转化生长因子-β1及其基因多态性与多发性骨髓瘤的关系研究

目的：探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）分子表达水平及其编码区基因多态性与多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）的关系.方法：应用ELISA方法检测标本血浆TGF-β1的浓度,应用LightCycler实时荧光PCR结合熔点曲线分析的方法检测转化生长因子-β1编码区3个基因多态性：codon10 T〉C（Leu10Pro）、codon25 G〉C（Arg25Pro）和codon263 C〉T（Thr263Ile）.结果：患者血浆TGF-β1浓度明显高于对照组,但TGF-β1基因codon10位点各种基因型和等位基因在对照组和MM患者组以及MM患者各型之间的分布频率并没有显著差异,而且MM患者各种基因型血浆TGF-β1的浓度也没有显著差异,TGF-β1基因codon25和codon263位点均不存在预想中的基因多态性.结论：转化生长因子-β1可能在多发性骨髓瘤的发生中起到一定的作用,但该因子基因编码区多态性并不会影响血浆TGF-β1的浓度,也与MM的发生以及亚型没有明确的相关性.     

重组人生长激素治疗肝炎后肝硬化患者低蛋白血症的实验与临床研究

目的评价重组人生长激素对肝炎后肝硬化患者低蛋白血症的影响.方法治疗组31例肝硬化患者用重组人生长激素(每日0.25 IU/kg)、对照组20例用人血白蛋白(10 g/d)治疗10 d,用放射免疫法测定治疗前、后24 h及治疗结束时的血清生长激素(GH)、类胰岛素生长因子(IGF)-1、白蛋白(ALB)水平,另以同样方法测定10例健康人的GH、IGF-1水平.结果肝硬化患者治疗前的GH水平高于健康人(4.96±3.97,1.62±2.26,P<0.05),而IGF-1水平明显低于健康人(36.53±12.77,56.95±10.46,P<0.01).经重组人生长激素治疗后,IGF-1和ALB明显增高,与对照组比较差异有显著性(P<0.01).结论重组人生长激素可以克服肝硬化患者的生长激素抵抗现象;对其低蛋白血症的改善优于单纯人血白蛋白治疗.     

胰岛素样生长因子-1及其受体和结合蛋白-3与前列腺癌关系的研究进展

前列腺癌是老年男性最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,在欧美国家发病率占男性肿瘤第一位,死亡病因第二位,发病率随年龄增长而增高,平均每十年发病率增加2倍[1]。在我国,随着生活水平的提高、饮食结构的改变及人口逐渐老龄化,前列腺癌的发病率和死亡率亦在迅速增长。近年来有关胰岛素样生长因子-1及其受体和结合蛋白-3与前列腺癌的关系备受关注。本文就其与前列腺癌关系的研究进展作一综述。     

重组人 PTP1B 的原核高效表达及TFLC的体外抑制剂实验

 目的 高效诱导表达并纯化具有活性的重组 PTP1B 融合蛋白（rhPTP1B）,进行酶活性及抑制剂的实验。方法 重组体 pGEX-hPTP1B 转化 E.coliDH5α,诱导表达 rhPTP1B 并优化条件后,超声取细胞裂解上清液经 GST 亲和层析柱纯化后,利用 rhPTP1B 水解特异性底物 4-硝基苯基磷酸二钠盐（pNPP-Na2）的磷酸基团而产生颜色反应来测定 rhPTP1B 活性,并分析其与 rhPTP1B 浓度、底物浓度及反应温度的关系,钒酸钠（Na3VO4）抑制类型的研究,老鹰茶总黄酮（TFLC）对 rhPTP1B 的抑制性作用和浓度依赖关系。 结果 rhPTP1B 表达的最适条件是在 34 ℃ 和 2.0 mmol/L IPTG 下诱导表达 10 h,可被 GST 亲和层析法分离纯化;其活性随酶浓度及底物浓度的增加而增加,35 ℃ 时 rhPTP1B 的活性最大;钒酸钠的作用机制可能为非竞争性抑制作用;TFLC 对 rhPTP1B 有明显的抑制作用。结论 诱导表达纯化的 rhPTP1B 融合蛋白可用于抑制剂的研究,TFLC 对 rhPTP1B 的强抑制作用可能是其降低糖尿病大鼠血糖浓度的机制之一。     

