人胰岛素样生长因子-1在大肠杆菌中的高效表达

目的为了获得基因工程重组人胰岛素样生长因子1。方法采用Trizol试剂法，从人胎肝中提取，6-RNA，RT-PCR扩增得到人胰岛素样生长因子1基因，用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶酶切后，将该基因片段插入表迭栽体pkk223—3，筛选得到了重组质粒pkk-hIGF1。结果加IPTG诱导该质粒转化的大肠杆菌JM109表达，hIGF1的表达水平约30mg／L。结论用肝素亲和层析的方法，获得了电泳纯基因工程重组人胰岛素样生长因子1样品。纯化样品的理化及生物活性分析与天然对照品完全一致。     

胰岛素样生长因子基因在人淋巴细胞表达的探讨

目的探讨胰岛素样生长因子（ＩＧＦｓ）多肽、受体和结合蛋白在免疫调节和免疫发育中的意义。方法采用逆转录聚合酶链反应技术在ｍＲＮＡ水平观察正常成人和新生儿淋巴细胞静息和ＰＨＡ刺激不同时间ＩＧＦｓ及其受体,结合蛋白基因的表达。结果在静息和活化的成人和新生儿淋巴细胞均有ＩＧＦ－Ⅰ、ＩＧＦ－ⅠＲ、ＩＧＦ－ⅡＲ、ＩＧＦＢＰ－２、３、４、６基因表达,并随ＰＨＡ刺激时间的延长表达水平有所变化;ＩＧＦＢＰ－５ｍＲＮＡ在活化的淋巴细胞表达;ＩＧＦ－Ⅱ、ＩＧＦＢＰ－ⅠｍＲＮＡ仅在新生儿淋巴细胞检测到。结论ＩＧＦｓ可能通过参与淋巴细胞的增殖、分化,影响免疫系统的功能和免疫发育过程。     

人胰岛素样生长因子-1稳定表达细胞株的构建及鉴定

目的 :建立稳定表达人胰岛素样生长因子 - 1 ( h IGF- 1 )的细胞株。方法 :用脂质体转染法将含有 h IGF- 1 c DNA的真核表达载体转染 BHK细胞 ,经 G41 8筛选 ,形成阳性细胞克隆。继续培养4周 ,进行原位杂交和免疫细胞化学检测。结果 :原位杂交检测在转染细胞的胞浆中有棕黄色颗粒样阳性杂交信号 ;免疫细胞化学检测在转染细胞的胞浆中有氯化镍蓝色阳性信号。结论 :G41 8筛选后所获得的阳性细胞克隆 ,继续培养 4周 ,原位杂交和免疫细胞化学检测表明 h IGF- 1基因得到稳定表达     

小鼠胰岛素样生长因子-1基因体外克隆及表达的研究

目的 探讨小鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因提取、鉴定及重组质粒转染COS-7细胞表达.方法 通过RT-PCR获取小鼠骨骼肌IGF-1的cDNA,将该基因亚克隆入重组质粒p1 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP)中,构建重组质粒p2 (pcDNA3.1-Nestin-EGFP- IGF-1),脂质体转染COS-7细胞,ELISA检测细胞培养基中IGF-1蛋白量.结果 克隆IGF-1基因cDNA与GenBank中该基因序列一致,重组质粒转染COS-7细胞培养基中均含有IGF-1蛋白.结论 IGF-1基因成功构建到重组质粒p2中,且能在COS-7细胞中过表达.     

