鱼藤酮对PC12细胞凋亡及ERK1／2蛋白表达的影响

目的 观察鱼藤酮对PC12细胞凋亡以及细胞外信号调节酶1和2(ERK1/2)蛋白表达的影响,以深入探讨ERK1/2蛋白表达与鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡之间的关系.方法 通过建立PC12细胞鱼藤酮染毒模型,光镜下观察鱼藤酮对PC12细胞形态的影响;流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率的改变;Western蛋白印迹法和免疫组化法检测PC12细胞ERK1/2蛋白表达及定位情况.结果 鱼藤酮处理24 h后PC12细胞形态明显改变且凋亡率增加,20 μmol/LMEK抑制剂PD98059预处理1 h与单纯鱼藤酮染毒比较凋亡率没有显著性改变;磷酸化ERK1/2蛋白表达量随着鱼藤酮剂量的加大而增高,且活化的ERK1/2蛋白主要集中在胞浆内表达.结论 鱼藤酮体外作用可以诱导PC12细胞凋亡以及ERK1/2蛋白磷酸化表达增强.     

丙烯酰胺对L-02胎肝细胞株细胞凋亡和原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的观察丙烯酰胺(AA)对L-02胎肝细胞株细胞凋亡的影响以及对原癌基因c-fos、c-jun蛋白表达的影响。方法以不同终浓度AA(低剂量组:0.01和0.1mmol/L,中剂量组:0.5、1.0和2.5mmol/L,高剂量组:5.0和7.5mmol/L)对L-02细胞分别染毒12h和24h,CellTiter 96 MTS/PMS Assay法检测细胞存活率,流式细胞术法检测细胞凋亡,westernblot方法检测c-fos、c-jun蛋白表达水平。结果与对照组相比,低剂量染毒组细胞存活率略有升高,中、高剂量组则显著降低(P<0.05);中、高剂量(>2.5mmol/L)染毒组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);染毒组c-jun、c-fos蛋白表达水平较对照组显著增高(P<0.05),且随着AA浓度的升高呈先升高后降低的趋势;随着染毒时间的延长,c-jun、c-fos蛋白表达水平也显著增高(P<0.05)。结论AA可引起细胞凋亡及原癌基因c-jun、c-fos蛋白表达增高。     

IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的作用

目的 观察IRE1通路在高碘诱导甲状腺细胞凋亡中的特征,进一步分析高碘诱导甲状腺细胞凋亡的作用机制.方法 用0(对照)、1、10、50 mmol/L的碘化钾(KI)染毒体外培养的Nthy-ori 3-1细胞,24h后采用流式细胞术检测Nthy-ori 3-1细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)、肌醇需求酶-1(IRE1)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)基因蛋白的表达水平.结果 与0(对照)、l、10 mmol/L KI染毒组相比,50 mmol/L KI染毒组细胞凋亡率升高(P＜0.05);与对照组相比,各染毒组GRP78、IRE1 mRNA表达水平均无统计学差异(P＞0.05),CHOP mRNA表达水平升高(P＜0.05),GRP78、IRE1和CHOP蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 内质网应激中IRE1通路可能没有参与高碘诱导的Nthy-ori 3-1细胞凋亡过程.     

软骨藻酸诱导PC12细胞凋亡及对活性氧的影响

[目的]研究软骨藻酸诱导PC12细胞凋亡及对活性氧的影响. [方法]流武细胞仪法测定0、0.01、0.1、l μmol/L软骨藻酸作用PCI2细胞24h后,对细胞凋亡、细胞周期和活性氧生成的影响. [结果]软骨藻酸可诱导PC12细胞凋亡的发生,与对照组(凋亡率为0.250±0.053)相比,所有染毒浓度组PCI2细胞凋亡率均上升且差异有统计学意义;并将PC12细胞阻滞于细胞周期中的G2/M期,0.1、1 μmol/L组中处于G2/M期的PC12细胞数量与对照组相比,差异具有统计学意义;所有浓度组均可使PC12细胞的活性氧分子(reactive oxygen species,ROS)平均荧光强度增加(0.01 μmnol/L组为187.140±3.629,0.1 μmol/L组为206.023±5.277,1 μmol/L组为348.915±3.343),与对照组(163.660±4.059)相比,差异均具有统计学意义.[结论] 软骨藻酸能诱导PC12细胞凋亡的发生,将PC12细胞阻滞于细胞周期中的G2/M期,并使得细胞内的ROS产生增加.     

