结核分枝杆菌IS6110探针的克隆化

目的 制备克隆化结核分枝杆菌IS6110探针。方法 将IS6110的PCR扩增245bp片段克隆至质粒载体pCR2.1中。结果 得到了含有IS6110克隆化245bp的质粒菌析。结论 克隆化的探针易操作且一致性较好。     

二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA

目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验（MTD）的检出率、检测时间等，探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA（T＆DNA）的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础，对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测，并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验（MTD）进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在10^2～10^6copies／μl时，方法能够保持良好的线性关系（相关系数为0．9994），阳性检出率（100％）显著高于抗酸染色法（16．28％）和培养法（37．21％）的检出率，与MTD试验的检出率（100％）一致。MTD试验检测时间约4～5h，而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果，检测费用仅为MTD的1／4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点，该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA

目的探讨结核分枝杆菌感染在结节病发病中的作用;方法荧光定量聚合酶链反应技术检测22例结节病肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA;结果22例肺泡灌洗液中9例检出结核分枝杆菌;结论结核分枝杆菌感染可能是结节病病因之一。     

结核分枝杆菌IS6110探针的克隆化

目的　制备克隆化结核分枝杆菌IS6110探针。方法 将IS6110的PCR扩增245bp片段克隆至质粒载体pCR2.1中。结果 得到了含有IS6110克隆化245bp的质粒菌株。结论 克隆化的探针易操作且一致性较好。     

结核分枝杆菌DNA疫苗研究进展

20世纪 90年代初 ,有关质粒DNA诱导对其编码的抗原的免疫反应报道之后 ,DNA疫苗便成为疫苗技术增长最迅速的领域[1,2 ] 。现将DNA疫苗的概况及结核分枝杆菌DNA疫苗的研究现状介绍如下。一、DNA疫苗概况(一 )DNA疫苗作用原理与重组细菌或病毒疫苗相比 ,DNA疫苗仅由DNA(如质粒 )或RNA(如mRNA)组成 ,疫苗抗原的编码基因插入适当的真核细胞质粒DNA的始动子及终止密码之间 ,它可在细菌体内复制 ,而不能在人类宿主细胞内复制。此质粒可由大肠杆菌培养中纯化而得到。DNA被肌肉细胞摄取进入细胞核内 ,在此抗原基因被转录 ,mRNA被转…     

探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变

目的评价探针熔解分析法快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药突变的应用价值,为临床应用提供依据。方法首先用中国药品生物制品检定所提供的含37份标准非结核分枝杆菌的标准盘进行特异性评价,然后将野生型结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA梯度稀释进行灵敏度考察,最后对906株结核分枝杆菌临床分离株（其中37份有药物敏感性试验结果）的链霉素耐药相关基因进行检测,并对突变菌株、有药敏结果的菌株以及疑似杂合的菌株进行测序分析。结果标准盘评价结果证实该体系特异检测H37Rv结核分枝杆菌。分析灵敏度为5~50拷贝每反应。在所有的906份结核分枝杆菌培养标本中,103份标本发生突变且与测序结果一致,18份标本存在杂合信号,17份标本无信号。37份有药敏结果的标本中,敏感的标本用探针熔解分析法所得结果均为野生型,耐药的16份标本仅检测到7份突变,另有9份耐药的标本实时检测为野生型,与测序结果相符。结论探针熔解分析技术特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌链霉素耐药常见突变,有望直接用于临床标本链霉素耐药性检测。     

临床标本中结核分枝杆菌扩增直接试验的评价

背景:最近10年结核病例数有所增加,寻找快速特异的方法直接检测呼吸道标本的结核分枝杆菌十分必要。结核分枝杆菌扩增直接试验(AMTDT)是一种直接从标本中检测结核杆菌的方法。目的:评价AMTDT的敏感性和特异性。方法:我们对426例病人进行了试验,其中包括58例培阳和(或)临床诊断为结核病的病人,386例培养阴性和临床诊断为非结核病的病人作为对照组。将试验结果与培养以及结核病的临床诊断作比较。结果:在58例培阳和(或)临床诊断为结核病的病人中,AMTDT阳性数为35例,而在368例对照组中,71例AMTDT阳性,17例涂片阴性的结核病人中11例AMTDT结果阳性。AMTDT试验的敏感性和特异性分别是60％和80％。结论:AMTDT能作为临床上高度疑似结核病的补充诊断技术。     

