PI3K-Akt信号通路在尼古丁致牙周膜成纤维细胞细胞凋亡中的保护作用

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法向7×104/ml的PDLFs细胞悬液中分别加入0(对照)、1、10、100μg/ml的尼古丁溶液培养24 h。采用RT-PCR法检测磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,Akt)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)mRNA的表达量,采用Western blot法检测Akt蛋白的Thr308、Ser473位点磷酸化和caspase-3蛋白的表达量。结果与对照组比较,各剂量尼古丁染毒PDLFs细胞的PI3K mRNA表达水平上调(P<0.05),Akt mRNA表达水平下调(P<0.05),PDLFs细胞Akt在Thr308、Ser473位点磷酸化水平均升高(P<0.01),caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平均升高(P<0.05,P<0.01)。且随着尼古丁染毒剂量的升高,PI3K mRNA的表达水平呈逐渐增高的趋势,Akt mRNA的表达水平呈逐渐降低的趋势,PDLFs细胞Akt在Thr308位点磷酸化水平呈逐渐增高的趋势,PDLFs细胞Akt在Ser473位点磷酸化水平呈先上升后降低的趋势,PDLFs细胞caspase-3 mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势。结论 PI3K-Akt信号通路在尼古丁致PDLFs细胞凋亡中具有抗凋亡的保护作用。     

尼古丁对牙周膜成纤维细胞线粒体信号通路的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用0.001、0.01和0.1 g/L不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24 h后,采用激光扫描共聚焦显微镜检测尼古丁实验组干预PDLFs细胞后Ca2+水平的变化,运用RT-PCR方法检测Bcl-2、BAX和Caspase3转录水平的表达变化,用Western blot检测Caspase3翻译水平的表达变化。结果尼古丁作用于PDLFs细胞24 h后,细胞内Ca2+水平随着尼古丁剂量而逐渐增加;Bcl-2表达下调,而BAX表达上调;Caspase3转录和翻译增加。结论尼古丁与PDLFs细胞结合后,启动了促凋亡程序,发生细胞凋亡事件,这可能是吸烟人群牙周病高发的分子机制之一。     

金属诱导细胞凋亡及与MAPKs的关系

本文综述了金属诱导细胞凋亡的研究概况,并概要描述了细胞凋亡的发生发展过程过程与丝裂素活化蛋白激酶家族成员间的可能关系。主要内容包括：（１）国内外关于金属（镉、锌、铅、镁 、铜、镍、汞等）诱导细胞凋亡的情况,镉、镁、铬、铜、汞可诱导多种类型的细胞凋亡,且具有剂量时间,效应关系;锌可诱导也可抑制细胞凋亡,与剂量有关,镍可抑制细胞凋亡。（２）丝裂素活化蛋白激酶家族成员及其在细胞凋亡中的可能作用。大量文献     

尼古丁对L-929细胞毒性作用

目的 评价尼古丁对L-929细胞毒性及作用机制。方法 采用(MTT)法检测尼古丁对L-929细胞增殖的影响,采用流式细胞术观察尼古丁对L-929细胞周期的影响。结果 不同浓度尼古丁作用于L-929细胞24,48和72 h后,均能抑制L-929细胞生长。0.01,0.1μg/mL尼古丁作用24,48 h细胞毒性为1级,作用72 h细胞毒性则为2级。10 000μg/mL尼古丁作用24 h细胞毒性为3级,作用48,72 h细胞毒性则为4级。随着尼古丁浓度增加,G₀G₁期细胞比例逐渐增高,而S期和G2期细胞比例则呈下降趋势。结论 尼古丁对体外培养L-929细胞具有明显细胞毒性,且阻遏细胞周期。     

mTOR信号通路在细胞自噬和凋亡调节中的作用

自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发...     

MAPKs在Bcl-2家族调控细胞凋亡中的作用

Bcl-2家族是细胞凋亡最重要的调控因子之一,在细胞凋亡通路中发挥着重要的调节作用。MAPKs信号传导通路参与的细胞内激酶级联反应是细胞外界信号传递到细胞核内、调节基因表达的重要通路,是细胞质和细胞核信号之间的枢纽。研究表明,MAPKs信号传导通路与Bcl-2家族有着密切的关系。本文就MAPKs如何作用于Bcl-2家族来调节细胞凋亡进行综述。     

尼古丁对PDLFs细胞NF-κB和p53表达的影响

目的 探讨尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)凋亡的信号转导机制.方法 用不同浓度的尼古丁作用PDLFs细胞24 h后,测定NF-κB、p53、I-κB和Caspase3的基因表达水平.结果 尼古丁作用于PDLFs细胞24 h后,p53表达水平明显上调,而NF-κB表达水平明显下调,I-κB和Caspase3蛋白...     