miR-138-5p在锰致SH-SY5Y细胞自噬中的作用

[目的]探讨miR-138-5p在氯化锰(MnCl_2)诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的作用及其机制。[方法]以生理盐水处理组作为对照,0.125、0.25、0.5、1 mmol/L MnCl_2染毒SH-SY5Y细胞6 h后,利用MTT法检测细胞活力;0.25和0.5 mmol/L MnCl_2处理细胞6 h后,采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和Beclin1的表达;MnCl_2染毒6 h后,使用反转录PCR和Western blot检测miR-138-5p和组蛋白脱乙酰酶SIRT1 mRNA以及蛋白表达的变化;使用miRNA模拟物转染细胞实现miR-138-5p过表达,然后0.25 mmol/L MnCl_2染毒6 h,检测SIRT1 mRNA和蛋白的表达以及自噬相关蛋白LC3和Beclin1的变化。[结果]MnCl_2可剂量依赖性地降低SH-SY5Y细胞活力(趋势χ~2=12.42,P0.05)。与对照组相比,0.25、0.5 mmol/L MnCl_2染毒后,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值和Beclin1表达水平明显增加(P0.05);miR-138-5p表达下调,SIRT1 mRNA及蛋白表达上调(均P0.05)。miR-138-5p过表达后,相比未过表达的MnCl_2染毒组,SIRT1 mRNA及蛋白表达均出现下调,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及Beclin1蛋白表达也相应下调(P0.05)。[结论]miR-138-5p过表达可通过调节SIRT1的表达抑制锰诱导的SH-SY5Y细胞自噬。     

麦芽酚铝对PC12细胞钙稳态和凋亡的影响

目的探讨麦芽酚铝[aluminum maltolate,Al(mal)_3]染毒对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(rat pheochromocytoma cells,PC12)钙稳态及凋亡的影响。方法将PC12细胞随机分为0(对照组)、50、100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒组,分别培养12、24、48 h,采用CCK-8试剂盒检测PC12细胞活性,以流式细胞术检测PC12细胞内游离钙离子荧光强度[Ca(~2+)]i及细胞凋亡率。结果随着Al(mal)_3染毒时间和染毒剂量的增加,PC12细胞活性逐渐下降,细胞[Ca(~2+)]i与细胞总凋亡率逐渐升高。除50μmol/L Al(mal)_3染毒12、24 h及100μmol/L Al(mal)_3染毒12 h外,其他各剂量组染毒PC12细胞12、24、48 h后细胞活性均低于对照组,细胞[Ca(~2+)]i均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。400μmol/L Al(mal)_3染毒PC12细胞12 h,200、400μmol/L Al(mal)_3染毒24 h,100、200、400μmol/L Al(mal)_3染毒48 h后,PC12细胞总凋亡率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论钙超载可能是Al(mal)_3引起凋亡发生的主要机制。     

锰诱导PC12细胞凋亡与P53、MDM2蛋白表达

目的 探讨锰对嗜铬细胞瘤细胞(PC12cells)凋亡的诱导作用及与抑癌基因P53、原癌基因MDM2蛋白表达的关系.方法 以PC12细胞作为多巴胺能神经元的模型细胞,取对数生长期的PC12细胞,用含200,400,800μmol/LMnCl2的培养液分别染毒培养24,36,48h.四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况;用免疫细胞化学法检测细胞P53、MDM2蛋白表达强度.结果 氯化锰可呈时间和剂量依赖性抑制PC12细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为11.8%～73.6%,凋亡率为8.72%～53.60%.免疫化学法检测结果显示,随锰浓度的增高,P53蛋白的表达增加(P<0.01),而MDM2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论 锰可诱导PC12细胞凋亡,上调P53基因的表达和下调MDM2基因的表达可能在其诱导PC12细胞凋亡中起着重要的作用.     

