单方绿豆粉干预哮喘小鼠肺组织中白三烯C4和5-脂氧合酶及其激活蛋白的变化效应

目的探讨压热解毒单方绿豆粉对哮喘肺小鼠组织中白三烯及5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白含量的影响. 方法实验于2002-10/2003-04在广东医学院呼吸疾病研究所完成.32只清洁级雄性昆明种纯白小鼠,随机分为4组生理盐水对照组、卵蛋白哮喘模型组、地塞米松治疗组、绿豆粉治疗组,每组8只.参照文献[1]建立小鼠卵蛋白哮喘模型.除对照组小鼠予生理盐水处理外,其余各组小鼠于第1,7,14天给予鸡卵白蛋白抗原液0.5 mL(含氢氧化铝凝胶2 mg和鸡卵白蛋白15μg)腹腔注射,第21天始用1%鸡卵白蛋白雾化吸入来激发小鼠哮喘发作,2次/d,每次1 h,连续3 d.每次雾化前30 min,生理盐水对照组和卵蛋白哮喘模型组给予生理盐水10 mL/kg,地塞米松治疗组给予地塞米松2 mg/kg,绿豆粉治疗组给予绿豆粉液10 mL/kg,灌胃.肺组织匀浆中白三烯B4、白三烯C4含量检测应用ELISA方法;各组肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达应用免疫组化方法检测. 结果实验所用32只小鼠均进入结果分析.①小鼠肺组织中白三烯B4比较生理盐水对照组明显低于卵蛋白哮喘模型组[(0.151±0.055,0.293±0.058)mg/L,(P＜0.01)].②小鼠肺组织中白三烯C4比较绿豆粉治疗组明显低于哮喘模型组[(2.091±0.273,2.482±0.278)mg/L,(P＜0.01)].③小鼠肺组织中5-脂氧合酶的活性比较免疫组化法检测结果显示绿豆粉组明显低于哮喘模型组[(12.3±4.9,25.0±6.6),(P＜0.01)].④小鼠肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达绿豆粉治疗组、地塞米松治疗组与生理盐水对照组比较无显著性变化(P＞0.05). 结论白三烯B4、白三烯C4在肺组织中的高水平,5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白表达的增加在鸡卵白蛋白致敏小鼠的哮喘发病中起重要作用.单方绿豆可显著降低哮喘小鼠肺组织中白三烯C4含量,抑制哮喘小鼠肺组织中5-脂氧合酶、5-脂氧合酶激活蛋白的表达,从而表现出抗哮喘的活性.     

n-3多不饱和脂肪酸对哮喘小鼠白三烯B4及5脂氧合酶基因表达的影响

目的：探讨n-3多不饱和脂肪酸（n-3PUFA）对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中白三烯B4（LTB4）水平、肺组织5脂氧合酶（5-LO）mRNA表达的影响及其可能的机制.方法：建立小鼠卵蛋白哮喘模型．分别灌胃不同剂量的n-3PUFA干预．用ELISA的方法检测BALF中LTB4含量；用RT—PCR的方法检测肺组织中5-LO mRNA表达的变化．结果：哮喘小鼠BALF中LTB4水平、肺组织5-LO基因表达水平较正常对照组显著升高（P〈0．01）；灌胃n-3PUFA干预的3个剂量组与模型组相比，LTB4含量、5-LO基因表达水平下降（P〈0．05）.结论：LTB4在气道里的高浓度及5LO基因表达的上调在哮喘小鼠发病中起重要作用，n—3PUFA可以降低哮喘小鼠BALF中LTB4的浓度，抑制肺组织5-LO mRNA表达，从而起到对抗哮喘气道炎症的作用.     

