神经病理性疼痛脊髓背角GLT-1及GLAST表达的变化

目的:观察神经病理性疼痛大鼠脊髓背角GLT-1及GLAST表达变化对疼痛的影响。方法:选取雄性SD大鼠80只随机分为4组,A组(n=10)为L5背根切断假手术组,B组(n=30)为L5背根切断组,C组(n=10)为坐骨神经周围植管与药物溶剂组,D组(n=30)为坐骨神经周围植管与给药组。通过机械刺激的行为学观察确立病理性神经痛形成过程,采用免疫组化进行细胞定量。结果:A及C组胶质细胞GLT-1及GLAST表达无变化。B、D组痛敏形成后脊髓背角胶质细胞GLT-1及GLAST的胞内外表达未发生改变;B及D组小胶质细胞GLAST术后4 d表达增加至7 d后逐渐下降,而星型胶质细胞GLT-1术后6 d表达明显增加,直至14 d仍持续增高。结论:脊髓背角胶质细胞GLT-1及GLAST不存在胞吞现象,小胶质细胞参与启动病理性神经痛但不维持其发展,星型胶质细胞主要维持病理性神经痛发展,TNF-α介导病理性神经痛大鼠脊髓背角GLT-1及GLAST表达并诱导胶质细胞参与和维持病理性神经痛。     

运动训练对脊髓损伤后痉挛大鼠脊髓内钾-氯离子协同转运体2表达的影响

目的:研究运动训练对脊髓损伤(SCI)后痉挛大鼠行为学表现及脊髓内钾-氯离子协同转运体2(KCC2)表达的影响,探讨KCC2在运动训练的解痉效应中的作用。方法:将30只雌性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验组。采用改良Allen撞击法建立脊髓损伤后痉挛模型,使用BBB评分、Ashworth评分来评估三组大鼠术后行为学变化,并于术后5周用免疫组化技术检测各组大鼠损伤远段脊髓KCC2表达。结果:假手术组术后行为学评分一直保持正常。术后1d—5周,对照组和实验组的BBB评分均持续升高,且2组组内不同时间点的BBB评分差异均有显著性意义(P0.05)。术后2—5周,实验组评分均高于对照组,且差异均有显著性意义(P0.05)。对照组和实验组在术后1周左右出现痉挛,后痉挛程度逐渐加重,至术后5周左右降低,2组组内不同时间点的Ashworth评定结果差异均有显著性意义(P0.05)。术后3—5周,对照组评定等级均高于实验组,差异有显著性意义(P0.05)。三组大鼠脊髓运动神经元胞膜上KCC2表达水平比较,组间差异有显著性意义(P0.05)。与假手术组相比,其余两组大鼠KCC2蛋白表达下调(P0.05);与对照组相比,实验组能够明显上调KCC2蛋白的表达(P0.05),但仍低于假手术组(P0.05)。结论:运动训练可以促进脊髓损伤后运动功能恢复,有效缓解痉挛,并可抑制KCC2表达的下调,运动训练的解痉效应可能是通过增加KCC2表达实现的。     

豆腐果苷对慢性神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏及脊髓背角p-CREB表达的影响

目的:观察豆腐果苷(helicid)对坐骨神经慢性压迫伤(CCI)后大鼠热痛觉过敏的影响及对脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(phosphorylated cAMP response element binding protein,P-CREB)表达的影响.方法:32只180～220 g Wistar雄性大鼠随机分为4组(n=8);分别为Sham组(假手术组)、CCI组(CCI模型组)、H1组(CCI 10天后豆腐果苷,25 mg·kg-1·d-1×10 d灌胃)和H2组(CCI 10天后豆腐果苷,50 mg·kg-1·d-1×10d灌胃).4组分别于CCI手术前1天、CCI手术后1、3、5、7、9、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20天进行热板实验、测后肢回缩时间(PWL).CCI后20天取L4、5脊髓,免疫组织化学染色,计数p-CREB免疫反应阳性(p-CREB-IR)神经元数量.结果:第一部分:CCI手术后第9天,Sham组、CCI组、H1组、H2组分别与术前PWL基础值比较,Sham组无差异(P>0.05),CCI组、H1组、H2组均有差异(P<0.05),且下降达30%以上;CCI手术后第9天,CCI组、H1组、H2组分别做PWL值组间两两比较均无差异(P>0.05),证实CCI模型制作成功.给药后第1-10天,H1组、H2组分别与CCI组做组间比较,PWL值增高,H2组第3天已有差异,H1组第5天开始有差异,两组PWL值增高至第7天达峰值,后一直保持稳定,H2组较H1组保持较高水平.第二部分:脊髓背角p-CREB免疫反应阳性神经元细胞计数比较:与Sham组比较,CCI组、H1组和H2组计数明显升高,有差异(P<0.01);H1组和H2分别与CCI组比较,数量较之为少(P<0.01);H1组计数稍大于H2组,但无差异;即CCI>H1>H2>Sham组.结论:口服豆腐果苷能剂量依赖性提高CCI大鼠热痛阈值,降低热痛觉过敏,并与影响脊髓背角P-CREB的表达有关.     

