肾综合征出血热疫苗后备毒株的分离和生物学特性研究

目的从肾综合征出血热(HFRS)疫区阳性鼠肺中分离汉坦病毒(HV),并对分离到的病毒进行型别鉴定和生物学特性研究,为HFRS疫苗后备毒种库的建立打下基础。方法疫区阳性鼠肺研磨液接种长爪沙鼠分离病毒,并将分离到的HV经乳沙鼠脑内连续传代,采用直接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验,检查毒株的型别,研究传代后毒株的繁殖特性、病毒滴度和抗原滴度。结果从疫区32份阳性鼠肺中分离到9株HV,经单克隆直接荧光血清检查6株为汉滩病毒株,3株为汉城病毒株,经乳沙鼠脑内连续传代,其中4株毒株的病毒滴度和抗原滴度较高,汉滩和汉城毒株的病毒和抗原滴度最高分别达106.50、106.00和1∶5120、1∶5120。结论4株毒株的病毒滴度和抗原滴度均较高,可作为HFRS疫苗后备毒种的筛选毒株。     

肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的研究肾综合征出血热(HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10(Ⅰ型)、Z37(Ⅱ型)适应到Vero细胞上进行连续传代，并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果Z10、Z37，株感染Vero细胞后第1代即可达到较高病毒滴度，并且在Vero细胞中持续传代适应，病毒滴度分别维持在6．25～6．75和6．50～7．00logTCID50／ml之间，较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRS Vero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高，反向间接血凝效价从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的1：2上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64；疫苗病毒滴度(logTCID50／ml)从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的4．25上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的6．50，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的6．25上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的7．50。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论HFRS Vero传代细胞疫苗的生产，疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。     

水痘纯化疫苗候选毒株在Vero细胞上的适应传代及其免疫原性研究

目的:证实VZV1毒株粗制纯化灭活疫苗免疫效果.方法:将VZV1毒株在Veto细胞上进行适应传代,收集感染细胞后.经洗涤、破碎细胞、过柱纯化、粗制疫苗免疫家兔、采集血清测定中和抗体.结果:家兔免疫二针后血清中和抗体达1:5～1:10.结论:以VZV1为毒株粗制疫苗免疫家兔能获得保护性抗体.     

汉坦病毒感染Vero细胞病毒滴度和抗原滴度的动态观察

目的　观察汉坦病毒 (HV)在Vero细胞上的适应能力和毒株在该细胞中的增殖规律。方法　将HV感染Vero细胞 ,每隔 3d收取细胞培养液 ,直到细胞衰老 ,并观察细胞的病变情况。采用间接免疫荧光法 (IFAT)和反向被动血凝试验 (RPHA) ,观察细胞培养液的病毒滴度和抗原滴度的动态变化。结果　HV不致Vero细胞产生病变 ,病毒感染细胞第 8～ 11天时细胞培养液的病毒滴度和抗原滴度最高 ,以后逐渐降低 ,但直到细胞感染病毒 3 2d时其培养液的病毒滴度和抗原滴度仍稳定在 5 .0 0LgTCID50 /ml和 1∶2 0以上。结论　两株病毒已适应于Vero细胞 ,且具有病毒滴度高、毒力强和抗原性良好的特性 ,是Vero细胞肾综合征出血热灭活疫苗良好的后备筛选毒株。     

不同狂犬病毒毒株在Vero细胞上的传代研究

近年来,我国狂犬病流行较为严重,病死数居所有传染病之首。预防和治疗狂犬病的惟一方法是注射狂犬病疫苗,因此,生产优质高效的狂犬病疫苗显得尤为重要。在狂犬病疫苗生产过程中,所选用的毒株直接影响到疫苗的病毒滴度和免疫原性,为了给生产厂家提供一些有效的参考数据,我们对不同的狂犬病毒毒株在Vero细胞上进行了传代比较。1　材料和方法　狂犬病毒液体毒株CTN 1V10 株、CTN BHK株,狂犬病毒脑毒株CTN 1V10 M3 株、aG株,均由中国药品生物制品检定所提供,病毒滴度均在7.0～8.0LogLD50 /ml之间。Vero细胞来源于美国ATCC ,由中国药品…     