5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与中国汉族人群脑卒中遗传相关性研究

目的 探讨5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)基因的SG13S114和SG13S32两个SNP位点多态性与中国汉族人群脑卒中的相关性.方法本研究共纳入507例脑卒中患者(动脉粥样硬化性脑梗死158例,腔隙性脑梗死243例,脑出血106例)和513例对照组人群.采用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)技术检测基因的多态性.运用SPSS16.0软件进行基因型、等位基因和单倍型等的关联分析.多元素Logistic回归方法调整传统危险因素后分析基因多态性与脑卒中发病风险的独立相关性.结果 SG13S114和SC13S32位点等位基因频率和基因型频率在病例组与对照组间比较差异无统计学意义.但经传统危险因素高血压分层后,SG13S114 TT基因型能够显著降低无高血压人群患脑卒中的发病风险(OR=0.54,95% CI0.30～0.98).两位点单倍型构成在脑卒中组及其各亚型组与对照组间比较差异无统计学意义.结论本地区中国汉族人群中ALOX5AP基因SG13S114和SG13S32两个位点多态性与脑卒中无显著关联,而SG13S114 TT基因型能显著降低无高血压人群脑卒中的发病风险,提示该基因可能与本地区无高血压人群脑卒中发病相关.     

5-脂氧合酶及其基因表达调控的研究进展

5-脂氧合酶是白三烯类代谢产物生成的关键酶,其酶活性及基因表达与炎性疾病、老年性痴呆和肿瘤等疾病的发生发展有密切的关系。本文主要对5-脂氧合酶的活性及其表达调控的研究现状进行综述。     

5-脂氧合酶在三阴性乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨5-脂氧合酶(5-LOX)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达及其临床意义。方法免疫组化法检测178例TNBC组织中5-LOX的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性,并通过随访,分析不同表达组的生存情况。结果 TNBC组织中5-LOX阳性表达率70.22%(125/178),其阳性表达与组织学分级、淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。随访显示5-LOX阴性表达组5年无复发生存率和总生存率明显高于阳性表达组(43%∶13%,96%∶91%)。结论 5-LOX的阳性表达与TNBC的不良预后相关,可能成为TNBC治疗的新靶点。     

5—脂氧合酶及其基因表达调控的研究进展

5-脂氧合酶是白三烯类代谢产物生成的关键酶，其酶活性及基因表达与炎性疾病、老年性痴呆和肿瘤等疾病的发生发展有密切的关系。本文主要对5-脂氧合酶的活性及其表达调控的研究现状进行综述。     

缺血性卒中5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性和相关药物的治疗进展

缺血性脑卒中是一种多因素多基因的疾病,为我国第一位死亡原因。尽管国内外缺血性脑卒中的研究甚多,但对基因相关的复杂多因子遗传性脑卒中却关注甚少。全基因组连锁不平衡研究确认5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase-acti-     

花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白基因多态性与心肌梗死关系的研究

目的探讨在中国北方汉族人群中花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白(ALOX5AP)基因单核苷酸多态性T(8733)C与心肌梗死的关系。方法采用PCR-重测序法对随机选取的无亲缘关系的48例中国北方汉族个体进行ALOX5AP基因单核苷酸多态性筛查,对经冠状动脉造影证实的125例心肌梗死患者和158例正常对照者,采用聚合酶链反应?限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测ALOX5AP基因T(8733)C多态性基因型和等位基因分布情况。结果通过筛查发现7个多态。心肌梗死患者ALOX5AP基因T(8733)C3种基因型(TT型、TC型和CC型)及C等位基因分布频率分别为35.2%、48.8%、16.0%和40.4%,正常对照者分别为32.9%、50.0%、17.1%和42.1%,其差异均无统计学意义(P>0.05);按性别分层进行亚组分析,心肌梗死患者与正常对照者ALOX5AP T(8733)C多态的基因型和等位基因频率差异亦均无统计学意义。结论ALOX5AP基因T(8733)C多态性与中国北方汉族人群心肌梗死的发生可能无关。     

