TGF-β1基因修饰BMSCs对I型胶原表达的影响

目的:通过对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)转染人TGF-β1基因,观察该基因对BMSCs表达I型胶原的影响。方法:采用脂质体介导法转染人TGF-β1基因至BMSCs,采用定量RT-PCR,免疫荧光分析等方法分析转基因后,BMSC表达I型胶原的变化。结果:重组质粒pCDNA3.1( )-TGF-β1成功转染至大鼠BMSCs,细胞免疫荧光和定量RT-PCR均证实了TGF-β1表达的增强。结论:转TGF-B1基因可以促使BMSCs合成I型胶原。     

XW630对大鼠成骨细胞TGF-β_1和Ⅰ型胶原基因表达调控的研究

目的 :探讨抗骨质疏松新药XW6 30促进成骨作用的机理。方法 :提取并标记制备TGF_β1和ColⅠ基因的cDNA探针 ,将 3种不同药物作用于大鼠成骨细胞 2 4、72h后 ,提取细胞总RNA ,并与TGF_β1和ColⅠ基因的cDNA探针进行狭缝杂交。结果 :XW6 30具有促进大鼠成骨细胞中TGF_β1和ColⅠmRNA表达的作用 ,在相同浓度 (10 -6mol/L)下 ,其作用优于四环素加哌嗪雌酮和单纯雌酚酮 (P <0 0 5 )。结论 :XW6 30可能通过促进TGF_β1和ColⅠmRNA的表达而促进成骨作用     

TGF-β1、EGFP双基因修饰骨髓间充质干细胞的体外实验研究

目的：构建PTGF-β1-IRES2-EGFP双顺反子真核表达载体,检测其在骨髓间充质干细胞（BMSCs）中的表达,为研究基因修饰细胞回植后的迁移转归及成骨作用提供实验基础。方法：构建PTGF-β1-IRES2-EGFP双顺反子真核表达载体,PTGF-β1-IRES2-EGFP与pIRES2-EGFP分别转染BMSCs,并设空白对照。荧光显微镜和细胞免疫组化分别检测GFP和TGF-β1的表达。结果：成功地构建含TGF-β1基因和EGFP基因的真核表达载体。G418筛选10～15d后有抗性克隆形成。PTGF-β1-IRES2-EGFP转染组抗性克隆中,GFP表达的同时有TGF-β1的表达,而部分抗性克隆（约20％）中有TGF-β1表达的却无GFP表达。pIRES2-EGFP转染组的抗性克隆中有EGFP表达,但无TGF-β1表达。结论：利用IRES构建的含TGF-β1基因和GFP基因的双顺反子真核表达载体,能在部分BMSCs中同时获得表达,可以作为TGF-β1基因修饰BMSCs体内回植后追踪其成骨作用的方法。     

三七总皂苷对兔BMSCs的成骨分化及TGF-β1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)对兔骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨分化及TGF-β1在基因水平表达变化的影响。方法:体外分离培养兔BMSCs,观察不同浓度PNS(50、100、200 mg/L)对兔BMSCs的影响,采用MTT法检测细胞增殖,茜素红染色观察钙结节形成,qRT-PCR检测TGF-β1表达水平。结果:各浓度PNS培养下的细胞增殖无明显差异(P>0.05);100、200 mg/L PNS组的钙结节数量和TGF-β1的表达水平均高于阴性组(P<0.05)。结论:PNS可促进兔BMSCs的成骨分化并刺激其分泌TGF-β1,但无明显促细胞增殖作用。     

XW630对大鼠成骨细胞TGF-β_1和Ⅰ型胶原基因表达调控的研究

目的:探讨抗骨质疏松新药XW630促进成骨作用的机理。方法:提取并标记制备TGF-B1和ColÑ基因的 cDNA探针,将3种不同药物作用于大鼠成骨细胞24、72 h后,提取细胞总RNA,并与TGF-B1和ColÑ基因的cDNA探针进行狭缝杂交。结果:XW630具有促进大鼠成骨细胞中TGF-B1和ColÑmRNA表达的作用,在相同浓度(10-6 mol/L)下,其作用优于四环素加哌嗪雌酮和单纯雌酚酮(P<0105)。结论:XW630可能通过促进TGF-B1和ColÑ mRNA的表达而促进成骨作用。     