曲马多抑制大鼠神经病理性痛和脊髓背角NR2B表达

目的:研究曲马多对神经病理性痛(neuropathic pain,NP)大鼠的镇痛作用及对脊髓背角N-甲基-D-天门冬氨酸(N-Methyl-D-Aspartate,NMDA)受体NR2B亚基表达的影响.方法:雄性wistar大鼠,随机分为3组(每组10只):假手术组(Sham operation,SO组)、NP模型组(NP组)、曲马多处理组(Tramadol组,T组).NP模型采用慢性坐骨神经压迫损伤的方法制作.各组大鼠分别于术前和术后3、7、10、14d测术侧后爪机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).T组于术后3d开始腹腔注射曲马多注射液(20 mg/kg),术后14d取大鼠脊髓背角用免疫荧光法与RT-PCR方法检测NR2B蛋白和mRNA表达水平.结果:与SO组比较,NP组术后痛阈明显降低,NR2B表达水平明显升高(P＜ 0.05).与NP组比较,T组术后痛阈升高,NR2B表达水平明显降低(P＜0.05).T组和SO组比较,痛阈和NR2B表达水平差异无统计学意义.结论:曲马多可反转NP模型脊髓背角的NR2B表达上调并具有镇痛作用.     

电针对神经病理性疼痛大鼠背根神经节及脊髓P2X3受体的影响

目的:探究电针对坐骨神经挤压损伤(chronic constriction injury,CCI)所致神经病理性疼痛大鼠坐骨神经节(DRG)及脊髓P2X3受体的影响并比较同侧电针与对侧电针的差异。方法:选取40只成年雄性SD大鼠,随机分为假模组、模型对照组、对侧电针组、同侧电针组。电针组于造模后第7天给予电针治疗,连续电针7天。所有动物在造模前(第0天)及造模后3、7、10、14天测量机械缩足阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)。造模14天后运用免疫荧光技术检测各组大鼠L4~6DRG细胞及L4~5脊髓P2X3受体表达情况。结果:CCI造模后大鼠MWT值和TWL值出现明显降低,电针治疗后,MWT值和TWL值均有不同程度的提高(P<0.01),且同侧电针组与对侧电针组无明显差异。CCI损伤后DRG及脊髓P2X3表达上调,对侧电针组和同侧电针组蛋白阳性神经元总数少于模型对照组(P<0.01)。结论:电针可以减轻外周神经损伤后引起的痛觉过敏,电针的镇痛作用可能是通过降低DRG及脊髓的P2X3受体表达来实现的,并且对侧电针与同侧电针有类似的镇痛作用。     

