噬菌体展示技术应用于肿瘤的研究进展

噬菌体肽库展示技术是一种用于筛选功能性多肽的生物技术.编码多肽的外源DNA片段与噬茵体表面蛋白的编码基因重组后,以融合蛋白的形式在噬菌体表面表达出多肽序列,通过与特定的靶标反应.使展示特定蛋白的噬菌体从佑表达有各种外源性蛋白的噬茵体肽库中筛选出来,通过感染大肠杆菌使选择出的噬茵体扩增,然后进行序列测定,获得相应的结构和功能信息,实现了高通量筛选,成为一种有效的分子筛选方法.     

噬菌体展示技术及其在医药上的主要应用

噬菌体展示技术（phage display）是一种用于筛选和改造功能性多肽的生物技术，编码多肽的DNA片段与噬菌体表面蛋白的编码基因融合后，以融合蛋白的形式表达在噬菌体的表面，不影响噬菌体的生活周期。同时可保持目的蛋白的天然构象，且能被相应的抗体或受体所识别。随着此项技术的不断完善和发展，噬菌体展示技术已在许多领域得到广泛的运用：抗原表位筛选及疫苗研制、多肽药物的筛选、疾病检测等，并显示了良好的发展前景。本文对近几年来噬菌体展示技术的研究及应用进展作以综述。     

噬菌体展示技术的研究进展

噬菌体展示技术是将外源蛋白通过与丝状噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性。最近有实验表明噬菌体表面展示的外源多肽模拟了天然抗原的空间结构,利用筛选肽库的方法确定抗原的线性和构象型表位是可行的。这对于发现与疾病相关的抗原表位具有一定的普遍意义,有可能在未知的情况下进行疫苗及诊断分子的设计。     

噬菌体肽库技术及在肿瘤研究中的应用

噬菌体展示肽库技术是一种用于筛选蛋白、多肽的强有力的生物技术,将外源蛋白与噬菌体外壳蛋白融合而表达于噬菌体颗粒表面,被展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。目前,此技术已被广泛应用于生命科学研究的不同领域,尤其在肿瘤的诊断和治疗方面。     

噬菌体随机肽库技术与寄生虫病免疫诊断

噬菌体随机肽库技术是 2 0世纪 90年代发展起来的一项新型基因表达筛选技术。 1 985年Smith[1]首先利用基因工程手段 ,将外源DNA片段 (基因 )插入到噬菌体外壳蛋白基因组中 ,使外源基因所编码的氨基酸序列与噬菌体外壳蛋白一起 ,以融合蛋白形式呈现于噬菌体表面。从而形成特定长度不同序列的肽段集合 ,这些表达有各种外源肽段的众多噬菌体便组成了噬菌体随机多肽文库。由于被展示的外源蛋白或多肽可保持相对独立的空间结构和生物活性 ,并能被相应的抗体或受体识别[2 ] ,因此 ,利用靶分子 (抗体、酶、细胞表面受体等 )与表达在噬菌体表面的…     

噬菌体展示技术及其在病原微生物研究中的应用进展

噬菌体是能特异性地感染细菌的一类病毒,其基因数目少,结构相对简单,容易在分子水平上操控其基因。噬菌体展示技术是将外源肽或蛋白以融合蛋白形式表达并呈现在噬菌体衣壳表面的分子生物学技术。与传统的研究方法相比,噬菌体展示技术具有通量高、成本低、操作简单、耗时短等优点。本综述主要聚焦噬菌体展示技术在病原微生物抗原筛选、抗体制备和疫苗研制等方面的应用进展。     

用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白

目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白.方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索.结果:经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与乙型肝炎病毒PreS1相互作用的蛋白可能为:细胞色素C氧化酶1(Cytochrome c Oxidase Subunit Ⅰ,COX1).结论:T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨PreSI的致病机制提供重要依据.     

