两种分析miRNA相对表达量方法的比较研究

目的基于实时反转录一聚合酶链反应（RT—PCR）基因表达相对定量的分析方法：GenEx软件分析与2（-△△CT）法,建立一种简便、准确的miRNA相对定量方法。方法以HK-2细胞系cDNA为模板,进行PCR扩增,确定最佳退火温度;再倍比稀释该模板,用荧光定量PCR测定的ct值作miR-122和miR-16的标准曲线,计算出相应miRNA的扩增效率。用荧光定量PCR测定健康者和乙型肝炎患者血清中内参miR-16和靶基因miR-122的表达,分别采用GenEx软件分析与2（-△△CT）法来评价相对表达量。结果系列稀释法制作的标准曲线呈现较好的线性相关性,两种miRNA的标准曲线r2值均为0．999,miR-16的扩增效率为97％,miR-122扩增效率为107％。2（-△△CT）法分析乙型肝炎患者血清中miR-122的表达较健康者增高了44．3倍,而GenEx软件分析为54．1倍。结论GenEx软件分析考虑了更多的影响因素,其结果比（-△△CT法更可靠,适用于临床分析。     

多重实时定量PCR检测BCR-ABL mRNA方法的建立

目的建立一种快速、可靠的实时定量PCR（RQ-PCR）检测BCR-ABL mRNA的方法。方法应用LightCycler技术,设计在同一PCR反应管内可扩增b3a2、b2a2、ela2几种常见的BCR-ABL转录本和b3a3、b2a3等少见转录本,并对RQ-PCR主要要素进行优化,评价优化后RQ-PCR的敏感性、特异性和可靠性。结果建立的RQ-PCR方法可检出10^3健康人单个核细胞中的1个K562细胞,最低可检出100个拷贝BCR—ABL分子。BCR—ABL和ABL的循环域值（C1）值（拷贝数）批内变异系数分别为0．68％（12．93％）和0．59％（8．60％）,批间变异系数分别为1．14％（18．89％）和1．01％（12．72％）。结论RQ-PCR可作为评价慢性粒细胞白血病（CML）疾病进展、预后判断和骨髓移植后微量残留白血病监测的灵敏、可靠的方法。     

miR-181b在慢性淋巴细胞白血病患者中的表达及其靶基因的预测

目的:探讨miR-181b在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者CD19+B淋巴细胞中的表达水平,分析其表达与CLL预后关系,并利用生物信息学预测miR-181b在CLL中的潜在靶基因。方法:选取2013年6月至2018年6月在新疆自治区人民医院诊治的CLL患者84例、并选取健康者20例为对照组。应用磁珠分选CLL患者和对照组外周血CD19+B淋巴细胞后进行RNA提取,检测miR-181b的表达水平,分析其在不同IPI分组中表达差异,探讨miR-181b表达水平与CLL患者PFS相关性。使用网上数据库及文献预测miR-181b靶基因,对候选靶基因进行基因注释分析及相关信号通路分析。结果:miR-181b在CLL患者中表达显著低于对照组(P0.01)。miR-181b在低危组的表达水平高于高危组和极高危组(P0.05),但在低危组与中危组间表达无差异(P=1.00),中危组中miR-181b的表达水平高于高危组和极高危组(P0.05),但在高危组与极高危组间表达无差异。ROC曲线结果显示,曲线下面积(AUC)为0.792(P0.01),由此显示,miR-181b表达水平处于分界值0.279时,具有较好的敏感性(62.9%)和特异性(91.8%)。生存分析结果提示,与高表达组相比,miR-181b低表达CLL患者具有较差的PFS(log-rank:P=0.047)。使用starBase、Targetscan和PicTar数据库进行靶基因预测,结合文献报道,与血液疾病相关的靶基因有CARD11、ZFP36L1、RUNX1、NR4A3、ATP1B1、PUM1和PLAG1,其中上调的CARD11、ZFP36L1通过促进细胞增殖、抑制细胞衰老参与淋巴系统肿瘤形成。结论:miR-181b在CLL患者中的表达水平明显低于健康对照组,且miR-181b低表达与CLL不良预后有关。通过生物信息学预测并结合文献报道,推测CARD11及ZFP36L1可能作为miR-181b的靶基因参与CLL疾病发生发展,该结果还需要进一步实验进行验证。     

