人肝病变组织低分子量角蛋白CK19的表达

目的研究低分子量角蛋白CK19在人肝细胞癌、肝癌前病变、肝硬化组织中的表达状况及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测56例肝细胞癌、8例肝硬化及9例正常肝组织中CK19的表达。结果56例肝细胞癌组织中26例CK19表达阳性,显著高于对照组(P<0.001),癌组织CK19多分布于腺样型或梁索型肝细胞癌。癌旁不典型增生组中异型增生细胞及卵圆细胞的CK19表达率(51.9%)显著高于癌旁非不典型组中肝细胞的表达率(17.2%),但与肝癌组织的表达率差别不大。肝硬化组中CK19的表达率为37.5%(3/8),阳性细胞均为卵圆细胞及异型增生细胞。结论肝细胞癌和增生的卵圆细胞及异型增生肝细胞表达CK19,提示CK19可做为判断肝细胞异型增生的一个指标。肝细胞癌CK19表达与其组织学类型有密切关系。     

人肝病变组织低分子量角蛋白CK19的表达

目的 研究低分子量角蛋白CK19在人肝细胞癌、肝癌前病变、肝硬化组织中的表达状况及意义。方法 采用免疫组织化学SP法检测56例细胞癌、8例肝硬化及9例正常肝组织中CK19的表达。结果 56例肝癌旁不典型增生组中异型增生细胞及卵圆细胞的CK19表达率（51.9%)显著高于癌旁非不典型组中肝细胞的表达率（17.2%),但与肝癌组织的表达率差别不大。肝硬化组中CK19的表达率为37.5(3/8)阳性细胞均为卵圆细胞及异型增生细胞,结论 肝细胞癌和增生的卵圆细胞及异型增生肝细胞表达CK19,提示CK19可做为判断肝细胞异型增生的一个指标,肝细胞癌CK19表达与其组织学类型有密切关系。     

肝细胞癌组织及卵圆细胞中细胞角质素18及消减基因P02的表达

目的:观察肝细胞癌、癌周肝硬化组织及卵圆细胞中细胞角质素18(CK18)及消减基因P02的表达情况.方法:采用免疫组化SP法观察8例正常肝组织,27例肝硬化组织和43例肝细胞癌组织中CK18的表达;采用原位杂交方法检测肝细胞癌、癌周肝硬化组织及卵圆细胞中P02的表达.结果:肝硬化组织和正常肝组织中CK18阳性表达率分别为29.6%和25.0%(P>0.05),肝细胞癌组织中CK18阳性表达率为65.1%,与肝硬化组和正常肝组织比较差异有统计学意义(P<0.05).在13对肝硬化的汇管区和肝细胞癌癌巢周边可见到卵圆细胞中P02的强阳性表达,且其数量在2种组织中差异有统计学意义(P<0.05).结论:CK18参与了肝硬化到肝细胞癌的癌变过程;CK18在卵圆细胞中的强阳性表达,及其在肝细胞癌和肝硬化组织中数量上的显著性差异,证明卵圆细胞与肝脏损伤后再生及癌变有关,支持肝细胞癌的卵圆细胞起源学说;P02是一个肝细胞癌高表达基因,可能通过促进卵圆细胞的增殖来介导肝细胞癌的发生.     

HBV所致终末期肝病患者肝组织胆管增生的免疫组织化学研究

目的在乙型肝炎病毒（HBV）所致的终末期肝病患者肝组织内，常可见大量的胆管增生，但其发生机制及临床意义尚不清楚。为阐明该类患者胆管增生的发生机制及其与卵圆细胞增生及肝细胞再生的关系，我们对8例HBV相关的终末期肝病患者及2例正常人肝组织进行了免疫组化染色及图像分析。方法肝组织连续切片后进行免疫组化染色。观察指标为细胞角蛋白（CK）7、CK8、CK19、OV6、增殖细胞核抗原（PC—NA）、甲胎蛋白（AFP）及白蛋白（ALB）。结果在所有8例惠者肝组织汇管区内均可见典型增生的胆管及非典型增生的胆管，且对CK7、CKB、CK19、OV6及PCNA染色呈阳性反应，但两种类型的胆管在染色强度上存在明显差异。一些非典型增生的胆管细胞表现出肝卵圆细胞的形态学及免疫组化特征。某些小型肝细胞样细胞在形态及免疫组化特征方面介于肝卵圆细胞及成熟肝细胞之间。结论在t-IBV相关的终末期肝病患者肝组织内，胆管增生可能存在不同起源。某些非典型增生的胆管细胞实际上就是活化的肝卵圆细胞。非典型增生的胆管细胞与肝细胞再生密切相关。小型肝细胞样细胞可能是肝卵圆细胞与成熟肝细胞之间的中间过渡细胞。     

