低温保存-再灌注肝脏糖原含量与肝细胞凋亡的关系

目的　研究肝脏低温保存 再灌注期间肝糖原含量与肝细胞凋亡之间的关系及其相关机制。方法　制备糖原含量分别为 (1 5 .42± 2 .60 )mg/ g(A组 )、(51 .83± 6 .61 )mg/ g(B组 )及(63 .2 2± 5 .84)mg/ g(C组 )的 3组兔肝脏模型 ,检测各组肝脏低温保存 再灌注过程中肝细胞凋亡及肝细胞内游离Ca2 + 浓度变化情况。结果　各组肝脏于低温保存 9h后再灌注 60min时 ,组织内可见明显的肝实质细胞凋亡现象 ;其凋亡细胞数量分别为 (× 1 0 - 2 个 / μm2 ) :A组 :1 7.58± 3 .64 ,B组 :1 2 .61± 2 .95 ,C组 :8.2 7± 2 .60 ,3组间差异均有显著性 (P <0 .0 1 ) ;并且此时 ,3组肝实质细胞内游离Ca2 + 浓度 (nmol/L)依次为 :A组 :379.1 8± 50 .2 6 ,B组 :331 .59± 43 .56 ,C组 :2 81 .47±40 .1 2 ,各组间差异均有显著性 (P <0 .0 1 )。结论　肝脏低温保存 再灌注过程中 ,肝细胞内高糖原含量能显著拮抗再灌注期间肝实质细胞凋亡的发生 ;其可能与高糖原含量的肝实质细胞内ATP充裕 ,细胞膜上Ca2 + ATP酶功能完善 ,细胞内外Ca2 + 平衡相对稳定有关     

离体肝脏低温保存-再灌注期间肝细胞凋亡现象观察

目的 探讨临床肝移植过程中离体供肝低温保存－再灌注损伤与肝细胞凋亡的关系。方法 采用细胞凋亡原位末端标记法并结合电镜观察,检测低温保存时间分别为０、３、６、９小时的４组免肝脏在低温保存－再灌注过程中肝细胞凋亡发生情况。结果 在低温保存后的再灌注期间,４组动物的肝组织内均可见明显的肝实质细胞凋亡现象,而且低温保存时间越长的肝脏,其再灌注后产生的肝实质凋亡细胞数量越多,但各组肝脏于低温保存末,其组织内     

三七总皂甙对大鼠肝脏低温保存再灌注期间肝细胞凋亡的影响

目的　研究三七总皂甙 (PNGS)对大鼠肝脏低温保存再灌注期间肝细胞凋亡的影响及其机制。方法　采用大鼠离体肝脏再灌注模型 (IPRL) ,用Fura 2法测定低温保存 2h后肝细胞内钙离子浓度 ;经乳酸林格氏液 (LR)低温保存 2 4h的肝脏再灌注 30min后进行肝脏功能检测、氧自由基代谢产物、肝细胞凋亡、Bcl 2蛋白表达及形态学观察。LR和DMEM液中加入不同浓度PNGS。结果　大鼠肝细胞内钙离子浓度、MDA、SOD、肝细胞凋亡及Bcl 2蛋白表达阳性率等项指标各实验组明显好于对照组 (P <0 0 1) ,PNGS对大鼠肝细胞凋亡的保护作用显示出剂量依赖性 ,在 2 0 0～ 6 0 0mg范围内随剂量增加保护作用随之增强 (P <0 0 1) ,在 80 0～ 10 0 0mg范围内虽有增强 ,但无明显差别 (P >0 0 5 )。结论　PNGS减轻了大鼠肝脏在低温保存再灌注期间肝细胞凋亡 ,可能与通过抑制钙超载、抗氧自由基损伤、提高Bcl 2蛋白表达作用有关。     

低温保存-再灌注肝脏肝细胞凋亡与肝细胞糖原含量的关系及bax基因在其中的作用

目的　研究肝脏低温保存 再灌注期间肝细胞糖原含量与肝细胞凋亡之间的关系及bax基因在其中的作用。方法　制备糖原含量显著不同的 4组兔肝脏模型 ,根据给食方法的不同分为A组 (禁食 2 4h ,但自由饮水 )、B组 (标准实验室饮食 )、C组 (标准实验室饮食 +每 6h静脉滴注 2 5 %葡萄糖 3 0ml)及D组 (标准实验室饮食 +每 4h静脉滴注2 5 %葡萄糖 3 0ml) ,检测各组肝脏低温保存 再灌注期间肝细胞凋亡及bax基因蛋白的表达情况。结果　各组肝脏于低温保存 9h后再灌注 60min时 ,肝组织内可见明显的肝实质细胞凋亡现象 ,A、B、C、D 4组的凋亡细胞数量依次减少 ,4组间两两比较差异有统计学意义 ,各组肝细胞bax基因蛋白的表达程度与肝细胞糖原含量有密切的相关性。结论　肝脏低温保存 再灌注过程中 ,肝细胞内糖原能明显拮抗肝实质细胞凋亡的发生 ,其内在机理可能为肝细胞糖原通过抑制bax基因蛋白的表达从而达到拮抗肝实质细胞凋亡的发生。     

