Nε-羧甲基赖氨酸是慢性血液透析病人晚期糖基化终产物的天然结构

目的鉴定导致长期血液透析（ＨＤ）病人淀粉样变等并发症的可能致病原晚期糖基化终产物（ＡＧＥ）的分子结构。方法采用对氧化、糖基化产物Ｎε羧甲基赖氨酸（ＣＭＬ）特异的抗体对ＨＤ病人血浆和淀粉样沉积物中的ＣＭＬ进行定量观察。结果竞争法ＥＬＩＳＡ测定表明，ＨＤ病人８４６％血浆中可测得ＣＭＬ，其水平中位数为０．５ｍｇ／Ｌ，而年龄匹配的正常人仅９．４％血浆中ＣＭＬ含量＞０１ｍｇ／Ｌ。糖尿病与非糖尿病ＨＤ病人之间ＣＭＬ水平无明显差异。血浆ＣＭＬ与β２微球蛋白水平呈显著正相关（Ｐ＝０．０１８２），但与血糖水平无相关。免疫组化及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，ＣＭＬ是ＨＤ病人组织淀粉样纤维蛋白中ＡＧＥ分子的天然结构。结论ＣＭＬ的存在提示ＨＤ病人的ＡＧＥ潴留可能与氧化应激增加有关。ＣＭＬ从而可作为反映这类病人氧化糖基化损伤的一项生物学指标     

冠心病患者血清晚期糖基化终产物Nε-羧甲基赖氨酸含量的变化

目的 观察冠心病患者血清晚期糖基化终产物(AGE)Nε-羧甲基赖氨酸(CML)的水平.方法 采用抗戚蓝蛋白晚期糖基化终产物(KLH-AGE)抗体竞争ELISA法,对33例冠心病患者、14例单纯高血压患者及38名正常人血清中CML进行定量观察.结果 33例冠心病患者血清中均测得CML,正常对照组中仅3名血清CML含量＞0.1 mg/L,两组比较差异有极显著性意义(P＜0.001).合并高血压的冠心病患者血清CML水平为(0.92±0.61)mg/L,较单纯高血压[(0.23±0.16)mg/L]或单纯冠心病[(0.44±0.47)mg/L]患者明显增高(P＜0.01,P＜0.05).不合并糖尿病的冠心病患者和合并糖尿病的冠心病患者血清CML水平无显著差异.结论 冠心病患者血清CML水平明显增高,提示机体内晚期糖基化终产物的产生在冠状动脉粥样硬化的形成机制中可能起一定的作用.血清CML含量可作为冠心病患者晚期糖基化反应水平的生物学指标.     

肝素对血液透析病人单核细胞表面晚期糖基化终产物受体的影响

目的 研究肝素对慢性肾衰竭长期血液透析（血透）病人单核细胞表面晚期糖基化终产物（AGE）受体的影响。探讨血透病人体内AGE潴留的机制。方法 用核素[^125I]标记AGE修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）。用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,用放射性配体-受体结合法观察肝素和低分子量肝素对血透病人及正常人单核细胞表面AGE受体的影响。结果 采学常规持续肝素输注法进行抗凝的血透病人,在透析后15min,单核细胞与^125I-AGE-HSA的结合被抑制27%,作用持续6h,透析后24h结合率恢复至透析前水平用低分子量肝素抗凝的病人,透析中及透析后单核细胞与^125I-AGE-HSA的结合无明显变化。体外实验显示,肝素抑制AGE与其单核细胞表面AGE受体的结合。这种作用呈剂量依赖性;低分子量肝素对AGE受体不具有封闭作用。结论 肝素可以阻断AGE与其单核细胞表达AGE受体的结合,从而干扰体内AGE的清除,可能是造成血透病人体内AGE潴的原因之一。     

晚期糖基化终产物致动脉粥样硬化的作用机制

<正> 大量研究逐步确定了高血压、糖尿病、高脂血症、肥胖、吸烟等危险因素与心血管疾病的关系,尤其是糖尿病导致的动脉粥样硬化。目前与糖尿病及动脉粥样硬化关系最密切的一个物质就是晚期糖基化终末产物(AGEs)。越来越多的研究表明,AGEs与AGEs受体(RAGE)的相互作用在动脉     

