CIK细胞对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的 探讨细胞因子激活的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对人食管癌EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用.方法 体外分离健康人外周血单个核细胞,干扰素-γ、白细胞介素-2、CD3单抗诱导培养14 d,流式细胞仪测细胞表型,LDH法测定不同效靶比时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性.12只BALB/c裸鼠分为两组,每组6只.每只裸鼠皮下接种1×106个EC9706细胞,治疗组裸鼠同时每只经尾静脉注入3×107个CIK细胞,每周1次,连续3周,观察两组裸鼠成瘤时间、成瘤率、肿瘤体积变化.成瘤后3周,眼眶取血,流式细胞仪检测人CIK细胞;处死裸鼠,取瘤块称重,计算抑瘤率,观察肿瘤病理特点.结果 CIK细胞中CD3+CD56+细胞占42.50%,CIK细胞表面NKG2D表达率为67.10%.效靶比10:1、20:1、30:1时CIK细胞对EC9706细胞的杀伤活性分别为(28.81±0.47)%、(37.78±0.22)%、(44.31±1.06)%,差异有统计学意义(P<0.01).对照组和CIK细胞治疗组成瘤时间分别为(9.00±1.26)d、(15.67±4.37)d,差异有统计学意义(P<0.01);瘤重分别为(3.24±0.11)g、(2.10±0.10)g,差异有统计学意义(P<0.01),CIK治疗组的抑瘤率为35.19%.HE染色显示CIK细胞治疗组有较多的淋巴细胞浸润和坏死区.结论 CIK细胞对EC9706细胞裸鼠皮下移植瘤有明显的抑制作用,可能成为治疗食管癌的免疫效应细胞.     

CIK细胞治疗局限性肾癌的疗效

目的观察细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)对局限性肾癌患者的治疗作用。方法肾癌根治术后患者12例,分成两组：（1）CIK细胞治疗组8例,根治术后15天应用CIK细胞治疗,随访1～4年,研究CIK细胞对患者的免疫状态及生存情况的影响;（2）对照组4例,只行肾癌根治术后出院。从治疗组患者外周血中分离单个核细胞,在体外经CD3McAb和细胞因子诱导培养成CIK细胞;应用免疫组织化学方法对培养前后的细胞表型进行鉴定;术后7d和术后45d分别检测两组患者外周血T淋巴细胞亚群活性。结果诱导培养后,作为CIK主要效应细胞的CD3+CD56+T细胞数量增多,从（0.75±0.89）增加到（30.25±3.06） (P<0.01);治疗组CIK细胞治疗后CD3+、CD4+、CD8+及CD56+细胞活性较治疗前增高,与对照组相比差异有统计学意义（P均＜0.05）;治疗组患者生存情况良好,其中6例完全缓解（CR）,1例部分缓解（PR）,有效率为87.5%,均未观察到明显不良反应。对照组患者术后2~15月发现远处转移,肺转移2例,肝转移1例,脑转移1例;术后生存期为5~34月,平均14.25月。 结论CIK治疗局限性肾癌安全有效,可以改善预后,为该类患者提供了一种有效的术后辅助治疗手段。     

索拉非尼对人肾癌荷瘤裸鼠血清IL-2及TNF-α水平影响的实验研究

目的探讨索拉非尼(sorafenib)对人肾癌荷瘤裸鼠血清中白细胞介素-2(IL-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法采用皮下细胞悬液注射法建立裸鼠人肾癌模型,随机分成3组,对照组、sorafenib低剂量组及sorafenib高剂量组,每组10只。分别于给药后7天、14天检测人肾癌荷瘤裸鼠血清中IL-2及TNF-α的含量。结果给药后第7天,sorafenib低剂量组及高剂量组人肾癌荷瘤裸鼠血清中IL-2的含量低于对照组(均P<0.05),sorafenib高剂量组人肾癌荷瘤裸鼠血清中TNF-α的含量低于对照组(P<0.05);给药后第14天,对照组、sorafenib低剂量组及高剂量组人肾癌荷瘤裸鼠血清中IL-2、TNF-α的含量无差异(均P>0.05)。结论 sorafenib对人肾癌荷瘤裸鼠IL-2及TNF-α的表达影响短暂,远期影响不明确。     