重组人生长激素治疗前后血胰岛素样生长因子-Ⅰ、胰岛素样生长因子结合蛋白水平监测及意义

目的 通过对使用重组人生长激素(rhGH)患儿进行胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的监测,探讨rhGH使用的安全性.方法 对在本院使用rhGH的患儿30例进行治疗前后血IGF-Ⅰ和IGFBP3浓度监测并计算IGF-Ⅰ和IGFBP3的比值,同时测定T3、T4、TSH,并以年龄、性别匹配20例儿童作为对照组.结果 治疗后平均身高增加(8.77±3.01)cm/y(t=7.773,P<0.001).IGF-Ⅰ治疗前与对照组差异无显著性(t=-0.475,P>0.05),IGFBP,治疗前组高于对照组,差异有显著性(t=3.759,P<0.01),IGF-Ⅰ和IGFBP,治疗后3个月即明显增高,与治疗前相比差异有显著性(t=4.212和7.733,P<0.01).治疗后IGF-Ⅰ各组之间差异无显著性(f=1.629,P>0.05);IGFBP3各组之间差异有显著性,(f=22.964,P<0.001)与治疗时间呈正相关.IGF-Ⅰ/IGFBP3治疗前后各组之间差异无显著性(f=6.081,P>0.05).结论 在使用rhGH中进行IGF-Ⅰ和IGFBP,监测十分必要;血IGF-Ⅰ和IGFBP3检测方便,可作为rhGH治疗期间是否存在诱发肿瘤高危因素的临床评价指标之一.     

重组人生长激素治疗前后血胰岛素样生长因子-I、胰岛素样生长因子结合蛋白水平监测及意义

目的通过对使用重组人生长激素（rhGH）患儿进行胰岛素样生长因子-I（IGF-I）、胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP3）的监测,探讨rhGH使用的安全性。方法对在本院使用rhGH的患儿30例进行治疗前后血IGF-I和IGFBP3浓度监测并计算IGF-I和IGFBP,的比值,同时测定T3、T4、TSH,并以年龄、性别匹配20例儿童作为对照组。结果治疗后平均身高增加（8．77&#177;3．01）cm／y（t=7．773,P〈0．001）。IGF-I治疗前与对照组差异无显著性（t=-0．475,P〉0．05）,IGFBP,治疗前组高于对照组,差异有显著性（t=3．759,P〈0．01）,IGF-I和IGFBP,治疗后3个月即明显增高,与治疗前相比差异有显著性（t：4．212和7．733,P〈0．01）。治疗后IGF-I各组之间差异无显著性（f=1．629,P〉0．05）;IGFBP,各组之间差异有显著性,（f=22．964,P〈0．001）与治疗时间呈正相关。IGF-I／IGFBP,治疗前后各组之间差异无显著性（f=6．081,P〉0．05）。结论在使用rhGH中进行IGF-I和IGFBP,监测十分必要;血IGF-I和IGFBP,检测方便,可作为rhGH治疗期间是否存在诱发肿瘤高危因素的临床评价指标之一。     

人胰岛素样生长因子-1真核表达载体的构建及在神经干细胞中的表达

目的:构建人胰岛素样生长因子-1(IGF-1)真核表达载体,并在人脐血神经干细胞(NSCs)中表达。方法:采用RT-PCR法从人胎肝中克隆IGF-1基因,将其导入真核表达载体pcDNA3.1中,用脂质体转染法将重组质粒转染人脐血NSCs。分别采用RT-PCR和免疫荧光细胞化学法检测转基因NSCs中IGF-1mRNA和蛋白的表达。结果:琼脂糖电泳显示RT-PCR扩增出462bp的条带;重组载体pcDNA3.1-IGF-1经HindⅢ与BamHⅠ双酶切后,得到5428bp和462bp的两个条带;目的基因转染的NSCs经RT-PCR扩增出一条与目的基因一致的条带;免疫荧光细胞化学检测到IGF-1蛋白的表达。结论:成功构建了人IGF-1基因的真核表达载体,转染后IGF-1重组蛋白在人脐血NSCs中能成功表达。     

利用杆状病毒载体高效表达人胰岛素样生长因子-1及其纯化的研究

目的:利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物学活性的重组人胰岛素样生长因子-1(rhIGF-1).方法:将15kDhIGF-1前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,构建重组病毒BmNPV/IGF-l.用BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫,提取家蚕血淋巴液,采用亲和层析法纯化rhlGF-1,ELISA法测定rhIGF-1含量,用SDS-PAGE和Western-blot分析鉴定rhIGF-1纯度及免疫学活性,MTF法观察其对MCF-7细胞增殖的影响.结果:ELISA测定显示,BmNPV/IGF-1感染家蚕幼虫120h rhIGF-1含量达最高值(23.36μg/ml).rhIGF-1纯度为40%,Westem-blot分析发现主要纯化产物为7.5 kD成熟hIGF-1.细胞活性刺激实验显示,纯化后rhIGF-11对MCF-7细胞促增殖能力明显优于来源于大肠杆菌的rhIGF-1产品.结论:实现了具有免疫学活性及生物学活性rhlGF-1在杆状病毒表达系统的高效表达,并使rhIGF-1得到初步纯化.     