类胰岛素生长因子结合蛋白-1在预测临产时间及保胎中的价值

目的　评价类胰岛素生长因子结合蛋白 - 1预测临产时间的临床意义及其在先兆早产保胎中的价值。方法　比较IGFBP - 1和宫颈评分预测 72h内临产的成功性 ,比较先兆早产孕妇不同IGFBP - 1检测结果保胎效果的差异。结果　IGFBP - 1检测预测 72h内临产的敏感性、阴性预检值和准确性均高于宫颈评分 (P <0 0 1) ,假阴性率低于宫颈评分 (P <0 0 1)。先兆早产IGFBP - 1阴性者保胎均成功 ,阳性者保胎均失败。结论　IGFBP - 1试纸条预测临产时间明显优于宫颈评分 ,阳性可预测在 72h内临产。IGFBP - 1检测可预测先兆早产保胎成功性 ,指导临床医生采取相应治疗方案。     

测定IGF-1及其结合蛋白诊断生长激素缺乏症的价值

目的：探讨胰岛素样生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）诊断生长激素缺乏症的价值。方法：采用免疫放射分析（IRMA）分别检测32例生长激素缺乏症（GHD）、35例特发性矮小症（Idiopathic short-small syndrome,ISS）、30例健康儿童血清IGF-1和IGFBP-3水平,同时比较IGF-1和IGFBP-3诊断GHD敏感性、特异性和实验有效率。结果：GHD组、ISS组、正常对照组血清IGF-1和IGFBP-3水平,两两比较均有显著性差异（P〈0．01,P〈0．05）;IGF-1、IGFBP-3水平与GH激发试验中的GH峰值呈正相关（r=0.312、0.354,P〈0．05）;诊断GHD,IGF-1的特异性为82,9％,敏感性为68．8％;IGFBP-3的特异性为91．4％,敏感性为75．0％,两者比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：IGF-1和IGFBP-3的检测可能可作为筛查和诊断GHD有价值的指标,血清IGF-1、IGFBP-3水平的检测可能可替代GH激发试验。     

检测血清IGF-1和IGFBP-3对儿童生长激素缺乏症的诊断价值

目的：探讨血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)浓度在诊断生长激素缺乏症(GHD)患儿中的应用价值。方法：用免疫放射分析检测38例GHD患儿和42例对照儿童的血清IGF-1和IGFBP-3,同时进行生长激素(GH)激发试验,用化学发光法检测GH,对两组结果进行比较。结果：GHD组患儿IGF-1和IGFBP-3均显著低于对照组儿童,且在GH激发试验中,GH的增加值也明显低于对照组。结论：检测血清中的IGF-1和IGFBP-3,对诊断GHD儿童具有重要价值。     

人类胰岛素生长因子Ⅰ基因的合成、表达与纯化

目的：实现含人类胰岛素生长因子I(hIGF-1)融合蛋白的高水平可溶性表达和纯化，应用factor Xa获得非融合的hIGF-1，并对提高目的融合蛋白对factor Xa的敏感性进行探索。方法： 根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成编码70个氨基酸的hIGF-1基因，克隆到表达载体pET-35b(+)，实现hIGF-1与纤维素结合域（cellulose binding domain, CBD）的融合表达，并在两者之间引入factor Xa的识别位点，同时尝试在factor Xa识别位点前引入7个氨基酸的柔性短肽（Gly-Thr-Gly- Gly-Gly-Ser-Gly），比较factor Xa酶切效率。纤维素亲和层析纯化融合蛋白CBD-IGF，经Western blotting检测后，利用MTT法测定其促进NIH3T3细胞增殖的活性。结果： 可溶性融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中高效表达；活性测定结果显示所纯化的融合蛋白具有促进3T3细胞增殖的活性。在factor Xa识别位点前引入柔性短肽后提高了融合蛋白对factor Xa 的敏感性。结论： 实现有活性的融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中可溶性的高效表达，为高效制备hIGF-1基因工程产品奠定了基础。此外，在factor Xa识别位点前引入柔性短肽有效提高融合蛋白CBD-IGF对factor Xa的敏感性。     

良性前列腺增生患者IGF-1、IGFBP-3水平的探讨

目的：研究良性前列腺增生(BPH)患者血清胰岛素生长因子—1(IGF—1)及其结合蛋白—3(IGFBP—3)的水平，探讨IGF—1、IGFBP—3对揭示BPH病因及治疗方面的价值。方法：采用免疫放射分析法(IRMA)测定64例BPH患者血清中IGF—1、IGFBP—3水平，并以30例健康人作对照。BPH患者按照其前列腺总体积(PV)的大小分为3组。Ⅰ组：PV≤30ml，18例；Ⅱ组：PV31-50ml，24例；Ⅲ组：PV≥50ml，22例。结果：BPH组血清IGF—1、IGF-BP-3含量与健康组比较，差异均显著(p＜0．05)；相关检验均呈正相关，p＜0．05。结论：IGF—1、IGFBP—3的高低与前列腺增生的程度有关联，对BPH病因的揭示以及BPH的非手术治疗均有一定的临床价值。     