青年人急性心肌梗死血清晚期糖基化终末产物N~ε-羧甲基赖氨酸含量的变化

为观察青年人(<40岁)急性心肌梗死血清晚期糖基化终末产物-Nε-羧甲基赖氨酸含量的变化,探讨其发病机制.采用抗戚蓝蛋白晚期糖基化终末产物抗体竞争酶联免疫吸附测定法测定32例青年人急性心肌梗死、47例中老年人急性心肌梗死和38例健康年轻自愿者血清中Nε-羧甲基赖氨酸含量.结果发现,年轻对照组中有5例血清Nε-羧甲基赖氨酸含量>0.1 mg/L,青年人急性心肌梗死组有14例,两组差异显著(P<0.05),其中冠状动脉单支病变组与多支病变组相比具有显著性差异(P<0.05);但中老年人急性心肌梗死组Nε-羧甲基赖氨酸水平较青年人急性心肌梗死组显著增加 (P<0.001),冠状动脉单支病变与多支病变相比具有显著性差异(P<0.05).中老年人急性心肌梗死中合并糖尿病患者与不合并糖尿病患者血清Nε-羧甲基赖氨酸水平无显著性差异(P>0.05).结果提示,机体内晚期糖基化终末产物的产生增多部分参与了青年人冠状动脉粥样硬化的形成和急性心肌梗死的发病机制.     

晚期糖基化终产物引起老年小鼠创伤后继发心脏损伤加重的机制研究

目的 探讨衰老个体创伤后心肌损伤加重的机制,尤其是晚期糖基化终产物（AGEs）在其中发挥的作用。方法 C57雄性小鼠使用Noble-Collip创伤仪制备小鼠创伤模型。将成年C57小鼠（2月龄18只）和老年C57小鼠（20月龄18只）随机分为:非创伤组、创伤组、创伤干预组。采用彩色多普勒超声诊断仪检测左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS)。取心肌组织予Western blot检测磷酸化的AMP蛋白激酶（pAMPK）、AMP蛋白激酶（AMPK）、p16和p53 蛋白表达水平,使用ELISA 试剂盒检测血清可溶性晚期糖基化终产物受体（sRAGE）和羧甲基赖氨酸（CML）的水平。结果 与成年创伤小鼠对比,老年小鼠创伤后心肌损伤明显加重,表现为左室EF和左室FS显著减低（均P<0.01）。血MG-AGEs显著升高（P<0.05）以及AMPK活性下降（P<0.05）。预先采用sRAGE对AGEs进行干预,可显著改善老年小鼠创伤后心功能,表现为心肌AMPK活性显著提高（P<0.01）,心脏功能EF和FS值显著提高（P<0.01）。结论 衰老个体创伤后心肌损伤加重的机制与MG-AGEs系统有关,该系统可能是提高老年个体临床救治的有效靶点之一。     

晚期糖基化终产物诱导血管内皮细胞骨架形态改变的机制

目的研究晚期糖基化终产物修饰蛋白对内皮细胞细胞骨架肌动蛋白的形态学影响及特异的糖基化终产物受体和氧化应激在此病理过程中的作用。方法用不同浓度的糖基化终产物修饰人血清白蛋白与人脐静脉内皮细胞株ECV304在体外共同培养不同时间，并设立对照组进行比较，采用免疫荧光染色法显示细胞骨架的形态学改变。结果与对照组相比，糖基化终产物修饰人血清白蛋白以时间和剂量依赖的方式影响内皮细胞骨架肌动蛋白聚合丝状和可溶性单体（或球状）形态的改变。随着糖基化终产物修饰人血清白蛋白作用浓度和时间的增加，丝状肌动蛋白所形成的外周致密带边缘出现锯齿样断裂，趋于变细崩解消散，最终形成由非极性单行排列的肌动蛋白丝组成的应力纤维。可溶性单体表现为向细胞浆和胞膜移位，胞浆区出现点状和丝状染色，细胞间距离明显增大。可溶性糖基化终产物受体的抗体和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐氧化酶抑制剂均可阻断糖基化终产物对细胞骨架的影响。结论糖基化终产物修饰蛋白对细胞骨架的影响是通过与内皮细胞上的糖基化终产物受体结合并引起细胞内的氧化应激所介导的，这一作用可能与糖基化终产物所致血管通透性升高有关。     