尼古丁对人肺腺癌细胞和人大细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察不同浓度尼古丁对人肺腺癌(NCI-H1975)细胞和人大细胞肺癌(NCI-H460)细胞增殖和凋亡的影响。方法分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h;或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞活性。分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为40μmol/L顺伯的低血清培养基24 h,诱导细胞发生凋亡;将诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h,或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h。采用Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡率。结果与对照组相比,各浓度尼古丁分别染毒NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞72 h后的细胞存活率均增加,差异有统计学意义(P0.05)。且随着尼古丁染毒浓度的升高,NCI-H1975细胞、NCIH460细胞暴露72 h后的细胞存活率呈明显的先上升后下降趋势。与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞存活率均较高,差异有统计学意义(P0.05)。且随着染毒时间的延长,1μmol/L尼古丁暴露NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞的细胞存活率呈明显的上升趋势。40μmol/L顺铂作用于NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24 h后,其细胞凋亡率显著升高,与空白组相比,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度尼古丁作用于顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞72 h后,其细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P0.05);且随着尼古丁染毒浓度的升高,顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞暴露72 h后的细胞凋亡率呈明显的下降的趋势。与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用于顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P0.05);且随着染毒时间的延长,1μmol/L尼古丁暴露顺铂诱导后NCI-H1975细胞、NCIH460细胞的凋亡率呈明显的下降趋势。结论尼古丁可促进NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞增殖并抑制细胞凋亡。     

FoxO1参与氧化应激的信号通路研究进展

目的 对FoxO1在抗氧化应激中的功能及作用机制进行综述,为进一步深入研究其作用机制以及通过该因子预防和治疗相关疾病提供参考。方法 以“FoxO1”、“氧化应激”、“信号通路”为主题词,对Pubmed、中国知网以及万方数据库进行文献检索,经过筛选获得国内外相关文献35篇,以近五年的文献为主。结果 显示FoxO1通过发生核易位和JNK、INS-PI3K-AKT、β-catenin、Sirt1、Cdk5等五条信号通路发挥抗氧化应激功能。结论 FoxO1参与氧化应激的调控机制非常复杂,不同的细胞类型对不同的凋亡刺激,FoxO1参与调控的效果不完全一样,涉及的信号通路也不完全相同,产生的凋亡效应更是有差别。     

PI3K/Akt信号通路对胃癌细胞SGC7901细胞化疗效果的影响

目的运用磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3-K)LY294002[2-(4-吗啉基)-8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4-酮]作用于胃癌细胞系SGC7901,探讨抑制PI3K/Akt信号转导通路对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法采用MTT比色法,流式细胞术检测5-FU、DDP及ADM单独或联合PI3K抑制剂LY294002对人胃癌细胞SGC7901的抑制率、凋亡率。并分析单独及联合应用LY294002对SGC7901细胞周期的影响。Western-blot检测单独及联合化疗药后P-Akt蛋白在SGC7901细胞中的表达水平。结果单独使用化疗药5-FU、DDP及ADM均可抑制SGC7901细胞增殖、诱导其凋亡。当化疗药与抑制剂联合应用,对细胞的抑制作用明显增强,促凋亡作用增强,与对照组比较(P0.05)。细胞周期同步分析显示,单独用药均可将SGC7901细胞阻滞于G0/G1期。联合使用抑制剂使处于G0/G1期细胞增加。Western blot显示化疗药上调P-Akt蛋白的表达,联合使用抑制剂后SGC7901细胞P-Akt蛋白的表达与未使用抑制剂比较减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断PI3K/Akt信号通路可提高化疗药5-FU、DDP及ADM对胃癌细胞株SGC7901的抑制率,凋亡率并使阻滞于G0/G1期细胞增多;LY294002通过阻断PI3K/Akt信号通路,抑制P-Akt蛋白表达,增强化疗药的敏感性;LY294002阻断PI3K/Akt信号通路对5-FU、DDP、ADM治疗胃癌有一定的协同或增强作用。     

Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用

目的 探讨Src介导ERK信号通路对宫颈癌细胞增殖凋亡的作用。方法 采用体外细胞实验方法,以宫颈癌细胞Hela（HPV阳性）和C33A（HPV阴性）为研究对象,施加Src激酶选择性抑制剂（PP2）对Src激酶进行抑制。于抑制前后采用流式细胞术（FCM）检测各组细胞的周期及凋亡情况,分别采用Real-time PCR法和Western-blot法检测各组细胞ERK 1/2、c-Fos和c-Jun的mRNA和蛋白表达水平。应用SPSS 20.0软件进行数据录入和分析。结果 Src抑制后,Hela和C33A细胞均显示增殖指数降低,凋亡率升高,处于G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期细胞比例降低,ERK 1、ERK 2、c-Fos和c-Jun的mRNA含量升高,ERK 1/2、磷酸化ERK 1/2（p-ERK 1/2）和磷酸化c-Fos（p-c-Fos）蛋白表达水平降低,c-Jun和磷酸化c-Jun（p-c-Jun）蛋白表达水平升高。Hela细胞凋亡率、p-ERK 1/2和c-Fos蛋白在Src抑制前后的变化低于C33A细胞。结论 Src活化可以上调ERK信号通路中关键因子ERK 1/2和c-Fos磷酸化蛋白的表达,促进宫颈癌细胞的生长与增殖,在宫颈癌变中发挥重要作用。HPV感染可能对Src介导的ERK信号通路调节具有调节作用。     

塞来昔布抑制PI3K-Akt信号转导通路及COX-2表达的作用研究

目的:观察塞来昔布降调节COX-2的表达,诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及阻止PI3K-Akt信号转导的可能机制。方法:采用MTT法检测塞来昔布对HeLa细胞的增殖抑制作用,应用流式细胞术检测塞来昔布对HeLa细胞增殖周期和凋亡的影响,并用免疫组化SP法和RT-PCR法检测塞来昔布对细胞PI3K-Akt信号转导通路的影响。结果:塞来昔布抑制HeLa细胞增殖和诱导HeLa细胞的凋亡作用均呈剂量和时间依赖性,经不同浓度的塞来昔布处理24 h后,HeLa细胞周期的G1期、G2/M期细胞比例明显增多,S期细胞比例明显下降,细胞被阻滞于G2/M期。塞来昔布能阻止PI3K-Akt的信号转导,并呈浓度和时间依赖性。结论:塞来昔布在体外能下调COX-2的表达,抑制HeLa细胞的增殖,并诱导其凋亡,其作用机制与阻滞细胞周期于G2/M期及阻止PI3K-Akt信号转导通路有关。     

β-紫罗兰酮对人乳腺癌细胞(Er~-)MAPK途径的影响

目的为了研究β紫罗兰酮对雌激素受体阴性的人乳腺癌细胞(MDAMB435)MAPKs途径的影响。方法采用细胞生长曲线,细胞核分裂,集落形成以及DNA合成试验,Westernblotting方法,观察了用不同浓度β紫罗兰酮(25、50、100和200μmolL)对MDAMB435细胞生长的影响及其对细胞增殖相关蛋白如PCNA和MAPKs途径的作用。结果β紫罗兰酮可明显抑制MDAMB435细胞生长,细胞核分裂,集落形成和DNA合成。7天的抑制率分别为45.65%,71.24%,81.53%和84.93%;IC50值为42.0μmolL。细胞核分裂的抑制率24小时为-34.57%～58.857%,48小时为-30.05%～75.12%;集落形成试验的抑制率24小时为4.44%～63.79%,48小时为6.42%～95.55%;DNA合成抑制率24h为17.00%～57.56%,48h为62.25%～78.35%。采用Westernblotting方法进一步对其抑制机制结果表明,β紫罗兰酮可抑制PCNA蛋白的表达,抑制MAPK途径中的ERK和MEK1的表达,促进JNK和MKP1的表达。结论β紫罗兰酮对MDAMB435细胞有明显地抑制作用;β紫罗兰酮影响MAPKs级联反应可能是其抑制肿瘤作用的机制之一。     