抗IGFBPrP1抗体对小鼠肝纤维化的预防作用及其机制的研究

目的: 明确抗胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBPrP1)抗体能否预防硫代乙酰胺(TAA)诱导的小鼠肝纤维化的形成,同时探讨其机制。方法: 将24只雄性C57BL/6野生型小鼠随机分为正常对照组、TAA 4周组和TAA+抗IGFBPrP1抗体4周组,每组8只,观察肝组织形态学改变,免疫组织化学染色和Western blotting检测肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)、Smad3、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen Ⅰ、Ⅲ)及IGFBPrP1的表达。结果: TAA 4周组肝损伤严重,α-SMA、TGF-β₁、Smad3、p-Smad2/3、FN、collagen Ⅰ、Ⅲ及IGFBPrP1的表达明显高于正常对照组(P＜0.01),TAA+抗IGFBPrP1抗体4周组肝损伤减轻,上述各指标表达均低于TAA 4周组(P＜0.01)。IGFBPrP1与TGF-β₁、Smad3、p-Smad2/3 、FN及collagen Ⅰ的表达呈正相关(P＜0.01)。结论: 抗IGFBPrP1抗体可预防TAA诱导的小鼠肝纤维化的形成,其机制为抑制肝星状细胞的活化和减少细胞核内p-Smad2/3的表达、抑制TGF-β₁/Smad3信号通路,进而导致细胞外基质在肝组织中沉积减少。     

可溶性syndecan-1 对人多发性骨髓瘤细胞体外的生物学作用

目的：研究可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１（ＣＤ１３８）分子对人多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞生长行为的影响及其机制。方法：用亲和层析法分离可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１;借助＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入、间接免疫荧光、ＡＮＮＥＸＩＮ－Ｖ及ＰＩ标记分析ＭＭ细胞增殖、凋亡周期变化。结果：（１）从ＸＧ－２细胞培养上清中分离纯化得到分子量为６０ｋＤ左右的可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１分子;（２）可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１分子在体外能抑制ＸＧ－１增殖,阻滞细胞增殖停留在Ｇ２／Ｍ期。并介导其凋亡;ＦＧＦ、５％小牛血清、肝素酶Ⅲ可逆转一定浓度可溶性ｓｙｎ－ｄｅｃａｎ－１的作用,ＨＧＦ、ＶＥＧＦ和ＩＧＦ－１可部分逆转可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１分子对细胞的生长抑制作用;（３）ＩＬ－６及激发型抗ＩＬ－６Ｒ１３０（ｇｐ１３０）单抗对可溶性ｓｙｎｄｅｃａｎ－１ｗ     

IRMA测定血清IGF-1的方法评估

胰岛素生长因子-1(IGF-1)是一个氨基酸序列与胰岛素相似的多肽。是由垂体分泌的生长激素(GH)作用于肝脏等外周组织和器官合成并分泌的。循环中的IGF-1与其结合蛋白结合(IGFBP-3)结合,呈结合状态。IGF-1是许多细胞系重要的有丝分裂原,具有促进细胞分裂、增殖、抑制细胞凋亡的功能。目前实验室测定血清IGF-1的方法有色     

