Podocin在大鼠微小病变肾病模型中的表达和分布

目的:观察podocin在大鼠氨基核苷嘌呤霉素(PAN)肾病模型中的表达和分布,探讨其在蛋白尿发生中的可能作用.方法:建立大鼠PAN肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,免疫荧光染色图像分析以及半定量RT-PCR的方法,分别检测不同时间点(1、3、10、20天)大鼠肾组织中podocin的表达.结果:①PAN注射后第l、3、10、20天大鼠肾小球podocin的表达强度分别为:45.03±5.10、33.35±6.41、13.58±3.73、42.34±6.65,显著低于正常对照组(54.95±6.25,P＜0.01),其中第10天的表达强度最低.podocin的表达与尿蛋白排泄量呈负相关(r=-0.786,P＜0.01);②podocin在正常大鼠肾小球沿毛细血管袢呈均匀连续的线样分布;模型第1天podocin在肾小球局部呈颗粒状分布;第3天呈弥散性的颗粒状分布;第10天呈粗大的颗粒状分布;第20天podocin的分布逐渐恢复为线样;③PAN注射后第1、3、10、20天大鼠肾小球podocin mRNA的表达分别为正常对照组的1.2、1.5和1.4倍,第20天大鼠肾小球podocin mRNA水平恢复正常.结论:PAN肾病模型大鼠肾小球podocin蛋白表达分布异常及其量的减少与大鼠蛋白尿的发生密切相关.     

肾病综合征患儿肾小球中nephrin、podocin、α-actinin及WT1的表达

目的 :检测肾病综合征 (NS)患儿肾小球足细胞中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达和分布特征 ,以探讨这些分子在蛋白尿发生中的可能作用。　 方法 :用免疫荧光染色 ,激光扫描共聚焦显微镜采集图像及图像分析的方法 ,检测 2 5例NS患儿 [其中肾脏病理为微小病变 (MCD) 2例 ,系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN) 17例 ,局灶节段性肾小球硬化 (FSGS) 5例 ,新月体性肾小球肾炎 (CREGN) 1例 ]、9例单纯性血尿患儿及 9例对照肾组织中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达。　 结果 :(1)NS患儿肾小球中podocin的表达量 (82 9± 2 1 5 )与单纯性血尿组 (10 3 6± 2 0 2 )及对照组 (110 8± 15 4 )比较差异显著 (P =0 0 12 ,P =0 0 0 1) ;WT1的表达量 (6 1 3± 9 2 3)与对照组 (6 9 7± 9 2 7)比较差异也显著 (P =0 0 37) ;nephrin和α actinin表达量 (12 9 3± 2 2 6 ,10 4 3± 19 0 )与单纯性血尿组(132 1± 7 4 0 ,94 9± 13 0 )及对照组 (133 9± 8 5 ,10 3 6± 15 0 )比较差异均不显著 (P >0 0 5 )。 (2 )对照组肾组织中nephrin和podocin的染色均见于肾小球毛细血管壁 ,呈均匀、线状分布 ;α actinin主要沿肾小球毛细血管壁呈点状分布 ;WT1的染色主要集中于肾小球细胞核。 (3)病理表现为MsPG     

糖尿病肾病患者肾小球中nephrin表达及其临床意义

目的检测糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中nephrin的表达,以探讨nephrin在DN患者蛋白尿发生机理中可能的作用.方法免疫荧光染色图像分析及RT-PCR法检测DN组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组肾小球组织nephrin的表达水平.结果DN组肾小球组织nephrin的表达量显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.DN组患者肾小球组织中nephrin的mRNA表达量也显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.结论DN患者肾小球组织nephrin的表达减少,可能影响肾小球滤过屏障的通透性,导致蛋白尿的产生.     

醛固酮受体拮抗剂联合贝那普利对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin、WT1表达的影响

目的观察nephrin和WT1在阿霉素肾病大鼠肾组织中表达的变化,探讨醛固酮受体拮抗剂及贝那普利对其的影响及二者与尿蛋白的关系。方法 SD大鼠60只,随机分为正常对照(A组)、阿霉素肾病(B组)、贝那普利干预(C组)及醛固酮受体拮抗剂联合贝那普利干预(D组)各15只,实验开始后6 w观察大鼠24 h尿蛋白、血肌酐及肾脏病理改变,采用RT-PCR方法对肾组织nephrin和WT1表达进行分析。结果与A组比较,B组24 h尿蛋白明显升高,肾组织nephrin、WT1表达明显降低(P0.01);与B组比较,C、D组24 h尿蛋白定量显著降低(P0.05),D组治疗效果更显著(P0.01);C、D组与同时期B组比较病理变化明显减轻。C、D组肾脏nephrin、WT1表达较B组明显增高(P0.05,P0.01)。结论阿霉素肾病大鼠尿蛋白的变化与肾组织nephrin和WT1的表达改变有关,醛固酮受体拮抗剂及贝那普利可能通过上调nephrin和WT1的表达,降低尿蛋白、改善肾小球足细胞功能。     