IL-12基因联合吡柔比星治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的实验

目的 探讨联合应用白细胞介素12(IL-12)质粒和吡柔比星（THP）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 将人EJ膀胱癌细胞株裸鼠腋下接种,成瘤后设4组（每组6只）：联合组于骨骼肌注射IL-12真核表达质粒pcAGGS-mIL-12和腹腔注射THP;IL-12组骨骼肌注射pcAGGS-mIL-12;THP组腹腔注射THP;对照组肌肉及腹腔注射0.9%氯化钠溶液,以上注射每周2次,共4次。观察各组裸鼠肿瘤大小变化。4周后处死荷瘤鼠。免疫组织化学法检测肿瘤内VEGF 表达。ELISA法测定血液及肿瘤组织中IL-12和γ-干扰素(IFN-γ)的表达。结果 联合组肿瘤生长明显抑制,瘤重及体积明显小于其他组。ELISA法表明IL-12组和联合组 IL-12和IFN-γ都高表达。免疫组织化学法表明联合组VEGF基因表达量明显低于其他组（P<0.05）。结论 联合应用IL-12真核表达质粒pCAGGS-mIL-12和THP,对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用明显强于单独应用IL-12和THP。     

CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤生长的抑制作用

目的：观察外周血单个核细胞(PBMC)体外经IFNγ， rIL2和antiCD3McAb诱导后细胞表型的变化及CIK细胞对裸鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法：采用成份血采血机采集6例健康自愿者PBMC，经多因子诱导后，计数活细胞数，流式细胞仪检测细胞表型；裸鼠肩胛下接种肝癌细胞，次日起连续6 d给予不同数量的CIK细胞，观察对肝癌生长的抑制作用。结果：诱导培养后13 d，效应细胞增殖7.1倍，CD3+CD56+双阳性细胞增殖约6倍。动物实验结果表明，CIK细胞可明显抑制肝癌移植瘤的生长，且肿瘤抑制率与CIK细胞的数量呈剂量效应关系。结论：PBMC细胞体外经多因子诱导成CIK细胞，其数量及抗肿瘤活性显著增加，对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用。     

CIK治疗11例中晚期肾癌的预后分析

目的 通过 4 年跟踪随访 11 例接受细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)治疗的中晚期肾癌,了解 CIK 细胞的治疗效果及患者的预后情况.方法 收集我院治疗的肾癌 20 例,根据患者肾癌根治术后有无施行 CIK 生物治疗,将患者分为治疗组和对照组,跟踪随访4～6年,研究治疗组和对照组患者的生存情况.结果 治疗组平均生存时间 30 个月,对照组平均生存时间11个月,差异有统计学意义(P<0.01).结论 CIK 治疗肾癌安全有效,可以改善患者的预后.     

人ACHN肾癌裸鼠移植瘤模型的建立及其特性研究

目的　用ACHN肾癌细胞株,建立人肾癌裸小鼠异位移植模型。方法　将ACHN人肾癌细胞株2. 0×10 /0. 2ml接种于裸小鼠背部皮下,观察移植肿瘤的生长状况、移植成功率、肺转移率及移植瘤病理形态,检测肿瘤细胞的增殖与凋亡。结果　异位移植成功率为 75%,肺转移率 58. 3%,肿瘤细胞增殖指数(PI)为 54. 84±11. 39,凋亡指数(AI)为 1. 75±0. 83,AI/PI与肿瘤体积呈负相关 (r=-0. 8332,P<0. 05)。皮下瘤病理形态与肾腺癌相似。结论　人ACHN肾癌裸鼠异位移植瘤模型可作为肾癌及其转移的研究工具。     

CIK细胞及其在肿瘤治疗中的应用

细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞过继免疫治疗在实体肿瘤治疗中发挥重要作用,特别是对于经标准治疗后出现复发或转移的实体肿瘤来说具有广阔的应用前景.尽管许多过继免疫治疗策略已经在临床前研究中取得了令人鼓舞的结果,但在临床推广应用中仍存在一些困难,如何确保抗肿瘤免疫效应物可以大量扩增并能在体内长时间停留,如何选择性杀伤肿瘤细胞以及确保应用安全等一系列关键问题仍亟待解决.     

IL-15、IL-21和4-1BBL增强NK-92细胞增殖和细胞毒性的实验研究

目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系,对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响。方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒,用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞;筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞（NK-92组:NK-92细胞;K562组:K562细胞+NK-92细胞;IL-15组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-21组:表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-15+IL-21组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞、表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞）;通过CCK-8法,乳酸脱氢酶释放法检测体外扩增后NK-92细胞的细胞毒性;ELISA检测NK-92细胞上清中IFN-γ的水平,以评估NK-92细胞的抗肿瘤效应。结果:两组转染后的HEK293FT细胞以及慢病毒感染的K562细胞携带绿色荧光,两组饲养层细胞成功表达目的基因;各组饲养层细胞都能刺激NK-92细胞大量增殖;随着效靶比的逐渐增加,IL-15组扩增后的NK-92细胞毒性显著高于其余各组（P<0.05）;效靶比为5∶1和10∶1时,IL-15组NK细胞IFN-γ的释放量显著高于其余各组（P<0.05）。结论:膜结合型IL-15、IL-21与4-1BBL联合都能引起NK-92细胞的大量增殖,且IL-15与4-1BBL联合运用扩增的NK-92细胞有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。     