妊娠期糖尿病与CRP、IGF-1及IGFBP-1相关性研究

目的探讨C反应蛋白（CRP）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）与胰岛素样生长因子结合蛋白l（IGFBP-1）在妊娠期糖尿病（GDM）发病中的作用。方法采用免疫透射比浊法和酶联免疫吸附法（ELISA）检测孕24～28周GDM孕妇18例（观察组）和29例正常孕妇（对照组）外周血CRP、IGF-1及IGFBP-1水平,并分析CPR与体重指数、IGF-1与IGFBP-1的相关性。结果（1）两组体重指数（BMI）比较：GDM组（26.01±3.54）kg,较正常组（23.31±2.13）kg高,差异有统计学意义（P〈0.01）;（2）血清CRP水平：GDM组（8.65±5.38）mg/dl,较正常组（5.83±3.26）mg/dl为高,但差异无统计学意义（P〉0.05）;（3）血清IGF-1水平：GDM组（89.16±41.32）ng/ml,正常组（148.95±53.90）ng/ml,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（4）血清IGFBP-1水平：GDM组（59.43±10.97）ng/ml较正常组（52.33±9.68）ng/ml高,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（5）相关性：血清CRP与体重指数成正相关（r=0.849,P〈0.01）;血清CRP水平与体重指数成正相关,IGF-1与IGFBP-1成负相关（r=-0.33755,P〈0.05）。结论CRP对GDM风险的独立影响不能被证实,但母体血清CRP水平与妊娠期的BMI显著相关,推论肥胖介导的炎症反应导致胰岛素抵抗和糖代谢失调;孕妇外周血IGF-1、IGFBP-1与GDM的发生相关。     

miR-122对脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积及胰岛素样生长因子-1受体通路的影响

目的：探讨miR-122 对脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积及胰岛素样生长因子-1 受体（IGF-1R）通路的 影响。方法：将SPF 级雄性 C57BL 小鼠,运用线栓法建立脑缺血再灌注损伤（I/R）模型,分对照组（ 假手术 组）、模型组（I/R 模型组）、模拟物组（I/R 模型+miR-122 模拟物）、抑制物组（I/R 模型+miR-122 抑制物）,比 较小鼠神经功能和认知功能,测定小鼠脑梗死体积,H-E 染色检测脑组织结构改变,RT-PCR 测定miR-122、IGF- 1R mRNA水平,免疫印迹测定IGF-1R 蛋白表达,流式细胞术检测神经元细胞凋亡情况。结果：与对照组相比, 模型组和模拟物组小鼠旋转圈数明显增多,悬挂实验评分降低,且模拟物组小鼠旋转圈数多于模型组,悬挂实验 评分低于模型组;与模型组相比,抑制物组小鼠旋转圈数明显减少,悬挂实验评分明显升高。与对照组相比,模 型组和模拟物组小鼠PT%、T% 值均降低,且模拟物组较模型组降低的更为显著;与模型组相比,抑制物组小鼠 PT%、T% 值显著升高。与对照组相比,模型组和模拟物组大鼠脑梗死体积明显增加,且模拟物脑梗死体积大于 模型组;与模型组相比,抑制剂组大鼠脑梗死体积显著减小。对照组脑组织结构完整,神经元排列紧密,无染色 不匀现象,模型组脑组织神经元排列呈疏松状态,着色不匀,有大量空泡样病理结构改变,模拟物组脑组织结构 改变较模型组严重,抑制物组脑组织损伤病理变化逐渐减弱,神经元排列较密,空泡样病理改变减少。与对照组 对比,模型组miR-122 水平呈显著升高状态,其余3 组miR-122 水平从高到低依次为模拟物组、模型组、抑制物组。 与对照组比较,模型组、模拟物组IGF-1R mRNA 水平均呈下降趋势;与模型组比较,模拟物组 IGF-1R mRNA 水平有所升高。与对照组比较,模型组IGF-1R 蛋白表达明显下降,模型组IGF-1R 蛋白高于模拟物组,抑制物组 IGF-1R 蛋白高于模型组、模拟物组。神经元细胞凋亡从高到低依次为模拟物组、模型组、抑制物组、对照组,4 组神经元细胞凋亡率比较差异有统计学意义。结论：miR-122 低表达可减少脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积, 增加IGF-1R 通路活性,对脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织有一定的预防作用。     

早期急性心肌梗死患者血清白细胞介素-1受体拮抗蛋白变化的临床价值

目的探讨血清白细胞介素-1受体拮抗蛋白（IL-1Ra）在早期诊断急性心肌梗死（AMI）患者中的临床价值。方法比较IL-1Ra、肌红蛋白（MYO）、肌钙蛋白I（cTnI）、肌酸激酶同功酶（CK-MB）四种物质定量检测对诊断发病6h内的AMI的敏感性、特异性和准确性。结果 AMI组IL-1Ra水平高于非急性心肌梗死组和正常对照组（P均〈0.01）;AMI组和非急性心肌梗死组患者血清IL-1Ra含量进行Logistic回归分析得知,IL-1Ra诊断AMI的最佳临界值为210pg/ml。IL-1Ra诊断发病3h和6h内的AMI的敏感性显著高于cTnI和CK-MB（P〈0.05）,特异性差异则无统计学意义（P〉0.05）,诊断准确性高于MYO、cTnI和CK-MB。结论 IL-1Ra在AMI患者中早期升高对发病〈3h的AMI患者有诊断意义,提示检测IL-1Ra可作为早期诊断AMI的一个重要的辅助指标。     

