Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织Bax与Bcl-2表达的影响

目的研究Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织Bax与Bcl-2表达的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组(20)、糖尿病组(20)和Wortmannin处理组(20),通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病模型建立后,检测血糖、血脂及体重的改变;采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠肺组织中Bax与Bcl-2表达的变化情况。结果与对照组比较,糖尿病模型组大鼠血糖、血脂值明显增高;与糖尿病模型组比较,Wortmannin处理组大鼠血糖、血脂值明显降低。免疫组织化学和Western blot结果显示,糖尿病模型组大鼠肺组织Bax的表达量显著高于对照组,而Bcl-2的表达量则显著低于对照组;而与糖尿病模型组比较,Wortmannin处理组大鼠肺组织Bax的表达量显著降低,而Bcl-2的表达量则显著升高(P0.01)。结论PI3K/Akt信号通路可能通过调节Bax与Bcl-2的表达参与糖尿病啼组织病变的发生发展。     

Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究Wortmannin对糖尿病大鼠肺组织IL-1与IL-6表达的影响。方法 60只大鼠随机分为对照组(20)、糖尿病组(20)和Wortmannin处理组(20),通过高糖、高脂饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病大鼠模型。糖尿病模型建立后,检测血糖、血脂及体重的改变;采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组大鼠肺组织中IL-1与IL-6表达的变化情况。结果糖尿病模型组大鼠血糖、血脂值比对照组明显增高(P0.01),而Wortmannin处理组比糖尿病模型组明显降低(P0.01)。免疫组织化学和Westernblot结果显示,糖尿病模型组大鼠肺组织Ⅱ-1与Ⅱ-6的表达量均显著高于对照组(P0.01),而Wortmannin处理组比糖尿病模型组则显著降低。结论 PI3K/Akt信号通路可能通过调节Ⅱ-1与IL-6的表达参与糖尿病肺组织病变的发生发展。     

丝胶对2型糖尿病大鼠胰腺胰岛素PI3K-Akt信号通路的调节作用

目的探讨丝胶是否通过影响胰腺胰岛素PI3K-Akt信号通路发挥降血糖的作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组12只。采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素(35mg/kg,2次,1次/d)连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型,模型成功标准是空腹血糖≥11.1mmol/L。模型成功建立后,丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃35d。采用ELISA法检测大鼠血清脂联素水平,Western blotting法和Real-time PCR法分别检测大鼠胰腺胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和Akt蛋白和mRNA的表达情况。结果与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠血清脂联素水平,胰腺IR、IRS-1、PI3K、Akt蛋白和mRNA的表达明显升高(P0.01,P0.05)。结论丝胶可通过上调糖尿病模型大鼠胰腺IR、IRS-1、PI3K和Akt的表达,改善糖尿病时胰腺胰岛素PI3K-Akt信号转导通路的异常,从而发挥降低血糖的作用。     

小檗碱通过PI3K/Akt通路调控水通道蛋白-1表达改善糖尿病大鼠肾功能

目的 :研究小檗碱对糖尿病大鼠肾水通道蛋白-1(AQP-1)表达的影响,探讨小檗碱保护糖尿病肾功能的作用机制。方法 :以髙脂高糖饮食结合低剂量注射链脲佐菌素的方式诱导建立糖尿病肾病大鼠模型,成模大鼠随机分为糖尿病肾病组和小檗碱给药组,另设正常对照组,大鼠饲养6个月后取肾,通过H-E染色和PAS染色观察肾组织病理变化,应用免疫组织化学显色观察各组大鼠肾组织中AQP-1表达的变化。应用免疫印迹检测小檗碱对AQP-1、PI3K和Akt蛋白含量的影响。结果 :糖尿病组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞空泡样改变,糖原颗粒聚集,小檗碱可明显减轻糖尿病造成的肾病理损害。免疫组织化学显色和免疫印迹结果证实小檗碱增加糖尿病肾组织中AQP-1的表达量。小檗碱激活PI3K/Akt信号通路。结论 :小檗碱通过PI3K/Akt信号通路调控肾组织中AQP-1的表达进而改善糖尿病肾病症状。     