淋巴细胞部分结核分枝杆菌DNA检测的临床意义

目的 判别淋巴细胞部分ＴＢ－ＤＮＡ检测的临床意义。方法 将淋巴细胞分离液血细胞方法与ＰＣＲ方法结合，对１５０例活动性结果、５０例非结核、３０例结核病已于三年前治愈者，３０例健康对照者同步检测外周血淋巴细胞部分和血浆部分的ＴＢ－ＤＮＡ１２３ｂｐ和２４５ｂｐ；并３０例初治肺结核病人外周血淋巴细胞部分ＴＢ－ＤＮＡ转阴时间。整个研究采取双盲法。结果 确立有ＴＢ－ＤＮＡ存在于活动性肺结核病人淋巴细胞部分而不     

淋巴细胞部份结核分枝杆菌DNA检测的临床意义

目的 判别淋巴细胞部份ＴＢ－ＤＮＡ检测的临床意义。方法 将淋巴细胞分离液分离血细胞方法与ＰＣＲ方法结合，对１５０例活动性结核、５０例非结核、３０例结核病已于三年前治愈率、３０例健康对照者同步检测外周血淋巴细胞部分和血浆部份的ＴＢ－ＤＮＡ１２３ｂｐ和２４５ｂｐ；并观察３０例初治肺结核病人外周血淋巴细胞部份ＴＢ－ＤＮＡ转阴时间。整个研究采取双盲法。结果 确实有ＴＢ－ＤＮＡ存在于活动性肺结核病人淋巴细胞     

应用基因阵列法快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的　研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法　根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基因阵列杂交 ,同时以聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序法为对照。结果　 111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR SSCP分析 ,4 1株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同 ;70株耐RFP菌株中 ,6 3株(90 % )SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同 ,其余 7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同。基因阵列检测结果 4 1株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同 ,70株耐RFP临床分离株中 ,6 3株检测到rpoB基因突变 ,检出率为 90 % ;其中 37株 (5 3% ) 5 31位丝氨酸 (Ser)置换 ,15株 (2 1% ) 5 2 6位组氨酸(His)置换 ,11株 (16 % )其他位置的氨基酸置换。基因阵列检测结果与PCR SSCP及测序结果一致。结论　用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。     

结核分枝杆菌DNA分型技术及其应用

在结核分枝杆菌基因组插入序列中，IS6110是最有特点的插入序列，同时结核分枝杆菌基因组内除IS6110插入序列外。还有多个插入序列和重复元件。如IS1081、PGRS、VNTR、DR等等，利用这些插入序列或重复序列，通过扩增或酶切杂交获得象人体指纹一样的特异带型，即DNA指纹图谱，由此建立的方法就称为DNA指纹技术。     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

CDG-3荧光探针检测结核分枝杆菌的初步研究

目的 探讨CDG-3荧光探针[β-内酰胺酶(BlaC)特异性绿色荧光探针]用于结核病诊断的潜在可能性。方法 为明确CDG-3荧光探针的特异性,选取结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)标准株H37Rv,牛和非洲分枝杆菌标准株,35种临床相对常见的不同非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)标准株和6种呼吸道感染病原菌标准株,与CDG-3荧光探针反应后进行检测;为初步了解CDG-3荧光探针临床应用效果,收集2016年1月至9月于北京胸科医院门诊就诊的200例疑似肺结核患者的痰标本分别进行金胺O荧光染色法、培养法(罗氏固体培养联合MGIT960液体培养,二者只要有一种结果为阳性即认为培养阳性)和CDG-3荧光探针检测,并对检测结果进行分析。结果 以H37Rv为标准,CDG-3荧光探针检测牛和非洲分枝杆菌标准株结果均为阳性。试验的35种NTM标准株中,CDG-3荧光探针检测结果阳性的菌株仅有3株,分别是堪萨斯分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌和草分枝杆菌;其余32株的检测结果为阴性。6种呼吸道感染病原菌中,5种检测结果为阴性,1种(诺卡菌)为阳性。在临床痰标本实验中,CDG-3荧光探针对痰MTB的阳性检出率为53.0%(106/200),高于金胺O荧光染色法(29.5%,59/200)与培养法(35.0%,70/200)的阳性率,差异有统计学意义(χ ²值分别为33.587、21.121,P值均为0.000)。以培养法结果为标准,CDG-3荧光探针检测的敏感度为84.3%(59/70),高于金胺O荧光染色法(70.0%,49/70);特异度为63.8%(83/130),低于金胺O荧光染色法(92.3%,120/130);以临床诊断为标准,CDG-3荧光探针检测的敏感度为64.4%(96/149),高于金胺O荧光染色法(39.6%,59/149)和培养法(44.3%,66/149);特异度为95%(19/20),低于金胺O荧光染色法(100%,20/20),高于培养法(90%,18/20)。 结论 CDG-3荧光探针对MTB的选择性较好,受NTM干扰较小,与呼吸道感染病原菌的反应还需进一步研究;CDG-3荧光探针技术具有快速、简便、检出效率高等优势,但特异度有待进一步提高。     