阿霉素肾病大鼠nephrin及podocalyxin蛋白表达及泼尼松干预作用的探讨

目的 探讨阿霉素肾病（ADN）大鼠肾组织nephrin及podocalyxin蛋白表达及泼尼松的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分成ADN组、泼尼松组、对照组,于0、4、8周测定大鼠24h尿蛋白（24hUP）、血清胆固醇（Cho）及白蛋白（Alb）。实验8周取肾组织观察病理形态改变,计算肾小球细胞外基质面积与肾小球面积之比（ECM/GA）,评估肾脏病理积分。用免疫组织化学法观察肾小球nephrin、podocalyxin表达。结果 实验4周时,ADN组较之对照组24hUP、Cho升高（P〈0.05）,Alb下降（P〈0.01）。实验8周时,泼尼松组较ADN组24hUP、Cho下降,ECM/GA及肾脏病理积分降低,nephrin、podoralyxin表达增多,Alb升高（P〈0.01）。ADN组nephrin、podlocalyxin表达与24hUP、Cho、ECM/GA及肾小球病理积分均呈负相关,与Alb呈正相关;nephrin与podocalyxin呈正相关。结论 nephrin、podocalyxin与蛋白尿的发生及发展密切相关。泼尼松能减轻ADN大鼠的蛋白尿及肾脏病理损害,其机制可能通过上调nephrin、podoralyxin表达来发挥肾保护作用。     

肥胖相关性肾病肾组织中nephrin desminWTI的表达

目的 研究肥胖相关性肾病患者肾小球足细胞病变,分析不同肾组织病理类型患者肾小球足细胞中neph-rin、desmin、WT1的表达和分布特征.方法 收集2001-2008年河北医科大学第二医院肾内科收治的16例经肾穿刺活检明确诊断的肥胖相关性肾病患者资料,根据其肾脏病理分为肥胖相关性肾小球肥大症(O-GM)组11例,肥胖相关性局灶节段性肾小球硬化症(O-FSGS)组5例.对照组5例,为外科切除的且已诊断为肥胖的肾脏肿瘤标本的正常皮质组织.应用免疫组织化学方法检测足细胞特异标志物nephrin、desmin、WT1,同时结合临床及肾组织病理有关指标的进行多因素分析.结果 nephrin、desmin、WT1在正常肾组织沿肾小球基底膜呈连续、线形分布.O-GM组nephrin、desmin、WT1的表达量降低,与对照组比较,差异无统计学意义,O-FSGS组nephrin、desmin、WT1的表达下降,呈点状、短线条状,较正常组织少,差异有统计学意义(P<0.05).O-FSGS组足细胞计数少于O-GM组,差异有统计学意义(P<0.01),且足细胞融合、微绒毛化改变和肾小球硬化数明显增多(P<0.05).结论 肥胖相关性肾病患者早期即出现肾小球足细胞中nephrin、desmin、WT1的表达和分布减少,随着病变的加重,这种变化愈发明显.     

Nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小足细胞系的表达与分布

目的：探讨nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系(MPC5)的表达与分布，为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。方法：培养小鼠MPC5，以γ-干扰素诱导在33℃传代增生，继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态；免疫荧光染色观察nephrin，podocin，α-actinin及WTl在足细胞的分布；RT-PCR检测足细胞nephrin，podocin及α-actinin4的mRNA；免疫蛋白印迹检测nephrin，podocin，α-actinin及WTl蛋白。结果：成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WTl分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面，α-actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin，podocin和α-actinin-4表达，其蛋白大小分别为180KDa，45KDa和100KDa。结论：首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin，podocin及α-actinin，为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

乙型肝炎病毒相关性膜性肾病中nephrin的表达及意义

目的 观察nephrin在HBV相关性膜性肾病(HBV-MN)中的表达特点,研究HBV-MN中足细胞的损伤程度及意义.方法 采用免疫组化方法检测35例HBV-MN患者肾组织nephrin的表达情况,并进行半定量评分,分析其与临床病理指标的相关性.结果 35例HBV-MN患者中Ⅰ期6例、Ⅱ期20例和Ⅲ期9例.正常肾组织nephrin于肾小球上皮侧呈线性高强度表达,HBV-MN患者肾组织nephrin表达显著减少,在HBV-MN的不同分期中nephrin表达无显著性差异(P＞0.05),但肾病综合征组nephrin的表达明显低于非肾病综合征组患者(P＜0.01),且不同程度尿蛋白患者其表达也有显著性差异(P＜0.05).Spearman相关分析显示肾组织nephrin与24 h尿蛋白定量之间存在负相关(r=-0.378,P＜0.05).Ⅱ期患者呈肾病综合征者nephrin的表达也明显低于非肾病综合征患者(P＜0.01).结论 HBV-MN早期足细胞即受损伤,肾组织nephrin表达明显下调,尤其在肾病综合征患者更明显,HBV-MN中nephrin表达下调与蛋白尿的产生密切相关.