氯离子转运体在神经病理性疼痛大鼠背根神经节上表达的研究

目的:为了探讨氯离子转运体的表达及其功能在神经病理性疼痛的产生和维持中的作用。方法:建立大鼠坐骨神经压迫模型(chronic constriction injury,CCI);检测大鼠热刺激缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);应用免疫组化、Western Blot技术检测钠-钾-氯共转运体1(sodium-potassium-chloride co-transorter 1,NKCC1)和钾-氯共转运体2(potassium-chloride co-transorter2,KCC2)在CCI模型背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元上表达的改变;应用氯离子荧光探针MQAE(N-Ethoxycarbonylmethyl-6-methoxyquinolinium bromide)检测DRG神经元氯离子浓度的变化。结果:(1)CCI组大鼠TWL较正常对照组明显缩短(P<0.01,n=10),至术后21天测试结束仍较明显(P<0.05,n=10)。假手术组与正常组差异无统计学意义。(2)正常情况下,NKCC1微弱表达于DRG大、中、小型神经元,KCC2未见表达。CCI模型术后第7天、14天、21天,NKCC1表达增加,KCC2未见表达。(3)CCI组大鼠术后第7天DRG、NKCC1阳性细胞计数、中型神经元显著增加(P<0.01,n=1000);术后第14天,中、小型神经元增加(P<0.01,n=1000);术后第21天,中型神经元增加(P<0.01,n=1000)。(4)CCI术后14、21天DRG神经元NKCC1蛋白表达显著增加。(5)CCI术后7、14天DRG神经元中氯离子浓度明显升高(P<0.05,n=1000)。结论:神经病理性疼痛发生时,NKCC1在DRG神经元表达异常增加,引起细胞内Cl-浓度升高,继而可能参与了介导初极感觉外周末梢去极化(primary afferent depolarization,PAD)或/和诱发初极感觉中枢末梢端的背根反射(dorsal root reflexes,DRRs)引发痛觉过敏和异常疼痛产生。     

α_2肾上腺素受体在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角中的表达

目的:研究α2肾上腺素受体(α2-AR)不同亚型在神经病理性疼痛大鼠中的表达变化规律及其在神经病理性疼痛形成中作用。方法:雄性6周龄SD大鼠分为对照组、假手术组和保留性脊神经损伤模型组(spared nerve injury,SNI组)。采用蛋白质免疫印迹法(Western blot法)和RT-PCR法测定α2A-AR、α2B-AR和α2C-AR在腰膨大段脊髓背角中的表达。结果:(1)在蛋白水平三个亚型在正常大鼠均有表达,主要是以α2A-AR为主;(2)与正常组和假手术组比较,SNI神经病理性疼痛组α2A-AR的蛋白表达明显下调(P<0.01,n=6),而α2B-AR和α2C-AR蛋白表达则没有明显的变化(P>0.05,n=6)。(3)在m RNA水平,三个亚型在三组表达没有明显的变化(P>0.05,n=5)。结论:在神经病理性疼痛条件下,脊髓背角α2A-AR受体亚型明显下调,α2B-AR和α2C-AR没有明显变化,表明这种下调仅发生在翻译水平而非转录水平。α2A-AR下调可能在外周神经损伤所引起的神经病理性疼痛中发挥作用。     

大鼠脊髓背角TRPV4在背根神经节持续受压致神经病理性疼痛中的作用

目的:探讨大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)持续受压(chronic compression of right side dorsal root ganglion,CCD)后脊髓背角瞬时感受器电位离子通道4(TRPV4)基因及蛋白变化,明确脊髓背角TRPV4在CCD致神经病理性疼痛中的作用。方法:采用健康成年雄性Wistar大鼠,共36只,随机分为3组,分别为空白对照组、CCD手术组、CCD+钌红组。制备大鼠背根神经节持续受压模型,于术前1天、术后第7天、给药前及给药2h后,测量大鼠机械刺激缩爪反应阈值,观察机械痛阈的变化;利用RT-PCR及Western Blot技术检测各组大鼠手术侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达的变化。结果:与空白对照组相比,术后第7天,CCD组大鼠术侧机械痛阈值明显下降(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高(P0.05);与给药前相比,给予钌红2h后,术侧机械痛阈值明显升高(P0.001),同侧脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达下降(P0.05)。结论:CCD后大鼠术侧机械痛阈下降,脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达升高;钌红可部分逆转CCD后痛觉过敏,部分降低脊髓背角TRPV4基因及蛋白表达。脊髓背角TRPV4参与CCD后大鼠神经病理性疼痛形成。     

氯胺酮对神经病理性疼痛脊髓背角生长相关蛋白表达的影响

目的：观察氯胺酮对脊神经结扎大鼠脊髓背角生长相关蛋白-43（GAP-43）表达的影响。方法：25只雄性S D大鼠,随机分成5组;假手术组,氯胺酮Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,生理盐水组。行为学上应用von Frey Hair测定上述各组机械缩足时间变化（n=5）,采用免疫组织化学方法测定脊髓背角GAP-43表达的变化（n=5）。结果：氯胺酮组和生理盐水组,1周后均形成神经病理性疼痛模型。腹腔注射不同剂量氯胺酮均可逆转机械性痛觉过敏,氯胺酮组机械缩足时间与生理盐水组比较有显著统计学意义（P（0.001）。各组GAP-43表达随氯胺酮药物浓度增大而含量增加,生理盐水组亦可见GAP-43表达。结论：GAP-43可以阻断神经病理性疼痛中枢敏化的形成,氯胺酮能在很大程度上增强GAP-43的表达,从而起到治疗神经病理性疼痛的作用。     

