMI后形成的电重构。     

缺血再灌注期间不同时相氟比洛芬酯处理对乳鼠心肌细胞钠电流的影响

目的：研究缺血再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）期间不同时相（缺血时、缺血后再灌时）氟比洛芬酯处殚对乳鼠心肌细胞钠电流的影响。方法：实验分为四组：1组（对照组）为体外培养乳鼠心室肌细胞;Ⅱ组（I/R组）为相同的细胞,缺血3小时,再灌注1小时;III组（氟比洛芬酯缺血时处理组）在I/R缺血时相加入氟比洛芬哺（0.15μM）;IV组（氟比洛芬酯缺血后再灌注时处理组）在I/R再灌注时相加入氟比洛芬酯（0．15μM）。采用膜片钳全细胞模式分别记录并比较四组的钠电流。结果：和I组相比,II组存每一指令电压上都增大钠电流;在测试电压为-20mV的条件下,钠电流峰值电流密度从-375．47±70．31（pA/pF）增至-557．11±12786（pA/pF）（n=5,P〈f0.05）;稳态激活半激活电压（V1/2）分别为-4281±1．21mV和-3149±2．40mV（n=5,P〈005）;稳态欠活半激活电压（V1/2）分别为-7424±5．89mV和-68．70±6．26mV（n=5,P〈005）;通道失活后恢复T分别为2569±19．47ms和7．534±3．24ms（n=5,P〈0．05）。III、IV组钠电流峰值电流密度从-375．47±70．31（pA/pF）分别降至-208．80±121．44和-278．91±188．26（pA/pF）（n=5,P〈0．05）;通道稳念激活V1/2分别为-40．89±9．81mV和-39．49±3．70mV（n=5,P〉O05）;稳态失活V1/2分别为74．45±5．02mY和-75494±3．32mV（n=5,P〉0．05）;通道失活后恢复T分别为24．98±16．41ms和26．30±11．82ms（n=5,P〉005）。III、IV组之间各指标间的差异无统计学意义。结论：I/R处土型可以增大钠电流的峰值电流,并使电压电流曲线下移;减慢通道的时间依赖性激活,促进通道的电爪依赖性失活,失活后恢复变快。而在I/R缺血和再灌注两个时相使用氟比洛芬酯均能有效阻制钠通道的这螳改变。     

重组人脑钠尿肽后适应对兔急性缺血/再灌注心肌的保护作用

目的:探讨重组人脑利钠肽(rhBNP)后适应对兔急性缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用及其机制。 方法: 将36只健康日本大耳白兔随机分为3组（每组12只）。即假手术组、I/R组（缺血40 min后再灌注180 min）及BNP+I/R组（I/R前5 min以0.01 μg/kg静脉给予BNP）。假手术组开胸于左室支下穿线但不结扎,观察180 min结束;I/R组及BNP+I/R组:缺血40 min,分别再灌注180 min后处死。进行心肌酶学CK-MB含量检测,观察心肌HE染色后病理形态变化及BCI-2、Bax表达的检测。结果: 与假手术组相比,I/R组和BNP+I/R组CK-MB的水平均显著增高（P<0.01)。与I/R组相比,BNP+I/R组明显减少这些心肌酶的升高（P<0.01)。与假手术组相比,I/R组及BNP+I/R组均可见到凋亡细胞,但BNP+I/R组凋亡细胞明显减少。与假手术组相比,I/R组Bax的表达增加,Bcl-2的表达降低。与I/R组相比,BNP+I/R组 Bax的表达明显降低,而Bcl-2的表达明显升高。结论: 重组人脑钠尿肽可减少梗死后心肌的损伤;可以增加梗死后心肌细胞抑制凋亡基因（Bcl-2）的表达,从而减少心肌细胞的凋亡。     

