扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响

目的:观察扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响.方法:BALB/c小鼠40只随机分为正常组、模型对照组、环孢霉素A对照组、扶正养营颗粒实验组,记数外周血象、骨髓有核细胞,测定骨髓造血组织容量及bcl-2表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,环孢霉素A组、扶正养营颗粒组外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:扶正养营颗粒可能是通过上调拮抗凋亡因子bcl-2的表达,改善骨髓增殖,发挥其治疗再生障碍性贫血的作用.     

再障骨髓造血细胞培养及其凋亡的研究

目的 :了解再障骨髓造血细胞分裂、增殖活性及凋亡情况。方法 :应用甲基纤维素体外培养法、电镜、流式细胞术检测 11例再障骨髓造血细胞分裂、增殖及凋亡情况。结果 :再障者骨髓造血细胞BFU -E及CFU -GM集落、集族产率远较对照组为低 (P <0 .0 1) ,凋亡率较对照组为高 (P <0 .0 1)。结论 :再障患者骨髓造血细胞的分裂与增殖能力严重受损 ,其骨髓造血细胞凋亡增加是再障的发病机制之一     

再障患者血清体外诱导正常骨髓造血细胞凋亡的研究

目的 :了解再障患者血清的造血抑制和诱导凋亡活性 ,及对造血细胞膜上Bcl -2蛋白、Bax蛋白表达的影响。方法 :应用甲基纤维素体外培养法、电镜、TUNEL法、流式细胞术分析、间接免疫荧光标记法对 13例再障患者血清体外抑制正常人骨髓造血细胞增殖及促进正常人骨髓集落细胞凋亡的作用 ,以及共同培养后对集落细胞膜表面的Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达的影响。结果 :再障患者血清在体外均可明显抑制正常人BFU -E及CFU -GM的增殖 ,再障组骨髓集落细胞中有较多细胞呈现凋亡形态 ,凋亡率明显高于正常 (P <0 .0 1) ,重型再障 (SAA)组血清的造血抑制活性和诱导凋亡活性均强于非重型再障 (NSAA)组 (P <0 .0 5 )。SAA、NSAA组、和正常组的集落细胞胞膜上表达一定量的Bcl-2蛋白、Bax蛋白 ,不高于阴性对照 ;表达Bcl-2蛋白、Bax蛋白的量与相应集落细胞的凋亡率无相关性。结论 :再障患者血清具有造血抑制活性和诱导凋亡活性 ;再障患者血清作用后Bcl-2蛋白、Bax蛋白在造血细胞膜上的表达无明显的改变。     

健脾补肾活血方及其拆方对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞凋亡的影响

目的:采用细胞培养方法,从细胞凋亡角度探讨健脾补肾活血方对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)模型小鼠的疗效及其促进骨髓造血的作用机制。方法:复制AA小鼠模型并制备AA小鼠血清,以健脾补肾活血方及其拆方灌胃大鼠制备含中药血清,共同培养正常小鼠骨髓造血细胞,24 h后采用流式细胞仪和透射电镜观察细胞的凋亡情况。结果:AA小鼠血清能诱导正常小鼠骨髓造血细胞发生凋亡,经健脾补肾活血方及其拆方的药物血清作用后,各组小鼠骨髓造血细胞的凋亡率均下降,其中,补肾方的疗效优于健脾方和活血方,健脾补肾活血方(全方)的效果最好。电镜观察造血细胞超微结构的结果亦表明补肾方的作用较好,但以全方作用最佳。结论:健脾补肾活血方及其拆方均可不同程度地降低骨髓细胞凋亡率,可促进骨髓恢复造血功能。     

免疫介导的再障小鼠血浆中肿瘤坏死因子水平的变化

用ＴＮＦ ＥＬＩＳＡ检测免疫介导的再障小鼠发病时血浆中的ＴＮＦ及发病过程中血浆ＴＮＦ的动态变化，结果显示：免疫介导的再障小鼠血浆ＴＮＦ水平明显升高；ＴＮＦ随发病过程呈线性升高。     