电针对神经病理性疼痛大鼠谷氨酸受体1表达的影响

目的观察电针对大鼠神经病理性疼痛及谷氨酸受体1(GluR1)表达的影响,探讨电针镇痛效应机制。方法将36只SD大鼠随机分为假模组、模型组、电针组,每组12只。前两组采用脊神经结扎(SNL)的方法建立大鼠神经痛模型,假模组仅分离脊神经不结扎。电针组在造模后7d电针干预大鼠患侧"足三里""环跳"穴,其他两组仅给予固定,不予治疗,每次30min,1次/d,连续7d。在造模前1d及造模后第3、5、7、10、12、14天分别测定大鼠机械缩足反射阈值(MWT)及热缩足反射潜伏期(TWL),术后15d处死大鼠,取大鼠L4～L6段腰膨大脊髓,用免疫组化及Western blot检测GluR1蛋白的表达,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测GluR1-mRNA的表达。结果与假模组相比,模型组大鼠痛阈值明显降低,差异有统计学意义(P0.01),出现痛觉过敏;电针干预后,电针组较模型组痛阈值明显升高,差异有统计学意义(P0.01),与假模组相比,模型组与电针组GluR1蛋白及mRNA表达水平明显增高,差异有统计学意义(P0.01),与模型组相比,电针组GluR1阳性蛋白表达水平明显下调,差异有统计学意义(P0.01)。结论电针"足三里""环跳"穴可以缓解大鼠神经病理性疼痛,该作用可能与其下调大鼠脊髓背角AMPA受体GluR1的表达密切相关。     

转运蛋白通过激活脊髓背角星形胶质细胞自噬缓解神经病理性疼痛

目的:探讨18kDa转运蛋白(translocator protein,TSPO)是否可以通过激活脊髓背角星形胶质细胞自噬来缓解神经病理性疼痛及其可能的机制.方法:实验分为两部分,第一部分将雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(Sham组)、对照组(SNL组)、TSPO受体激动剂Ro5-4864处理组(Ro组);第二...     

BMP7对脊髓损伤模型大鼠神经病理性疼痛的影响

目的:探讨局部过表达骨形态发生蛋白7 (bone morphogenetic protein 7, BMP7)对大鼠脊髓损伤后期神经病理性疼痛的影响及可能的机制。方法:采用成年雄性SD大鼠建立脊髓损伤模型,使用von Frey纤维丝测定大鼠50%机械缩足阈的变化,应用Western blot方法检测大鼠脊髓腰膨大BMP7和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein, GFAP)的表达水平。此外,在脊髓损伤后立即在损伤局部分别注入腺相关病毒载体、BMP7腺相关病毒,以脊髓损伤模型组为对照,以BMP7成功过表达作为判断病毒转染成功的指标,并观察后肢机械痛阈和腰膨大GFAP表达的变化。结果:与假手术组相比,脊髓损伤组大鼠术后3～28天,后肢机械痛阈明显下降(P <0.001),BMP7表达在术后7天明显减少(P <0.01),28天后表达增加(P <0.01),GFAP表达随时间增多,21天达到峰值(P <0.001);局部注射BMP7腺相关病毒后28天,BMP7显著过表达(P <0.01),提示病毒转染成功,与载体组相比较,病毒组50%机械缩足阈在损伤后14天、21天、28天显著升高(P <0.001),并且术后28天脊髓背角GFAP表达减少。结论:局部过表达BMP7可缓解大鼠脊髓损伤后期的机械痛觉过敏现象,这可能是通过抑制脊髓背角星形胶质细胞的持续激活实现的。     

Epileptiform activity in rat spinal dorsal horn in vitro has common features with neuropathic pain