水痘纯化疫苗候选毒株在Veto细胞上的适应传代及其免疫原性研究

目的：证实VZV1毒株粗制纯化灭活疫苗免疫效果。方法：将VZV1毒株在Vero细胞上进行适应传代，收集感染细胞后，经洗涤、破碎细胞、过柱纯化、粗制疫苗免疫家兔、采集血清测定中和抗体。结果：家兔免疫二针后血清中和抗体达1：5～1：10。结论：以VZV1为毒株粗制疫苗免疫家兔能获得保护性抗体。     

建立肾综合征出血热双价纯化疫苗人用疫苗生产传代细胞系Vero细胞库的研究

目的　建立HFRS双价纯化疫苗生产用三级细胞库 ,确保Vero细胞作为病毒培养基质的安全性。方法　以 2 0 0 2年版《中国生物制品规程》对生物制品生产用传代细胞系的要求 ,对Vero细胞进行核型分析、致肿瘤性等一系列基础性试验。结果　该生物所保存的Vero细胞未污染细菌、支原体 ,致肿瘤试验符合2 0 0 2年版《中国生物制品规程》要求 ,染色体核型分析结果为保持有原细胞学核学特征。结论　该所保存的Vero细胞 1 2 8代可以作为HFRS双化纯化疫苗生产的原始细胞库细胞     

肾综合征出血热研究近况

肾综合征出血热是由汉坦病毒引起的一组以发热、出血、肾损害为特征的发热性疾病,各国学者对汉坦病毒的生态学和流行病学进行了广泛研究,它们的普遍性和引起严重疾病的潜在危害性使得该病毒成为备受关注的一个公共卫生问题,本文对肾综合征出血热的疫情,检测方法和疫苗研究动态作了综述。     

大规模接种双价肾综合征出血热纯化疫苗效果观察

目的评价双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)纯化疫苗对人群的保护效果。方法按照实验期间完成3针疫苗接种和从未进行疫苗接种分为接种组和对照组。治疗组按0、14 d 2针基础免疫,6个月后1针加强免疫的程序对适龄人群接种疫苗,采用实验流行病学研究方法,构建疫苗接种观察队列,对接种组和对照组连续观察3年并进行比较分析。结果疫苗接种后的3年内,接种组年均发病率为0,对照组年均发病率为0.02%,3年内疫苗保护率达100.00%。结论大规模接种双价HFRS纯化疫苗的中远期流行病学效果良好,可推广应用。     

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选

目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代。比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Veto细胞灭活疫苗。研究疫苗的免疫原性。结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7．00～7．75LgCCID50／ml和1：3201：1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6．50～7．50LgCID50／ml和1：160～1：768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株Z34与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1：10。结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。     

3株肾综合征出血热病毒的分离和鉴定

目的了解浙江省肾综合征出血热（HFRS）流行特点及汉坦病毒（HV）型别，为防治提供科学依据。方法鼠肺HV抗原检测采用直接免疫荧光法（DFA），病毒分离采用阳性鼠肺研磨液接种幼龄长爪沙鼠，再经vero-E6细胞传代，用单克隆抗体DFA定毒株及分型。结果从捕自浙江省龙泉地区的8份阳性鼠肺中分离到3株HV，经DFA鉴定均为汉滩型（Ⅰ型）病毒，3株病毒在Vero-E6细胞中的感染滴度为10^4.75～10^5.25CCID50／ml。结论从鼠类肺组织中分离到3株汉滩型HV，毒株均能在Vero-E6细胞中较好增殖，有可能成为HFRS疫苗后备毒株。     

湖南省2006年肾综合征出血热病原学监测研究

目的 了解湖南省啮齿动物中汉坦病毒带病毒率、基因型别和分布.方法 采用直接免疫荧光(DFA)法检测鼠肺汉坦病毒抗原,从汉坦病毒阳性鼠肺标本中提取病毒RNA,应用汉坦病毒型特异性引物进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增、核苷酸序列测定以及基因分型和同源性分析.结果 总鼠密度为3.15%,鼠带病毒率为1.31%,在室内捕获的7只褐家鼠、黑线姬鼠、小家鼠、黄胸鼠鼠肺标本中均发现携带SEO型病毒,在室外捕获的1只黑线姬鼠鼠肺标本则携带HTN型病毒.成功对6份阳性PCR产物进行了序列分析,浏阳市1、2、4、6号标本同源性较高为100%,邵东市的7、8号标本同源性也较高为100%,但两地区间的同源性差异为89.3%,L99株与浏阳分离株的同源性为94.4%,与邵东分离株的同源性为88.3%.结论 湖南省汉坦病毒存在HTN和SEO型,以SEO型为主.     