人参养营汤对免疫介导再障小鼠骨髓微环境作用的研究

目的探讨人参养营汤对再障骨髓微环境的作用及其机制。方法建立免疫介导再障小鼠模型。胃饲人参养营汤每次 0 .5ml,1d 2次 ,第 1 0d记数股骨有核细胞数 ,再观察成纤维细胞集落形成单位 (CFU -F) ,培养基质细胞层的粘附能力。结果药物组CFU -F数为 (2 5 .6± 7.1 4)个 ml,显著高于再障组 (1 0 .3±5 .63 )个 ml。药物组体外培养基质细胞粘附正常小鼠骨髓有核细胞能力为 (70 .3 3± 9.5 0 ) % ,与正常组(71 .67± 7.5 7) %无显著性差异 ,明显高于再障组 (5 2 .67± 8.98) % ,P <0 .0 0 1。结论人参养营汤能促进骨髓基质细胞生长及粘附功能 ,并通过改善骨髓微环境而有利于骨髓造血细胞增生     

参芪扶正注射液对再生障碍性贫血小鼠脾脏T-bet表达的影响

目的观察参芪扶正注射液对再生障碍性贫血(以下简称再障)小鼠的疗效及其对Th1细胞转录因子T-bet的影响,探讨参芪扶正注射液在再障治疗中的免疫调节作用。方法将小鼠随机分成正常组、模型组及用药组,用药组给予参芪扶正注射液腹腔注射治疗,正常组及模型组给予生理盐水对照治疗,治疗第11天观察外周血、骨髓象及T-bet蛋白表达水平。结果与正常组比较,模型组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显降低,T-bet蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,用药组小鼠外周血象计数、骨髓造血细胞明显升高,T-bet表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论参芪扶正注射液能改善贫血症状,降低再障小鼠脾脏组织中转录因子T-bet的表达水平,逆转Th1型反应,调节免疫异常。     

补肾活血法对免疫介导型再障小鼠造血调控因子影响的实验研究

建立免疫介导型再障小鼠模型,胃饲补肾活血方药,观察造血调控因子IL-2、IL-10、IFNγ、TNFα分泌水平的变化.结果免疫介导型再障小鼠造血负调控因子IL-2、IFNγ、TNFα显着高于正常对照组(P《0.05),IL-10低于正常对照组,(P《0.05).补肾活血中药组IL-2、IFNγ、TNFα显著低于模型组(P《0.05),IL-10显着高于模型组(P《0.05),说明补肾活血方药可通过抑制造血负调控因子的分泌,减轻免疫因素对机体的损害,恢复机体的造血功能.     

人参养营颗粒剂对免疫介导再生障碍性贫血小鼠血细胞系统及 …

观察人参养营颗粒剂对再生障碍性贫血小鼠血细胞系统及血中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化脂质（ＬＰＯ０及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的影响。结果表明：人参养营颗粒剂可改善再障组小鼠生活质量,显著增强红中ＳＯＤ,ＬＰＯ,ＧＳＨ－Ｐｘ的活性,降低血浆ＬＰＯ的含量,并能显著提高外周血细胞数,骨髓有核细胞数。     

人参养营颗粒剂对免疫介导再生障碍性贫血小鼠血细胞系统及氧自由基的影响

观察人参养营颗粒剂对再生障碍性贫血小鼠血细胞系统及血中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的影响.结果表明:人参养营颗粒剂可改善再障组小鼠生活质量,显著增强红细胞中SOD、LPO、GSH-PX的活性,降低血浆LPO的含量,并能显著提高外周血细胞数、骨髓有核细胞数.     

人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡作用及对Caspase-3、Fas表达的影响

目的 探讨人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡的作用机制及其对凋亡相关基因Caspase-3、Fas表达的影响.方法 采用人参总皂苷0、100、200及400 μ g/ml作用于HL-60细胞,并在不同时间内用MTT法检测人参总皂苷对HL-60细胞的抑制率;48h后予普通光镜、荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化;予流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测HL-60细胞凋亡;予RT-PCR法检测Caspase-3、Fas基因表达的变化.结果 人参总皂苷抑制HL-60细胞生长呈剂量及时间依赖性;在100～400 μ g/ml时,HL-60细胞凋亡逐渐增加,可见典型的凋亡细胞形态和明显的DNA梯度;在该浓度范围内,Caspase-3、Fas表达逐渐增加.结论 一定浓度的人参总皂苷可诱导HL-60细胞发生凋亡,且细胞凋亡率与人参总皂苷浓度呈一定的量效依赖关系,Caspase-3、Fas基因的表达变化在人参总皂苷诱导HL-60细胞凋亡中可能起重要作用.     