抗人胰岛素样生长因子-1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备稳定分泌抗人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定.方法:用纯化后的hIGF-1重组蛋白免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤细胞融合技术制备抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鉴定mAb的特异性,用间接ELISA法检测mAb腹水效价及mAb的亲和力,杂交瘤细胞染色体分析,鉴定Ig亚类.结果:获得2株能稳定分泌抗hIGF-1的mAb杂交瘤细胞系,Western blot分析显示,该mAb能与具有生物学活性的成熟IGF-1蛋白结合.腹水mAb效价可达6×104.mAb相对亲和力为2.1×109/mol～7.8×109/mol.2株单抗属IgM亚类.染色体分析符合杂交瘤细胞特征.结论:成功制备出抗hIGF-1的2株mAb杂交瘤细胞,为进一步用于hIGF-1的临床检测和实验研究创造了条件.     

携带人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒的构建和鉴定

[目的] 采用 Cre-LoxP同源重组系统构建并鉴定携带人胰岛素样生长因子-1( human insulin-like growth factor-1, hIGF-1)目的基因的复制缺陷重组腺病毒,为椎间盘退变的 hIGF-1基因治疗奠定基础.[方法] PCR合成 hIGF-1基因,用 pMD18-T载体克隆 hIGF-1目的基因,酶切、测序并进行 NCBI BLAST相似性在线分析.将 pMD18-T-hIGF-1和 pDNR-1r质粒分别行 EcoRⅠ和 BamHⅠ双酶切, DNA 连接酶连接双酶切产物,转化感受态大肠杆菌 DH5α,合成中间载体 pDNR-hIGF-1,酶切鉴定.Cre-loxP系统介导 pDNR-hIGF-1和 pInt.AV1.SpaT同源重组形成 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1重组表达质粒,行 EcoRⅠ酶切鉴定.复苏 293细胞,将 pInt.AV1.SpaT-hIGF-1和 pInt.B.B质粒在 293细胞内进行同源重组成含 hIGF-1基因的复制缺陷重组腺病毒.倒置显微镜观察 293细胞病变样效应( cytopathogenic effect, CPE);透射电镜观察 293细胞中的病毒颗粒;提取细胞裂解液中病毒 DNA, PCR鉴定 hIGF-1目的基因的存在; Western blot 检测 hIGF-1蛋白表达.用半数组织培养感染量 (tissue culture infectious dose 50,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.[结果]克隆的 hIGF-1目的基因经 NCBI BLAST相似性在线分析证实与 Homo sapiens IGF-1 (GI:19923111)完全相同.pInt.AV1.SpaT-hIGF-1酶切鉴定,出现 5.4 kb和 1 kb两条片段,与理论值完全相符.转染 293细胞 12～ 14 d后,大部分细胞出现肿胀,脱落等细胞病变样效应.PCR鉴定细胞裂解液中含有 hIGF-1目的基因.Western blot 证实重组腺病毒表达 hIGF-1蛋白.第 2代腺病毒的滴度为 80× 106 PFU/mL.[结论]成功构建出含有 hIGF-1目的基因的复制缺陷重组腺病毒.     

