人ⅡA型磷脂酶A2的cDNA顺序与婴儿利什曼原虫DNA相似性分析

目的：了解人ⅡA型磷脂酶A2cDNA顺序和婴儿利什曼原虫DNA相似性的情况和原因。方法：利用BLAST工具,以人ⅡA型磷脂酶cDNA顺序中的片段对核酸数据库进行搜寻和比对,将获得的一致性片段进行收集、整理并分析、汇总利什曼原虫DNA的相关信息。结果：发现人ⅡA型磷脂酶A2cDNA与婴儿利什曼原虫DNA之间具有9个完全一致序列（≥16bp）,这些序列集中分布于利什曼原虫36条染色体的29、30号染色体上。结论：人ⅡA型磷脂酶cDNA顺序与婴儿利什曼原虫DNA片段之间具有一致性,可能与基因由原虫向人的横向传递有关。     

婴儿利什曼原虫Pepck和Gp63优势表位的真核与原核重组载体的构建与表达

目的 选取婴儿利什曼原虫的Pepck和Gp63的优势表位基因,构建Pepck-Gp63二联优势表位的原核与真核重组表达载体并表达蛋白.方法 用计算机分析预测磷酸烯醇丙酮酸羧基酶(phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPCK)的二级结构及HLA表位,筛选出优势表位.根据本实验室之前对表面蛋白...     

杜氏利什曼原虫39KD抗原基因同源性分析

目的：确定杜氏利什曼原虫39KD抗原基因的基因分析与同源性。方法：以杜氏利什曼原虫39KD抗原基因为探针,与不同种株的利什曼原虫进行Southem杂交,确定不同种株的利什曼原虫该基因的变化,并将该基因序列测定后,进行DNA序列数据库检索,分析其同源性,并进行数据库登记。结果：杜氏利什曼原虫不同地域株及婴儿利什曼原虫基因组中均含有该基因,并且无明显定位变化,整个基因在DNA数据库中无完全DNA同源序列,在GenBanK中的序列号为3280。结论：该抗原基因是利什曼原虫保守基因。     

杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5的原核表达与生物信息学分析

目的扩增杜氏利什曼原虫假定蛋白PA5基因,原核表达该假定蛋白并预测其结构与功能。方法以杜氏利什曼原虫前鞭毛体基因组DNA为模板,巢式PCR法扩增该基因,将其克隆入pQE30质粒构建pQE30-PA5重组质粒,经IPTG诱导表达目的蛋白。采用生物信息学方法对该蛋白进行同源性分析、信号肽及跨膜区预测、蛋白质结构与B细胞抗原肽位点分析。结果成功扩增出PA5基因,序列全长为765 bp,构建的pQE30-PA5重组质粒,经诱导后目的蛋白以包涵体形式表达。所获得的蛋白含254个氨基酸,相对分子质量为27 065,等电点为5.71的亲水性不稳定蛋白,不含信号肽及跨膜区。二级结构以α-螺旋及不规则卷曲为主,共含5个B细胞抗原肽片段。结论成功表达了杜氏利什曼原虫PA5蛋白,该亲水蛋白具有体液免疫刺激潜能,具有利什曼病潜在免疫诊断价值。     

杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因原核表达重组质粒的构建

目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的原核表达重组质粒pET-amastin.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增,将扩增出的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒载体pET-32a(+),构建原核表达重组质粒pET-amastin.结果:扩增出大小约550 bp的无鞭毛体蛋白基因,重组质...     

原核表达载体pKpL5的构建及应用研究

目的构建基因工程生产用高效原核融合表达质粒载体。方法在原核表达质粒pKpL4起始密码下游嵌入人工合成的六聚组氨酸编码区、16s RNA3端互补区、凝血酶识别位点编码区接头,构建成原核表达质粒pKpL5,并将人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因编码区分别克隆入pQE32、pKpL4和pKpL5进行表达,SDS-PAGE电泳分析各目的蛋白的表达量。结果人生存素单体、双体及利什曼原虫LACK抗原基因读码框在pQE32和pKpL4质粒载体内均不表达,而在pKpL5内,其目的蛋白表达量分别占细菌总蛋白量的5.1%,19%和35%。结论pKpL5可用作通用原核高效表达质粒载体表达各种目的基因。     

基因在艾滋病中起作用吗?