苯并[a]芘对小鼠睾丸支持细胞缝隙连接蛋白表达及细胞增殖的影响

[目的]探讨苯并[a]芘(BaP)在不引起小鼠睾丸支持细胞凋亡的情况下,对缝隙连接蛋白43(CX43)表达及细胞增殖的作用. [方法]取小鼠睾丸支持细胞系——TM4细胞,以二甲基亚砜为对照,0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP同时染毒培养的TM4细胞,并于染毒的4h、72h后收集细胞,检测细胞的活力、增殖、凋亡情况,以及CX43的mRNA和蛋白的表达量. [结果]与对照组相比:BaP染毒4h时,两个染毒组细胞存活率、增殖、凋亡和CX43蛋白表达没有明显变化(P＞0.05),而CX43 mRNA的表达升高(P＜0.05);72h时,两个染毒组细胞凋亡无明显变化,而细胞存活率和增殖均下降(P＜0.05),CX43 mRNA和蛋白表达出现上升(P＜0.05). [结论]0.5、10.0 μmol/L浓度的BaP染毒小鼠睾丸支持细胞,可抑制细胞增殖,引起CX43 mRNA和蛋白表达升高.     

姜黄素通过Fas/FasL途径诱导卵巢癌COV504细胞凋亡的研究

目的探讨姜黄素对人卵巢癌COV504细胞增殖能力、细胞凋亡及Fas/Fas L表达的影响。方法 MTT法检测姜黄素对细胞增殖的作用;Hoechst33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot方法检测姜黄素对COV504细胞Fas/Fas L蛋白表达水平的影响。结果姜黄素作用24 h,与对照组相比,姜黄素能明显抑制细胞的增殖能力(P0.05),50μmol·L~(-1)及100μmol·L~(-1)姜黄素实验组的抑制率分别为(21.23±0.17)%和(45.08±0.25)%,差异有统计学意义(P0.05)。姜黄素作用24 h可使COV504细胞出现明显的凋亡。同时,细胞经姜黄素作用后,Fas/Fas L蛋白表达水平明显上调。结论姜黄素能抑制细胞生长增殖,诱导细胞凋亡,显著上调Fas/Fas L蛋白表达水平。     

鞘氨醇激酶1在丙烯酰胺致神经细胞损伤的保护作用

目的研究鞘氨醇激酶1(SphK1)过表达在丙烯酰胺(ACR)致神经细胞损伤中的保护作用以及影响。方法将纯度为99%的ACR用生长液制备成浓度为1.25、2.5 mmol/L溶液;将人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞分为对照组(NC组)、实验组和SphK1激活剂组。NC组加入(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐(PMA)溶液[SphK1特异性激活剂, 二甲基亚砜(DMSO)配制, 终浓度为100 nmol/L]。实验组给予终浓度分别为1.25和2.5 mmol/L的ACR溶液, 染毒24 h。SphK1激活剂组在实验组染毒浓度的基础上, 每个染毒浓度分别加入PMA溶液, 其他处理与实验组一致。各组采用免疫印迹(Western blot)法检测SphK1蛋白的表达含量;CCK-8检测SH-SY5Y细胞的增殖活性;Hoechst33342法观察神经细胞形态学改变;流式细胞术分析细胞的凋亡。结果与NC组比较, 实验组和SphK1激活剂组细胞SphK1蛋白表达均降低, 差异有统计学意义(P<0.05)。与实验组比较, SphK1激活剂组细胞在1.25和2.5 mmol/L浓度的Sph...     