噬菌体展示技术用于寄生虫病的研究

噬菌体展示 (phagedisplay)技术是指将蛋白分子或肽段的基因克隆到单链噬菌体的基因组中 ,并使噬菌体表面表达该异源性分子。其主要特点是将特定分子的基因型和表型统一在同一病毒颗粒中 ,即在噬菌体表面表达特定蛋白或肽 ,在噬菌体核心DNA中含有该蛋白或肽的结构基因。这种基因型和表型的统一使蛋白的基因工程改造成为可能。另外 ,该技术将扩增和选择有机地结合在一起 ,使表面表达特定蛋白或肽的噬菌体易于得到有效富集 ,并利于做进一步研究。噬菌体展示技术再生至今 ,已被广泛用于抗体文库及肽文库的构建和筛选、蛋白分子的识别和改造、…     

天花粉蛋白结合肽的筛选及潜在靶点蛋白的同源分析

目的 通过噬菌体展示技术,筛选天花粉蛋白(TCS)的结合多肽,并通过蛋白质同源分析,研究TCS在体内可能直接作用的靶点蛋白。方法 用构建的十五肽库和购买的十二肽库分别对TCS进行4轮固相亲和筛选,并通过噬菌体ELISA检验阳性克隆与靶蛋白的亲和力,对阳性克隆进行测序,并将多肽序列与已登记蛋白序列进行同源性分析。结果 每轮筛选的回收率,及多克隆噬菌体ELISA结果显示筛选有效。通过单克隆噬菌体ELISA结果挑取阳性克隆,测序分析得到若干噬菌体展示多肽序列。经蛋白质同源性分析,TCS特异性结合多肽与蛋白激酶C（PKC）的磷酸化位点具有同源序列。结论 噬菌体展示技术是筛选中药成分靶点蛋白的有效手段,PKC可能为TCS潜在的靶点蛋白。      

运用噬菌体展示随机肽库筛选与内毒素结合的高亲和性多肽

目的 从噬菌体展示随机肽库中筛选与内毒素结合的多肽序列,并进行鉴定.方法 以内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)为靶分子对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮亲和筛选,获得与LPS结合的噬菌体克隆,应用结合实验和克隆斑抑制实验进一步确证.挑选结合力强的克隆进行DNA测序,推导出呈现的多肽序列,应用生物信息学软件进行多肽序列分析和同源性分析.结果 经4轮亲和筛选从噬菌体展示随机十二肽库中筛选获得了86个克隆,挑选12个结合力强的克隆进行DNA序列测序及生物信息学分析,结合本项目组的噬菌体展示随机七肽库筛选结果推导出呈现的多肽序列为HWQWPHWSPPP(命名为P11肽).检索相关数据库发现此肽序列未被申请专利,体内约908种蛋白与其结构相匹配,其中包含有与LPS相互作用的位点.结论 通过对噬菌体展示随机肽库的淘选,获得与LPS结合的高亲和性多肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础.     

噬菌体表面呈现技术及在疫苗研制中的应用

噬菌体表呈现展示技术 (PhageDisplayTechniques ,PDT)是将编码外源肽或抗体可变区的DNA片段插入噬菌体表面特定蛋白基因中 ,以融合形式与噬菌体的表面蛋白共同表达于噬菌体表面的技术 ,它将基因型与表型、分子结合活性与噬菌体的可扩增性结合在一起 ,是一种高效的筛选系统 ,因而在抗原表位的模拟、蛋白质工程的改造、单克隆抗体的制备、药物筛选及疫苗研制等方面 ,具有广泛的用途     

噬菌体随机肽库在确定单抗识别表位中的应用

以抗人感冒病毒凝血素蛋白单克隆抗体12CA5为筛选配基,从丝状噬菌体（M13）表面展示的随机6肽库中筛选抗体特异性识别的多肽,噬菌体与单抗的结合可以用酶联免疫吸附法鉴定,而展示的氨基酸序列可以通过测定相应克隆的插入外源核苷酸来确定,筛选所犁多肽与单抗的表达,特别是C-蝗四个氨基酸残基PDYA有高度的同源性,说明该四肽在单抗与抗原的结合中起到十分重要的作用。     

噬菌体抗体库展示技术及其研究进展

<正>1噬菌体展示技术的基本原理噬菌体展示技术(phage display technology)是一项通过基因重组的方法,将目的蛋白或部分片段基因以融合的方式重组到噬菌体的外壳蛋白的基因上,通过噬菌体的包装将目的蛋白展示在噬菌体的表面。这项技术在蛋白质组学、医药工程、临床等方面具有重要的应用价值。该技术是以改造的噬菌体     

噬菌体展示肽库筛选VPAC1高亲和力结合多肽

目的 通过噬菌体展示肽库技术筛选VPAC1高亲和力结合十二肽配体,并进行特异性和亲和力鉴定.方法 建立稳定表达VPAC1的真核细胞系;利用噬菌体肽库展示技术进行全细胞差减筛选,随机挑取40个噬菌体克隆进行测序,初步鉴定确定阳性克隆,明确外源十二肽序列,固相合成该十二肽;利用体外竞争结合ELISA及流式细胞分析,鉴定目标多肽与VPAC1受体结合的特异性及亲和力.结果 成功构建稳定表达VPAC1细胞系;经过4轮差减筛选,回收噬菌体逐轮得到富集,随机挑取40个克隆测序,共得到15条序列不同的多肽,经ELISA鉴定有7个克隆与细胞有特异性高结合能力;阳性噬菌体克隆与细胞结合通过多肽VP1介导;VP1能特异高亲和地与VPACl受体结合.结论 通过噬菌体展示肽库技术成功筛选得到与VPAC1高亲和力特异结合十二肽.     