美国加利福尼亚的研究人员说,有些人可能携带艾滋病过程变慢的基因。人免疫缺陷病毒(HIV)阳性而仍健康者,比艾滋病患者或有此病早期体征者的第6染色体上更可能有一种人白细胞抗原(HLA)基因的特殊“标记”。 HLA基因是控制免疫系统的一个重要部分。它们为一些蛋白或抗原编码,这些蛋白或抗原使免疫系统的T细胞能够识别外来的蛋白。T细胞仅在与HLA抗原结合时才能识别这类蛋白。HLA基因是人类基因组中一些最易变的基因,每个人都有略微不同的一组HLA基因。它们被分成两种类型:Ⅰ类控制     

肿瘤抗原MAGE-n HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测及合成鉴定

目的　采用表位重建技术 ,对预测MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位结合活性进行研究。方法　用SYFPEITHI超基序法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法 ,筛选新的MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位作为候选表位。对预测的抗原表位进行多肽合成 ,并用HPLC进行纯化 ,质谱法 (MS)鉴定。候选表位与HLA A2位点的亲和力及结合稳定性用竞争结合抑制实验、T2结合稳定性实验及MHC 肽复合体稳定性实验测定。结果　用表位预测法筛选MAGE n抗原 5个HLA A2限制性CTL表位为候选表位。QLVFGIEVV(15 9 16 7)、IMPKTGFLI(195 2 0 3)和FLIIVLVMI(2 0 1 2 0 9) 3个表位具有较高的HLA A2结合力 (IC50 <15 μM)和结合稳定性 (DT5 0 >6h) ,可作为MAGE n抗原HLA A2限制性CTL候选表位进行进一步研究。结论　表位预测结合表位重建方法可提高肿瘤抗原CTL表位研究的效率。MAGE n抗原HLA A2限制性CTL表位经免疫学鉴定后 ,可望用于新型肝癌治疗性多肽疫苗的设计研究 ,为临床肝癌特异性治疗奠定基础。     

HLA与疾病关系的一些新认识

HLA抗原分为二种组织类型,Ⅰ型和Ⅱ型,由第六对染色体短臂上一个区域的基因进行编码,通称主要组织相容性复合物(MHC)。MHC这一名称意指基因产物的主要功能是自身或非自身辨认(Self/non-Self discrimination),而HLA抗原确是在组织移植中首先遇到的问题。现已明瞭,除怀孕时组织相容性的差别在调节母亲和胎儿之间的关系上可能是重要的以外,HLA抗原的主要作用不是抑制个体间的组织交换,而是识别免疫系统细胞之间的信号,促进相互间的作用,这对产生有效的免疫应答是必不可少的,不论是体液免疫、细胞免疫,或是二者兼而有之。Ⅰ型抗原包括三个系:HLA A、HLA     

具有T辅助活性的抗原特异性T细胞杂交瘤

本文报道应用利什曼原虫抗原免疫CBA/T6小鼠,7天后取免疫小鼠的淋巴结经在体外抗原再刺激下培养一周后,分离得致敏的T淋巴母细胞,与T胸腺瘤株BW5147进行细胞杂交,获得几株具有利什曼原虫抗原特异性T辅助活性的T细胞杂交瘤。4B_(11)、4C_7和5D_7株表现两个亲代细胞的表面抗原特征Thy 1,1和Thy1,2。在B细胞抗半抗原斑点形成细胞应答过程中,T细胞杂交瘤的辅助活性仅接受利什曼原虫抗原的刺激信号,不应答其     

人类白细胞抗原与乙型肝炎病毒感染相关性研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染与机体的免疫功能状态密切相关,而人体免疫状态主要取决于人类白细胞抗原(HLA)基因复合体。HLA分子在抗原识别、免疫应答和免疫调控,破坏外来抗原靶细胞方面与抗HBV免疫反应有着密切的关系。HLA基因的多态性可能导致机体免疫功能状态的差异,因而决定HBV感染的易感性和发生、发展与转归。现就HLA基因的多态性与乙型肝炎病毒感染的相关性进行综述。     

人食管癌Eca-109细胞膜肿瘤抗原的筛选

目的:从人食管癌Eca109细胞入手,筛选出食管癌高效细胞膜肿瘤抗原的大致范围。方法:采用敏感的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP)来确定Eca109细胞人主要组织相容性复合体(HLA)基因分型,用HLA血清学分型技术筛选健康志愿者;改良的Neville法结合超滤法纯化膜蛋白并分组:<3000、3000～10000、<10000、10000～30000、30000～100000、>100000、总膜蛋白共7个组,各组抗原负载树突状细胞(DC),以DC激活的T淋巴细胞为效应细胞,Eca109细胞为靶细胞,设效靶比为81、161、321,用MTT法检测效应细胞杀伤率。结果:Eca109细胞HLA的基因分型为A03,A24;B35,B37;DRB101,DRB112;DR52;DRB3;筛选到1例表型为A03杂合子的健康志愿者。根据MTT检测,在效靶比为81、161和321时,膜蛋白相对分子质量小于10000组的肿瘤细胞杀伤率与未使用去垢剂的总膜蛋白组相比差异无统计学意义(P>0.05),而相对分子质量小于3000组的杀伤率最高,与各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Eca109细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞免疫反应的肿瘤抗原,相对分子质量小于3000的膜蛋白成分中可能存在人食管癌的高效肿瘤抗原。     