IL-15对树突状细胞激活的T淋巴细胞免疫反应的作用观察

  目的  观察IL-15和IL-2对树突状细胞疫苗(dendritic cells, DC)激活的淋巴细胞免疫反应的作用。  方法  取健康小鼠的脾淋巴细胞, 在体外采用肿瘤抗原负载的DC疫苗与脾淋巴细胞混合后, 分别加入IL-15或IL-2培养7d。采用流式细胞术检测淋巴细胞免疫表型的变化; 使用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测分泌干扰素(interferon, IFN)-γ的细胞数量; 利用51Cr释放法检测淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。  结果  IL-15联合DC疫苗增强了T细胞反应, 包括淋巴细胞免疫表型和功能的改变。  结论  与IL-2相比, IL-15能更好的增强DC疫苗诱发的免疫反应, 为IL-15与DC疫苗的联合应用提供了一定的依据。      

化疗联合CIK细胞回输治疗转移性肾细胞癌Ⅱ期临床研究

[目的]探讨化疗联合CIK细胞回输治疗转移性肾癌的疗效。[方法]40例mRCC患者，采用GEM＋5-Fu化疗，化疗结束后分次回输CIK细胞，同时给予IL-2和IFN-α所有患者均接受至少2个周期治疗。[结果]40例患者中4例PR（10．0％），22例SD（55．0％），14例PD（35．0％），无进展生存时间（PFS）为87d。Ⅲ-Ⅳ度毒副反应占27．5％。[结论]化疗联合自体CIK细胞回输对mRCC患者有效，并延长PFS，是一种可接受的治疗模式。     

薏苡仁酯对人鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用

 目的　探讨薏苡仁酯 ( coixenolide,CXL)对实验性鼻咽癌的治疗作用及机理。方法　采用裸鼠肿瘤移植法观察 CXL的药效 ,MTT法和骨髓粒单系祖细胞 ( CFU- GM)培养法检测该药物对免疫和造血功能的影响。结果　CXL以量效方式抑制移植瘤生长 ,累积 ID50 为 1 0 -3.710 mol/kg,相对效力 ( relative potency,RP)是 5 -氟尿嘧啶的 2 0 .2 3%。CXL对骨髓造血细胞无毒性。相反 ,能促进荷瘤小鼠 NK细胞活性的恢复。结论　 CXL能选择性地杀伤肿瘤细胞 ,其机理与直接作用及提高免疫力密切相关.     

IL-27基因修饰树突状细胞活化的特异性CTL对人食管癌裸鼠移植瘤生长增殖的影响

研究IL-27基因转染树突状细胞（DC）体内诱导免疫杀伤食管癌细胞的效能及其机制。方法：基因转染的方法建立表达IL-27基因的树突状细胞（DC/IL-27）;构建人食管癌细胞裸鼠移植瘤模型,皮下注射食管癌细胞抗原致敏、IL-27基因修饰DC（DC/IL-27-Ag）活化的特异性CTL后观察荷瘤裸鼠抑瘤率;TUNEL法检测荷瘤裸鼠肿瘤细胞的原位凋亡;流式细胞术检测移植瘤细胞的细胞周期、凋亡率。结果：RT-PCR显示DC/IL-27细胞中有IL-27 p28和EBI3亚基基因表达提示转染成功;免疫接种DC/IL-27-Ag活化的CTL组的抑瘤率为58.28%,明显高于其他组,差异有统计学意义（P<0.01）。TUNEL法检测显示,DC/IL-27-Ag活化的CTL组凋亡率明显高于其他组（P<0.01）,流式细胞术（FCM）显示肿瘤组织内细胞增殖指数为（23.92±1.60）%,显著低于其他组,差异有统计学意义（P<0.01）;细胞凋亡率为（32.78±0.83）%,显著高于其他组,差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DC/IL-27-Ag可活化特异性CTL,在裸鼠体内产生了抑制肿瘤生长的作用,显著抑制食管癌细胞增殖、促进其凋亡,为DC应用于食管癌的免疫治疗提供了理论和动物实验依据。     

