糖尿病肾病患者肾小球中nephrin表达及其临床意义

目的检测糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中nephrin的表达,以探讨nephrin在DN患者蛋白尿发生机理中可能的作用.方法免疫荧光染色图像分析及RT-PCR法检测DN组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组肾小球组织nephrin的表达水平.结果DN组肾小球组织nephrin的表达量显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.DN组患者肾小球组织中nephrin的mRNA表达量也显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.结论DN患者肾小球组织nephrin的表达减少,可能影响肾小球滤过屏障的通透性,导致蛋白尿的产生.     

肾病综合征患儿肾小球中nephrin、podocin、α-actinin及WT1的表达

目的 :检测肾病综合征 (NS)患儿肾小球足细胞中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达和分布特征 ,以探讨这些分子在蛋白尿发生中的可能作用。　 方法 :用免疫荧光染色 ,激光扫描共聚焦显微镜采集图像及图像分析的方法 ,检测 2 5例NS患儿 [其中肾脏病理为微小病变 (MCD) 2例 ,系膜增生性肾小球肾炎 (MsPGN) 17例 ,局灶节段性肾小球硬化 (FSGS) 5例 ,新月体性肾小球肾炎 (CREGN) 1例 ]、9例单纯性血尿患儿及 9例对照肾组织中nephrin、podocin、α actinin及WT1的表达。　 结果 :(1)NS患儿肾小球中podocin的表达量 (82 9± 2 1 5 )与单纯性血尿组 (10 3 6± 2 0 2 )及对照组 (110 8± 15 4 )比较差异显著 (P =0 0 12 ,P =0 0 0 1) ;WT1的表达量 (6 1 3± 9 2 3)与对照组 (6 9 7± 9 2 7)比较差异也显著 (P =0 0 37) ;nephrin和α actinin表达量 (12 9 3± 2 2 6 ,10 4 3± 19 0 )与单纯性血尿组(132 1± 7 4 0 ,94 9± 13 0 )及对照组 (133 9± 8 5 ,10 3 6± 15 0 )比较差异均不显著 (P >0 0 5 )。 (2 )对照组肾组织中nephrin和podocin的染色均见于肾小球毛细血管壁 ,呈均匀、线状分布 ;α actinin主要沿肾小球毛细血管壁呈点状分布 ;WT1的染色主要集中于肾小球细胞核。 (3)病理表现为MsPG     

乙型肝炎病毒相关性膜性肾病中nephrin的表达及意义

目的 观察nephrin在HBV相关性膜性肾病(HBV-MN)中的表达特点,研究HBV-MN中足细胞的损伤程度及意义.方法 采用免疫组化方法检测35例HBV-MN患者肾组织nephrin的表达情况,并进行半定量评分,分析其与临床病理指标的相关性.结果 35例HBV-MN患者中Ⅰ期6例、Ⅱ期20例和Ⅲ期9例.正常肾组织nephrin于肾小球上皮侧呈线性高强度表达,HBV-MN患者肾组织nephrin表达显著减少,在HBV-MN的不同分期中nephrin表达无显著性差异(P＞0.05),但肾病综合征组nephrin的表达明显低于非肾病综合征组患者(P＜0.01),且不同程度尿蛋白患者其表达也有显著性差异(P＜0.05).Spearman相关分析显示肾组织nephrin与24 h尿蛋白定量之间存在负相关(r=-0.378,P＜0.05).Ⅱ期患者呈肾病综合征者nephrin的表达也明显低于非肾病综合征患者(P＜0.01).结论 HBV-MN早期足细胞即受损伤,肾组织nephrin表达明显下调,尤其在肾病综合征患者更明显,HBV-MN中nephrin表达下调与蛋白尿的产生密切相关.