大鼠成体肝卵圆细胞分离培养及诱导分化的初步研究

目的 通过成体大鼠肝卵圆细胞分离培养获取纯净的干细胞并观察诱导分化前后从肝卵圆细胞到肝细胞的形态变化.方法 采用AAF/PH肝干细胞刺激模型,胶原酶Ⅳ消化分离和Percoll梯度离心纯化肝卵圆细胞的方法,用地塞米松、DMSO和EGF、HGF、SCF、LIF等生长因子联合应用诱导肝卵圆细胞增殖和分化为肝实质细胞.观察肝卵圆细胞到肝细胞形态变化过程,用免疫荧光技术,Western blotting分析检测了干细胞标志c-kit和RT-PCR分析法检测肝干细胞白蛋白和CK19 mRNA表达鉴定卵圆细胞.结果 分离得到的肝卵圆细胞活度达到90%,细胞形态包括大小和颜色呈不均质,卵圆细胞直径是肝细胞直径的1/4～1/6.诱导后出现大而圆的肝细胞,可见卵圆细胞到肝细胞的中间变化过程,新分离的肝卵圆细胞在生长因子诱导下有向肝细胞分化的特性.经c-kit免疫荧光染色显黄绿色荧光,Western blotting检测肝卵圆细胞有c-kit蛋白条带,而大鼠肝细胞及胆管细胞则未出现条带.PCR分析显示卵圆细胞有CK19和白蛋白mRNA表达.结论 新分离的肝卵圆细胞同时表达c-kit,CK19和白蛋白3种抗原,诱导分化出现一系列从卵圆细胞到肝细胞的形态学变化,这种现象证明分离的肝卵圆细胞就是肝干细胞,经诱导分化可以产生成熟的肝细胞,成为进一步研究肝干细胞生物学特性的基础.     

肝干细胞的研究进展

肝干细胞研究近年来已取得重要进展 ,肝干细胞的存在目前趋于肯定。肝干细胞分为肝源性和非肝源性两类。前者包括胆管源性卵圆细胞和分化肝细胞 ;后者包括胚胎干细胞 (ＥＳ细胞 )、骨髓 /血液干细胞及胰腺上皮细胞等。1　肝干细胞与肝脏生长、发育及再生成熟肝细胞和肝内胆小管细胞均系原始肝细胞(ｐｒｉｍｉｔｉｖｅｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ)生成。目前认为 ,肝再生通常通过处于增生静止期的分化肝细胞进入细胞周期完成。如果这一途径出现缺陷 ,胆管上皮细胞可从门脉汇管区移出并分化成肝细胞。这种胆管上皮细胞被称为卵圆细胞 (ｏｖａｌｃ…     