Neuropathic pain and epileptic seizures bear several similarities, among them is the response to anticonvulsant drugs. It has therefore been hypothesized that epileptiform activity of nociceptive spinal dorsal horn neurons may contribute to paroxysmal forms of neuropathic pain. We used patch-clamp and field potential recordings from young rat spinal cord slices to test if nociceptive dorsal horn structures are indeed able to sustain epileptiform activity. Application of the convulsant 4-aminopyridine (100 microM) evoked epileptiform activity that was most pronounced in superficial dorsal horn and involved nociceptive lamina I neurons with a projection to the brain. The epileptiform activity was dependent on fast excitatory and inhibitory synaptic transmission through ionotropic glutamate receptors and GABA(A) receptors. During epileptiform activity, previously silent polysynaptic pathways from primary afferent C-fibers to superficial dorsal horn neurons were opened. Stimulation of primary afferents at Adelta- and C-fiber intensity interfered with the epileptiform rhythm, suggesting that both affect the same dorsal horn structures. Similar to neuropathic pain, spinal dorsal horn epileptiform activity was much less reduced by classical analgesics than by anticonvulsant agents.     

不同剂量神经生长因子对神经源性疼痛大鼠脊髓Fos蛋白的影响

背景:神经生长因子对神经元的存活、生长发育、分化、再生和功能维持起到调控作用.目的:进一步验证不同剂量神经生长因子对神经源性痛大鼠的治疗作用以及对脊髓中Fos蛋白的影响.设计、地点:随机对照动物实验,在上海第九人民医院完成.材料:健康成年雄性Wistar大鼠72只,体质量180-200 g,随机分为4组,模型组及腹腔注射神经生长因子4, 8,16 μg组,每组18只.方法:72只大鼠结扎左侧坐骨神经制备坐骨神经慢性缩窄性损伤模型;腹腔注射神经生长因子4, 8,16 μg组,造模后分别腹腔注射神经生长因子4,8,16 Pg/(kg·d).主要观察指标:①于术前和术后第1,2,3,5,7,10,14天进行行为学观察和机械性痛阈测定.②于术后第2.7,14天各组分别处死大鼠各6只,取脊髓,应用免疫组织化学方法和图像分析系统检测脊髓中Fos蛋白的表达.结果:模型组大鼠术后出现自发抬足、舔足等自发痛表现,术后第3天起开始出现痛阈下降,第14天达最低值,而注射神经生长因子组大鼠没有自发痛表现,没有出现机械性痛阈的低常期,第10,14天模型组大鼠痛阈与其余各组比较差异有显著性意义(P<0.05).4组大鼠术后第1天机械性痛阈普遍升高;注射神经生长因子16 Pg组大鼠术后第1天机械性痛闽比其他各组低(P<0.01),第2天机械性痛阈恢复至术前水平,低于注射神经生长因子4 Pg组(P<0.05).术后模型组大鼠脊髓Fos蛋白表达进行性升高,而其他各组大鼠脊髓中仅有少量Fos阳性神经元,模型组与其余各组比较差异显著(P<0.01).术后第2天注射神经生长因子16 μg组大鼠脊髓Fos蛋白表达最低,与模型组和注射神经生长因子4 Pg组比较,差异有显著性意义(P<0.01).结论:神经生长因子对大鼠神经源性痛有治疗作用,且大剂量较小剂量作用更为明显,其机制可能与抑制脊髓中Fos蛋白表达有关.     

部分背根切断猫脊髓Ⅱ板层和背核c-jun的表达与脊髓可塑性的关系

目的:探讨即早基因c-jun蛋白在部分背根切断猫脊髓Ⅱ板层、背核(L3)表达的时空变化,以了解c-jun与脊髓可塑性的关系。方法:取成年健康雄性猫10只。随机分为2组:假手术组、单侧部分切断背根手术7d组(手术组),每组5只动物。取各组脊髓L3,L5,L6节段连续切片,片厚20μm,分别用兔抗c-jun(1∶200)抗体行免疫组化ABC法染色。观察并测量各组术侧脊髓Ⅱ板层(L3,L5,L6)和背核(L3)中c-jun蛋白的分布、含量及时空变化。结果:c-jun在假手术猫脊髓Ⅱ板层和背核的神经元和胶质细胞中均有表达。部分背根切断术后,c-jun阳性神经元数均较假手术组相应节段显著增加:L3,L5,L6II板层犤(17±3),(6±1)个;(13±2),(8±2)个;(11±2),(7±3)个犦,两组比较,差异有显著性意义(t=-7.778,-3.953,P<0.01;t=-2.481,P<0.05);L3背核,两组比较,差异有显著性意义(t=-5.000,P<0.01)。结论:部分背根切断术后c-jun在脊髓Ⅱ板层和背核表达增加,提示c-jun与脊髓Ⅱ板层和背核可塑性有关。     