肾综合征出血热双价灭活疫苗免疫原性和安全性观察

目的　在肾综合征出血热双价灭活疫苗随机对照试验现场,观察接种人群的免疫效果和副反应发生情况。方法　分别检测１６７ 名和６９ 名基础三针接种者免疫后２ 周血清荧光抗体和中和抗体（Ⅰ和Ⅱ型） ,重点观察６５７ 名接种者免疫后７２ 小时内副反应发生情况。结果　荧光抗体阳转率和几何平均滴度分别为９９．０４％ （１６６／１６７）和２４．５１±２．０６;中和抗体总阳转率为１００ ％ ,其中Ⅰ型为９１．３０％ （６３／６９）、Ⅱ型为８８．４１％（６１／６９） ;中和抗体对Ⅰ型和Ⅱ型几何平均滴度分别为１８．２７±２．２１ 和１２．４７±２．１６ ;接种３ 针疫苗局部反应发生率为１．４８％ ,全身体温反应发生率为０ ．３６ ％ ;未见人群接种后发生严重副反应和异常反应。结论　肾综合征出血热双价灭活疫苗免疫效果良好,接种副反应低。     

肾综合征出血热发病机制研究进展

肾综合征出血热发病机制至今仍未完全阐明,病毒、病毒受体、细胞因子、自由基、特异性CTL反应、HLA差异性均可能与发病有关.此文对近年来的研究进展进行了综述.     

北京东灵山地区肾综合征出血热疫源地调查

目的了解北京市东灵山小兽种类构成,是否存在肾综合征出血热疫源地及其分布特征。方法从山麓到山顶选择三类生境和海拔为监测点,采用夹夜法进行鼠密度测定,应用间接免疫荧光法检测捕获小兽的汉坦病毒抗原携带、抗体阳性状况。结果本次调查共捕获小兽13种,287只;不同生境的小兽密度为9．13％～14．69％,平均11．43％;平均带病毒率为3．98％,平均感染率为6．37％;其中在社鼠、黑线姬鼠、大林姬鼠中查到汉坦病毒抗原或／和抗体,其他无汉坦病毒感染。结论北京东灵山地区存在肾综合征出血热疫源地。     

广西肾综合征出血热宿主动物及其病毒感染状况

目的调查广西壮族自治区（广西区）肾综合征出血热（HFRS）宿主动物及其自然感染汉坦病毒状况。方法用夹夜法在室内及室外捕鼠,捕获鼠经分类鉴定后无菌取血清及肺组织,用ELISA法检测血清汉坦病毒抗体及肺组织抗原,对汉坦病毒抗原阳性的肺组织标本用RT-PCR检测汉坦病毒核酸及分型。结果 2006-2008年共捕获宿主动物17种1984只,以小型啮齿动物为主,宿主动物感染汉坦病毒总抗体阳性率为14.51%;褐家鼠肺组织汉坦病毒抗原阳性标本6份,经核酸检测和测序证实为汉城型病毒。结论广西区广泛存在以褐家鼠为主要宿主的HFRS家鼠型疫源地,并存在汉城型汉坦病毒的流行。     

中国大陆2004-2015年肾综合征出血热的时空分布

目的 观察中国大陆肾综合征出血热(HFRS)疫情的时空分布,为HFRS的防治工作提供数据参考.方法 2004-2015年中国大陆的HFRS疫情资料来自中国卫生统计年鉴及中国疾病预防控制中心(CDC)报表,采用Excel 2013和地理信息系统(GIS)软件统计和分析数据.结果 2004-2015年,中国大陆HFRS发病数呈季节性波动;年均发病数、发病率及病死率分别为13 237人、1.00/10万(0.66/10万～1.93/10万)和1.02％(0.46％～1.31％);自2007年以来,年发病率均低于1.00/10万人;2012年以来,病死率均低于1.00％.传统疫情高发地区如黑龙江、吉林和辽宁的HFRS发病率下降明显.结论 近年来我国的HFRS疫情总体呈下降趋势,这可能与政府各部门的环境治理、灭鼠防鼠、疫苗接种、健康教育等措施和城市化进程相关.