急性B淋巴细胞白血病的差异microRNA综合调控网络的生物信息学分析北大核心CSCD

目的通过生物信息分析途径,从系统水平揭示参与急性B淋巴细胞白血病（B—ALL）发病的分子机制,为研究提供新的思路。方法从公共数据库GEO中下载B—ALL的microRNA（miRNA）芯片数据,利用QlucoreOmicsExplorer3．0软件筛选差异表达miRNA,再分析得到差异miRNA与靶基因、长链非编码RNA和转录因子各自的调控数据,然后构建以差异miRNA为中心的综合调控网络。另外,功能富集分析有功能的靶基因。结果共筛选出15个差异miRNA,其中7个miRNA表达上调,8个miRNA表达下调。通过差异miRNA为中心的综合调控网络可知,hsa—miR．126和hsa—miR-486—3p调控大量的靶基因,其中hsa．miR-126的靶基因包括MYC基因。hsa—miR．29a、hsa．miR-130a和hsa—miR-181c调控大量的长链非编码RNA,包括XIST。hsa．miR-181a．2、hsa—miR．18ib-2和hsa．miR-663调控大量的转录因子,包括CDX2、YYl等。hsa—miR．126靶基因的通路分析显示富集到Wnt通路。结论通过生物信息学方法分析得出,hsa—miR-29a、hsa．miR-126和hsa—miR-181家族是B．ALL的核心差异miRNA,及其转录因子CDX2、长链非编码RNAXIST和靶基因MYC基因在B．ALL的发生发展中起重要作用,可能为潜在的治疗靶点。     

血清TLR-3，miR-181b及URBP联合检测在糖尿病肾病诊断及预后判断的价值研究

目的　探讨Toll 样受体3（toll like receptor, TLR-3）、微RNA（micro RNA, miR）-181b 和尿视黄醇结合蛋白（urinary retinol binding-protein, URBP）联合检测在糖尿病肾病（DN）诊断及预后判断的价值。方法　选取2016 年12 月～ 2018年12 月邢台医学高等专科学校第二附属医院收治的115 例DN患者作为观察组,另选取同期96 例2 型糖尿病作为对照组。采用美国ABI 公司7900 实时荧光定量PCR 仪检测TLR-3,miR-181b 水平,采用BNP 特定蛋白分析仪以速率免疫散射比浊法检测URBP 水平,采用肾小管萎缩与间质纤维化（IFTA）、间质炎症和肾小球分级评分判断肾病理损伤程度,分析两组及观察组不同肾病理损伤程度患者血清TLR-3,miR-181b 及URBP 水平,分析上述指标与肾病理损伤相关性及对DN 的诊断价值,同时随访12 个月,分析上述指标与终末期肾病（end-stage renal disease, ESRD）的关系。结果　①观察组URBP（4.12±1.24mg/L）,血清TLR-3（0.86±0.27）和miR-181b（2.55±0.76）水平高于对照组（2.88±0.86mg/L,0.59±0.18 和1.79±0.54）,差异有统计学意义（t=8.367,8.217,8.275,均P ＜ 0.05）。② URBP,血清TLR-3,miR-181b 与DN 患者间质炎症、IFTA 评分和肾小球分级呈正相关（r=0.676,0.654,0.692,均P ＜ 0.05;r=0.705,0.682,0.733,均P ＜ 0.05;r=0.699,0.713 和0.745,均P ＜ 0.05）。③ URBP,血清TLR-3 和miR-181b 及三者联合诊断DN的曲线下面积（AUC）分别为0.751,0.782,0.796 和0.880。④ URBP 和miR-181b 高表达者随访12 个月ESRD 发生率（40.74%,41.03%）高于低表达者（9.52%,12.50%）,差异有统计学意义（χ2=7.210,6.626,均P ＜ 0.05）。结论　URBP,血清TLR-3,miR-181b 与DN 患者肾脏病理损伤程度有关。三者联合可作为判定DN 的生物学标志物,指导临床防治ESRD。     