辛伐他汀对急性心肌梗死兔的心室肌细胞钠离子通道电流的影响

目的 研究辛伐他汀预处理对兔急性心肌梗死（AMI）后24 h心室肌细胞钠离子通道电流的影响,并探讨他汀类药物抗心律失常的细胞学离子机制。方法 采用结扎兔冠状动脉左前降支的方法,建立AMI动物模型。将45只新西兰大耳白兔随机分为3组:心梗组、辛伐他汀治疗组［他汀组,手术前3 d给予辛伐他汀 5 mg/(kg·d)］及假手术对照组（只开胸不结扎血管）。采用酶解法分离心室肌外膜单个心室肌细胞;采用全细胞膜片钳技术,记录跨膜钠离子通道电流（INa）,同时应用全自动生化分析仪检测各组血脂的水平。结果 各组动物血脂的水平无显著差异。对照组、心梗组和他汀组的INa电流密度峰值（-30 mV）分别为(-42.78±5.48)pA/pF(n=16)、(-23.26±5.18)pA/pF(n=12)和(-39.23±5.45)pA/pF(n=13)。心梗组较对照组明显下降（P<0.01）,他汀组较心梗组明显升高（P<0.01）。另外,心梗组INa失活曲线左移,失活后恢复时间延长,他汀组这些异常也明显恢复。结论 AMI可导致梗死区心肌细胞INa明显下降,辛伐他汀预处理可减轻INa的异常变化,逆转电重构,而不依赖于降血脂的效应,可能为他汀类药物降低心律失常发生率的细胞学离子机制。     

缺血后处理对大鼠心室肌细胞内向整流钾电流和动作电位的影响

目的探讨缺血后处理（IPC）对大鼠心室肌细胞内向整流钾电流（IKI）和动作电位的影响及机制。方法实验分IPC组、缺血／再灌注（I／R）组、单纯灌流（SP）组，利用大鼠心脏建立离体灌注模型，采用胶原酶酶解法分离得到大鼠单心室肌细胞，采用膜片钳全细胞技术分别记录三组心室肌细胞电流和动作电位的变化。结果在-120mV和-30mV刺激电压水平，IKI电流密度：IPC组低于I／R组，I／R组高于SP组（P均〈0．05），IPC组同SP组无差异（P〉0．05）。与SP组和IPC组比较，I／R组静息电位明显升高（P〈0．05）；而动作电位幅度、20％动作电位时程、50％动作电位时程、90％动作电位时程均明显下降（P〈0．05）。而IPC组各值与SP组无差异（P〉0．05）。结论IPC可以降低大鼠缺血／再灌注心肌细胞IKI延长缺血／再灌注心肌细胞APD。     

稳心颗粒甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流和瞬时外向钾电流激活动力学的影响

目的研究步长稳心颗粒中甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)、瞬时外向钾电流(Ito)激活动力学的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,研究10 g/L甘松提取物对急性分离的成年大鼠心室肌细胞INa、Ito激活动力学的影响。结果①10 g/L甘松提取物使大鼠心室肌细胞INa峰值(INa,max)从-58.96±2.71 pA/pF降至-31.66±1.29 pA/pF(n=5,P<0.01);②10 g/L甘松提取物使Ito峰值(Ito,max)由3.40±1.52 pA/pF降到1.43±0.64 pA/pF(n=7,P<0.05)。10 g/L甘松提取物对INa和Ito的抑制率分别达38.2%和57.9%。结论10 g/L甘松提取物对大鼠心室肌细胞INa、Ito具有显著抑制作用。     