磷脂酰肌醇3激酶对哮喘大鼠气道上皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达的调控作用

目的： 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂wortmannin对哮喘大鼠支气管上皮细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法: 24只成年哮喘大鼠随机分成对照组、哮喘组以及PI3K抑制剂wortmannin干预组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数及嗜酸性粒细胞进行计数,免疫组织化学检测大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白的表达,RT-PCR检测肺组织iNOS mRNA的表达,分光光度计检测肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量。结果: 哮喘组大鼠BALF细胞总数计数及嗜酸性粒细胞分类均高于对照组;PI3K抑制剂wortmannin干预组BALF嗜酸性粒细胞计数及分类明显低于哮喘组,差异显著。哮喘组肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量高于对照组,PI3K抑制剂wortmannin干预组肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量低于哮喘组。哮喘组大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白及肺组织iNOS mRNA表达较对照组明显增强,但PI3K抑制剂wortmannin组iNOS蛋白及mRNA表达均明显弱于哮喘组。结论: PI3K可调节哮喘大鼠气道iNOS表达,影响哮喘气道炎症反应。     

PI3K/Akt信号通路及内质网应激在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中的作用

目的观察磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长停滞及DNA损伤基因(CHOP/GADD153)在四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化中的表达并探讨其可能的作用。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、肝纤维化模型(皮下注射40%CCl4橄榄油溶液)4及8周组。HE染色法观察肝组织病理形态学;用real-time PCR技术检测肝脏内GRP78及CHOP mRNA的表达;用Western blot检测肝脏内PI3K/Akt信号通路中Akt1、磷酸化Akt1及内质网应激相关蛋白GRP78及CHOP的表达;用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测细胞凋亡。结果与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝脏内GRP78及CHOP mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05),而肝脏内Akt1和磷酸化Akt1蛋白的表达则较正常大鼠显著降低(P0.05);与正常组大鼠比较,肝纤维化模型4及8周组大鼠肝细胞凋亡显著升高(P0.05)。结论 PI3K/Akt信号通路及内质网应激可能在肝纤维化大鼠肝细胞凋亡中发挥了重要作用。     

不同浓度红景天苷对Ⅱ型糖尿病大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇-3-激酶及葡萄糖转运蛋白-4表达的影响

目的:观察不同浓度红景天苷对Ⅱ型糖尿病大鼠血糖、血脂及骨骼肌磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)表达含量的影响,探讨红景天苷降糖改善胰岛素抵抗的可能机制。方法:采用小剂量链脲佐菌素加高脂高热量饲料喂养方法建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型,将建模成功后大鼠随机分为糖尿病模型组(DM),二甲双胍治疗组,红景天苷高、中、低剂量组。按规定药物剂量灌胃12周后测血糖、血脂及胰岛素水平,处死大鼠,取后肢骨骼肌,免疫印迹检测组织中PI3K和GLUT4的表达水平。结果:与对照组比较,DM组大鼠骨骼肌细胞中PI3K和GLUT4表达明显降低;与DM组比较,红景天苷各治疗组骨骼肌细胞中PI3K和GLUT4的表达明显增强。结论:红景天苷可能通过增强大鼠骨骼肌组织细胞中PI3K和GLUT4的表达以改善Ⅱ型糖尿病胰岛素抵抗。     

大黄糖络丸通过调控PI3K-Akt/NF-κB信号通路减轻糖尿病大鼠大血管炎症反应

目的：基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）-蛋白激酶B(PKB/Akt)/核因子κB(NF-κB)信号通路,探讨大黄糖络丸（RSP）防治Zucker糖尿病肥胖（ZDF）大鼠大血管炎症反应的作用机制。方法：15只雄性ZDF(fa/+)大鼠作为对照组;高脂饲料诱导成模的75只雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组,高、中、低剂量RSP组,以及二甲双胍组,每组15只。药物干预12周后,处死大鼠,分离血清,检测高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）水平;ELISA法检测大鼠血清CD4、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察大鼠腹主动脉组织病理改变;免疫组化染色检测腹主动脉中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)蛋白表达;RT-qPCR检测大鼠腹主动脉中PI3K、Akt和NF-κB p65的mRNA表达;Western blot观察腹主动脉组织中PI3K、Akt、p-Akt、p-IκB和NF-κB p65蛋白水平。结果：与模型组相比,RSP显著降低糖尿病大鼠空腹血糖及LDL-C、TG和TC水平（P<...     