放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长抑制作用

目的研究放射线联合重组人血管内皮生长抑素(Endostatin)对HNE1鼻咽癌移植瘤生长、转移的抑制作用.方法应用裸鼠建立HNE1移植瘤模型;待瘤体平均体积达627mm3±47mm3,40只裸鼠随机分成治疗组单独放疗(RT)组,单用Endostatin组,单次20cy照射后 连续使用Endostatin 14天组,连续使用Endostatin 14天后 单次20Gy照射组和空白对照组;绘制肿瘤生长曲线;取瘤体用免疫组化检测乏氧诱导因子-α(HIF-α)和微血管内皮CD34的表达,观察肿瘤乏氧及其微血管密度的变化.结果与空白对照组比较,照射20GY后 连续Endostatin 14天组,其照射后20天抑瘤率84.79%,而先用Endostatin组 后照射组及单独照射组,单独使用Endostatin(使用完14天以后的第7天)组的抑瘤率分别是83.91%,64.95%,19.47%;其中各放射治疗组的减瘤率分别为44.1%,54.1%和18.1%(P=0.000);使用Endostatin联合放射线及单用Endostatin组,肿瘤新生血管减少,HIF-α表达降低.结论放射线联合Endostatin的策略,其肿瘤控制率优于单用Endostatin或单用放射线,且能明显抑制HNE1鼻咽癌移植瘤生长和转移.照射后使用Endostatin可以在较短的时间获得较好的局部控制率;而先给予Endostatin再照射具有明显的放射增敏作用,可获得较长的再生长延缓时间,但两者的长期疗效无明显统计学差异(P=0.077).提示采用分割照射方案同时加用Endostatin可能会取得更好的临床疗效.     

放射线联合人血管内皮生长抑素对HNE1鼻咽癌移植瘤生长抑制作用

目的:研究放射线联合重组人血管内皮生长抑素(Endostatin)对HNE1鼻咽癌移植瘤生长、转移的抑制作用.方法:应用裸鼠建立HNE1移植瘤模型;待瘤体平均体积达627mm3±47mm3,40只裸鼠随机分成治疗组:单独放疗(RT)组,单用Endostatin组,单次20cy照射后+连续使用Endostatin 14天组,连续使用Endostatin 14天后+单次20Gy照射组和空白对照组;绘制肿瘤生长曲线;取瘤体用免疫组化检测乏氧诱导因子-α(HIF-α)和微血管内皮CD34的表达,观察肿瘤乏氧及其微血管密度的变化.结果:与空白对照组比较,照射20GY后+连续Endostatin 14天组,其照射后20天抑瘤率84.79%,而先用Endostatin组+后照射组及单独照射组,单独使用Endostatin(使用完14天以后的第7天)组的抑瘤率分别是83.91%,64.95%,19.47%;其中各放射治疗组的减瘤率分别为44.1%,54.1%和18.1%(P=0.000);使用Endostatin联合放射线及单用Endostatin组,肿瘤新生血管减少,HIF-α表达降低.结论:放射线联合Endostatin的策略,其肿瘤控制率优于单用Endostatin或单用放射线,且能明显抑制HNE1鼻咽癌移植瘤生长和转移.照射后使用Endostatin可以在较短的时间获得较好的局部控制率;而先给予Endostatin再照射具有明显的放射增敏作用,可获得较长的再生长延缓时间,但两者的长期疗效无明显统计学差异(P=0.077).提示采用分割照射方案同时加用Endostatin可能会取得更好的临床疗效.     

胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内cAMP含量的影响

目的 :探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤细胞内环磷酸腺苷 (cAMP)含量的影响。方法 :建立人结肠癌SW4 80 裸鼠移植瘤模型 ,实验动物随机分为 5肽胃泌素 (PG)组及对照组 (生理盐水 ) ,观察移植瘤的体积、重量及细胞内cAMP含量的变化。结果 :移植瘤的体积、重量、细胞内cAMP含量 ,PG组均显著高于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论 :胃泌素在体内使人结肠癌移植瘤细胞内cAMP含量增加 ,从而促进移植瘤的生长     

移植于裸鼠的人鼻咽癌细胞DNA合成生物节律的初步研究

目的：探讨鼻咽癌细胞DNA合成的生物节律为临床制订鼻咽癌时辰化疗方案提供必要的参数。方法：BALB/C裸小鼠15只，置于积控的独立光照系统中（12h光照，12h黑暗）中同步化至少3周。然后双侧腋下接种人鼻咽低分化鳞癌细胞裸小鼠移植瘤CNE-2，成瘤后按灯亮后3、9、15、21h（即3、9、15、21 HALO）的时间点取瘤块，制成单个细胞悬液，固定，染色后流式细胞仪侧DNA含量。用SPSS软件系统ANOVA法检验各期细胞在4个时间点差异的显著性，用Cosinor法考察G1、S、G2/M期细胞在24h的分布是否符合余弦函数。结果：G1、S、G2/M期细胞在3、9、15、21 HALO的分布随时间变化有显著性差异，G1、G2/M期细胞变化符合余弦节律。结论：移植于裸鼠的人鼻咽癌细胞的DNA合成随昼夜交替呈节律性变化。