全反式维甲酸和三氧化二砷诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化前后微小RNA表达变化

目的 研究急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化前后微小RNA(miRNA,miR)表达变化.方法 采用全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)诱导APL细胞系NB4 细胞分化,瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志CD11b的表达,用实时定量RT-PCR检测miRNA表达谱miR-15b、miR-16、miR-34a、miR-107、miR-124a、miR-146、miR-155、miR-181a、miR-223、miR-342、let7c等miRNA的表达水平,用2-△△Ct法计算miRNA相对表达水平.收集15例APL初诊和15例APL缓解期患者骨髓单个核细胞(MNC),用RT-PCR检测MNC miRNA 的表达水平,用2-△Ct法计算miRNA表达水平.结果 ATRA作用NB4细胞96 h,miR-15b、miR-16、miR-107、miR-223、miR-342表达水平均显著上调,分别为对照组的3.40、4.22、5.41、20.03和5.29倍,As2O3作用NB4细胞96 h,miR-15b、miR-16、miR-107、miR-223、miR-342表达水平也显著上调,分别为对照组的3.62、2.49、2.58、4.27和1.94倍,除miR-15b外,ATRA处理组miR-16、miR-107、miR-223和miR-342表达水平上调程度均高于As2O3处理组,其中尤以miR-223为甚.ATRA和As2O3治疗后缓解期APL患者miR-15b、miR-16、miR-107、miR-181a、miR-223和miR-342表达水平(2-△Ct值)分别为0.4137、0.6367、0.1260、0.0522、0.6611和0.0280,而APL初诊患者miR-15b、miR-16、miR-107、miR-181a、miR-223、miR-342表达水平分别为0.0751、0.2022、0.0425、0.3064、0.1733和0.0090,APL缓解期miR-15b、miR-16、miR-107、miR-223和miR-342表达水平高于APL初诊者(P值均<0.05),而APL缓解期miR-181a表达水平低于APL初诊者(P<0.05).结论 特定miRNA参与APL细胞分化过程.     

血清微小RNA作为早期乳癌诊断标志物的价值

目的探讨血清5种微小RNA（miRNA）在乳癌早期诊断中作为生物标记物的价值。方法根据生物信息学数据库miRWalk的预测,选定5种与乳癌相关的miRNA（包括miR-31、miR-107、miR-155、miR-200c及miR-205）。采用实时荧光定量PCR检测5种miRNA在42例健康女性、66例乳癌病人中的相对表达量,根据受试者工作特征曲线（ROC曲线）下面积分析诊断乳癌的特异度和灵敏度。结果血清中miR-31、miR-107和miR-200c联合检测诊断乳癌的灵敏度为78.6%,特异度为88.7%。结论血清中miR-31、miR-107和miR-200c的组合有可能成为乳癌早期诊断的新指标。     

43例多发性骨髓瘤骨髓EB病毒DNA检测

目的用荧光定量PCR方法检测急性白血病（AL）与多发性骨髓瘤患者（MN）骨髓中EBV—DNA含量,并探讨其临床意义。方法采用荧光定量PCR技术检测38例急性白血病与43倒多发性骨髓瘤患者EBV感染情况,同时检测了32例对照组小细胞低色素性贫血和巨幼细胞性贫血患者骨髓EBV—DNA含量。结果多发性骨髓瘤患者EBV感染率为58．1％,急性白血病组EBV感染率为8．0％,对照组EBV感染率6．2％。AL组与对照组EBV—DNA阳性率无显著性差异（P〉0．05）,MM组与对照EBV—DNA阳性率有显著性差异（P〈0．01）,MM组与AL组EBV—DNA阳性率有显著性差异（P〈0．01）。结论AL患者的发病与EB病毒感染关系不大,MM患者的发病与EB病毒感染有关;应用荧光定量PCR方法对MM患者骨髓中,EBV—DNA舍量进行检测,对于揭示MM的发病与EBV感染之间的相关性提供了敏感可靠的检测方法。     

心房颤动患者血清miR-29b和miR-135b水平表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的相关性研究

目的 观察心房颤动（atrial fibrillation,AF）患者血清微小核糖核酸（micro RNA,miRNA,miR）-29b和miR-135b的表达变化,探讨二者表达与心房纤维化程度及射频消融术后复发的关系。方法 选取2019年7月～2022年7月于沧州市人民医院心血管内科住院诊治并接受射频消融术治疗的AF患者（病例组,n=158）以及同期体检的健康者（对照组,n=126）。收集AF患者的一般临床资料及生化指标,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-29b和miR-135b相对表达水平。采用多因素Logistic回归分析AF患者术后复发的影响因素;绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析血清miR-29b和miR-135b水平对AF患者术后复发的预测价值,曲线下面积（area under the curve,AUC）比较采用Z检验。结果 与对照组比较,病例组血清miR-29b(0.64±0.13 vs 1.04±0.24)和mi R-135b水平（0.45±0.08 vs 1.00±0.14）均降低,差异均有...     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测宫颈癌血清中miR-21的表达