减重手术通过激活PPARα抑制氧化应激改善糖尿病大鼠肾功能

目的探讨减重手术对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法 SPF级SD大鼠45只,随机分为假手术组(Sham组)、糖尿病肾损伤模型组(DN组)及减重手术干预组(DJB组)。除Sham组外,其余两组大鼠建立糖尿病肾损伤模型,模型成功后DJB组大鼠给予减重手术治疗;生化检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;HE染色观察肾脏组织病理学变化;ELISA检测大鼠肾组织中超过氧化物歧化酶(SOD)与活性及丙二醛(MDA)含量;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测肾组织过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)表达情况;Western blot法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、Akt及pAkt的表达。结果经减重手术干预后,与DN组相比,DJB组大鼠Scr、BUN表达明显下降(P0.05),肾脏损伤明显减轻,SOD活性升高而MDA含量降低(P0.05);肾脏细胞凋亡数量降低且PPARα表达增加(P0.05);减重手术干预后,大鼠肾脏组织中PI3K及p-Akt表达明显升高(P0.05)。结论减重手术可以有效减轻糖尿病大鼠肾功能损伤,其作用机制可能与激活PPARα、抑制氧化应激有关。     

TrkA对小鼠过敏性气道反应肺组织Akt/PKB的调节作用

目的 探讨神经生长因子(NGF)受体酪氨酸激酶(TrkA)是否调控丝/苏氨酸激酶(Akt/PKB)磷酸化表达来参与小鼠肺组织过敏性免疫炎性变化。方法 制备卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠过敏性免疫炎症模型,应用HE肺组织病理染色确定模型成功,采用免疫组织化学、免疫荧光和定量RT-PCR等方法,观察给予TrkA抗体后小鼠肺组织磷酸化Akt(p-Akt)表达变化。结果 p-Akt在过敏性免疫炎症模型小鼠肺组织中表达水平高于正常对照组,TrkA阻断后p-Akt在小鼠肺组织中表达水平明显低于过敏性免疫炎症模型小鼠(p<0.05)。结论 TrkA受体参与NGF介导Akt/PKB传导的小鼠肺部过敏性免疫炎症反应。     

c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂对哮喘小鼠肺组织IL-8表达的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂(SP600125)对哮喘小鼠肺组织白介素-8(IL-8)表达的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和SP600125组,制作哮喘模型及干预处理后,处死小鼠,取肺组织,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组小鼠肺组织内IL-8的表达。结果免疫组化结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.75±0.12),显著高于对照组(0.25±0.03,p0.01),而SP600125组小鼠明显低于(0.44±0.06,p0.01)哮喘组。Western blot结果显示,哮喘组小鼠肺组织IL-8表达的平均光密度值为(0.51±0.08),显著高于对照组(0.15±0.02,p0.01);而SP600125组与哮喘组相比明显降低(0.29±0.04,p0.01)。结论 c-Jun氨基末端激酶选择性抑制剂能降低哮喘小鼠肺组织IL-8的表达。     

PI3K对心梗大鼠TNF-α表达的影响

目的 探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)抑制剂LY-294002对心梗大鼠心肌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响。方法 45只SD大鼠,随机分为假手术组、心肌梗死组和PI3K抑制剂组。分别用Western blot和RT-PCR方法检测各组大鼠梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白和TNF-α mRNA表达变化。结果 心肌梗死组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平显著高于假手术组(p<0.05),PI3K抑制剂组心肌梗死区及其周围心肌TNF-α蛋白、TNF-α mRNA表达水平则明显低于心肌梗死组(p<0.05)。结论 PI3K能够上调心肌梗死大鼠TNF-α的表达。     

PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌肥厚中的表达

目的:观察PTEN/PI3K信号通路在大鼠心肌组织中的表达,探讨该通路在心肌肥厚发生、发展中的作用.方法:皮下注射异丙肾上腺素(ISO)建立大鼠心肌肥厚模型,测定大鼠体质量、心质量、心肌细胞横径和横截面积;采用免疫组织化学方法检测大鼠心肌组织中肥大标志因子β-肌球蛋白(β-MHC)及PTEN/PI3K信号通路上PTEN、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、死亡相关因子(BAD)蛋白表达;利用计算机图像处理系统对各种蛋白进行定量分析.结果:模型组大鼠全心质量/体质量、左室质量/体质量、心肌细胞横径、心肌细胞截面积较对照组明显增加.模型组大鼠的心肌组织与对照组相比,β-MHC、PI3K与PKB表达水平均升高,PTEN和BAD表达水平明显降低.结论:PTEN在心肌肥厚中表达明显降低,起负性调节作用;PI3K/PKB信号通路激活,可能是导致心肌肥厚的机制之一,BAD可望成为生物学治疗靶点.     