地塞米松诱发先天性腭裂对TGF-β1、TGF-β2表达的影响

目的：探讨TGF-β1、TGF—β2在先天性腭裂发病过程中的作用。方法：在GDl2^12以磷酸地塞米松注射液(50mg／kg)经母鼠腹腔注射，对照组则以等量生理盐水代替。分别于GDl3^12、GDl4^12、GDl5^12取出胎鼠头部标本，作冠状位切片。采用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-β2的表达。结果：地塞米松在GDl2^12作用于孕鼠可以诱发小鼠先天性腭裂，并使胚胎腭中TGF-β1表达较同期正常组高，TGF-β2表达较正常组高，腭突上抬后的降低被抑制。结论：地塞米松诱发先天性腭裂与TGF-β1．TGF-β2的表达异常改变有关。     

以胶原缓释rhBMP-2复合BMSCs及珊瑚构建组织工程骨异位成骨的实验研究

目的：观察以胶原缓释rhBMP-2复合BMSCs及珊瑚构建的组织工程骨异位成骨的能力。方法：构建3种复合支架材料：1)rhBMP-2／珊瑚；2)胶原rhBMP-2／珊瑚；3)BMSCs／胶原rhBMP-2／珊瑚。分别植入裸鼠皮下，8周后观察成骨情况，并作比较。结果：第3组材料异位成骨的能力最强，第2组次之，第1组较弱。结论：动物实验中胶原是rhBMP-2适宜的缓释载体，BMSCs对促进材料异位成骨有重要意义。     

IGF-1基因转染对骨髓基质细胞分泌IGF-1、ON和Ⅰ型胶原的影响

目的:观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因转染的骨髓基质细胞(MSCs)合成IGF-1、骨粘连素(osteone-ctin,ON)和Ⅰ型胶原(Collagen-I)的变化,进一步了解基因转染骨髓基质细胞的生物学特性。方法:将含有IGF-1基因的真核质粒转染入大鼠骨髓基质细胞(MSCs)中,以正常培养的MSCs为对照组,分别于1、3、5、7d对MSCs进行IGF-1、ON和Collagen-I免疫组化观察。通过图像分析检测IGF-1基因转染对MSCs合成IGF-1、ON和Collagen-I的影响。结果:IGF-1基因转染后可促进MSCs合成IGF-1、ON和Collagen-(Ip<0.05),第3d合成IGF-1、ON和Collage-I作用最明显。结论:IGF-1基因转染的MSCs较未转染细胞合成IGF-1、ON和Collagen-I显著增加。     

釉基质蛋白对骨髓基质细胞分泌TGF-β1的影响

目的：探讨釉基质蛋白(EMPs)对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs)分泌内源性转化生长因子β1(TGF－β１)的影响。方法：采用全骨髓法培养rMSCs，通过酶联免疫测定法(ELISA)测定EMPs对rMSCs分泌TGF－β1的浓度效应和时间效应。结果：EMPs作用后，实验组rMSCs分泌TGF－β1明显高于对照组，且有浓度依赖性。结论：EMPs能有效促进rMSCs分泌TGF－β1。     

下颌骨缺损修复过程中Ⅰ型胶原基因表达的实验研究

目的：了解生物材料和TGF-β1复合生物材料植入骨缺损区后细胞外基质内胶原基因表达的特点及春在骨愈合中的意义。方法：采用Slot Blot杂交及苦味酸天狼星红－偏振光方法观察68只大鼠下 骨缺损区骨修复过程中Ⅰ型胶原mRNA表达及材料骨界面区Ⅰ型胶原蛋白的分布。结果Ⅰ型胶原的mRNA及其产物表达水平在三组之间有显著性差异。以TGF-β1组最高。结论：本研究表明外源性TGF-β1通过促进Ⅰ型胶原mRNA表达及其物的合成,加快骨缺损的愈合;Ⅰ型胶原mRNA可被认为是骨形成、骨改建的分子标记。     

渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响

目的:探讨渐进性咬合紊乱对髁突软骨TGF-β1表达的影响及意义。方法:27只雄性新西兰大白兔被随机分为实验组、操作对照组和正常组,每组9只,用结扎丝固定橡皮圈单颌牵拉第一前磨牙向近中倾斜移动,造成渐进性咬合紊乱。只结扎钢丝不牵拉的兔子做为操作对照组。1、2和3个月分批取颞下颌关节髁突,用免疫组织化学方法检测髁突软骨TGF-β1表达变化,并做图像分析和统计学处理。结果:与对照组相比,实验组大多数部位TGF-β1表达持续增强。表达分布发生变化,纤维层和增殖层,由对照组的前内强、后外弱变为实验组的前内弱、后外强;肥大层,由对照组的内后最强变为实验组的外后最强。结论:渐进性咬合紊乱可导致髁突软骨中TGF-β1表达明显增强,TGF-β1可能参与了关节软骨的修复活动。     

面部发育和腭融合期间上皮和间充质中TGF-βⅠ型受体ALK-5的作用

转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)在许多颅面部组织形成过程中发挥重要作用。然而,TGF-β发挥作用的生物机制的细节,特别是在体内,仍旧知之甚少。本实验利用特异性基因敲除技术敲除小鼠特定部位的转化生     

TGF-β1对MDPC-23细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)对成牙本质细胞系MDPC—23增殖和细胞周期的影响。方法：细胞培养，MTT比色测定法和流式细胞仪(flow cytometry，FCM)分析技术。结果：TGF-β1能明显抑制MDPC—23细胞增殖，无剂量依赖性，但呈时间依赖性；FCM结果显示，TGF-β1作用后，MDPC—23细胞G1％升高，而S％显著降低，反映细胞增殖活性的增殖指数Prl值(S G2M)％增高。结论：TGF-β1抑制成牙本质细胞系MDPC—23细胞增殖和DNA合成。     

TGF-β1对人根尖牙乳头干细胞增殖和分化的影响

目的:研究转化生长因子(TGF-β1)在体外对根尖牙乳头干细胞(SCAP)增殖和分化的影响。方法:采用酶消化法获得原代培养人SCAP,并对获得克隆化的SCAP进行免疫组化染色和多向分化能力的初步鉴定。用MTT比色法观察不同浓度的TGF-β1对细胞增殖情况,并通过检测ALP活性和矿化诱导后COL1、DSPP、OCN mRNA表达,分析TGF-β1对SCAP分化能力的影响。结果:5、10、20、40 ng/mL组的TGF-β1在SCAP培养1周内可显著促进细胞增殖(P<0.05);在TGF-β1作用8 d后,细胞ALP活性增强(P<0.05);SCAP矿化诱导2周后,TGF-β1组中COL1、OCN、DSPP的mRNA表达上调(P<0.05)。结论:TGF-β1促进SCAP细胞增殖,并通过提高ALP活性和上调COL1,OCN、DSPP mRNA的表达促进SCAP分化。     