Abstract：

ObjectiveTo observe the expression of nephrin in hepatitis B virus-associated membranous nephropathy (HBV-MN),and investigate the impairment and significance of podocyte in HBV-MN.MethodsThe protein expression of nephrin in renal biopsy specimens in 35 patients,who were diagnosed as HBV-MN by renal biopsy,was determined by immunohistochemistry and tested by semiquantitative method.The relationship between the expression of nephrin and clinicopathological data was analyzed.Results Among the 35 cases with HBV-MN,6 were in MN phase Ⅰ,20 in MN phase Ⅱ and 9 in MN phase Ⅲ.A strong intensity expression of nephrin in normal glomerulus was found along capillary loop of glomerulus,while its expression in HBV-MN patients decreased obviously.There was no significantly difference in the expression of nephrin among the different stages of HBV-MN ( P ＞ 0.05 ).The expression of nephrin in different clinical types was significantly different ( P ＜ 0.05 ).The expression of nephrin in patients with nephrotic syndrome was significantly lower than that in patients without nephrotic syndrome (P ＜0.01 ).The expression of nephrin in different grades of 24-hour urinary protein excretion quantity was significantly different( P ＜ 0.05 ).There was negative correlation between the expression of nephrin and 24-hour urinary protein excretion quantity(r = -0.378,P ＜ 0.05).In the patients with HBV-MN phase Ⅱ,the expression of nephrin in patients with nephrotic syndrome was also significantly lower than that in patients without nephrotic syndrome( P ＜ 0.01 ).Conclusions The damage of podocytes emerge in the early stage of HBV-MN and the expression of nephrin in HBV-MN patients,especially in patients with nephrotic syndrome,are significantly down regulated.The descended expression of nephrin in HBV-MN patients may promote the production of proteinuria.     

Nephrin,podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系的表达与分布

目的 :探讨nephrin ,podocin及α actinin在小鼠肾小球足细胞系 (MPC5)的表达与分布 ,为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。　 方法 :培养小鼠MPC5,以γ 干扰素诱导在 33℃传代增生 ,继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态 ;免疫荧光染色观察nephrin ,podocin ,α actinin及WT1在足细胞的分布 ;RT PCR检测足细胞nephrin ,podocin及α actinin 4的mRNA ;免疫蛋白印迹检测nephrin ,podocin ,α actinin及WT1蛋白。　 结果 :成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WT1分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面 ,α actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin ,podocin和α actinin 4表达 ,其蛋白大小分别为 180KDa,4 5KDa和 10 0KDa。　 结论 :首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin ,podocin及α actinin ,为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

骨化三醇对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin表达的影响

目的研究骨化三醇对阿霉素(ADR)肾病大鼠肾组织损伤及足细胞裂隙隔膜分子(nephrin)表达的影响。方法6周龄雄性SD大鼠分为:正常对照组(Control组),ADR肾病组,骨化三醇治疗组(ADR+VD组)。大鼠模型以单次尾静脉注射阿霉素(7.5 mg/kg),治疗组大鼠灌胃法服用0.25μg/(kg·d)骨化三醇。所有大鼠在处死前称重、留尿检测24 h尿蛋白(UP),留血检测血清白蛋白(Alb)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cre);苏木素-伊红(HE)染色、马松三色染色(Masson)、透射电镜(TEM)观察肾病理学结构;免疫荧光观察nephrin的定位;免疫组织化学染色半定量检测nephrin的表达;Western印迹检测nephrin蛋白表达。结果与ADR肾病组比,ADR+VD组24 h UP、BUN、Cre、肾脏指数显著降低(P<0.05),Alb水平显著升高(P<0.05);组织化学染色显示骨化三醇减轻肾组织系膜基质增生及纤维化;TEM显示骨化三醇修复足细胞损伤;免疫组化与Western印迹检测结果显示高度一致性,骨化三醇升高ADR引起的nephrin表达降低(P<0.05)。结论骨化三醇能够减轻ADR引起的肾损伤和大量蛋白尿,这与改善肾足细胞标记分子nephrin低表达密切相关。