卵圆细胞在实验性肝癌发生中的作用

目的：观察诱癌过程中ｃＨａｒａｓ、ｐ２１蛋白、ＡＦＰ及ＰＣＮＡ在肝细胞及肝卵圆细胞中的表达变化。方法：用化学致癌剂３′甲基４二甲基氨偶氮苯（３′ｍｅｔｈｙ１４ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏａｚｏｂｅｎｚｅｎｅ,３′ＭｅＤＡＢ）诱发ＳＤ大鼠肝癌,通过免疫组化、原位杂交等方法检测各相关因子在肝细胞及肝卵圆细胞内的表达。结果：诱癌４周,大鼠肝内出现大量的卵圆细胞,呈ＰＣＮＡ强阳性。６～８周,部分增生的卵圆细胞ｐ２１ｒａｓ及ＡＦＰ阳性反应。原位杂交显示,诱癌的第４～８周,ｃＨａｒａｓ的阳性表达细胞呈逐渐增多趋势;１４周时,ｃＨａｒａｓｍＲＮＡ阳性表达细胞减少;至１７周,所有癌组织内显示ｃＨａｒａｓ基因表达阴性,而癌旁组织内则可见ｒａｓ基因的大量表达。结论：卵圆细胞是宿主受化学致癌剂作用后发生肝癌的始动细胞,与肝癌的发生有着密切的联系。     

肝干细胞－卵圆细胞的研究进展

卵圆细胞是肝脏干细胞的代表细胞,主要存在于幼肝及成人受损的肝脏中,是一种双潜能的肝脏干细胞,多种因素调节其分化,在此过程中动态表达一系列表面标志物。卵圆细胞的分化异常与肝癌的发生关系密切。在体外大量扩增卵圆细胞并使之分化为成熟的 有功能的肝细胞,为终末期肝病、肝脏的组织工程研究及基因治疗开辟了新的途径。      

大鼠实验性肝癌碱性磷酸酶及其同工酶的研究

本文以0.05％的2-Fluorenylacetamide(N-2-氟基乙酰胺)(2FAA)制成大鼠肝癌模型,进行肝癌组织及血清中碱性磷酸酶(ALP)及其同Ⅰ酶的生化研究,结果表明喂养2FAA后肝组织及血清中ALP均明显升高,且两者ALP的升高呈正相关。ALP组织化学染色显示正常肝组织中仅有少许部位阳性,而在卵圆细胞及肝癌细胞中ALP明显增多。同工酶研究显示卵圆细胞,肝癌细胞及鼠胎肝细胞中均可见胎盘型ALP,表明卵圆细胞为癌前期病变。测定血清及组织中ALP活力尤其是胎盘型ALP的酶组织化学染色有利于大鼠肝癌模型的早期诊断。     

肝卵圆细胞与慢性肝病

肝卵圆细胞 (ｈｅｐａｔｉｃｏｖａｌｃｅｌｌ,ＨＯＣ)是在慢性肝病患者的肝脏中出现的一种具有多分化潜能的原始细胞 ,可分化为过渡细胞、小肝细胞和成熟肝细胞 ,也可向胆管细胞分化[1 ,2 ] 。ＨＯＣ直接参与了肝组织的再生和修复 ,与肝癌的发生有密切的关系。下面就ＨＯＣ与慢性肝病的关系 ,综述如下。1　肝卵圆细胞的特征1944年Ｏｐｉｅ在致癌物饲养的诱癌大鼠的肝脏中发现了ＨＯＣ并首先描述 ,将这种细胞核呈卵圆形、细胞体积较小的细胞称为卵圆细胞。随后许多学者在诱癌大鼠动物模型上对ＨＯＣ进行了大量研究。然而 ,人体肝脏是否存在…     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

为建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究，SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-acetyailamif1uorene，2-AAF)，剂量分别为5、10、15、20mg／kg，连续给药6d，于第7天行三分之二部分肝切除，术后继续给药1周，每隔3d取肝组织行常规组织学观察，作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞(Magnetic activated cell sorting，MACS)，用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CKl9。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞，90％以上为OV6阳性，并有AFP、白蛋白、CK19 mRNA转录。结论：2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞／前体细胞，利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞／前体细胞。     