Abstract：

ObjectiveTo observe the expression of nephrin in hepatitis B virus-associated membranous nephropathy (HBV-MN),and investigate the impairment and significance of podocyte in HBV-MN.MethodsThe protein expression of nephrin in renal biopsy specimens in 35 patients,who were diagnosed as HBV-MN by renal biopsy,was determined by immunohistochemistry and tested by semiquantitative method.The relationship between the expression of nephrin and clinicopathological data was analyzed.Results Among the 35 cases with HBV-MN,6 were in MN phase Ⅰ,20 in MN phase Ⅱ and 9 in MN phase Ⅲ.A strong intensity expression of nephrin in normal glomerulus was found along capillary loop of glomerulus,while its expression in HBV-MN patients decreased obviously.There was no significantly difference in the expression of nephrin among the different stages of HBV-MN ( P ＞ 0.05 ).The expression of nephrin in different clinical types was significantly different ( P ＜ 0.05 ).The expression of nephrin in patients with nephrotic syndrome was significantly lower than that in patients without nephrotic syndrome (P ＜0.01 ).The expression of nephrin in different grades of 24-hour urinary protein excretion quantity was significantly different( P ＜ 0.05 ).There was negative correlation between the expression of nephrin and 24-hour urinary protein excretion quantity(r = -0.378,P ＜ 0.05).In the patients with HBV-MN phase Ⅱ,the expression of nephrin in patients with nephrotic syndrome was also significantly lower than that in patients without nephrotic syndrome( P ＜ 0.01 ).Conclusions The damage of podocytes emerge in the early stage of HBV-MN and the expression of nephrin in HBV-MN patients,especially in patients with nephrotic syndrome,are significantly down regulated.The descended expression of nephrin in HBV-MN patients may promote the production of proteinuria.     

膜性肾病患者肾组织肥大细胞的分布及病理意义

目的了解肥大细胞在各种病理类型膜性肾病患者肾组织中的分布及其病理意义。方法选取各个病理类型膜性。肾病病例共55例,正常供。肾8例;检测肾活检组织中肥大细胞,分析其与相关临床病理指标的相关性。结果肥大细胞主要分布于损伤的小管和小球周围的间质中。膜性肾病患者肾组织肥大细胞较对照组显著增加。I期患者肥大细胞较少,其他组间无显著差异。患者肾组织肥大细胞数量与反映肾组织损伤的指标,特别是小管和小管间质损伤指标具有显著相关性。结论上述结果提示肥大细胞参与了膜性肾病的小管间质慢性病变过程,作为膜性肾病的一种新致病因素,一个潜在的膜性肾病肾组织慢性病变防治新靶标,肥大细胞值得关注。     

膜性肾病--重复肾活检预测其转归

1　病例摘要1 .1　病史　患者男性 ,60岁 ,因“浮肿、蛋白尿两年余 ,贫血、肾功能不全一年”于 2 0 0 2 1 0 2 2入院。缘于1 999年自觉夜尿增多 ,每晚约 5～ 6次不等。当时查血糖、尿糖均正常 ,未进一步检查。2 0 0 0 0 4 0 6无诱因地发现双下肢水肿 ,血压达 1 60 /1 1 0mmHg,当地查尿蛋白 3 ～ 4 ,诊断“肾病综合征” ,予强的松 (60mg/d× 3 0天 ,以后每 2周减 5mg)、CTX等治疗 ,水肿、蛋白尿未减轻。同年 6月住入我院行肾活检 ,组织学改变示“膜性病变伴轻～中度小管 间质病变及血管病变”。当时肾功能正常 ,无贫血 ,尿本 周蛋白检…     

肥胖相关性肾病肾组织中nephrin desminWTI的表达

目的 研究肥胖相关性肾病患者肾小球足细胞病变,分析不同肾组织病理类型患者肾小球足细胞中neph-rin、desmin、WT1的表达和分布特征.方法 收集2001-2008年河北医科大学第二医院肾内科收治的16例经肾穿刺活检明确诊断的肥胖相关性肾病患者资料,根据其肾脏病理分为肥胖相关性肾小球肥大症(O-GM)组11例,肥胖相关性局灶节段性肾小球硬化症(O-FSGS)组5例.对照组5例,为外科切除的且已诊断为肥胖的肾脏肿瘤标本的正常皮质组织.应用免疫组织化学方法检测足细胞特异标志物nephrin、desmin、WT1,同时结合临床及肾组织病理有关指标的进行多因素分析.结果 nephrin、desmin、WT1在正常肾组织沿肾小球基底膜呈连续、线形分布.O-GM组nephrin、desmin、WT1的表达量降低,与对照组比较,差异无统计学意义,O-FSGS组nephrin、desmin、WT1的表达下降,呈点状、短线条状,较正常组织少,差异有统计学意义(P<0.05).O-FSGS组足细胞计数少于O-GM组,差异有统计学意义(P<0.01),且足细胞融合、微绒毛化改变和肾小球硬化数明显增多(P<0.05).结论 肥胖相关性肾病患者早期即出现肾小球足细胞中nephrin、desmin、WT1的表达和分布减少,随着病变的加重,这种变化愈发明显.     