摘要：目的：建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法检测宫颈疾病患者血清中miR-21的表达水平,探讨miR-21在宫颈癌临床监测中的意义。 方法：设计miR-21、U6茎环逆转录引物和PCR扩增引物,以U6为内参,用实时荧光定量PCR检测32例不同宫颈疾病患者血清中miR-21表达水平。 结果：建立的实时荧光定量PCR法能特异地检测血清中的miR-21扩增信号,熔解曲线单一,产物特异。宫颈癌患者血清中miR-21水平明显高于子宫肌瘤、宫颈炎等其他良性宫颈疾病（P<0.05）,而宫颈癌患者手术切除后血清中miR-21水平明显下降（P<0.05）。 结论：SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR是一种快速简便、敏感性高、特异性好的检测方法,对宫颈癌早期诊断、分子分期和预后判断有很好的应用前景。     

微小RNA-128b与-181a和-223在急性白血病患者中的表达

背景：微小RNA是一类内源性非编码RNA。新近研究认为微小RNA可用作肿瘤标记物,对肿瘤进行分类。目的：分析微小RNA-181a、微小RNA-128b和微小RNA-223在急性白血病患者中的表达差异。方法：提取初治急性白血病患者及对照受试者骨髓单个核细胞总RNA,经微小RNA特异性引物反转录后,采用实时定量PCR分析各微小RNA的表达。结果与结论：与对照受试者相比,无论是急性非淋巴细胞白血病还是急性淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞的微小RNA-128b,微小RNA-181a和微小RNA-223表达均降低;统计学分析显示,急性非淋巴细胞白血病和急性白血病患者微小RNA-128b和微小RNA-181a表达与对照受试者比较差异有显著性意义（P〈0.05）,但急性淋巴细胞白血病患者与对照受试者比较差异无显著性意义（P〉0.05）;微小RNA-128b,-181a和-223的表达在急性非淋巴细胞白血病与急性淋巴细胞白血病患者之间差异无显著性意义（P〉0.05）。结果显示微小RNA-128b,-181a和-223有可能是急性白血病诊断与分型的生物标记物。     

原发性IgA肾病患者血清miR-181b水平表达与病情严重程度及预后的相关性分析

目的　分析原发性IgA肾病患者血清miR-181b水平表达及与病情严重程度、预后的相关性。方法　回顾性分析上海市市东医院2015年6月~2017年11月收治的原发性IgA肾病患者107例的临床资料。根据患者肾脏病理学检查结果按病情严重程度分为轻度、中度、重度,根据随访结果将预后分为预后良好和预后较差。比较不同病情严重程度和不同预后患者的血清miR-181b水平。采用Spearman相关分析miR-181b水平与IgA肾病病情严重程度及预后的相关性,绘制ROC曲线分析血清miR-181b水平对IgA肾病疾病严重程度及预后的预测价值。结果　107例原发性IgA肾病患者中轻度35例、中度46例、重度26例。轻度、中度和重度患者的血清miR-181b水平分别为(1.47±0.41)×2-△△Ct,(1.89±0.58)×2-△△Ct和(2.69±0.67)×2-△△Ct,差异有统计学意义(F=49.765,P<0.001)。107例原发性IgA肾病患者随访2年后,预后良好88例、预后较差19例。预后良好、预后较差患者的血清miR-181b水平分别为(1.73±0.52)×2-△△Ct和(2.95±0.74)×2-△△Ct,差异有统计学意义(t=5.193,P<0.001)。经Spearman相关分析发现,血清miR-181b水平与患者病情严重程度(r=0.801,P<0.001)、预后(r=0.494,P<0.001)呈显著相关性。血清miR-181b预测IgA肾病病情严重程度的ROC曲线下面积为0.886(95%CI:0.717~0.966),最佳临界值2.25×2-△△Ct,此时灵敏度和特异度分别为0.892,0.731。血清miR-181b预测IgA肾病预后的ROC曲线下面积为0.848(95%CI:0.701~0.925),最佳临界值2.48×2-△△Ct,此时灵敏度和特异度分别为0.873和0.704。结论　血清miR-181b水平与IgA肾病病情严重程度及预后均呈显著相关性,血清miR-181b越高,病情越重,预后越差。可通过检测IgA肾病患者血清miR-181b水平评估患者病情及预测预后。     