化学致癌剂诱发大鼠肝癌过程中凝集素受体的表达

①目的探讨卵圆细胞及其分化的过渡细胞与肝癌组织发生之间的关系。②方法用亲和组织化学的方法对化学致癌剂诱发Ｆ３４４大鼠肝癌过程中花生凝集素（ＰＮＡ）、菜豆凝集素（ＰＨＡ）、荆豆凝集素（ＵＥＡ）及大豆凝集素（ＳＢＡ）受体的表达进行检测。③结果部分卵圆细胞、过渡细胞之ＰＮＡ，ＰＨＡ，ＵＥＡ阳性；正常肝细胞、增生灶、增生结节之ＰＮＡ，ＰＨＡ，ＵＥＡ，ＳＢＡ均阴性；肝癌组织中ＰＮＡ，ＰＨＡ，ＵＥＡ，ＳＢＡ均阳性。④结论在致癌剂作用下所出现的卵圆细胞及其分化的过渡细胞，与肝癌细胞具有某些共同的糖结合蛋白。卵圆细胞及过渡细胞是与肝癌发生有关的前体细胞。ＰＮＡ，ＰＨＡ，ＵＥＡ可作为肝癌早期病变的指标     

D-氨基半乳糖与脂多糖对小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

目的观察部分肝切除联合D-氨基半乳糖(D-GaIN)、脂多糖对肝损伤后再生修复的影响。方法 40只BALB/c雄性小鼠随机均分为2组。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组:腹腔注射D-GaIN(500 mg/kg),1 h后注射脂多糖(50μg/kg);肝脏部分切除组:生理盐水代替D-GaIN和脂多糖,同样方法注射;两组小鼠在第2次腹腔注射24 h后行肝脏1/3切除。观察两组小鼠术后肝脏体质量比值、肝再生率、肝细胞损伤、增殖与肝卵圆干细胞增生。结果肝脏部分切除组术后第9天肝大体结构基本恢复正常,肝再生率为(22.26±105.93)%,而D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组第14天肝质量较术前仍偏小,肝再生率为(9.49±32.55)%,P<0.001。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组术后肝窦和中央静脉充血,库普弗细胞增多;肝脏部分切除组术后第7天有明显肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝细胞增殖甚少。D-GaIN/脂多糖/肝脏部分切除组肝脏术后第3天开始出现肝卵圆干细胞增生,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。结论 D-GaIN联合脂多糖可部分抑制肝部分切除后小鼠成熟肝细胞增殖,D-GaIN/脂多糖/肝部分切除可诱导肝卵圆干细胞增生。     

胰腺HGF对大鼠肝卵圆细胞调控的探讨

目的 探讨胰腺组织HGF表达对大鼠肝卵圆细胞增殖、分化的影响.方法 选择体重150～200 g的雄性Wistar大鼠,建立肝卵圆细胞增殖模型（2-AAF/PH）.采用免疫组织化学和RT-PCR方法,观察不同时间点胰腺、肝脏组织中HGF蛋白和mRNA的表达及其变化.结果 实验组大鼠胰腺HGF表达上调,与对照组比较有显著意义,其高峰时间与肝脏HGF表达及肝卵圆细胞增殖高峰时间同步.结论 胰腺可能通过HGF的内分泌调控对大鼠肝卵圆细胞介导的肝再生起一定作用.     

不同品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型的比较研究

目的 对不同品系大鼠肝卵圆细胞增殖模型进行比较,筛选建模效率较高的大鼠品系.方法 选择F344、Wistar和SD大鼠各10只,经2-乙酰氨基芴灌胃和四氯化碳腹腔注射建立肝脏卵圆细胞增殖模型,组织学和免疫组织化学检测鉴定.荧光激活细胞筛选法分选并纯化各品系大鼠肝脏卵圆细胞,分析Thy-1.1~＋细胞百分率,观察Thy-1.1~＋细胞培养结果.结果 成功建立三种品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型.流式细胞仪分选结果显示,F344、wistar和SD大鼠Thy-1.1~＋细胞百分率分别为（9.46±0.99）%、（2.46±0.37）%和（1.46±0.12）%;各品系大鼠间Thy-1.1~＋细胞百分率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.细胞培养观察发现,与Wistar和SD大鼠比较,F344大鼠分选得到的肝脏卵圆细胞生长状态好且纯度较高.结论 在用于建立肝脏卵圆细胞增殖模型最为常见的三种品系大鼠中,F344大鼠所建模型的肝脏卵圆细胞活化效率最高.     