Spread of excitation across modality borders in spinal dorsal horn of neuropathic rats

Under physiological conditions, nociceptive information is mainly processed in superficial laminae of the spinal dorsal horn, whereas non-nociceptive information is processed in deeper laminae. Neuropathic pain patients often suffer from touch-evoked pain (allodynia), suggesting that modality borders are disrupted in their nervous system. We studied whether excitation evoked in deep dorsal horn neurons either via stimulation of primary afferent Abeta-fibres, by direct electrical stimulation or via glutamate microinjection leads to activation of neurons in the superficial dorsal horn. We used Ca(2+)-imaging in transversal spinal cord slices of neuropathic and control animals to monitor spread of excitation from the deep to the superficial spinal dorsal horn. In neuropathic but not control animals, a spread of excitation occurred from the deep to the superficial dorsal horn. The spread of excitation was synaptically mediated as it was blocked by the AMPA receptor antagonist CNQX. In contrast, block of NMDA receptors was ineffective. In control animals, the violation of modality borders could be reproduced by bath application of GABA(A) and glycine receptor antagonists. Furthermore, we could show that neuropathic animals were more prone to synchronous network activity than control animals. Thus, following peripheral nerve injury, excitation generated in dorsal horn areas which process non-nociceptive information can invade superficial dorsal horn areas which normally receive nociceptive input. This may be a spinal mechanism of touch-evoked pain.     

早期运动训练对脊髓损伤大鼠痛觉阈值及脊髓后角胶质细胞活化的影响

目的:观察早期运动训练对T10不完全性SCI大鼠机械性及热刺激痛觉阈值、脊髓后角小胶质细胞和星形胶质细胞活化的影响。方法:将24只成年雌性SD大鼠随机分为:假手术组(Sham组)、SCI-对照组(SCI-Sed组)和SCI-运动组(SCI-TT组)。SCI-Sed组和SCI-TT组使用改良Allen’s法制作T10不完全SCI模型,Sham组只暴露脊髓。SCI-TT组于SCI第8天行减重平板训练。于SCI术前、术后第1、7、14、21、28、35天使用Von Frey单丝及热刺激痛觉测试仪对大鼠的痛觉阈值进行评估。SCI 5周后,使用免疫组化技术对所有大鼠L4—5脊髓进行染色,观察脊髓后角小胶质细胞及星形胶质细胞活化情况,并对大鼠痛觉阈值与胶质细胞活化之间的相关性进行分析。结果:机械性痛觉阈值评估结果显示,SCI术后第1天,SCI-Sed组和SCI-TT组阈值均较Sham组增加(P0.05);之后两组阈值均低于Sham组(P0.05);第21—35天,SCI-TT组阈值明显高于SCI-Sed组(P0.05)。热刺激痛觉阈值结果显示,SCI术后第1天,SCI-Sed组和SCI-TT组痛觉阈值较Sham组均增加(P0.05);SCI 7天后,两组大鼠痛觉阈值均低于Sham组(P0.05);术后14—35天,SCI-TT组痛觉阈值明显高于SCI-Sed组(P0.05)。小角质细胞及星形胶质细胞免疫组化结果显示,SCI-Sed组和SCI-TT组脊髓后角内的阳性细胞数量多于Sham组(P0.05);而SCI-TT组明显少于SCI-Sed组(P0.05)。相关性分析显示,SCI后第35天,痛觉阈值与脊髓后角胶质细胞活化数量之间呈负相关(P0.001)。结论:早期运动训练对缓解SCI大鼠NP的发生有一定作用,其机制可能与抑制脊髓后角胶质活化相关。     

Calcium channel alpha-2-delta-1 protein upregulation in dorsal spinal cord mediates spinal cord injury-induced neuropathic pain states