早期膜性肾病的诊断和治疗

既往人们在研究激素或(和)细胞毒药物对特发性膜性肾病(MN)的疗效时,均常将MN作为一个整体来研究。虽然结论不完全一致,但在大系列的前瞻、随机、双盲对照试验中,其疗效多不满意。美国(1979年)观察了72例病人,认为大剂量、短疗程(8周)强地松虽似可减少进行性肾衰的发生,但缓解蛋白尿无效。加拿大(1989年)及英国(1990年)重复了上述试验,分别观察了158例病人及103例病人,前者并将强地松疗程延长至半年,结果连延缓肾衰的疗效也未见到。用环磷酰胺治疗的疗效也与上相同,并未     

糖尿病肾病合并膜性肾病一例

患者,53岁,女性。因“下肢浮肿伴尿检异常3个月”入院。患者3个月前无明显诱因下出现双下肢对称性浮肿,无肉眼血尿,亦无尿频、尿急、尿痛,查尿常规：     

糖尿病肾病合并膜性肾病模型的构建

目的 研究糖尿病肾病合并膜性肾病模型的构建方法.方法将 大鼠随机分为四组:正常组(NC组,n=10),糖尿病肾病组(DN组,n=10),膜性肾病组(MN组,n=15),糖尿病肾病合并膜性肾病组(DN+ MN组,n=20).Wistar大鼠一次性腹腔注射STZ( 60 mg/kg)造模,48 h后血糖均高于16.7 mmol/L;待糖尿病肾病模型制造成功后按膜性肾病模型构建方法处理.留取2、4、6、8w大鼠24 h尿,测尿蛋白定量.8w后心脏采血、留取肾脏组织.结果 ①NC组大鼠一般状态较好;DN组尿量增多,体重减轻;MN组出现摄食减少、尿量减少、大便稀等现象;DN+ MN组除上述表现外,部分出现腹水及肉眼血尿.②24 h尿蛋白定量结果:模型各组尿蛋白量较正常组增多,DN+ MN组增多尤为明显.③病理改变:NC组大鼠肾脏病理无异常,DN组表现为肾小球体积增大等糖尿病肾病的病理表现,MN组肾小球毛细血管壁增厚、僵硬,DN+ MN组的肾小球体积增大,肾组织出现系膜增殖、基质增多、弥漫性基底膜增厚等病理改变.结论 成功诱导出糖尿病肾病合并膜性肾病的动物模型,为进一步研究奠定了基础.     

Nephrin,podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系的表达与分布

目的 :探讨nephrin ,podocin及α actinin在小鼠肾小球足细胞系 (MPC5)的表达与分布 ,为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。　 方法 :培养小鼠MPC5,以γ 干扰素诱导在 33℃传代增生 ,继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态 ;免疫荧光染色观察nephrin ,podocin ,α actinin及WT1在足细胞的分布 ;RT PCR检测足细胞nephrin ,podocin及α actinin 4的mRNA ;免疫蛋白印迹检测nephrin ,podocin ,α actinin及WT1蛋白。　 结果 :成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WT1分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面 ,α actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin ,podocin和α actinin 4表达 ,其蛋白大小分别为 180KDa,4 5KDa和 10 0KDa。　 结论 :首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin ,podocin及α actinin ,为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

人肾小球足细胞表达Nephrin的体外研究

目的：观察人足细胞在体外表达Nephrin的分子量大小、细胞内分布。方法：体外培养人肾小球足细胞，采用间接免疫荧光法、免疫蛋白印迹研究原代培养人足细胞表达Nephrin的分布、蛋白质的分子量，逆转录PCR(RT-PCR)法检测Nephrin的mRNA表达等，RT-PCR产物进行序列分析加以确定。结果：体外原代培养的人足细胞可以表达Nephrin，间接免疫荧光显示其沿足细胞的细胞膜、细胞骨架和细胞核分布，并且在细胞内有一聚集中心。免疫蛋白印迹示人足细胞表达2种分子量的Nephrin，其中135kD的分子量与预期分子量一致，180kD的分子量与肾小球蛋白提取物一致，RT-PCR从基因水平确定了该蛋白的表达。结论：人足细胞在体外培养的条件下表达不同分子量的Nephrin，并且在细胞内分布具有一定的规律，为进一步研究其在自身细胞和肾脏病中的作用提供了可靠的实验方法。     