5-脂氧合酶在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中的表达

目的　探讨 5 脂氧合酶 (5 LO)在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中的表达。方法　分离大鼠腹腔巨噬细胞培养一定时间 ,用高效液相色谱、Westernblot和RT PCR分别观察 5 LO催化的代谢产物的生物合成、5 LO和 5 脂氧合酶激活蛋白 (FLAP)表达的变化 ,并用毛细管电泳定量分析RT PCR产物。结果　体外培养 2 4h对 5 LO以及FLAP的表达没有明显影响 ,5 LO酶活性没有明显的变化 ;培养到第 72小时 ,5 LOmRNA和蛋白表达没有明显的影响 ,但FLAP几乎检测不到 ,mRNA的量明显降低 ,检测不到白三烯B4(LTB4)和 5 羟二十碳四烯酸 (5 HETE)。进一步培养到第 12 0小时 ,5 LO的mRNA和蛋白表达明显下降 ,FLAP的mRNA和蛋白检测不到。毛细管电泳定量分析结果显示 ,培养 1、2 4和 72h ,5 LO的相对表达量没有明显变化 ,培养到 12 0h则下降了约 80 %。结论　 5 LO可以在体外培养的大鼠腹腔巨噬细胞中稳定表达 72h。     

哮喘儿童诱导痰液白三烯B4和白细胞介素-5水平的变化及临床意义

目的:探讨白三烯B4(LTB4)、白细胞介素-5(IL-5)在儿童哮喘发病中的作用及意义。方法:采用酶联免疫吸附试验检测75例急性发作期和缓解期哮喘患儿,以及20例健康儿童诱导痰液中LTB4、IL-5水平,并同时测定第 1秒用力呼气容积(FEV1)及最大呼气流速(PEF)。结果:哮喘患儿急性发作期诱导痰液LTB4平均水平(30.92±8.32)pg/mL,较正常对照组(1.67±0.84)pg/mL为高(P<0.01),其中重度发作组为(58.16±10.45)pg/mL,较轻、中度发作组 (7.82±1.86)、(26.78±5.07)pg/mL为高,3组差异有非常显著性(P<0.01);同时,急性发作期诱导痰液IL-5平均水平(77.94±12.21)pg/mL,较正常对照组(7.48±1.89)pg/mL为高(P<0.01),其中重度发作组为(135.98 ±22.04)pg/mL,较轻、中度发作组(31.83±5.35)、(66.01±10.23)pg/mL为高,3组差异有非常显著性(P< 0.01)。病情越重,LTB4、IL-5水平越高,且FEV1值、PEF值下降愈明显;缓解期哮喘患儿较急性发作期各组LTB...     

血管内皮生长因子在哮喘小鼠的表达及细辛脑的干预作用

目的 (1)观察哮喘小鼠肺组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化;(2)研究细辛脑干预对VEGF表达的影响。方法 24只BALB/c雌性小鼠随机分为对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、细辛脑干预组(C组),每组各8只。建立小鼠哮喘模型,酶联免疫吸附测定法(ELISA)对各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)和血清中VEGF进行定量分析;Western blot检测VEGF表达;免疫组化法检测小鼠肺组织中VEGF的表达。结果 ELISA法测定结果显示:与对照相比,哮喘组的VEGF在血清和BALF中表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);细辛脑干预组的VEGF含量比哮喘组降低(P<0.05)。Western blot检测哮喘组VEGF表达量相比于对照组升高(P<0.05),细辛脑组小鼠VEGF表达量相对于哮喘组降低(P<0.05)。免疫组化结果显示哮喘组大部分肺泡上皮细胞、支气管平滑肌和血管周围VEGF均呈阳性表达,细辛脑组有一定程度的减轻,对照组几乎没有。结论 VEGF在哮喘小鼠的肺组织内高度表达,可能参与气道重塑过程,细辛脑在一定程度上可改善气道重塑的病理生理过程。     

儿童哮喘与白三烯受体1及C4合成酶基因多态性的关系

目的探讨白三烯受体1(CYSLTR1)和白三烯C4合成酶(LTC4S)基因多态性与上海儿童哮喘及其严重程度之间的关系。方法 2006年9月至2009年8月本院儿科住院及门诊儿童哮喘患者72例,男39例,女33例,平均年龄(5.1 1.6)岁。根据哮喘发作程度分为间歇和轻度发作组44例、中重度发作组28例。健康对照组成人95例,男50例,女45例。应用连接酶检测反应(LDR)技术,对CYSLTR1的927T/C位点和LTC4S的444A/C位点基因多态性进行分析。结果①哮喘组和对照组927T/C位点基因型、等位基因频率比较(χ2=0.178,0.04,P(0.05)、444A/C位点基因型、等位基因频率比较(χ2=1.14,1.065,P(0.05)差异均无统计学意义。②927T/C和444A/C位点基因型频率在哮喘各组中的分布比较(χ2=0.927,1.138,P(0.05)差异均无统计学意义。结论在上海哮喘儿童中,CYSLTR1的927T/C位点和LTC4S的444A/C位点基因多态性可能不是其发病和严重程度的主要基因危险因素。     

雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织基质金属蛋白酶9及其抑制剂1表达的影响

目的:探讨雷公藤多甙对哮喘大鼠肺组织中细胞外基质相关因子基质金属蛋白酶9及金属蛋白酶组织抑制因子1的表达的影响。方法:①实验于2004-01/09在南京医科大学实验动物中心、南京医科大学生化教研室实验室和病理教研室实验室完成。选用健康雄性Wis-tar大鼠18只。按随机数字表将大鼠分为3组:对照组、哮喘组、药物组,每组6只。②哮喘组和药物组于第1,8天每只腹腔内注射抗原混悬液1mL致敏;第15天开始雾化吸入10g/L鸡卵清蛋白激发哮喘,1次/d,20min/次,连续4周制作哮喘模型。每天激发前30min,药物组预先灌胃雷公藤多甙悬浮液(1.5mL)50mg/(kg·d)。对照组以等量生理盐水行致敏和激发,1次/d,20min/次,连续吸入4周。③采用免疫组化法观察大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1的蛋白表达,采用反转录聚合酶联反应技术测定3组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA的表达。④多组间均数的比较采用方差分析,组间两两比较采用q检验。结果:大鼠18只均进入结果分析。①大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9和组织金属蛋白酶抑制剂1蛋白含量:哮喘组明显高于对照组(q=9.75,7.87,P<0.01);经药物干预后,明显低于哮喘组(q=5.99,3.27,P<0.05),但仍明显高于对照组(q=3.76,4.59,P<0.05)。②大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.87,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.47,P<0.05),更低于哮喘组(q=7.34,P<0.01)。③大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9、组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA表达水平:哮喘组明显高于对照组(q=16.71,15.37,P<0.01);经药物干预后显著下降,明显低于哮喘组(q=11.14,7.21,P<0.01),但未完全降至正常,仍明显高于对照组(q=5.57,8.17,P<0.01)。④大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1mRNA比值:哮喘组>1,明显高于对照组(q=3.45,P<0.05);经药物干预后<1,明显低于对照组(q=3.45,P<.05),更低于哮喘组(q=6.89,P<0.01)。结论:雷公藤多甙可能下调基质金属蛋白酶9的表达,调节基质金属蛋白酶9与组织金属蛋白酶抑制剂1比值的平衡,干预细胞外基质重塑。     

参附对失血性休克大鼠肺脏组织中内皮细胞蛋白C受体表达的影响

目的:观察参附对失血性休克大鼠肺脏组织中内皮细胞蛋白C受体(EPCR)表达的影响和意义。方法:104只SD大鼠随机分为正常组、假休克组、失血性休克组、林格液组、参附注射液组。采用RT-PCR方法检测失血性休克及药物复苏大鼠不同时间点肺脏组织中血管EPCR的动态变化。结果:失血性休克组肺脏组织中EPCRmRNA明显升高,林格液组和参附注射组早期有所升高,随后开始下降。与失血性休克组相比,林格液组和参附注射液组肺内EPCRmRNA含量均明显降低,差异有统计学意义,且参附注射组下降更明显。结论:参附注射液能减少失血性休克大鼠肺脏组织中EPCR的表达,改善失血性休克大鼠凝血功能,而早期应用效果可能更好。     