FK506对肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达及肝细胞凋亡的影响

目的探讨肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达,肝细胞凋亡以及FK506的作用.方法建立离体大鼠肝脏保存再灌注模型,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL),分别检测肝脏保存0、8、16、24、32 h组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达,肝细胞凋亡以及FK506对上述指标的影响.结果 FK506保存组16、24、32 h Bcl-2 mRNA表达明显高于对照组(P<0.05); Bax mRNA表达明显低于对照组(P<0.05);FK506保存组肝细胞凋亡指数明显低于对照组(P<0.05).结论 FK506能使肝脏保存再灌注中Bcl-2 mRNA表达增强,Bax mRNA表达减低,肝细胞凋亡减少.FK506对肝脏保存再灌注损伤具有防治作用.     

肝脏低温保存-再灌注后的变化及机制

目的　研究肝脏低温保存 再灌注期间 ,肝细胞糖原含量与肝细胞凋亡之间的关系及其相关机制。方法　制备四组肝糖原含量显著不同的兔肝脏模型 ,肝糖原含量 (mg/ g)分别为 :A组 :15 .42± 2 .6 0 ;B组 :5 1.83± 6 .6 1;C组 :6 3 .2 2± 5 .84;D组 :78.5 8± 8.46。检测各组肝脏低温保存 再灌注过程中肝细胞凋亡及组织内氧自由基相关指标 (SOD、GSH、MDA)的变化情况。结果　各组肝脏低温保存 9h后 ,再灌注 6 0min时 ,组织内可见明显的肝实质细胞凋亡现象 ,其凋亡细胞数量依次为A组 >B组 >C组 >D组 ,四组间差异均有显著性 ;且此时各组肝脏组织中SOD、GSH或MDA水平差异也均有显著性。结论　肝脏低温保存 再灌注过程中 ,肝细胞内糖原能显著拮抗肝实质细胞凋亡的发生 ;其内在机制可能在于肝细胞糖原通过抑制氧自由基的产生而达到拮抗肝实质细胞凋亡的发生。     

一氧化氮对大鼠肝缺血-再灌注损伤中肝细胞凋亡的影响

目的探讨一氧化氮对肝缺血-再灌注损伤及肝细胞凋亡的影响。方法在一氧化氮合酶（NOS）增强剂和抑制剂条件下,观察大鼠肝缺血-再灌注后1、3、6、24h肝的血清门冬氨酸氨基转移酶（AST）和丙氨酸氨基转移酶（ALT）变化,同时进行肝细胞胞浆诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达及肝细胞凋亡的免疫组织化学分析。结果在再灌注6h点AST、ALT、肝细胞凋亡水平上,L-精氨酸（L-arg）组值分别为（341.88±111.24）IU/L、（311.75±139.41）IU/L和2.80±1.79,显著低于L-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）组（2080.88±241.98）IU/L、（1153.00±110.92）IU/L和5.50±0.71（P值均＜0.05）。而L-arg组的肝细胞内iNOS表达灰度值152.07±3.46显著高于L-NAME组灰度值180.45±4.46（P＜0.05）。结论一氧化氮可减少肝缺血-再灌注损伤后肝酶的释放,抑制肝细胞的凋亡,改善肝缺血-再灌注损伤。     

大鼠肝脏移植再灌注细胞凋亡与凋亡调控的研究

目的：探讨大鼠肝脏组织再灌注后细胞凋亡及其调控机制。方法：SD大鼠132只，进行原位肝移植，取灌注保存及再灌注后的肝脏组织。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法和逆转录多聚酶链反应，检测肝组织中的凋亡细胞及bcl-2 mRNA、bax mRNA和Fas mRNA。结果：肝移植再灌注后，大鼠肝脏组织标本中凋亡细胞尤其明显。肝脏冷灌注保存180min时，未检测到凋亡抑制基因bcl-2的表达，但可明显检测到bax和Fas基因的表达。移植再灌注后，可检测到bax和Fas基因及凋亡抑制基因bcl-2。结论：移植再灌注肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的重要原因，其发生可能与凋亡诱导基因bax和Fas的高表达以及凋亡抑制基因bcl-2的低表达有关。     