乳房浸润性导管癌组织miR-10b和miR-195表达及意义

目的探讨miRNA 10b（miR-10b）、miRNA 195（miR-195）在乳腺浸润性导管癌组织表达及其意义。方法收集40例乳癌病人癌组织及癌旁组织标本,应用逆转录PCR法测定组织中miR-10b、miR-195表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果乳腺浸润性导管癌组织miR-10b、miR-195表达明显低于癌旁组织（t=4.35、5.71,P〈0.05）。miR-195表达与肿瘤的大小、有无淋巴结转移及间质脉管癌栓等有关（U=-2.127--2.083,P〈0.05）,miR-10b、miR-195表达与肿瘤TNM分期、雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）及人表皮生长因子受体-2（Her-2）表达水平无明显相关性（P〉0.05）。结论乳房组织中miR-10b、miR-195表达可能为筛查和诊断乳房肿瘤的潜在生物学指标。     

胃癌患者血清 microRNA-192和 microRNA-215的表达及临床意义

目的探讨血清miR-192、miR-215作为胃癌诊断标记物的可能性。方法收集2011年9月至2012年1月四川省人民医院29例术前胃癌患者和10名健康对照者血清并提取总RNA,反转录后采用实时荧光定量PCR的方法检测miR-192、miR-215相对表达量,收集胃癌患者的详细临床病理资料,比较miR-192、miR-215在胃癌患者与健康人之间的差异,并与临床病理特征之间的关系进行分析,构建受试者工作特征曲线（ROC曲线）,通过曲线下面积（AUC）计算miR-192、miR-215检测及其联合应用诊断胃癌的敏感性和特异性。结果胃癌患者血清中miR-192、miR-215表达水平分别较正常对照组升高8.87倍（P＝0.002）和4.14倍（P＝0.037）。在不同肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤大小的胃癌患者之间比较,血清中miR-192、miR-215表达无统计学差异。 ROC曲线分析显示,miR-192、miR-215检测及其二者联合应用于胃癌诊断的AUC值分别为0.833（95％CI：0.793～0.993,P＜0.001）、0.724（95％ CI：0.555～0.894,P＝0.002）、0.893（95％CI：0.699～0.966,P＝0.037）,敏感性分别为75.9％、62.1％、75.9％,特异性分别为90.0％、88.3％、92.1％。结论胃癌患者血清中miR-192和miR-215表达可能与胃癌的形成或发展有关。 miR-192、miR-215检测及其联合应用,对胃癌的诊断有较高的敏感性和特异性,提示这两种血清miRNA有望作为胃癌的诊断标记物。     

茎环引物fqRT-PCR检测心肌梗死后重构患者血清miRNA-21的表达及其临床意义

目的建立茎环引物实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（fqRT-PCR）检测微小RNA（miRNA）的定量检测方法。方法选择300例心肌梗死患者作为心肌梗死组,心肌梗死组患者根据病情再分为急性组、亚急性组及慢性组;同期选取100例健康体检者作为对照组。采用茎环引物fqRT-PCR、金纳米-分子信标fqRT-PCR检测其血清miRNA-21表达水平。结果急性期、慢性期心肌梗死患者血清miRNA-21表达水平高于亚急性期和对照组（P〈0.05）,亚急性期患者的血清miRNA-21表达水平高于对照组（P〈0.05）。茎环引物fqRT-PCR检测miRNA-21,最低检出102 copies/μL的稀释标本,而金纳米-分子信标fqRT-PCR最低检出105 copies/μL的稀释标本。茎环引物fqRT-PCR与金纳米-分子信标fqRT-PCR检测miRNA-21比较,节约464个引物,节省时间208min。结论茎环引物fqRT-PCR检测miRNA具有快速、灵敏、重复性好,可用于临床定量分析miRNA。     