阿霉素肾病大鼠nephrin及podocalyxin蛋白表达及泼尼松干预作用的探讨

目的 探讨阿霉素肾病（ADN）大鼠肾组织nephrin及podocalyxin蛋白表达及泼尼松的干预作用。方法 24只雄性Wistar大鼠随机分成ADN组、泼尼松组、对照组,于0、4、8周测定大鼠24h尿蛋白（24hUP）、血清胆固醇（Cho）及白蛋白（Alb）。实验8周取肾组织观察病理形态改变,计算肾小球细胞外基质面积与肾小球面积之比（ECM/GA）,评估肾脏病理积分。用免疫组织化学法观察肾小球nephrin、podocalyxin表达。结果 实验4周时,ADN组较之对照组24hUP、Cho升高（P〈0.05）,Alb下降（P〈0.01）。实验8周时,泼尼松组较ADN组24hUP、Cho下降,ECM/GA及肾脏病理积分降低,nephrin、podoralyxin表达增多,Alb升高（P〈0.01）。ADN组nephrin、podlocalyxin表达与24hUP、Cho、ECM/GA及肾小球病理积分均呈负相关,与Alb呈正相关;nephrin与podocalyxin呈正相关。结论 nephrin、podocalyxin与蛋白尿的发生及发展密切相关。泼尼松能减轻ADN大鼠的蛋白尿及肾脏病理损害,其机制可能通过上调nephrin、podoralyxin表达来发挥肾保护作用。     

雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的 观察雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocinmRNA和蛋白表达的影响.方法 将体重200 ～ 260 g的50只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组和4个模型组（n=10）,后者分别应用链脲佐菌素造模成功后分为糖尿病肾病组（DN组）、厄贝沙坦组、雷公藤多甙组和雷公藤多甙联合厄贝沙坦组.给予相应干预8周后,检测血尿指标,HE染色观察肾组织病理变化,逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测各组大鼠肾皮质中nephrin和podocinmRNA和蛋白表达.结果 （1）与DN组大鼠比较,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾皮质nephrin mRNA （0.507±0.024比0.276 ±0.015,P ＜0.01）和podocin mRNA （0.533±0.024比0.463±0.022,P＜0.01）表达上调.（2）与DN组大鼠比较,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾皮质nephrin蛋白（0.738±0.029比0.199±0.012,P＜0.01）和podocin蛋白（0.811 ±0.032比0.227±0.014,P＜0.01）表达上调.（3） HE染色和Masson染色显示,糖尿病组大鼠肾脏肾小球体积增大,系膜基质弥漫增多,系膜细胞明显增多,基底膜弥漫增厚,间质可见灶性淋巴细胞及单核细胞浸润,厄贝沙坦组和雷公藤多甙组病变较糖尿病组减轻,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾脏组织病变较厄贝沙坦组和雷公藤多甙组进一步减轻.结论 雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病大鼠的肾脏足细胞具有保护作用,这种保护作用可能是通过上调足细胞nephrin和podocin mRNA和蛋白表达有关.     

Spectrum of Steroid-Resistant and Congenital Nephrotic Syndrome in Children: The PodoNet Registry Cohort

Background and objectives

Steroid-resistant nephrotic syndrome is a rare kidney disease involving either immune-mediated or genetic alterations of podocyte structure and function. The rare nature, heterogeneity, and slow evolution of the disorder are major obstacles to systematic genotype-phenotype, intervention, and outcome studies, hampering the development of evidence-based diagnostic and therapeutic concepts. To overcome these limitations, the PodoNet Consortium has created an international registry for congenital nephrotic syndrome and childhood-onset steroid-resistant nephrotic syndrome.

Design, setting, participants, & measurements

Since August of 2009, clinical, biochemical, genetic, and histopathologic information was collected both retrospectively and prospectively from 1655 patients with childhood-onset steroid-resistant nephrotic syndrome, congenital nephrotic syndrome, or persistent subnephrotic proteinuria of likely genetic origin at 67 centers in 21 countries through an online portal.