肝脏低温保存再灌注损伤的细胞分子机理

对于终末期肝病 ,肝移植是最有效的治疗手段 ,据统计 ,目前全世界每年正以 80 0 0例的速度开展此项手术 ,而且累计例数逐年增加 ;但肝移植术后肝原发性无功能 (ｐｒｉｍａｒｙｎｏｎ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ,ＰＮＦ)等早期并发症的发生率达 15 %～2 5 % 〔1〕,是肝移植术失败和死亡的重要原因。近年来对影响ＰＮＦ的因素进行了大量的研究 ,现就肝脏低温保存再灌注损伤的细胞分子机理综述如下。一、肝细胞钙超载的作用钙离子 (Ｃａ2 )作为细胞内第二信使 ,在维持细胞增殖 ,运动、代谢、Ｃａ2 依赖蛋白激酶和磷脂酶的激活等方面发挥着重要作用…     

大鼠肝脏缺血再灌注及低温保存过程中氧自由基变化的实 …

目的 观察大鼠肝脏缺血再灌注及低温保存过程中氧自由基的变化。方法 建立大鼠肝脏假手术、热缺血再灌注和原位肝移植模型,分别测定再灌注１ｈ和移植术后２ｈ下腔静脉血中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和血清中指质过氧化物（ＬＰＯ）的变化,并进行组织学观察。结果 术前３０ｍｉｎ静脉注射别嘌呤或灌洗液及保存液中加别嘌呤的实验组大鼠,其全血中ＳＯＤ的活力高于条件相同、但不给予别嘌醇的对照组,ＬＰＯ     

SMO保存液对犬肾低温保存期间细胞凋亡和能量代谢的影响

目的研究SMO保存液对犬肾低温保存期间细胞凋亡和能量代谢的影响。方法建立犬离体肾脏单纯低温保存模型，根据保存液的不同分为3组，分别用0～4℃HTK保存液（HTK组）、UW保存液（UW组）和自制的SMO保存液（SMO组）对供肾进行灌注和保存；于犬肾保存24、48、72h后取各组的肾皮质标本，进行组织病理学、细胞凋亡和组织能量代谢的检测。结果犬肾保存48和72h时的组织病理学损害，SMO组比HTK组轻，但在各时间点与Uw组基本相似。犬肾保存24h时的细胞凋亡指数，SMO组与HTK组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），保存48和72h后，SMO组显著低于HTK组（P〈0．05）；但SMO组与Uw组在各时点比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。犬肾保存24和48h时组织中Na^＋ -LK^＋ATP酶的活性，SMO组与HTK组比较，差异无统计学意义（P〉0．05），保存72h时，SMO组明显高于HTK组（P〈0．05）；而SMO组与Uw组在保存的各时点差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论SMO保存液在减轻细胞形态学改变、减缓肾脏细胞凋亡和保持Na^＋ -LK^＋ATP酶活性方面显著优于HTK保存液，与UW保存液相当。     

大鼠肝脏保存再灌注时OH与细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的关系

目的 阐明羟自由基（ＯＨ），细胞凋亡及Ｂｃｌ－２蛋白表达在大鼠肝脏不同保存时相再灌注过程中的变化规律及相互关系。方法 以大鼠肝脏离体非循环灌注为模型，用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）紫外检测法，测定ＯＨ与水杨酸的生成物二羟苯甲酸（ＤＨＢＡ）含量，用原位末端标记法及电镜观察细胞凋亡，用免疫组织化学法检测Ｂｃｌ－２蛋白表达。结果 随着保存时间延长，ＯＨ水平及细胞凋亡指数（ＡＩ）进行性升高，且两者呈显著正相关     

缺血预处理与急性心肌缺血/再灌注细胞凋亡及Bcl-2、BaX蛋白表达的关系

目的：研究缺血预处理对急性心肌缺血／再灌注细胞凋亡的影响及与Bcl-2,Bax蛋白表达的关系。方法：用在体心肌缺血／再灌注模型，将实验动物分为3组：对照组，缺血／再灌注组，缺血预处理组。分别用原末端标记（TUNEL）法测定凋亡细胞和用免疫组化法测定Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果：与对照组相比，缺血／再灌注组增加凋亡心肌细胞的百分数（P＜0．01）及Bax蛋白的光密度值（P＜0．01），减小Bcl-2蛋白的光密度值（P＜0．01），与缺血／再灌注组相比，缺血预处理减小凋亡心肌细胞百分数（P＜0．01）及Bax蛋白的光密度值（P＜0．05），增加Bcl-2蛋白的光密度值（P＜0．01）。结论：缺血预处理通过调控Bcl-2/Bax表达而抑制心肌缺血／再灌注细胞凋亡。     

Reperfusion injury to endothelial cells after cold storage of rat livers: protection by mildly acidic pH and lack of protection by antioxidants