山莨菪碱对兔缺血再灌注后心室肌细胞L-钙离子通道电流的影响

目的研究山莨菪碱对兔在体缺血再灌注后心室肌细胞L-钙离子通道电流的影响,探讨山莨菪碱抗再灌注心律失常的细胞学离子机制。方法 45只新西兰大耳白兔按随机数字表法随机分为3组:缺血再灌注动物模型组(I-R组,结扎冠状动脉左前降支30min后再开放120min);山莨菪碱治疗组(Ani组,手术前1min给予动物耳缘静脉注射山莨菪碱5mg/kg);假手术对照组(只开胸不结扎血管)。采用酶解的方法分离缺血部位心室肌外膜单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录L-钙离子通道电流。结果 (1)I-R组、Ani组室性心动过速和心室颤动发生率均比对照组高,差异有统计学意义(P0.05);Ani组室性心动过速和心室颤动发生率明显低于I-R组,差异有统计学意义(26.7%(4/15)vs.40%(6/15),P0.05;6.7%(1/15)vs.26.7%(4/15),P0.05)。与对照组比较,I-R组心律失常评分升高,差异有统计学意义[(3.6±0.8)分vs.(1.1±0.3)分,P0.01];Ani组心律失常评分差异无统计学意义[(2.6±0.7)分vs.(1.1±0.3)分,P0.05]。(2)I-R组电流密度峰值(0mV)较对照组显著升高,差异有统计学意义[(-4.34±0.92)pA/pFvs.(-3.13±1.22)pA/pF,P0.05];Ani组电流密度峰值较I-R组明显下降,差异有统计学意义[(-3.25±0.79)pA/pFvs.(-4.34±0.92)pA/pF,P0.05]。Ani组电流密度峰值与对照组比较,差异无统计学意义[(-3.25±0.79)pA/pFvs.(-3.13±1.22)pA/pF,P0.05]。结论山莨菪碱可逆转缺血再灌注心室肌细胞的电重构,这可能是其降低心律失常发生率的细胞学离子机制。     

罗格列酮对四氧嘧啶介导的糖尿病家兔心室肌细胞L型钙通道电流的影响

目的探讨罗格列酮对家兔心室肌细胞L型钙通道电流(I_(CaL))的影响。方法四氧嘧啶建立糖尿病家兔模型后,利用酶解法急性分离心室肌细胞,用全细胞膜片钳技术观测糖尿病和罗格列酮对心肌细胞I_(CaL)的影响,并与正常家兔进行比较。结果 (1)正常组家兔心室肌细胞I_(CaL)电流密度[(-8.83±2.31)pA/pF]大于糖尿病组[(-8.84±1.98)pA/pF],但差异不具有统计学意义。(2)给予罗格列酮后正常和糖尿病家兔组心室肌细胞I_(CaL)[正常组:基线电流密度(-8.83±2.31 pA/pF)大于5 min电流密度(-4.17±1.89 pA/pF)和10 min电流密度(-5.54±1.63)pA/pF,糖尿病组:基线电流密度(-8.84±1.98)pA/pF大于5 ml‘n电流密度(-4.97±1.15)pA/pF和10 min电流密度(-3.89±1.06)pA/pF],各时段差异均有统计学意义(各组P<0.05)。(3)空腹血糖[(7.65±1.60)mmol/L]小于建模48 h[(17.72±9.15)mmol/L]及1周后空腹血糖[(20.84±9.48)mmol/L]。各时段胰岛素水平[空腹(23.45±9.22)mmol/L,48 h后(22.69±8.94)mmol/L,1周后(21.65±11.91)mmol/L]差异均无统计学意义(各组P>0.05)。结论正常家兔组I_(CaL)电流密度与糖尿病家兔组相似,提示糖尿病对心肌细胞I_(CaL)无明显影响;罗格列酮对心脏的作用不依赖于高血糖存在与否,提示罗格列酮可能通过某些与胰岛素水平有关的特定机制作用于心肌细胞;四氧嘧啶所致糖尿病模型是一种不完全等同于1型及2型糖尿病的独特模型,但去除了胰岛素抵抗的影响。该模型可以用来作为高血糖对心肌细胞离子通道影响的研究载体。     