雄激素致不孕大鼠胰岛素样生长因子-1及其受体的变化

目的　观察雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠胰岛素样生长因子 1/胰岛素样生长因子 1受体(IGF 1/IGF 1R)的变化。方法　建立雄激素致高胰岛素高雄激素不孕大鼠模型 ,通过阴道涂片筛选各组大鼠 ;血清IGF 1测定采用放免法 ,IGF 1R的检测采用免疫组化法。结果　 (1)血清IGF 1水平 :两组间无统计学差异 ;(2 )胰腺、肝脏、卵巢和肾上腺IGF 1R免疫组化定量分析 :模型组 <正常组。结论　雄激素致不孕大鼠存在着主要靶器官低水平IGF 1R。     

昆虫细胞表达重组人胰岛素样生长因子1的研究

目的 利用杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ载体在昆虫细胞中表达重组人胰岛素样生长因子１（ｒｈＩＧＦ－１）。方法 含有胰岛素样生长因子１（ＩＧＦ－１）ｅＤＮＡ的重组ＡｃＭＮＰＶ感染昆虫细胞株Ｓｆ不及Ｓｆ２１后,采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测被重组病毒感染的昆虫细胞表达产生的ｒｈＩＧＦ－１,以野生型ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细胞及空白细胞的细胞培养液、细胞裂解物作对照。结果 （１）重组ＡｃＭＮＰＶ感染的昆虫细     

胰岛素样生长因子-1基因表达对糖尿病大鼠血糖的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达对糖尿病(DM)大鼠血糖的影响。方法:将含人IGF-1基因的重组转运质粒pCMV/IGF-1 DNA每鼠400μg肌内注射于DM大鼠模型(T组,n=7)体内,对照组(C组,n=7)给予同等剂量pcMV空载质粒DNA,同时设立正常对照组(N组,n=7)和DM对照组(DM组,n=7)。观察大鼠血糖和血IGF-1浓度(ELISA法),用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法比较治疗前后大鼠肝、肾、骨骼肌等组织IGF-1 mRNA表达量变化。结果:ICF-1基因治疗后,T组血糖较治疗前明显下降,由(28.71±1.79)mmol/L至(17.02±1.69)mmol/L,同时血IGF-1较基础水平明显升高,由(109.34±10.90)ng/ml至(135.61±6.15)ng/ml;T组大鼠在接受治疗后,血糖明显低于C组和DM组(P<0.000 1),而血IGF-1明显高于C组和DM组(P<0.000 1);RT-PCR结果显示,T组大鼠肝脏和骨骼肌IGF-1 mRNA表达量明显高于DM组(P<0.000 1,P=0.002),肾组织IGF-1基因含量与DM组比较,无明显统计学差异(P=0.387)。结论:IGF-1基因表达能有效降低DM动物血糖,为开展DM治疗新策略奠定基础。     

血清IGF-1和IGFBP-3及ALP在重组人生长激素治疗特发性矮小和特纳综合征中变化水平的观察

 目的 用重组人生长激素（rhGH）治疗特发性矮小（ISS）和Turner syndrome（TS）患儿,观察血清胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor -1,IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）及血碱性磷酸酶（ALP）在ISS和TS中的临床应用价值。方法　对rhGH治疗的ISS患儿31例和TS患儿17例进行治疗前后血清IGF-1、IGFBP-3及ALP浓度监测,观察治疗前后的变化。结果　ISS和TS患儿经rhGH治疗后IGF-1与IGFBP-3明显升高,6个月时达高峰,之后基本维持在较高水平;IGF-1与IGFBP-3的比值治疗后显著升高（F=6.739,P＜0.01）,以IGF-1升高更明显;ISS和TS患儿经rhGH治疗后血清ALP也明显上升,3个月时达高峰,之后基本维持在较高水平;血清ALP与IGF-1和IGFBP-3在治疗前后各个时间段不存在显著相关性。结论　ISS和TS患儿经rhGH治疗后,血清IGF-1、IGFBP-3及ALP水平均升高,并基本维持在较高水平,IGF-1较IGFBP-3升高更为明显;治疗起始3个月血清ALP反应敏感,血清ALP尚不能作为替代IGF-1和IGFBP-3监测rhGH治疗疗效的指标。     

胰岛素样生长因子1在结直肠癌中的研究进展

胰岛素样生长因子1是具有促进细胞增殖、分化等多种生物活性的生长因子。研究表明,其可促进肿瘤细胞的增殖、抑制肿瘤细胞的凋亡,在肿瘤的发生、发展中起重要作用。文章就其在直肠癌中的作用机制和研究现状作了阐述,说明胰岛素样生长因子1与结直肠肿瘤的关系具有广阔的研究空间。     