芦荟凝胶多糖对急性放射性皮肤损伤模型的修复作用及机制研究

目的研究芦荟凝胶多糖基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对急性放射性皮肤损伤模型的修复作用。方法选取40只雄性Wistar大鼠,10只为正常组(等体积生理盐水),其余30只建立急性放射性皮肤损伤模型,随机分为模型组、低剂量组、高剂量组,每组10只。模型组和正常组均给予等体积生理盐水干预,低剂量组、高剂量组分别以单层纱布浸润0.4 mg/mL、0.8 mg/mL的芦荟凝胶多糖外敷干预。记录创面愈合时间、放射性皮肤损伤评级,检测创面微血管密度、血管内皮生长因子(VEGF)含量,病理学观察创面组织细胞形态,Western blot检测PI3K-Akt-mTOR信号通路相关蛋白表达。结果低剂量组和高剂量组创面愈合时间均短于模型组,且高剂量组创面愈合时间显著短于低剂量组(P<0.05);与模型组相比,正常组大鼠0级较多,Ⅳ级较少;低剂量组和高剂量组大鼠Ⅳ级较少(P<0.05)。模型组、低剂量组、高剂量组创面微血管密度、VEGF、PI3K、Akt蛋白表达量低于正常组,mTOR蛋白表达量高于正常组;低剂量组、高剂量组创面微血管密度、VEGF、PI3K、Akt蛋白表达量高于模型组,mTOR蛋白表达量低于模型组;高剂量组创面微血管密度、VEGF、PI3K、Akt蛋白表达量高于低剂量组,mTOR蛋白表达量低于低剂量组。结论高剂量芦荟凝胶多糖可通过调控PI3K-Akt-mTOR信号通路促进急性放射性皮肤损伤模型创面新生血管形成,加快创面修复。     

RhoA/Rho激酶在2型糖尿病大鼠肝脏纤维化中的作用

目的阐明RhoA/Rho激酶在糖尿病大鼠肝纤维化中的作用。方法通过高脂饮食和小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg/kg)腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。实验分为对照组、糖尿病组和法舒地尔干预组(法舒地尔10 mg/(kg·d),分两次腹腔注射)24周末。测定血糖、血脂、谷草转氨酶和谷丙转氨酶;Masson染色和羟脯氨酸测定评估肝胶原沉积;RT-PCR测定转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达;免疫组化测定TGF-β1蛋白表达;Western blot测定肝组织肌球蛋白磷酸酯酶靶点亚单位1磷酸化(p-MYPT1)水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血糖、血脂和转氨酶显著增高,肝组织大量胶原沉积,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著上调(P0.01)。与糖尿病组比较,法舒地尔干预组大鼠转氨酶降低,肝胶原沉积明显减轻,p-MYPT1水平、TGF-β1与CTGF mRNA表达显著下降(P0.01)。结论高血糖激活了肝组织RhoA/Rho激酶,通过调控TGF-β1/CTGF表达,在糖尿病肝纤维化中起着重要作用。     

磷脂酰肌醇3激酶在支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞中的表达

 目的： 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）的表达。方法: 根据随机化分配原则将16只Wistar大鼠随机均分成2组，即哮喘组和正常对照组；模型建立后分别从每只大鼠分离培养ASMC，流式细胞检测方法检测ASMC的生长分数，用免疫细胞化学荧光染色及Western blotting方法进行PI3K表达的检测，并利用图像分析系统进行半定量对比分析。结果: 流式细胞仪检测发现哮喘组ASMC的S+G2/M期细胞所占细胞总数的百分比 (27.90±3.44) %显著高于正常对照组(13.00±1.56)%,P<0.05；免疫细胞化学荧光染色及Western blotting方法检测发现哮喘组和正常对照组ASMC胞浆内均有PI3Kp85阳性表达，且哮喘组的表达明显高于正常对照组；大鼠ASMC中PI3K的表达与大鼠ASMC的生长分数呈显著正相关。 结论: PI3K表达的增加可能在哮喘ASMC增殖中起重要作用。     