肿瘤坏死因子-α高亲和噬菌体融合肽的筛选及分析

目的 应用噬菌体展示随机肽库技术,进行肿瘤坏死因子-α(TNF-α)高亲和肽的筛选研究.方法 以重组人TNF-α为靶标分子,对噬菌体展示环七肽库进行3轮亲合筛选,ELISA结合实验鉴定阳性克隆,对获得的阳性克隆进行DNA序列测定,推导短肽的氨基酸残基序列.结果 3轮筛选后,随机挑取的15个噬菌体克隆中7个可与TNF-α结合.测序发现这7个阳性克隆融合多肽中的序列完全一致,均为STPTRYS.结论 筛选到一个可与TNF-α高亲力结合的噬菌体多肽,该肽序列能否阻断TNF-α的活性有待进一步阐明.     

用T7噬菌体展示技术筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白

目的 用T7噬菌体筛选系统筛选HCV核心蛋白的相互作用蛋白.方法 应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到HCV的核心蛋白作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索.结果 经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与HCV核心蛋白相互作用的蛋白为:Smad interacting-protein 1(SIP1).结论 T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨核心蛋白的致病、致癌机制提供重要依据.     

噬菌体展示技术筛选MRC-5细胞上人巨细胞病毒的结合位点

目的 以人巨细胞病毒(HCMV)感染的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)为靶细胞,寻找参与HCMV识别并结合细胞的多肽区域,研究HCMV膜蛋白中哪些功能域参与细胞识别以及膜融合过程.方法 以HCMV感染阳性的MRC-5细胞为液相筛选物,从随机七肽噬菌体展示库中筛选出能够与感染阳性MRC-5细胞特异性结合而与正常细胞不结合的噬菌体配体.通过ELISA分析亲和力、DNA测序、序列对比及理化性质分析多肽.结果 初步发现EVNMSDS、NVSVFET和GQQPTTV 3个肽段可能参与HCMV与宿主细胞的识别过程.同时通过同源比对分析还发现,这3个七肽与HCMV gB和gH蛋白存在共有序列.结论 应用PHD7噬菌体随机肽库和生物信息学方法 筛选出3个可能参与HCMV识别宿主细胞并进行膜融合的功能域,为进一步研究HCMV感染宿主细胞的具体机制提供新的思路以及为抗HCMV感染提供新的策略.     

应用噬菌体展示技术筛选中药的药物靶点蛋白研究进展

噬菌体展示技术是一种有效的药物靶点筛选工具,可用其筛选中药的药物靶点蛋白。其原理是将外源性蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白的表达而表达。药物靶点是药物在体内的作用结合位点,是药物筛选和新药研究的基础,良好的药物靶点也是发现性质优良药物的基础。利用现代生物技术为基础的高通量药物筛选技术,进行中药活性组分筛选是实现中药现代化的有效途径,并促进我国天然药物的开发和应用,为中药的研究提供一套完整的筛选和验证方案。      

乳腺癌T7噬菌体展示cDNA文库的构建

目的构建乳腺癌组织T7噬菌体展示c DNA文库,为下一步筛选差异蛋白打下基础。方法利用乳腺癌新鲜标本,提取总RNA,分离m RNA并进行纯化,然后合成c DNA,连接体外包装获得T7噬菌体展示c DNA文库。结果总RNA经检测,A260/A280=1.87,纯化的m RNA产量为4.0μg,A260/A280=1.91,合成的c DNA大小在200~6 000 bp之间,原始文库的容量为2×107pfu,文库重组率为90%,插入片段长度在300~2 000 bp之间。结论噬菌体展示技术是进行蛋白质功能研究的高效方法,构建高质量的乳腺癌噬菌体展示c DNA文库,可用于肿瘤标志物的筛选、肿瘤疫苗的研制、多肽药物的开发、靶向治疗的研究等众多领域。