表皮生长因子受体家族与靶向性抗癌治疗

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）家族,亦称erbB受体,含4个成员即EGFR（erbB-1、HER1）、erbB-2（HER2／neu）、erbB-3（HER3）和erbB-4（HER4）,均属于Ⅰ型酪氨酸激酶受体（typel—receptor tyrosine kinase,TITK）。这些受体是单个氨基酸链蛋白。每一受体含3个区域（domain）即细胞外区、疏水跨膜区和细胞内区。细胞外区为受体及其相应的配体或配体样物质结合处。受体与配体或配体样物质结合后形成同种或异种二聚体。二聚体跨膜进入细胞内区、激活酪氨酸激酶、底物转磷酸化（transphosphorylation）、     

IGF系统的生物学功能及其与肿瘤的关系

胰岛素样生长因子 (insulin- like growth factor,IGF)是体内重要的生长因子 ,它对组织细胞的增殖、分化、凋亡 ,机体的生长发育及肿瘤的发生发展起重要的调节作用。 IGF系统的组成包括 :IGF- 、IGF- 、IGF- R、IGF- R、IGFBP家族。 IGF促增殖、促生长的活性主要由 IGF- R介导 ;IGF- R的主要作用是清除游离 IGF- ,调节 IGF- 的水平。 IGFBP1- 6是 IGFs活性的调节因子 ,近年的研究表明它们也有不依赖 IGF的生物活性     

多发性骨髓瘤相关基因MMSA-1的表达及定位研究

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)相关基因MMSA-1的表达谱,蛋白表达水平与细胞增殖的关系及其细胞定位。方法:应用实时荧光定量PCR检测MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病患者及正常人中的表达水平,并同DKK1基因进行相关比较。使用不同浓度伊班磷酸对骨髓瘤RP-MI8226细胞进行处理,流式细胞术(FCM)检测处理后8226细胞细胞周期的变化及早期凋亡情况,免疫组化法检测8226细胞MMSA-1蛋白表达水平的变化。构建pCMV-Myc真核表达载体,采用抗体免疫组化法确定MMSA-1蛋白的细胞定位。结果:MMSA-1基因在MM、白血病、非肿瘤疾病及正常人中均有表达,在MM细胞中mRNA表达显著高于其他组;MM-SA-1与DKK1基因在MM中的高表达具有一致性,且含量呈正相关。伊班磷酸可以使8226细胞生长受阻于S期,并减少细胞成熟促进因子的释放,从而使细胞周期停滞,促进其早期凋亡,同时可以下调MMSA-1蛋白的表达。MMSA-1主要表达于细胞膜上,但在细胞质内也可见少量蛋白。结论:MMSA-1与MM细胞增殖和溶骨破坏密切相关,为进一步研究其功能及基于该抗原的免疫治疗奠定了基础。     

前列腺癌患者血清IGF-Ⅰ和SIL-2R检测的临床意义

目的：探讨了前列腺癌患者血清IGF—Ⅰ和SIL-2R水平及意义。方法：应用放射免疫分析和酶联免疫法对31例前列腺癌患者进行了血清IGF—Ⅰ和SIL-2R检测,并与30名正常人作比较。结果：前列腺癌患者血清IGF—Ⅰ和SIL-2R水平非常显著地高于正常人组（P〈0．01）,两者呈明显正相关（r=0．6182,P〈0．01）。结论：检测前列腺癌患者血清IGF—Ⅰ和SIL-2R水平对诊断、治疗和预后观察具有重要的临床价值。     

双功能基因APE1对多发性骨髓瘤疗效的影响

目的探讨MM细胞APE1基因表达及定位对MM疗效的影响。方法采用双标免疫荧光结合激光共聚焦显微镜和免疫细胞化学分析MM细胞系KM3,并在32例MM患者和10例正常自愿者骨髓标本中检测APE1蛋白表达及定位。结果MM患者骨髓标本有APE1和CD38蛋白共表达;在作为阳性对照的MM细胞系KM3中胞核、胞核/胞浆、胞浆均有APE1表达,其中尤以胞核明显;APE1胞浆阳性分度在正常对照组、初治组、复发或难治组间依次增高(P<0.01或0.05)。结论APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,APE1基因表达增强可能是MM患者预后不良的指标之一。