外源晚期糖基化终产物对大鼠脾脏组织结构的影响

目的探讨外源晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠脾脏组织结构的影响。方法采用大鼠血清蛋白制备外源AGEs,进行质量检测。SD大鼠经尾静脉注射外源AGEs,检测脾脏组织结构的变化,并与青年对照组和老龄对照组比较。结果 AGEs组大鼠脾脏白髓数量减少且形态不规则,淋巴细胞数量少,红、白髓区消失,红髓区域明显扩大。超微结构见核固缩、核破裂,细胞高度变形呈不规则锯齿状,细胞器肿胀,染色质边集,线粒体结构异常,线粒体嵴断裂,并有严重肿胀、空泡化。结论外源AGEs可诱导大鼠脾脏组织结构衰老样变。     

晚期糖基化终产物对大鼠免疫器官抗氧化系统的影响

目的 探讨外源性晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠免疫器官氧化/抗氧化系统的影响.方法 采用雌性SD大鼠,外源性AGEs干预采用尾静脉注射法,采用荧光光谱法检测血清、胸腺、脾脏AGEs含量,并检测胸腺、脾脏MDA含量、SOD和GSH-Px活性,并与青年对照组和老龄对照组比较.结果 AGEs组大鼠血清、胸腺、脾脏AGEs及MDA水平较青年对照组显著升高,而SOD、GSH-Px活性则显著下降,以上结果与老龄大鼠相似.结论 外源AGEs可能通过破坏大鼠免疫器官氧化与抗氧化系统平衡诱导免疫衰老.     

晚期糖基化终产物受体与特发性肺纤维化关系的研究进展

晚期糖基化终产物受体(RAGE)是细胞表面分子中免疫球蛋白超家族成员之一,与多种配体结合,参与调控多条信号通路.目前研究证实:RAGE在特发性肺纤维化的肺组织中表达明显异常,并通过干扰上皮-间充质细胞转换调节细胞外基质的分泌,参与肺纤维化调控.阻断RAGE表达有可能干预肺纤维化进程.深入研究RAGE参与肺纤维化的分子机制,有望为特发性肺纤维化提供新的分子治疗靶点.     

晚期糖基化终产物与冠状动脉病变程度的相关性分析

目的 分析血清糖基化终末产物(AGEs)水平与冠心病及冠状动脉病变程度的相关性,探讨其在冠状动脉粥样硬化病变中的作用.方法 队列选取行冠状动脉造影术的患者共120例,分为糖尿病组与非糖尿病组,两组分别根据冠状动脉造影结果分为无病变组、单支、多支病变三个亚组(单支、多支病变合为冠心病亚组),检测AGEs水平,同时对冠状动脉造影结果进行评价及Gensini积分.结果 非糖尿病组冠心病患者AGEs较无病变组升高[(43.25 ± 16.36) mg/L比(33.35±13.17) mg/L,P=0.006],但不同病变支数组间比较未见统计学差异.糖尿病组中无病变组、单支、多支病变组AGEs水平依次升高[(35.73±21.25)ng/L,(46.45±11.52) ng/L,(68.44±33.52) ng/L,均为P＜0.05],糖尿病患者AGEs与Gensini积分呈正相关(r=0.244,P=0.009).Logistic回归分析显示,AGEs是冠心病的独立危险因素(OR =0.064,95％ CI:1.024 ～1.111,P=0.002).结论 AGEs促进冠状动脉粥样硬化的发生、发展,且与糖尿病患者冠状动脉病变程度呈正相关.     

晚期糖基化终产物引起的RhoA和ROCK在人皮肤微血管内皮细胞的分布变化

目的观察在晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白作用下,小G蛋白RhoA及其激活的激酶ROCK在人微血管内皮细胞中分布的变化。方法培养人皮肤微血管内皮细胞株,分别以糖基化修饰的人血清白蛋白(AGE-HSA)处理不同的浓度和时间,用免疫荧光染色法、激光共聚焦显微镜观察RhoA和磷酸化ROCK在细胞中的分布变化;并用活性型RhoA L63或失活型的RhoA N19转染细胞后再给予AGE-HSA刺激,观察磷酸化ROCK细胞内分布的变化。结果 AGE-HSA刺激可以导致RhoA在胞浆中分布增多,其变化随着AGE-HSA作用时间的延长和剂量的增加更加明显。RhoA的下游激酶被活化的磷酸化ROCK在人微血管内皮细胞中的分布与RhoA类似;用失活型RhoAN19先处理细胞后,AGE-HSA介导的ROCK分布变化被抑制。结论晚期糖基化终产物刺激引起小G蛋白RhoA在细胞内分布变化,并导致其下游激酶ROCK磷酸化和定位变化。     