乙型肝炎病毒X基因蛋白诱导人类白细胞抗原DR表达

乙型肝炎病毒(HBV)所致的肝细胞坏死,被认为是与人类白细胞抗原(HLA)有关的MHC限制的T细胞为主的免疫应答的结果。本研究证实,转染HBV基因组或X基因后的人肝癌细胞系可诱导HLAⅡ(即HLA DR)表达。核转录及RNA杂交分析提示表达X基因的细胞其HLA DR mRNA水平增加,X蛋白增加该基因的转录。氯霉索乙酰基转移酶(CAT)基因分析进一步提示,X蛋白通过作用于HLA DR基因上游的调节序列诱导HLA DR表达。结果表明:X蛋白可能通过调节HLA DR表达参与HBV感染的免疫发病机理。     

抗人膀胱癌双功能抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人膀胱癌双功能抗体(BfAb)并进行体外实验与鉴定.方法:提取膀胱癌抗原,应用膀胱癌抗原通过杂交瘤技术制备抗人膀胱癌单克隆抗体,后者经胃蛋白酶水解后制备抗人膀胱癌单克隆抗体的F(ab′)2片段.然后将该片段通过二次杂交制备杂交瘤,用其免疫新西兰白兔,血清经凝胶纯化后获抗人膀胱癌BfAb,应用ELISA和免疫组化方法进行鉴别.结果:抗人膀胱癌BfAb与抗人膀胱癌单克隆抗体呈阳性反应,与BALB/C小鼠γ球蛋白呈阴性反应;BfAb可以同时结合靶细胞的肿瘤抗原和效应细胞表面的触发分子,引发正常细胞对肿瘤细胞的防御机制.结论:BfAb既能竞争性地与膀胱移行细胞癌抗原结合,又具有激活淋巴细胞的功能,从而特异性的直接杀伤癌细胞并诱发一系列的免疫应答反应.     

含CpG基序的寡核苷酸对乙型肝炎病毒基因疫苗的细胞免疫效应的影响

目的探讨人工合成的CpG ODN作为佐剂对乙肝病毒基因疫苗诱导小鼠产生细胞免疫应答的影响.方法构建编码乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原蛋白S的重组真核表达质粒pCR3.1-S作为HBV基因疫苗,人工合成含CpG基序(motif)的硫代磷酸寡核苷酸(CpG ODN)作为佐剂,观察其对HBV基因疫苗接种Balb/c小鼠诱导产生淋巴细胞增殖和淋巴细胞杀伤等细胞免疫应答的影响.结果与空载体对照组相比较,HBV基因疫苗诱发Balb/c小鼠产生较好的HBV特异的淋巴细胞增殖及杀伤效应(P＜0.05);应用CpGODN组与未应用组相比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞免疫应答(P＜0.05).结论CpG ODN作为佐剂,对HBV基因疫苗诱导Balb/c小鼠产生细胞免疫应答具有促进作用.     

肝癌肿瘤抗原研究及其应用分析

既往肿瘤免疫治疗虽经历临床长期尝试,但因肿瘤抗原不明确,疗效不稳定,而受到怀疑 . 20世纪90年代初,用细胞免疫学方法,鉴定并克隆出肿瘤抗原编码基因[1],无可置疑地证明了肿瘤特异抗原(tumor-specific antigens, TSA)的确实存在.继而以更简便的体液免疫方法,即应用病人的自身血清抗体筛选肿瘤细胞cDNA表达文库(serological an alysis of recombinant expression cDNA library , SEREX)[2],筛选并鉴定TSA 及其编码基因.     

食管癌HLA—A，B，C基因抗原表达下调机理的研究

目的：研究食管癌及食管上皮人类白细胞抗原（HLA－A,B,C）的抗原表达及探索该抗原丢失的分子机理。方法：采用抗HLA－A、,B,C单抗,以免疫组化法及甲基化PCR检测HLA－A,B,C抗原在食管癌及食管上皮的分布及HLA－A,B,C基因甲基化状况。结果：31例食管癌中27例无HLA－A,B,C抗原表达,正常及增生的食管上皮均可见该抗原的阳性表达;45．2％的食管癌HLA－A,B,C基因甲基化,食管上皮该基因无甲基化。结论：食管癌中HLA－A,B,C抗原大部分丢失,基因甲基化可能是导致抗原下调的关键机理。     

共刺激分子B7-1与汉坦病毒核蛋白基因共表达载体的构建及免疫调节作用

目的:探讨共刺激分子B7-1(CD80)对汉坦病毒核蛋白基因疫苗的免疫调节作用.方法:构建双启动子共表达B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的真核表达载体pcDNA 3.1-B7-S,酶切鉴定后直接肌注免疫BALB/c小鼠,同时设对照组pcDNA 3.1 空质粒接种组、pcDNA 3.1-S接种组.ELISA法检测血清特异性抗体,MTT法检测T细胞增殖反应.结果:pcDNA 3.1-B7-S接种组鼠在抗体的产生水平及淋巴细胞增殖指数上均较pcDNA 3.1-S接种组明显增高.结论:接种B7-1基因和汉坦病毒核蛋白基因的共表达质粒优于注射单目的抗原基因表达质粒,为探索增强基因疫苗的免疫作用提供了新的途径.