Lethal reperfusion injury to sinusoidal endothelial cells occurs after cold ischemic storage of livers and may be responsible for liver graft failure from storage injury. Here, we evaluated potential mechanisms underlying this reperfusion injury. In rat livers stored in Euro-Collins solution for 24 h and reperfused with Krebs-Henseleit bicarbonate buffer, nonparenchymal cell killing showed periportal predominance as assessed by nuclear staining with trypan blue. In livers reperfused in the retrograde direction, the lobular distribution of cell killing was reversed, indicating that cell killing was more rapid in oxygenrich upstream regions. However, antioxidants, including allopurinol, desferrioxamine, catalase, superoxide dismutase, superoxide dismutase plus catalase, and U74006F, did not reduce cell killing. Similarly, reperfusion with anoxic buffer did not prevent lethal injury. Antioxidants and anoxic reperfusion also did not improve cell viability in livers stored in UW solution. Nevertheless, superoxide generation, as identified by formazan formation from nitroblue tetrazolium, was increased in Kupffer cells after lives storage and reperfusion as compared to unstored livers. Acidification of the reperfusion buffer from pH 7.4 to pH 7.15 reduced overall nonparenchymal cell killing from about 40% to 10%. Moreover, a pH gradient developed across the liver lobule during reperfusion with the effluent 0.2–0.4 pH units more acidic than the influent. This intralobular pH gradient appears to account for the relative sparing of cells in more acidic downstream regions of the lobule. Lower temperatures of reperfusion also reduced lethal injury. In conclusion, Kupffer cells generated superoxide after perfusion of stored rat livers, but formation of oxygen free radicals did not appear to contribute to lethal reperfusion injury to endothelial cells. Rather, mildly acidotic pH was protective against lethal injury. Thus, hydrogen ion concentration may be a critical determinant of reperfusion injury to sinusoidal endothelial cells.     

吸入麻醉药预处理对兔缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax及p53基因表达的影响

目的探讨吸入异氟醚、七氟醚及地氟醚预处理对兔在体心脏局部缺血再灌注过程中心肌细胞Bcl-2、Bax及p53基因表达的影响。方法 40只新西兰白兔随机分成5组(n=8):假手术对照组(P组)、缺血再灌注对照组(IR组)、异氟醚预处理组(Ⅰ组)、七氟醚预处理组(S组)、地氟醚预处理组(D组)。除P组外,每组接受左冠脉前降支3 h阻断和3 h再灌注。吸入药预处理组在缺血前分别吸入1MAC的异氟醚、七氟醚或地氟醚,30 min后洗脱15 min。取心肌缺血区边缘组织用流式细胞仪测凋亡指数(AI)和Bcl-2、Bax及p53基因的蛋白表达量。结果 AI:P组为(0.93±0.27)％,IR组为(14±4)％,I、s、D组较IR组显著减少,分别为(6.7±1.8)％、(6.7±1.6)％、(7.4±2.0)％(P<0.01)。Bcl-2、p53、Bax基因的蛋白表达:Bcl-2基因的蛋白表达量I、S、D组高于IR组,Bax基因和p53基因的蛋白表达量I、S、D组低于IR组。结论 异氟醚、七氟醚及地氟醚预处理抑制缺血再灌注所致心肌细胞凋亡与上调BcI-2基因的蛋白表达、下调p53和Bax基因的蛋白表达有关。     

异丙酚对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤时Bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡的影响及与Bcl-2蛋白表达的关系。方法 Wistar大鼠36只,随机分为对照组(C组)和异丙酚处理组(P组)。每组再分为缺血前、缺血30 min和再灌注30 min 3个亚组。分别用DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL法)测定凋亡细胞和用免疫组化法测定Bcl-2蛋白的表达。结果 与缺血前相比,缺血30 min及再灌注30min亚组的凋亡指数(AI)显著增加(P<0.01),Bcl-2蛋白的光密度值显著减少(P<0.01);与C组相比,P酚组缺血30 min及再灌注30 min亚组的AI显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白的光密度值显著增加(P<0.01)。结论 异丙酚通过调控Bcl-2表达而减少心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡的发生。     

大鼠肝脏冷灌注保存中肝细胞凋亡及其调控基因的研究

目的 通过检测凋亡细胞计数及凋亡相关基因bax和Fas的表达，探讨细胞凋亡及其相关基因在冷灌注保存大鼠肝脏组织中的作用。方法 本研究采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法（TUNEL法）及RT-PCR，按照供肝保存时间30、60、90、120、180、300min分为6组进行凋亡细胞计数及其相关基因的检测。结果 不同保存时间大鼠肝脏组织中均有凋亡细胞发生，随着时间延长，凋亡细胞计数呈进行性增加趋势；未检测到bcl-2的表达，但可明显检测到bax和Fas基因的表达。结论 在冷灌注保存肝组织中，细胞凋亡是早期细胞死亡的主要原因之一。细胞凋亡的发生可能与bax和Fas的高表达以及bcl-2的低表达有关。