不同品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型的比较研究

目的 对不同品系大鼠肝卵圆细胞增殖模型进行比较,筛选建模效率较高的大鼠品系.方法 选择F344、Wistar和SD大鼠各10只,经2-乙酰氨基芴灌胃和四氯化碳腹腔注射建立肝脏卵圆细胞增殖模型,组织学和免疫组织化学检测鉴定.荧光激活细胞筛选法分选并纯化各品系大鼠肝脏卵圆细胞,分析Thy-1.1~+细胞百分率,观察Thy-1.1~+细胞培养结果.结果 成功建立三种品系大鼠肝脏卵圆细胞增殖模型.流式细胞仪分选结果显示,F344、wistar和SD大鼠Thy-1.1~+细胞百分率分别为(9.46±0.99)%、(2.46±0.37)%和(1.46±0.12)%;各品系大鼠间Thy-1.1~+细胞百分率比较,差异有统计学意义(P<0.05).细胞培养观察发现,与Wistar和SD大鼠比较,F344大鼠分选得到的肝脏卵圆细胞生长状态好且纯度较高.结论 在用于建立肝脏卵圆细胞增殖模型最为常见的三种品系大鼠中,F344大鼠所建模型的肝脏卵圆细胞活化效率最高.     

慢性重型肝炎肝内胆管增生的初步研究

目的：探讨CK7、8、19，白蛋白，甲胎蛋白AFP和CD34在慢性重型肝炎（CSH）患者肝组织内的表达；分析肝内胆管增生和肝再生的关系。方法：12例CSH肝组织行HE和嗜银染色；用SP免疫组织化学染色检测CK7、8、19，白蛋白、AFP和CD34表达。结果：死亡2例诊断为慢性重型肝炎；10例恢复期患者病理诊断为早期肝硬化。肝组织内胆管明显增生。肝组织内典型胆管增生细胞CK7、19强阳性；非典型胆管增生细胞CK8强阳性，CK7、19呈弱阳性，部分同时表达CK19和白蛋白，其细胞形态和表型符合肝卵圆细胞特征。结论：慢性重型肝炎患者肝组织内部分非典型增生胆管细胞可能来源于肝卵圆细胞；慢性重型肝炎患者肝细胞增生可能是干细胞参与的再生过程。     

大鼠肝癌发生过程中卵圆细胞分化的双染色研究

用r`谷氨酰转肽酶-甲胎蛋白(GGT-AFP)双染色法,对F_344大鼠肝癌发生过程中卵圆细胞的分化进行研究.结果表明,与免疫酶双标记法相比,此法具有特异性高、简便、精确、易于观察、经济、易推广等优点。卵圆细胞GGT 阳性,AFP 阴性;过渡细胞GGT,AFP 双表达;小肝细胞AFP 阳性,胆管细胞GGT 阳性。提示卵圆细胞是一种具有分化潜能的干细胞,过渡细胞双表达是处于双向分化状态,表达AFP 可以分化成小肝细胞,表达GGT 可以分化成胆管细胞。     

过氧化氢促肝卵圆细胞株WB—F344的增殖及转化作用

目的 探讨过氧化氢（H2O2）对肝卵圆细胞株WB－F344的促增殖及转化作用。方法 用H2O2直接作用于培养的WB－F344细胞,以MTT比色试验、^3H-TdB掺入液闪计数观察其对细胞的促增殖效应;经N－甲基－N‘－硝基－N－亚硝基胍（MNNG）启动的和未经MNNG启动的WB细胞用小剂量H2O2连续作用促其转化,以形态学观察、核型分析及甲基纤维素兰固体培养进行检测。结果 小剂量的H2O2一次作用具有明显的促进WB细胞增殖的效应,连续作用28d,可促进经MNNG启动的和未经MNNG启动的WB细胞发生转化,形态上呈现典型的转化细胞的特征;核型分析显示染色体数目改变,染色体结构畸变率明显升高;在甲基纤维素半固体培养基中形成克隆。结论 小剂量H2O2可诱使肝卵圆细胞增殖、转化,提示H2O2在肝癌发生中可能具有重要作用,抗氧化作用可能在肝癌的防治中具有一定的意义。