DNA指纹技术检测耐多药结核分枝杆菌的应用研究

目的 应用结核分枝杆菌DNA指纹技术,了解耐多药结核分枝杆菌的基因型状况并探讨耐多药结核病的分子流行病学.方法 以结核分枝杆菌插入序列IS6110序列为模板,设计一对特异外向引物,建立一种结核分枝杆菌DNA指纹技术方法,对临床标本中分离的220株耐多药结核分枝杆菌进行DNA指纹基因分析.同时对实验数据进行聚类分析,进行耐多药结核病分子流行病学研究.结果 根据结核分枝杆菌DNA指纹图谱分析,220株耐多药结核分枝杆菌均产生特征DNA指纹图谱,DNA指纹图谱变异很大.每一菌株DNA指纹的拷贝数介于3至18之间.其中大部分菌株,即205株(93.2%)包含6～13个拷贝,平均为11个带.这205株DNA指纹图谱中,162株为特异的,提示它们在流行病学上是独立的.有58株(26.4%)指纹图谱组成了15个簇,每簇2～8株,它们的IDNA指纹图谱相同,可能代表了近期的传播.尤其是在此DNA指纹图谱中,其中分子量为200 bp扩增带频率最大,在220株耐多药结核分枝杆菌均出现.结论 结核杆菌DNA指纹技术检测可应用耐多药结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型,并可用于耐多药结核病分子流行病学调查.     

结核分枝杆菌DNA指纹技术在河南结核病流行病学中的应用

结核分枝杆菌DNA指纹技术是一种用于结核流行病学分析的分子生物学手段，它除能追踪传染源，查证传播途径、筛选结核病易于传播的人群外，还能分析某一地区流行的结核分枝杆菌的群结构特征。本研究利用结核分枝杆菌DNA指纹技术分析2000年河南省内流调获得的结核分枝杆菌野生株，并对其进行了一些统计学分析，以期获得一些新的提示：     

DNA指纹技术检测耐多药结核分枝杆菌的应用研究

目的应用结核分枝杆菌DNA指纹技术,了解耐多药结核分枝杆菌的基因型状况并探讨耐多药结核病的分子流行病学。方法以结核分枝杆菌插入序列IS6110序列为模板,设计一对特异外向引物,建立一种结核分枝杆菌DNA指纹技术方法,对临床标本中分离的220株耐多药结核分枝杆菌进行DNA指纹基因分析。同时对实验数据进行聚类分析,进行耐多药结核病分子流行病学研究。结果根据结核分枝杆菌DNA指纹图谱分析,220株耐多药结核分枝杆菌均产生特征DNA指纹图谱,DNA指纹图谱变异很大。每一菌株DNA指纹的拷贝数介于3至18之间。其中大部分菌株,即205株（93.2%）包含613个拷贝,平均为11个带。这205株DNA指纹图谱中,162株为特异的,提示它们在流行病学上是独立的。有58株（26.4%）指纹图谱组成了15个簇,每簇28株,它们的IDNA指纹图谱相同,可能代表了近期的传播。尤其是在此DNA指纹图谱中,其中分子量为200 bp扩增带频率最大,在220株耐多药结核分枝杆菌均出现。结论结核杆菌DNA指纹技术检测可应用耐多药结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型,并可用于耐多药结核病分子流行病学调查。     

微量MIC快速检测结核分枝杆菌研究进展

世界卫生组织估计约2/3的结核病患者处于发生耐多药的危险之中,快速准确地进行结核分枝杆菌(MTB)药敏检测、及时调整抗结核化学治疗方案是有效控制疫情的重要方法之一。利用微量MIC法检测MTB的耐药性是近年来出现的一种较新的药敏检测方法,该技术采用的是液体培养基。1986年Richard等将其首次应用于检测较缓慢生长的分     

结核分枝杆菌分子生物学检测方法新进展

应用分子生物学技术检测结核分枝杆菌,克服了传统检测方法的诸多不足,能够对难以培养、生长缓慢的结核分枝杆菌进行更加敏感、特异、准确、快速的鉴定和药物敏感性评价。本文概述了目前国内外几种结核分枝杆菌分子生物学检测方法的原理、应用现状及评价。