肺腺癌患者血清中miR-498，miR-339-5p和miR-210-3p水平表达的临床诊断价值

目的　研究肺腺癌（lung adenocarcinoma, LA）患者血清中微核糖核酸（miRNA）在肺腺癌患者及正常人群组血清中的表达水平,分析其在肺腺癌诊断中的临床价值。方法 　收集60 例肺腺癌及40 例正常人群血清,通过实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real time PCR,qRT PCR）检测各组血清miR-498, miR-339-5p 和 miR-210-3p 的表达情况。统计分析各组miRNA 的表达差异以及单个miRNA 在肺腺癌诊断中的价值,进一步用统计学方法分析三者联合检测的诊断价值。结果　相比正常人群,肺腺癌患者血清中miR-210-3p 表达增加（6.41±1.85 vs 4.52±1.45）,miR-498（2.09±0.88vs 3.01±0.69）和miR-339-5p（0.8±0.53 vs 1.24±0.58）表达下降,差异有统计学意义(t=4.72, 1.34, 2.75,均P ＜ 0.05）。受试者工作特征曲线下面积（AUC）分析结果显示,miR-498 ,miR-339-5p 和miR-210-3p 的AUC 分别为 0.788（95%CI0.695 ～ 0.864）,0.715（95%CI 0.616 ～ 0.801）和0.799（95%CI 0.707 ～ 0.872 ）;三者联合检测在肺腺癌诊断中AUC 值为0.902（95%CI 0.826 ～ 0.952）,三者联合检测优于单个miRNA 的检测,差异有统计学意义（t=14.09 ～ 18.65,均P ＜ 0.05）。结论　miR-498, miR-339-5p 和miR-210-3p 在肺腺癌患者血清中的表达情况改变,对肺腺癌具有一定的临床诊断价值。     

microRNA-181b影响U87胶质瘤细胞干细胞对替莫唑胺化疗耐受性的实验研究

目的 本研究旨在建立miR-181b慢病毒载体感染U87胶质瘤干细胞模型后,检测其对TMZ化疗耐受性的变化,并探讨miR-181b对于恶性脑胶质瘤（GBM）辅助化学治疗的意义.方法 通过miR-181b慢病毒表达载体转染U87胶质瘤干细胞,提高miR-181b在U87胶质瘤干细胞中的表达.进一步通过RT-PCR、二次神经球形成实验、琼脂糖集落形成实验、MTT实验来分析miR-181b对于U87胶质瘤干细胞在TMZ化疗耐受性方面的作用.结果 miR-181b慢病毒表达载体转染U87胶质瘤干细胞后,U87胶质瘤干细胞中的miR-181b明显上调,而且U87胶质瘤干细胞的生长受到明显抑制;miR-181b可以加强TMZ抑制U87胶质瘤干细胞的生长的作用.结论 miR-181b可以加强TMZ抑制U87胶质瘤干细胞的生长,miR-181b可能对于提高U87胶质瘤干细胞对TMZ的敏感性,降低化疗耐受性起到一定作用.     

Nonisotopic detection of microRNA using digoxigenin labeled RNA probes

MicroRNAs (miRNAs) are an important class of endogenously derived, small approximately 22 nucleotide noncoding regulatory RNAs that have recently become implicated in development, cell regulation and cancers of various tissues. Here we report a nonisotopic Northern analysis method for miRNA detection using 3'-digoxigenin (DIG)-labeled RNA oligo probes. Northern blot analysis was performed using miRNA or total RNA fractions extracted from human leukemic cell lines, and blots were hybridized with either 32P- or DIG-labeled RNA probe for miR-181, miR-155 or miR-16. A labeled probe for U6 small nuclear RNA served as an internal control. The use of DIG-labeled RNA probes was equally sensitive compared to 32P-labeled probes in detecting miRNA quantities as low as 50 ng. The ability to use nonisotopic methods and yet obtain sensitive and reliable results offers an advantage to investigators who prefer to avoid isotopes.     

系统性红斑狼疮患者血清miR-181a检测的临床意义

目的 研究系统性红斑狼疮（SLE）患者血清miR-181a检测的临床意义.方法 采用反转录PCR法检测了30例SLE患者和30健康个体血清miR-181a,分析了其与患者血沉、C反应蛋白、抗dsDNA抗体和SLEDAI-2K评分等临床特征的关系.结果 SLE患者和健康个体血清miR-181a的相对表达量分别为177（P25~P75：78~354）和41（P25~P75：23~91）,差异具有统计学意义（Z=4.26,P〈0.01）.SLE患者血清miR-181a与血沉、C反应蛋白、抗dsDNA抗体和SLEDAI-2K评分呈正相关,相关系数分别为0.52、0.51、0.63和0.55（P值均小于0.01）.结论 血清miR-181a是评估SLE病情的有益标志物.