ROCK通过抑制PI3K/Akt通路促进高糖诱导的心肌细胞凋亡

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋激酶(ROCK)是否通过调控PI3K/Akt信号通路参与高糖诱导的原代心肌细胞凋亡。方法:培养原代Wistar乳鼠心肌细胞,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)免疫组化法进行鉴定;建立心肌细胞高糖模型,采用5.5、33和40 mmol/L葡萄糖作用于细胞48 h。采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR检测各组心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达水平;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western blot检测ROCK1、ROCK2、cleaved caspase-3、Bcl-2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平;为了证实ROCKs对PI3K/Akt信号通路的调控作用,将细胞分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖处理细胞)和高糖加Y27632(ROCK抑制剂)组,Western blot检测ROCK1、ROCK2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平。结果:高糖培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞相对活力分别为(79.71±2.43)%和(68.41±7.49)%,与对照组相比显著降低(P<0.05)。各组细胞培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组ROCK1和ROCK2的mRNA相对表达量较对照组显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率均显著增加(P<0.05)。与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组的ROCK1和ROCK2蛋白表达增高(P<0.05),caspase-3活化片段的蛋白水平增加(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达降低(P<0.05)。3组间心肌细胞PI3K与Akt蛋白水平的差异无统计学显著性,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞p-Akt蛋白的水平较对照组降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖加Y27632组的ROCK1和ROCK2表达被抑制;3组间心肌细胞PI3K和Akt的蛋白水平差异无统计学显著性;与对照组相比,高糖组的p-Akt蛋白水平降低(P<0.05),高糖加Y27632组的p-Akt蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:高糖环境下,ROCK可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,降低了p-Akt水平,从而促使心肌细胞凋亡的发生。     

LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1与Nephrin表达的影响

目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与肾小球足细胞跨膜蛋白(Nephrin)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测3组大鼠肾组织MCP-1与Nephrin蛋白的表达,RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织MCP-1 m RNA与Nephrin m RNA的表达。结果模型组肾组织MCP-1蛋白和m RNA的表达量显著高于假手术组(P0.05),而LY294002处理组明显低于模型组(0.05)。模型组肾组织Nephrin蛋白和m RNA的表达量显著低于假手术组(0.05),而LY294002处理组显著高于模型组(0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的表达,上调Nephrin的表达。     

CD151-整合素α3/α6复合体促人脐静脉内皮细胞增殖及其分子机制

目的:研究CD151-整合素α3/α6复合体对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的影响及机制。方法:将重组腺相关病毒介导CD151基因(rAAV-CD151)和整合素α3/α6结合缺陷的突变CD151基因(rAAV-CD151-AAA194-196)转染HUVEC。免疫共沉淀检测CD151-整合素α3/α6复合体;Western blot检测CD151、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、丝/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)的表达;MTT法检测CD151对HUVEC增殖的影响。结果:CD151组和CD151突变组的CD151蛋白表达水平较对照组、绿色萤光蛋白组(GFP组)明显增加(P<0.05)。CD151组的CD151-整合素α3/α6复合体、PI3K和p-Akt表达水平明显高于对照组和GFP组(P<0.05);CD151突变组的CD151-整合素α3/α6复合体、PI3K和p-Akt表达水平明显低于对照组和GFP组(P<0.05)。CD151组的细胞增殖明显高于对照组和GFP组,CD151突变组的细胞增殖能力最低。结论:过度表达CD151蛋白可以促进HUVEC的增殖,其机制是过度表达的CD151分子与整合素形成复合体增加,使PI3K和p-Akt表达增加。     

磷脂酰肌醇3激酶抑制剂BEZ235联合阿霉素处理促进HepG2细胞凋亡并抑制荷瘤小鼠肿瘤生长

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂BEZ235联合阿霉素(Dox)对肝癌细胞系HepG2细胞的协同抑制作用。方法 HepG2细胞分为对照组、BEZ235处理组、Dox处理组以及BEZ235联合Dox处理组,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色检测HepG2细胞的凋亡;Western blot法检测各处理因素对HepG2细胞Akt磷酸化的影响;制备荷瘤小鼠模型,观察各种处理因素对肿瘤生长的影响,HE染色观察肿瘤细胞形态特点,免疫组织化学染色检测各组肿瘤组织中活化caspase-3的表达。结果 与对照组相比,单独给予BEZ235或Dox都能够诱发细胞凋亡,但BEZ235联合Dox处理促凋亡作用更明显;联合应用BEZ235和Dox处理能下调磷酸化Akt(p-Akt)的表达,并显著抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,促进活化caspase-3表达。结论 BEZ235联合Dox能够诱发HepG2细胞凋亡并抑制荷瘤小鼠肿瘤生长。