Caspase-3和Fas在上皮性卵巢癌中的表达

①目的检测Caspase-3和Fas在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤及上皮性卵巢癌组织中的表达,分析其与临床病理特征的关系。②方法利用免疫组织化学方法检测30例正常卵巢组织、30例良性上皮性卵巢肿瘤和60例上皮性卵巢癌中Fas和Caspase-3的表达。③结果正常卵巢组织中Caspase-3和Fas表达显著高于上皮性卵巢癌,差异有统计学意义（P〈0.05）。上皮性卵巢癌组织中,随着病理分级和临床分期的增高,Fas和Caspase-3的表达逐渐降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。Caspase-3和Fas的表达呈正相关（r=0.702,P〈0.05）,并具有良好的共位性,Fas表达高的组织和区域,Caspase-3也相对的高表达。④结论 Caspase-3和Fas在上皮性卵巢癌中表达下调,且二者具有相关性。     

慢性酒精中毒大鼠神经细胞凋亡及Fas、Caspase8蛋白的表达

目的研究慢性酒精中毒大鼠神经细胞凋亡及Fas、Caspase8蛋白表达情况。方法逐步增加饮水中酒精浓度,建立慢性酒精中毒大鼠动物模型,HE染色光镜下观察大鼠脑组织病理变化,Tunnel法检测大鼠脑细胞凋亡情况,免疫组化法检测Fas、Caspase8蛋白表达情况。结果酒精组大脑皮质、海马、小脑等部位均有神经细胞数目缺失及细胞变性和损伤,酒精组各脑区凋亡细胞数和Fas、Casepse8蛋白表达阳性细胞数均高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性酒精中毒大鼠脑存在明显神经细胞凋亡,伴有Fas、Caspase-8蛋白表达增加,提示细胞死亡受体途径在慢性酒精中毒大鼠脑损伤病理过程中发挥作用。     

银杏叶提取物预处理对大鼠肝移植细胞凋亡及Caspase-3 mRNA和FasmRNA表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（ginkgo Biloba extract EGb）预处理对大鼠肝移植的保护作用及其对供肝FasmRNA Caspase-3mRNA表达的影响。方法雄性SD大鼠分别作供体、受体；采用Kamada’s袖套法建立大鼠原位肝移植模型，根据供肝切取前1h是否静脉注射银杏叶提取物（40mg／kg）将大鼠随机分为银杏叶提取物预处理组（EGb）：生理盐水对照组（Saline group NS）；假手术组（Sham operation SO）。分别于供肝再灌注后2h、6h、24h处死动物，检测血清ALT、AST，部分肝组织，10％的甲醛固定、石蜡包埋，病理切片HE染色作组织学检查，TUNEL法检测细胞凋亡，新鲜肝组织用RT-PCR检测FasmRNA，Caspase-3mRNA的表达。结果供肝再灌注2h、6h、24h各时点，银杏叶提取物预处理组大鼠血清ALT水平及细胞凋亡指数均明显低于生理盐水对照组（P〈0．01）。血清AST水平在供肝再灌注2h、6h各时点明显现低于生理盐水对照组（P〈0．01）。供肝再灌注后2h、6h、24h银杏叶提取物预处理组Caspase-3mRNA及FasmRNA的表达明显低于生理盐水对照组（P〈0．05）。结论银杏叶提取物预处理大鼠供肝，可以减轻移植肝的缺血／再灌注损伤和细胞凋亡，影响FasmRNA，Caspase-3mRNA的表达，对供肝有保护作用。     

宫颈癌癌变过程中Caspase-3、Fas/FasL的表达及其临床意义

目的:探讨宫颈癌癌变过程中Caspase-3、Fas/FasL蛋白表达的变化。方法:用免疫组织化学SP法检测42例宫颈癌、13例宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraep ithelial neop lasia,C IN)和8例正常宫颈组织中Caspase-3、Fas/FasL蛋白的表达。结果:Caspase-3蛋白在正常宫颈组织、C IN及宫颈癌组织中的阳性表达率依次降低(P<0.05)。而Fas及FasL在C IN及宫颈癌组织中的表达与在正常组织中表达相比均有显著性差异(PFas<0.05;PFasL<0.05)。结论:宫颈癌组织能通过Caspase-3、Fas的表达及FasL高表达逃逸机体免疫监视以促使肿瘤发生发展及转移。     