阜外极化液对缺血再灌注乳鼠心肌细胞快钠通道电流的影响

目的探讨阜外极化液(Fuwai polarizing solution,FW)对缺血再灌注心肌细胞快钠通道(INa)的影响。方法实验分为缺血再灌注组(I/R)、Histidine-tryptophan-ke toglutarat液组(HTK)和阜外极化液组(FW)。选择培养至18-48h的SD乳鼠心肌细胞用于实验。I/R组细胞经模拟缺血缺氧3h、再灌1h处理;HTK组和FW组在模拟I/R过程中,分别加HTK液和FW液于细胞培养基中进行干预。用全细胞膜片钳技术检测INa的电流强度和门控特性。结果与I/R组和HTK组相比,FW组的INa的峰值电流密度明显降低(-305.9±64.1pA/pFvs-617.2±74.2pA/pF和-547.3±20.8,P<0.05),I-V曲线上移。HTK组较I/R组峰值电流密度降低,但两者没有统计学差异。与I/R组和FW组相比,HTK组的稳态激活曲线和失活曲线左移。各组半激活电压、激活曲线斜率、半失活电压、失活曲线斜率、失活后恢复曲线时间常数均无显著性差异。结论 FW液可抑制乳鼠心肌细胞I/R损伤后的INa通道电流,但不影响快钠通道的门控特性,这有利于减少细胞内钠钙超载,减轻I/R导致的心肌损伤。     

巨噬细胞移动抑制因子对HL-1细胞T型钙电流的调控

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）对心房肌细胞T型钙电流（T-type calcium channel current,ICa,T）的调控.方法 使用全细胞膜片钳和分子生物分析方法检测心房肌细胞ICa,T的表达.结果 在体外培养的心房肌细胞株（HL-1细胞）中,小鼠重组MIF（20、40 nmol/L,24 h）可明显抑制ICa,T的峰值电流,与对照组比较,差异均有统计学意义[峰值内向电流：（-17.5±2.9）pA/pF vs.（-27.9±3.4） pA/pF,P＜0.05;（-11.3±1.7）pA/pF vs.（-27.9±3.4）pA/pF,P＜0.01];并可损伤电压依赖的ICa,T激活,使T型钙通道α1G和α1H亚单位mRNA表达下调.而Src非特异性抑制剂genistein和特异性抑制剂PP1可逆转40 nmol/L MIF所致的ICa,T下调[genistein：（-11.3±1.7）pA/pF vs.（-16.1±0.8）,P＜0.05;PPI：（-11.3±1.7）pA/pFvs.（-19.0±3.2）pA/pF,P＜0.05].结论 MIF可能通过影响ICa,T参与心房颤动的病理过程,Src可能参与该信号转导途径.     

丹酚酸B对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和L型钙电流的阻滞作用

目的研究从丹参中分离提取的药物单体——丹酚酸B对大鼠心肌细胞上的瞬时外向钾电流(Ito)、内向整流钾电流(IK1)和L型钙电流(ICa,L)的电生理学作用。方法用酶解法分离大鼠心室肌细胞,全细胞膜片钳技术记录Ito、IK1和ICa,L。每个细胞采用加药前后自身对照,用含100μmol/L丹酚酸B的细胞外液灌流心室肌细胞,记录加药前、后的电流,所有数据均在细胞破膜后20min内完成。结果 100μmol/L的丹酚酸B对Ito和ICa,L具有抑制作用,使Ito和ICa,L最大激活峰值电流密度下降,电流密度-电压曲线下移;且丹酚酸B主要抑制Ito的快速电流成分Itof,而对Ito的缓慢电流成分Itos无明显作用。在60mV测试电压下,Itof的最大激活峰值电流密度从23.51±3.29pA/pF降为16.85±2.36pA/pF,抑制率为28.31%±10.6%(n=8,P0.05)。在-10mV测试电压下,100μmol/L丹酚酸B作用后ICa,L的最大激活峰值电流密度从-8.66±-2.40pA/pF降为-5.91±-2.14pA/pF,抑制率为31.84%±10.23%(n=11,P0.05)。丹酚酸B使Ito通道失活后的恢复减慢,但不改变ICa,L的通道动力学。丹酚酸B对IK1无显著作用。结论丹酚酸B对Ito和ICa,L具有阻滞作用,而对IK1无显著作用。