Spinal cord injury (SCI) commonly results in the development of neuropathic pain, which can dramatically impair the quality of life for SCI patients. SCI-induced neuropathic pain can be manifested as both tactile allodynia (a painful sensation to a non-noxious stimulus) and hyperalgesia (an enhanced sensation to a painful stimulus). The mechanisms underlying these pain states are poorly understood. Clinical studies have shown that gabapentin, a drug that binds to the voltage-gated calcium channel alpha-2-delta-1 subunit (Ca_vα2δ-1) proteins is effective in the management of SCI-induced neuropathic pain. Accordingly, we hypothesized that tactile allodynia post SCI is mediated by an upregulation of Ca_vα2δ-1 in dorsal spinal cord. To test this hypothesis, we examined whether SCI-induced dysregulation of spinal Ca_vα2δ-1 plays a contributory role in below-level allodynia development in a rat spinal T9 contusion injury model. We found that Ca_vα2δ-1 expression levels were significantly increased in L4-6 dorsal, but not ventral, spinal cord of SCI rats that correlated with tactile allodynia development in the hind paw plantar surface. Furthermore, both intrathecal gabapentin treatment and blocking SCI-induced Ca_vα2δ-1 protein upregulation by intrathecal Ca_vα2δ-1 antisense oligodeoxynucleotides could reverse tactile allodynia in SCI rats. These findings support that SCI-induced Ca_vα2δ-1 upregulation in spinal dorsal horn is a key component in mediating below-level neuropathic pain states, and selectively targeting this pathway may provide effective pain relief for SCI patients.     

电针抗脊髓损伤的实验研究

背景：现有的研究结果证实神经生长因子在脊髓损伤后神经再生修复过程中发挥着重要作用，神经再生能力低下与损伤局部缺少支持神经元生长的微环境有关。针刺对脊髓损伤后的神经保护是否通过促进担损伤脊髓组织中神经生长因子水平的提高而起作用，目前尚缺少大量分子水平的实验证实数据。 目的：采用形态学、原位杂交等技术观察电针对实验性脊髓损伤大鼠运动功能、脊髓组织形态及其神经生长因子mRNA表达的影响。 设计：随机对照动物实验。 单位：同济大学附属第十人民医院针灸科，上海市针灸经络研究所。 材料：实验于1999-01／2002-02在上海市针灸经络研究所完成。选取雄性SD大鼠15只，体质量（260&;#177;9．52）g，随机分成假手术组、损伤对照组和电针组，各5只。 方法：损伤对照组和电针治疗组制备脊髓损伤模型，假手术组仅作椎切除。术后2h，对电针治疗组给予电针治疗，取大椎、命门和L2夹脊、环跳，两组穴位交替使用。针刺后接G6805型电针仪，疏波，0．8Hz0．3-0．6mA，以肌肉有轻微的抖动为宜。1次／d，每次30min，连续治疗30d。损伤对照组和假手术组不作任何处理。采用自行改良的Tarlow评分标准和Rivlin方法分别于术后2h，30d进行运动功能测定。①改良的Tarlov评分标准：以完全瘫痪，针刺时下肢无反应到正常行走记作0-6分。②改良的Rivlin方法：斜板由两块矩形的合金板通过铰链于一端相连而成，板从水平位置（0&;#176;）起绕轴旋转，斜面角度可以测出。将大鼠头朝前，身体纵轴与斜板纵轴垂直放置，逐渐增大板与水平间的角度，直至大鼠不能保持原有位置5s时，记录这一临界角。原位杂交检测，光镜下明视野记录神经生长因子阳性细胞数并摄片。 主要观察指标：脊髓损伤大鼠运动功能评分（改良的Tailov评分）、脊髓损伤大鼠斜面测试临界角度（改良的Rivlin方法）、各组脊髓组织神经生长因子mRNA阳性细胞数的变化。 结果：实验大鼠15只，全部进入结果分析。①大鼠脊髓损伤2h后，损伤对照组和电针治疗组运动功能评分和改良的Rivlin方法斜面临界角均明显下降；30d后，两组的改良的Tarlow评分运动功能评分和斜面临界角均有不同程度的恢复，但以电针组的恢复较明显，与损伤对照组比较，差异有显著性意义[35．40&;#177;6．62，27．80&;#177;1．10；（35．40&;#177;6．62）.（27．80&;#177;1．10）。P〈0．05]。②伤后30d，电针治疗组大鼠病理损害程度，较损伤对照组轻，脊髓组织形态的损伤，神经生长因子mRNA阳性细胞，数的增加较损伤对照组明显（28．13&;#177;1．64，12．63&;#177;1．41．P〈0．01）。 结论：电针可促进脊髓组织中神经生长因子mRNA的表达，可能减轻脊髓组织形态的损伤，促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复，因其神经生长因子mRNA的表达而起到神经保护作用。