He-Ne激光对兔实验性牙移动牙周组织中TGF-β1表达的影响

目的:研究局部照射He-Ne激光后,兔实验性牙移动牙周组织中转化生长因子β1(transforminggrowthfactorbeta,TGF-β1)表达的变化,探讨弱激光对正畸牙周组织改建的影响。方法:35只健康日本大耳白兔,随机分为7组:未加力组及加力1、3、5、7、14、21d组,每组5只。于双侧上颌第一磨牙至切牙间拴结不锈钢螺簧,80g力拉上颌第一磨牙向近中移动。加力组动物采用自身对照,右侧为照射侧,左侧为对照侧。除1、3d组分别照射1次、3次外,其余各组连续照射5次,每天1次。制作以上颌第一磨牙为中心的近远中方向的组织切片,行TGF-β1免疫组化染色。镜下观察,并对图像分析的灰度积分应用统计学软件SPSS10.0进行两样本均数比较t检验。结果:未加力组与加力各组牙周组织的张力区和压力区中TGF-β1均有表达。压力区照射侧1d组牙周组织TGF-β1表达显著低于对照侧(P<0.05),而3～5d组照射侧TGF-β1表达则显著高于对照侧(P<0.05),高峰值出现在牙受力后第5天。张力区TGF-β1表达在加力3～7d组照射侧高于对照侧(P<0.05),高峰值也出现在牙受力后第5天。结论:He-Ne激光照射有效地促进了TGF-β1在兔实验性牙移动牙周组织中的表达。     

复合rhTGF-β1的壳聚糖/胶原支架培养牙周膜成纤维细胞的体外研究

目的:研究复合在壳聚糖/胶原支架上的重组人转化生长因子β1(recomb ined hum an transform ing growthfactorβ1,rhTGF-β1)的释放情况及人牙周膜成纤维细胞(hum an periodontal ligam ent fibro-b lasts,HPDLFs)在载体上三维培养的生物学行为。方法:采用ELISA法检测rhTGF-β1的释放过程;原代培养HPDLFs,用MTT法检测及激光共聚焦显微镜观察HPDLFs在含有rhTGF-β1和不含rhTGF-β1的壳聚糖/胶原支架上的增殖情况。结果:ELISA显示复合在壳聚糖/胶原支架上rhTGF-β1的释放,可持续至4周。MTT结果与电镜扫描分析均显示HP-DLFs在两种不同支架上的增殖有显著性差异(P<0.5)。结论:复合在支架上的TGF-β1对HPDLFs的增殖有较好的促进作用。该复合支架能在一定程度上起到控释TGF-β1作用,但控释持续时间仍显不足。     

咬合力增强对大鼠磨牙牙周膜Ⅰ型胶原mRNA时空表达的影响

目的 :研究咬合力增强后大鼠牙周膜Ⅰ型胶原在转录水平的改建模式。方法 :用大鼠建立咬合力增强动物模型 ,运用原位杂位法检测牙周膜Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果 :咬合力增强后 ,Ⅰ型胶原的mRNA表达在前2d内急降 ,第 3d出现较大回升 ,到第 1周时达到较高水平 ,第 3周时又明显增强 ,但稍弱于对照组 ,第 4周同第 3周接近 ;随着整体信号的减弱 ,第 1天时 ,PDL内外侧信号基本均匀 ,以后随着整体信号的回升 ,牙侧信号又强于骨侧。结论 :牙周膜能在一定范围内耐受高于生理状态的咬合力     

转化生长因子-β1基因治疗对种植体周骨质疏松的影响

目的探讨转化生长因子- β1（TGF- β1）基因治疗对种植体周围骨质疏松和骨缺损的影响。方法构建pCDNA3.1（+）- TGF- β1真核表达载体，转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），并与聚乳酸- 羟基乙酸（PLGA）体外黏附。制备骨质疏松大鼠股骨植入钛种植体模型，将24只Wister大鼠随机分为实验组、对照组和空白对照组，实验组为在种植体周骨缺损处植入TGF- β1基因修饰BMSCs复合PLGA；对照组为BMSCs复合PLGA。术后第4和8周取标本行免疫组化和组织学分析，观察种植体周骨组织中TGF- β1的表达和组织学变化。结果术后第4周，实验组骨缺损区的TGF- β1表达较对照组和空白对照组明显；第8周实验组骨缺损区被新生骨充填，骨质较对照组和空白对照组明显改善。结论TGF- β1基因修饰BMSCs体内回植后，可在种植体周围骨组织内表达TGF- β1，并可以影响种植体周骨缺损的修复和骨质疏松状况。