灵芝孢子提取物对Lactacystin致PC12细胞损伤的保护作用

[目的]探讨灵芝孢子提取物对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的保护作用。[方法]体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞活力,annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡。[结果]用不同浓度的灵芝孢子提取物处理PC12细胞时,细胞存活率与对照几乎一致,并未表现出细胞毒性。经20μmol/L的Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的63.2%。模型组经不同浓度的灵芝孢子提取物预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度升高而升高。Lactacystin诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为48.86%,经灵芝孢子提取物处理后,细胞凋亡率明显降低。[结论Lactacystin能诱PC12细胞凋亡,灵芝孢子提取物能对Lactacystin致PC12细胞损伤有一定的保护作用。     

醋酸铅对人股动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应

目的观察醋酸铅对动脉内皮细胞和星形胶质细胞的毒性效应,探讨醋酸铅通过血脑屏障的可能机制。方法醋酸铅处理动脉内皮细胞和星形胶质细胞后进行Giemsa或HE染色,检测观察细胞形态学变化;细胞免疫化学法检测P53、Bax、Bc1-2的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果经10μmol/L醋酸铅处理24h后Giemsa,H.E染色均显示出醋酸铅组细胞成凋亡形态学改变。动脉内皮细胞和星形胶质细胞的细胞免疫化学结果都显示醋酸铅组的P53和Bax阳性表达升高,而Bc1-2的阳性表达下降。其流式细胞仪检测结果表明醋酸铅组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可损伤动脉内皮细胞和星形胶质细胞,促进凋亡及影响血脑屏障。     

铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白β位点裂解酶-1蛋白及基因表达的影响

[目的]探讨铝对PC12细胞淀粉样前体蛋白（APP）β位点裂解酶-1（beta-site amyloid precursor proteincleaving enzyme-1,BACE1）蛋白及基因表达的影响。[方法]采用PC12细胞进行培养及麦芽酚铝[Al（mal）3]染毒,将细胞分为6组,分别为：200μmol/L生理盐水组;0、50、100、200和400μmol/L Al（mal）3组。分别采用酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、荧光实时定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR）于染毒12、24和48 h后测定BACE1蛋白含量及基因表达。[结果]细胞计数试剂盒-8（CCK-8）细胞活力测定结果显示,不同浓度Al（mal）3染毒PC12细胞,可使其细胞活力呈现随染毒时间延长而逐渐下降的趋势。qRT-PCR结果显示,100μmol/L Al（mal）3组在染毒48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组、0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;200、400μmol/L Al（mal）3组染毒12、24、48 h后BACE1基因表达明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。ELISA测定结果显示,染毒12 h后400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒24 h后200、400μmol/L Al（mal）3组BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）;染毒48h后400μmol/L Al（mal）3组的BACE1表达量明显高于生理盐水组和0μmol/L Al（mal）3组,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]Al（mal）3对PC12细胞具有明显毒性作用,该作用可能与麦芽酚铝致PC12细胞BACE1蛋白和基因表达增强有关。     

锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究

为探讨锰 (Mn)抑制神经细胞增殖的机制 ,体外培养神经细胞株PC12 ,培养基分别含有 10 0、2 0 0及5 0 0mmol LMnCl2 ,作用 2 4、48、72h后 ,用四唑盐比色实验 (MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛 (MDA)的含量 ;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果显示 ,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10 0～ 5 0 0mmol L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。GSH Px活性降低 ;MDA的活性升高。DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡。提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡     