对阻塞性睡眠呼吸暂停综合症患者胰岛素样生长因子-1的初步探讨

目的:了解阻塞性睡眠呼吸暂停综合症(OSAS)患者胰岛素样生长因子1(IGF1)的浓度变化,探讨低氧对IGF1的影响。方法:对OSAS组40例,对照组15例进行多导睡眠仪监测,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IGF1浓度,应用统计学方法处理数据。结果:与对照组比较,OSAS中重度组IGF1浓度降低(P<0.05P<0.01);OSAS各组血清IGF1浓度分别与AHI、呼吸暂停时间比呈负相关,与最低氧饱和度及平均氧饱和度呈正相关。结论:阻塞性睡眠呼吸暂停会导致体内低氧而致血清中IGF1的浓度发生变化。     

重组人胰岛素样生长因子 1对坐骨神经损伤的修复作用

目的 在大鼠坐骨神经钳夹损伤模型上,探讨重组人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)融合蛋白的治疗作用. 方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组及hIGF-1融合蛋白高(0.02 mg)、低(0.002 mg)剂量处理组,建立大鼠坐骨神经钳夹损伤模型;以大鼠行为学、坐骨神经功能指数(SFI)、坐骨神经-腓肠肌诱发电位、组织形态学变化为指标,综合考察hIGF-1融合蛋白对损伤坐骨神经的影响. 结果 术后20～32 d,各测定时间点hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠SFI值及SFI恢复率显著高于模型组(P＜0.05),作用呈剂量依赖性.术后35 d,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经-腓肠肌诱发电位振幅显著高于模型组(P＜0.01),作用随剂量增大而增强.H-E染色显示,hIGF-1融合蛋白高、低剂量组大鼠坐骨神经损伤区再生神经排列较模型组规则,有髓神经纤维增多,髓鞘较厚且完整. 结论 重组hIGF-1融合蛋白能促进大鼠坐骨神经损伤的修复.     

重组人胰岛素样生长因子-1局部毒性、免疫原性研究

目的：考察重组人胰岛素样生长因子-1（rhIGF-1）的局部毒性、免疫原性。方法家兔连续7 d皮下注射rhIGF-1,末次给药后48 h ,对给药部位皮肤进行组织病理学检查;豚鼠隔日连续3次腹腔注射rhIGF-1致敏,末次致敏后14 d静脉注射激发,激发后密切观察过敏反应症状;体外试管法观察rhIGF-1的溶血作用;小鼠每周皮下注射rhIGF-12次,连续4周,间接ELISA法检测抗体产生情况。结果皮下刺激性试验提示,rhIGF-1对皮下组织有刺激作用;全身主动过敏反应中阴性对照组过敏反应呈阴性,低剂量组、高剂量组和阳性对照组过敏反应呈极强阳性;体外溶血试验不引起溶血反应;间接ELISA结果表明,给药1周,未见动物产生抗体,从给药2周开始,所有动物均产生抗体,且随着给药时间的延长,抗体滴度明显上升。结论 rhIGF-1对动物具有致敏性、刺激性、免疫原性,但不引起溶血反应。     

助孕胶囊对多囊卵巢综合征大鼠性激素含量及胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的:探讨中药助孕胶囊(ZYJN)对多囊卵巢(PCO)大鼠的治疗作用并分析其可能的作用机制。方法:采用皮下埋植左旋18-甲基炔诺酮硅胶棒的方法制作动物模型,将大鼠随机分为模型组、助孕胶囊组、克罗米酚组、联合用药(助孕胶囊 克罗米酚)组及对照组,运用放免法测定血性激素水平的变化,光镜观察卵巢、卵泡发育情况,免疫组化法检测卵巢组织胰岛素样生长因-1的表达水平。结果:助孕胶囊可使PCO大鼠的颗粒细胞层增厚,卵泡膜细胞层变薄,血清T、LH水平均明显下降,并下调卵巢组织胰岛素样生长因子-1的表达。结论:助孕胶囊能够通过调整内分泌及影响卵巢胰岛素样生长因子-I的表达,在中枢及卵巢局部协调发挥作用,从而调整性腺功能,促进卵泡的发育成熟及排卵。