异氟醚对老年小鼠空间参考记忆和脑细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的 观察异氟醚对老年小鼠空间学习记忆能力及其大脑Caspase-3蛋白表达、细胞凋亡的影响.方法 24只16月龄C57BL/6老年小鼠分层随机分为异氟醚组(Iso,n=12)和对照组(Con,n=12).lso组使用1.0%异氟醚行麻醉暴露4h/d,连续2d;Con组同期只使用30%的氧气和70%氮气混合气.在麻醉暴露后,采用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,再分别使用免疫荧光染色法及TUNEL法检测小鼠大脑皮质区(CX)、海马Cal区和齿状回(DG)的Caspase-3蛋白表达及神经细胞凋亡的变化.结果 在Morris水迷宫的定位航行测试中,2组间逃避潜伏期的变化差异无显著性(F=0.007,P=1.235),但在空间探索实验测试中,Iso组在原平台所在象限(靶象限)停留时间[(34.5±5.0)%]明显短于Con组[(45.1±4.9)%],差异具有显著性(P<0.01).测试过程中2组小鼠寻找平台游泳的速度差异无显著性F=1.537,P=0.241).免疫荧光染色检测结果显示,DG、CAI及Cx区均可见Caspase-3阳性细胞,然而2组间的单位面积的阳性细胞数(阳性密度)比较差异无显著性(P>0.05).TUNEL 法检测到极少量阳性凋亡细胞.结论 重复使用1%异氟醚麻醉暴露可损害老年小鼠的空间参考记忆能力,但无明显影响大脑Caspase-3蛋白表达及细胞凋亡.     

过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡与Caspase-3表达的实验研究

目的:探讨过氧化氢对血管内皮细胞促凋亡作用及发生机制。方法:用0.1mmol/L、0.5mmol/L与1.0mmol/L等不同浓度的过氧化氢分别作用于对数生长期的内皮细胞,采用PI染色与Annexin V/PI染色后,进行流式细胞术检测内皮细胞的死亡率与凋亡率,并一步检测采用流式细胞术Caspase-3的水平表达。结果:过氧化氢0.1mmol/L、0.5mmol/L与1.0mmol/L组内皮细胞,凋亡率分别为18.6%±5.8%、32.8%±6.2%与42.1%±10.1%,而PI阳性率则为10.9%±4.1%、26.6%±5.3%与28.3%±4.6%,而Caspase-3的阳性表达率则为10.2%±2.1%、16.3%±3.2%和16.9%±3.9%。结论:过氧化氢可引起细胞凋亡,其中0.5mmol/L是诱导适宜浓度,且凋亡发生机制与Caspase-3激活相关。     

吗啡成瘾时脑内Fas、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的改变

目的 观察吗啡成瘾时脑细胞中凋亡相关蛋白Fas、Caspase-3和Bcl-2表达的改变.方法 将48只体质量为190～210 g的成年SD大鼠随机分为3组:吗啡依赖组、吗啡戒断组和对照组,每组16只.依据药物递增原则,依赖组和戒断组大鼠腹腔内给予吗啡13d,建立吗啡成瘾模型.戒断组大鼠在成瘾后腹腔内注射纳洛酮5 mg/kg,诱导戒断30 min.对照组大鼠在相同的治疗时间腹腔内注射生理盐水.应用免疫组织化学、蛋白印迹分析方法检测大鼠海马区Fas、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 与对照组比较,吗啡依赖组和戒断组大鼠海马区Fas和Caspase-3的表达增加(P＜0.01),而Bcl-2的表达降低(P＜0.01).结论 长期应用吗啡可通过Fas、Caspase-3表达的增加和Bcl-2表达的降低诱发脑细胞异常凋亡,这可能是阿片类药物引起神经损害的机制之一.     

中药抗癌灵诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其对Fas和Caspase-3蛋白表达的影响

目的探讨复方中药抗癌灵对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas和Caspase-3表达的影响。方法以10、20和40ml/L抗癌灵提取液处理SGC-7901细胞48h,并以25mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Fas和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,抗癌灵提取液各浓度组细胞抑制率显著升高(P<0.01),细胞凋亡率明显上升(P<0.01),Fas和Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.05或0.01)。结论中药抗癌灵具有诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,其分子机理可能与上调Fas和Casoase-3蛋白表达有关。