甲醛致肾上腺嗜铬细胞瘤细胞凋亡作用

目的 研究甲醛诱导肾上腺嗜铬细胞损伤特征及机制。方法 将肾上腺嗜铬细胞瘤细胞与不同浓度甲醛(20,40,80,160μmol/L)共培养,24h以后用四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;分光光度法检测乳酸脱氢酶漏出量;硝酸还原酶法检测细胞上清液一氧化氮含量;生化法检测总一氧化氮合酶活性和诱导型一氧化氮合酶活性;磷酯酰丝氨酸结合蛋白-异硫氢酸荧光素/碘化丙啶双染法、流式细胞仪分析细胞死亡;免疫着色实验技术检测半胱氨酸蛋白酶-3前体表达。结果 20～160μmol/L甲醛诱导细胞死亡,低剂量甲醛(<80μmol/L)主要诱导凋亡,高剂量甲醛(>80μmol/L)主要诱导细胞坏死;细胞乳酸脱氢酶漏出量具有甲醛浓度依赖性,从(374.04±15.64)U/L增加至(800.18±24.84)U/L,且一氧化氮含量逐渐升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。甲醛浓度依赖性诱导总一氧化氮合酶及型一氧化氮合酶活性表达增加,半胱氨酸蛋白酶-3前体蛋白酶原表达随甲醛浓度逐渐增强;氨基胍保护组细胞损伤明显减轻。结论 甲醛呈浓度依赖性诱导肾上腺嗜铬细胞瘤细胞死亡;机制与半胱氨酸蛋白酶激活有关;氨基胍对细胞损伤有保护作用。     

活性氧在氯化锰致PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨活性氧（ROS）在氯化锰（MnCl2）诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 构建MnCl2诱导的PC12细胞模型,MTT法检测细胞存活率,流式细胞分析PC12细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化程度;分光光度法检测培养基中活性氧（ROS）生成量变化;化学发光法检测细胞三磷酸腺苷（ATP）生成量和Caspase-3表达量的变化;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-xl和bax的表达.结果 PC12细胞存活率与MnCl2诱导浓度和诱导时间呈负相关（P＜0.01）;2 mmol/L MnCl2诱导PC12细胞36 h,细胞凋亡率明显上升（P＜0.01）;核DNA发生明显片段化;细胞ROS生成量明显增加（P＜0.001）,细胞ATP生成量受到明显抑制（P＜0.01）;基因bcl-xl表达被抑制,bax表达上升（P＜0.01）;Caspase-3在细胞凋亡中被激活（P＜0.01）.结论 MnCl2诱导的PC12细胞凋亡与ROS升高、线粒体功能破坏和激活Caspase-3有关.     

百草枯诱导PC12细胞损害和miR-133b表达的变化

目的 探讨百草枯(PQ)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性作用和对miR-133b表达的影响.方法 以50、100、300 μmol/L PQ分别处理PC12细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性;以100、300 μmol/LPQ分别处理PC12细胞24 h,用Annexin V-FITC/P...     

叔丁基对苯二酚对锰致神经细胞毒性的保护作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)对锰致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性的保护作用.方法 以不同终浓度(300、600、900μmol/L)的MnCl2分别处理PC12细胞24、48、72 h,用噻唑蓝(MTT)法检测PC12细胞毒性.MnCl2组予600μmol/L MnCl2处理72 h;tBHQ组予40 μmol/L tBHQ处理细胞84h;tBHQ+MnCl2组予40μmol/L tBHQ预处理12h后,600 μmol/LMnCl2处理72 h,用MTT法检测细胞毒性,MnCl2处理剂量为300 μmol/L时用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡.结果 与对照组比较,300、600、900μmol/LMnCl2处理24、48、72h,细胞增殖相对比值降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);300、600、900 μmol/L MnCl2处理组各组间相互比较,有剂量一效应关系,差异均有统计学意义(P＜0.01).与对照组比较,600 μmol/L MnCl2组抑制PC12细胞增殖,抑制率为40%,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组及MnCl2组比较,tBHQ组和tBHQ+MnCl2组的细胞出现增殖效应,细胞增殖相对比为1.8,差异均有统计学意义(P＜0.01).300μmol/L MnCl2处理组PC12细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),tBHQ+MnCl2组细胞凋亡率低于300μmol/L MnCl2处理组,差异有统计学意义(P＜0.01),细胞凋亡抑制率61%.结论 锰可抑制PC12细胞增殖作用,可诱导细胞凋亡;tBHQ可减弱锰抑制PC12细胞的增殖作用并可削弱锰致PC12细胞凋亡的作用.     