高敏C反应蛋白在哮喘小鼠中的表达及其与气道炎症的相关性

目的测定哮喘小鼠中高敏C反应蛋白(hs CRP)的水平及其与气道炎症的相关性,观察气道炎症的抑制对其表达的影响。方法应用鸡卵白蛋白(OVA)致敏激发制备哮喘小鼠,测定哮喘小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中hs CRP水平,分析其与气道高反应性(AHR)、气道嗜酸细胞(Eos)和气道黏液分泌的相关性。在哮喘小鼠OVA激发前后分别腹腔注射DXM和anti-CD69m Ab,观察它们对哮喘小鼠气道炎症及hs CRP的影响。结果哮喘小鼠血清hs CRP显著高于正常小鼠(P<0.05),且与AHR、BALF中Eos、气管周围Eos浸润及黏液表达正相关(r分别=0.90、0.99、0.96、0.90,P均<0.05);但BALF中hs CRP未有显著增高。DXM和anti-CD69m Ab均可有效地抑制血清hs CRP的增高和哮喘小鼠的气道炎症(P均<0.05)。结论哮喘小鼠存在以CRP为指标的系统性炎症,且其水平与气道局部炎症正相关,而气道炎症的抑制可有效地抑制系统性炎症。     

Characterization and localization of leukotriene C4 receptors in bullfrog lung.

Specific binding sites for [3H]leukotriene C4, ([3H]LTC4) were characterized in lung membrane preparations and localized to the septa of lung tissue from the American bullfrog (Rana catesbeiana). Binding assays were carried out at 23 degrees C for 30 min in the presence of serine (5 mM)-borate (10 mM) to prevent metabolism of LTC4 to LTD4. Specific binding reached steady state within 10 min and was completely reversible with the addition of 1000-fold excess unlabeled LTC4. Scatchard analysis predicted a single class of binding sites with a Kd of 55.7 nM and a Bmax of 61.9 pmol/mg protein. The Hill coefficient was 0.958. LTC4 was the most potent inhibitor of [3H]LTC4 binding, with a Ki of 33 nM. LTD4 and LTE4 are less potent inhibitors, with Ki values of 3350 and 5979 nM, respectively. Mammalian LTD4 antagonists LY171883, L-649,923 and ICI 198,615 only displaced [3H]LTC4 specific binding at concentrations in excess of 1 x 10(-4) M. Guanosine 5' triphosphate and its analog guanyl-5'-yl-imidodiphosphate did not affect specific binding of [3H]LTC4, suggesting that a Gi protein is not involved in the LTC4 transduction mechanism. Glutathione, S-decyl-glutathione and hematin had Ki values of 35,000, 280 and 29,000 nM, respectively, suggesting the binding site is not the enzyme LTC4-synthase. LTC4 contracted lung strips, with S-decyl-glutathione a partial agonist. Computer-enhanced autoradiographs localized the binding sites to the smooth muscle regions of the septa in lung tissue. These data suggest that LTC4 binds to distinct receptors in bullfrog lung.     

四氧化二氮染毒小鼠肺组织病理学改变及转化生长因子β1与热休克蛋白70的表达

目的探讨四氧化二氮（N2O4）中毒小鼠肺组织损伤特点，转化生长因子β1（TGF—β1）和热休克蛋白70（HSP-70）在肺组织的表达及意义。方法采用ICR小鼠N2O4吸入性染毒，于3d后活杀，观察肺组织病理变化及用免疫组织化学方法检测TGF—β1和HSP—70的表达。染毒小鼠HE染色结果提示，肺组织有不同程度纤维化，TGF—β1和HSP—70表达明显增强。结论N2O4中毒小鼠肺组织可出现纤维化，TGF—β1和HSP—70在肺纤维化的发生发展过程中可能扮演着重要角色。     

综合护理干预对哮喘患儿C反应蛋白及心理状况的影响

[目的]探讨放松训练、饮食疗法、心理护理对哮喘患儿C反应蛋白(CRP)及心理状况的影响。[方法]将40例无基础疾病第1级哮喘患儿随机分为观察组和对照组各20例,两组患儿均给予积极对症治疗,对照组实施常规护理干预,观察组在常规护理干预的基础上对患儿实施放松训练、饮食疗法及心理护理,护理干预后采用汉密尔顿焦虑自评量表(HAMA)、儿童抑郁自评量表(CDI)测评患儿的心理状态,同时检测外周血C反应蛋白水平。[结果]观察组患儿护理干预后外周血CRP水平低于对照组(P0.01),HAMA、CDI得分低于对照组(P0.01)。[结论]护理心理干预可改善患儿的免疫功能及心理状况,利于患儿早日康复。