晚期糖基化终产物对血管内皮细胞通透性影响的研究

目的探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管内皮细胞通透性的影响作用。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)共同培养8h,采用ELISA检测细胞培养上清中血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)及金属基质蛋白酶(MMP9)的表达。然后将HUVECs与AGE-BSA100μg/ml及抗金属基质蛋白酶抗体(MMP9,MMP2)共同作用于单层内皮细胞8h后采用FITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞通透率。结果与正常对照(NC)组相比,AGE-BSA 50、100μg/ml组细胞上清中VE-cadherin及MMP9含量明显升高(P0.05或P0.01)。与NC组相比,AGE-BSA组单层内皮细胞通透性增加(P0.01);与AGE-BSA组相比,AGE-BSA+MMP9抗体组单层细胞通透性得到改善(P0.05)。结论 AGE-BSA通过诱导MMP9激活,促进VE-cadherin自身解聚,从而导致内皮细胞通透性增高。     

Ⅱ型糖尿病患者血浆Nε-羧甲基赖氨酸与颈动脉内中膜厚度的相关性

目的:探讨晚期糖基化终末产物Nε-羧甲基赖氨酸［Nepsilon-(carboxymethyl) lysine,CML］与Ⅱ型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度（intimal-medial thickness，IMT）的相关性。方法: 采用酶联免疫测定72例糖尿病患者及24例正常对照者血浆CML的浓度，同时用彩色多普勒超声测定IMT。结果: 糖尿病组血浆CML浓度高于正常对照组；糖尿病组IMT高于正常对照组，且与血浆CML浓度呈正相关。多因素回归分析显示，在控制年龄、血脂及血压等因素后CML水平与IMT仍有相关性。结论: 糖尿病患者血浆CML浓度显著升高，且与IMT独立相关。     

晚期糖基化终产物受体基因多态性与冠状动脉狭窄程度相关性的研究

目的:探讨晚期糖基化终产物受体(RAGE)基因多态性对中国汉族人群冠状动脉(冠脉)病变狭窄程度的影响。方法:应用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测109例冠脉轻中度狭窄(mild/moderate coronary stenosis,MCS)患者、134例重度狭窄(serious coronary stenosis,SCS)患者和170例健康对照者的RAGE基因3种多态性(-429T/C、1704G/T和G82S)基因型。结果:RAGE基因G82S多态性的S等位基因在SCS组的分布显著高于对照组(27.6%vs 13.2%,OR值为2.086,95%CI为1.494～2.914,P<0.001,Pcorr<0.003),而MCS组与对照组、MCS组与SCS组间差异无统计学意义(P>0.05,Pcorr=0.069);多变量Logistic回归分析提示与单倍体型T-Gly-T相比,单倍体型G-Ser-T发生冠脉SCS的危险显著增加(OR值为1.961,95%CI为1.150～3.343,P=0.013)。其余2种多态性(-429T/C和1704G/T)的基因型及等位基因频率分布在各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:携带有RAGE基因G82S多态性的单倍体型发生冠脉SCS的危险性显著增加,提示该单倍体型与冠脉SCS的发生呈明显相关性。     

体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响

目的观察体外制备的晚期糖基化终产物对内皮祖细胞数量的影响。方法人血清白蛋白与葡萄糖共同孵育90d后,行Bradford检测法蛋白定量和荧光值测定。从正常成人外周血中分离提取单个核细胞,培养7d后,流式细胞仪鉴定细胞表型,分别加入浓度为2mg/L、20mg/L和200mg/L的晚期糖基化终产物并设置对照组,干预不同的时间(0h、24h、48h和72h),200倍光学显微镜下随机取10个视野计数。结果该方法制备的晚期糖基化终产物具有荧光性。细胞培养7d,CD34/CD133/KDR单克隆抗体流式细胞仪鉴定细胞,结果发现表达KDR达78.60%±2.20%、CD34为8.60%±2.00%和CD1332.80%±0.60%,提示大部分细胞为内皮祖细胞。以不同时间(0h、24h、48h和72h)和浓度(2mg/L、20mg/L和200mg/L)晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞生长,对比0h组每个视野下细胞数量(186.0±6.7),干预24h细胞数量减少(146.67±4.98),72h降至最低(73.67±3.76)(P<0.001),呈现明显的时间效应(r=0.9658,P<0.01);终浓度为2mg/L或20mg/L晚期糖基化终产物干预内皮祖细胞72h后,与同时培养72h的对照组无显著差异(P>0.05),但随着浓度加大,浓度效明显(r=0.9988,P<0.01)。结论此方法制备的晚期糖基化终产物符合文献所述的特性,晚期糖基化终产物能抑制内皮祖细胞生长,具有时间效应和浓度效应。     