叔丁基对苯二酚对百草枯神经细胞毒性和氧化应激的拮抗作用

目的 研究叔丁基对苯二酚(tBHQ)预处理对百草枯(PQ)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞毒性和氧化应激的拮抗作用.方法 将PC12细胞分为溶剂对照组及100、300 μmol PQ处理组.用终浓度为40 μmol/LtBHQ预处理PC12细胞4 h再分别用终浓度0、100、300 μmol/L PQ处理细胞24或48 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞毒性,用Annexin V-FITC/PI法流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,用硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μ,mol/L PQ处理PC12细胞24 h细胞存活率分别较100、300 μmol/L PQ组增高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100μmol/LPQ处理PC12细胞48 h细胞存活率较100μmol/LPQ处理组细胞存活率增高,差异有统计学意义(P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/PQ处理PC12细胞24 h后,细胞凋亡率分别较100、300 μmol/L PQ下降,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);用40μmol/LtBHQ预处理后再用100、300μmol/LPQ处理PC12细胞24 h后,MDA含量分别较100、300 μmol/L PQ组下降,MDA含量分别为相应对照组的0.61、0.57倍,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 tBHQ预处理可削弱PQ致PC12细胞的细胞毒性、细胞凋亡以及氧化应激作用.

Abstract：

Objective To investigate the protective effects of the tert-butylhydroquinone (tBHQ)pretreatment on neurotoxicity and oxidative stress induced by paraquat (PQ) in PC12 cells. Methods Cytoyoxicity of PC12 cells was measured by MTT assay, following the PC12 cells treatment with different concentrations of 100, 300 μmol/L PQ for 24 h and 48 h. PC12 cells were pretreated with or without 40 μmol/L tBHQ for 4 h, PC 12 cells were exposed to PQ at the doses of 0, 100, 300 μmol/L for 24 h and 48 h, respectively.The viability of PC 12 cells was measured by MTT assay, the apoptosis rates of PC 12 cells were detected by flow cytometry (FCM) and the malondialdehyde (MDA) levels of PC 12 cells were examine by thiobarbituric acid (TBA) method. Results When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the viability of PC 12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC 12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). When the exposure dose of PQ was 100μmol/L for 48 h, the viability of PC12 cells pretreated with tBHQ was significantly higher than that of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.01). When the exposure doses of PQ were 100 and 300 μmol/L for 24 h, the apoptosis rates and MDA levels of PC12 cells pretreated with tBHQ were significantly lower than those of PC12 cells only exposed to PQ (P＜0.05 or P＜0.01). Conclusions tBHQ preteatment can reduce the cytotoxicity, apoptosis and oxidative stress induced by PQ in PC12 cells.     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系.方法 经MAPK特异性抑制剂SB203580、U0126预处理的PC12细胞接受65mW/cm2电磁波辐照20min,在辐照后3、24h2个观察时相点,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白质磷酸化水平,采用Annexine-V-FITC标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果 电磁辐射后,PC12细胞ERK1/2的激活可以被U0126明显抑制,而SB203580对其无抑制作用.U0126和SB203580对辐照后JNK的活性无明显影响.SB203580可以明显抑制P38 MAPK的激活,而U0126对P38 MAPK激活的抑制作用不明显.SB203580可以明显减轻电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,而U0126预处理对细胞凋亡无明显影响.结论 电磁辐射诱导PC12细胞凋亡主要通过P38 MAPK信号通路的激活调控,而ERK通路对电磁辐射诱导的细胞凋亡无明显影响,JNK可能对辐照后早期的细胞凋亡有一定促进作用.