Results

Steroid-resistant nephrotic syndrome manifested in the first 5 years of life in 64% of the patients. Congenital nephrotic syndrome accounted for 6% of all patients. Extrarenal abnormalities were reported in 17% of patients. The most common histopathologic diagnoses were FSGS (56%), minimal change nephropathy (21%), and mesangioproliferative GN (12%). Mutation screening was performed in 1174 patients, and a genetic disease cause was identified in 23.6% of the screened patients. Among 14 genes with reported mutations, abnormalities in NPHS2 (n=138), WT1 (n=48), and NPHS1 (n=41) were most commonly identified. The proportion of patients with a genetic disease cause decreased with increasing manifestation age: from 66% in congenital nephrotic syndrome to 15%–16% in schoolchildren and adolescents. Among various intensified immunosuppressive therapy protocols, calcineurin inhibitors and rituximab yielded consistently high response rates, with 40%–45% of patients achieving complete remission. Confirmation of a genetic diagnosis but not the histopathologic disease type was strongly predictive of intensified immunosuppressive therapy responsiveness. Post-transplant disease recurrence was noted in 25.8% of patients without compared with 4.5% (n=4) of patients with a genetic diagnosis.

Conclusions

The PodoNet cohort may serve as a source of reference for future clinical and genetic research in this rare but significant kidney disease.     

Ⅴ型狼疮性肾炎的远期预后

目的:回顾性分析Ⅴ型狼疮性肾炎(LN)的远期预后及影响预后的因素。方法:临床符合系统性红斑狼疮,经肾活检诊断为Ⅴ型LN(ISN/RPS2003肾脏病理分型标准)的患者100例[女性90例,男性10例,平均年龄(32±9)岁]。通过Kaplan-Meier法估算人肾存活率,并建立COX风险模型,分析影响预后的危险因素。结果:100例平均随访(77.6±56)个月(中位时间59.5个月)。共2例死亡,5年、10年人存活率均为98%,5年、10年肾存活率分别为96.1%、92.7%。肾小管间质严重损害(RR66.514)、治疗初大量蛋白尿(RR19.159)和持续不缓解(RR9.834)是影响肾存活率的独立危险因素。进入终末期肾衰6例中3例治疗初即有严重肾小管间质病变,2例随访中发生转型(1例转为Ⅴ型伴Ⅳ型,1例转为Ⅴ型伴Ⅲ型),1例CSA中毒。并发症:包括感染(13%),血栓(3%),股骨头坏死(3%),糖尿病(4%)和肿瘤(1%)。结论:Ⅴ型LN10年人肾存活率达98%和93%,严重肾小管间质病变、大量蛋白尿和持续不缓解是Ⅴ型LN进展为ESRF的危险因素。     

45例原发性膜性肾病治疗的探讨

目的通过45例原发性膜性肾病(IMN)患者的治疗随访,探讨IMN的治疗.方法Ⅰ组24h尿蛋白≤5g的肾病综合征(NS)患者12例,采用血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)+抗血小板粘附剂和(或)抗凝治疗.Ⅱ组24h尿蛋白＞5g的患者33例,采用糖皮质激素(激素)+免疫抑制剂治疗,其中ⅡA组(26/33)糖皮质激素+环磷酰胺冲击治疗.ⅡB组(7/33)Ponticelli方案激素与瘤可宁交替治疗,共6个月.结果Ⅰ组平均随访32.6(7～60)个月,67%患者缓解(完全+部分缓解),33%未缓解,无一例出现肾功能不全.ⅡA组平均随访28.1(6～74)个月,58%出现缓解(部分或完全),42%未缓解,其中慢性肾功能不全2例(一例死于心衰与肺部感染).ⅡB组随访36(24～48)个月,67%缓解(完全+部分缓解),33%未缓解.结论24h尿蛋白≤5g的NS患者或有NS倾向者,可不用激素+免疫抑制剂治疗,仅用ACEI+抗血小板粘附剂或(和)抗凝治疗,有67%的缓解.24h尿蛋白＞5g的NS患者,需用激素+免疫抑制剂治疗,兼以抗血小板粘附或(和)抗凝治疗,免疫抑制剂CTX和瘤可宁均有效,二者无明显差异.