晚期糖基化终产物导致糖尿病肾脏疾病肾纤维化作用机制的研究进展

DKD是DM主要微血管并发症,也是终末期肾病常见原因。肾纤维化是DKD晚期不可逆病理性改变。AGEs参与组织器官纤维化,在DKD肾纤维化中起重要作用。本文综述AGEs导致DKD肾纤维化作用机制的研究进展。     

晚期糖基化终产物及其受体在白细胞中表达与老年人精神障碍的关系

目的 探讨血液中晚期糖基化终产物(AGEs)及其受体(RAGE)表达水平与老年人精神障碍性疾病的关系. 方法 将观察对象分为健康对照组31例、阿尔茨海默病(AD)组36例、血管性痴呆组20例、脑血管病所致精神障碍组28例.以荧光分光光度法测定各组血清AGEs水平,以逆转录多聚酶链式反应测定RAGE mRNA水平. 结果 血清AGEs水平在AD组、血管性痴呆组和精神障碍组分别为(477.1±36.2)AU/ml、(512.6±33.2)AU/ml和(415.25±32.5)AU/ml,均明显高于健康对照组(357.4±28.2)AU/ml(F=3.77,P<0.05).RAGE mRNA水平(RAGE/b-actin)分别为1.12±0.34、1.27±0.41和1.18±0.42,亦高于健康对照组的0.92±0.37(F=4.07,P<0.01),但各疾病组间差异无统计学意义(F=0.979,P>0.05).白细胞中RAGE mRNA水平与血清AGEs呈正相关关系(r=0.442,P<0.01). 结论 AD、血管性痴呆、脑血管病所致精神障碍患者血中的AGEs及其受体RAGE mRNA水平均较同龄健康老年人明显升高,AGEs与RAGE的相互作用可能直接或间接参与了老年人精神障碍性疾病的病理变化.     

晚期糖基化终产物受体Gly82Ser基因多态性与冠状动脉造影阳性者的相关性研究

目的:探讨晚期糖基化终产物受体(Receptor for Advancedglyca-tion end products,RAGE)在动脉粥样硬化的发生及发展过程中起重要作用.方法:入选冠状动脉造影阳性者221例,阴性者208例,聚合酶链反应(PCR)扩增方法检测基因多态性.结果:三种基因型Ser/Ser、Gly/Se...     

晚期糖基化终产物诱导ECV304细胞株氧化增强的可能机制

目的探讨晚期糖基化终产物诱导细胞株ECV304氧化增强的机制。方法取ECV304细胞培养,与不同浓度的晚期糖基化终产物-人血清白蛋白共孵育,或分别经NADPH氧化酶抑制剂Apocynin或蛋白激酶C抑制剂GF109203或酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein预孵育0.5 h后,再与晚期糖基化终产物—人血清白蛋白共孵育,1h后收集细胞,用细胞色素C法检测O2-.,ThioGlo-1试剂检测还原型谷胱甘肽。结果12.5 mg/L、50 mg/L和200mg/L晚期糖基化终产物—人血清白蛋白可导致ECV304细胞内O2-.从1.37±0.67 nmol/(107.h)增加到3.44±0.40、10.67±0.67和10.93±0.67 nmol/(107.h),使还原型谷胱甘肽从9.54±0.41 nmol/106降低到9.02±0.21、8.41±0.34和8.02±0.18 nmol/106,两者均呈剂量依赖性。Apocynin、GF109203及Genistein均可抑制O2-.的增加及还原型谷胱甘肽的降低。结论晚期糖基化终产物-人血清白蛋白可通过蛋白激酶C和酪氨酸蛋白激酶途径激活NADPH氧化酶,引起ECV304细胞内O2-.产生及还原型谷胱甘肽降低,导致细胞内氧化增强。