磷酸化c-Jun氨基末端激酶信号通路在强噪声诱导豚鼠前庭毛细胞凋亡中的作用

目的 探讨强噪声对豚鼠前庭毛细胞死亡的机制及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通道在强噪声诱导前庭毛细胞凋亡中的作用,进一步揭示噪声性耳聋的发病机制,为临床治疗提供理论基础.方法 将实验组豚鼠暴露在4 kHz窄带噪声120 dB SPL噪声环境中4h,噪声刺激停止后1、5、15d组及对照组(每组各8只)在处死前测ABR.取每组4只豚鼠前庭毛细胞作石蜡切片.另外4只豚鼠提取前庭毛细胞总蛋白,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测前庭毛细胞的凋亡,免疫组织化学法及Western blotting法检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun的表达.结果 噪声暴露组前庭毛细胞存在TUNEL阳性细胞,以1d组最多,逐渐减少,15 d组最少,对照组未见阳性细胞.免疫组织化学结果显示,噪声暴露组P-JNK、P-c-Jun有免疫反应阳性,定位于细胞核,对照组未见阳性细胞.Western blotting检测JNK信号途径蛋白质P-JNK、P-c-Jun水平在强噪声刺激后,1d迅速增高并快速活化,5d达高峰,随后逐渐下降,但在15d仍然维持较高水平.结论 强噪声可以通过诱导细胞凋亡造成前庭毛细胞损伤,同时P-JNK标志着JNK信号途径的激活,提示JNK信号通路可能是介导强噪声诱导豚鼠前庭毛细胞凋亡信号通道之一,在前庭毛细胞损伤中发挥重要作用.     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

多囊卵巢综合征合并感染病原学及其PI3K/AKT信号转导通路蛋白水平

目的探讨多囊卵巢综合征合并感染患者病原菌特征及对血清细胞因子、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号转导通路蛋白水平的影响。方法选取2016年3月-2019年10月遵义医科大学附属医院多囊卵巢综合征合并感染患者96例为感染组,同期多囊卵巢综合征未合并感染患者96例为未感染组。统计感染组患者病原菌分布特征、感染组不同感染类型(革兰阴性菌、革兰阳性菌)患者血清细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-6]、PI3K、AKT蛋白水平,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)探讨血清细胞因子(TNF-α、IL-8、IL-6)、PI3K、AKT蛋白水平单一、联合检测对患者革兰阴性菌感染类型的鉴别价值。结果感染组96例患者共分离出病原菌96株,其中革兰阴性菌59株占61.46%,革兰阳性菌37株占38.54%;感染组血清TNF-α、IL-8、IL-6与PI3K、AKT蛋白分别为(147.48±34.19)ng/ml、(224.72±46.34)ng/ml、(75.02±16.51)ng/ml与(0.81±0.19)、(0.88±0.21)高于未感染组(P<0.001);革兰阴性菌感染患者血清TNF-α、IL-8、IL-6与PI3K、AKT蛋白分别为(168.07±37.26)ng/ml、(253.41±49.28)ng/ml、(86.75±18.37)ng/ml与(0.94±0.22)、(1.03±0.24)高于革兰阳性菌感染患者(P<0.05);鉴别革兰阴性菌的AUC:TNF-α为0.701,IL-8为0.719,IL-6为0.808,PI3K蛋白为0.763,AKT蛋白为0.791,各指标联合为0.894,联合诊断优于单一诊断(P<0.05)。结论多囊卵巢综合征合并感染患者病原菌以革兰阴性菌为主,可引起TNF-α、IL-8、IL-6及PI3K/AKT信号通路的高表达,TNF-α、IL-8、IL-6、PI3K/AKT联合检测有助于鉴别革兰阴性和阳性菌。     

植酸通过线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨植酸（IP₆）如何通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,为研究IP₆的抗肿瘤作用提供理论依据。方法 应用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪Annexin-FITC/PI双染法观察不同浓度IP₆作用HepG2细胞后的凋亡情况;流式细胞仪检测IP₆作用HepG₂细胞后线粒体膜电位（ΔΨm）的变化;RT-PCR法检测HepG2细胞内caspase-3mRNA的表达变化;Western blot法检测IP₆作用HepG2细胞后Cyt-c的表达变化。结果 荧光显微镜下可观察到IP₆作用后细胞出现明显的凋亡形态;与对照组相比,IP₆可升高细胞凋亡率（F=342.15,q=2.9～28.53,P<0.05）,且随着浓度增加,凋亡率逐渐升高（P<0.05）;IP₆可降低线粒体膜电位（F=14802.610,q=101.531～209.237,P<0.05）,且随着浓度增加,膜电位逐渐降低（P<0.05）;IP₆可增加caspase-3 mRNA的表达（F=30.474,q=3.406～9.103,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐增加（P<0.05）;IP₆可上调细胞色素C（Cyt-c）的表达（F=87.194,q=5.246～15.218,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐上调（P<0.05）。结论 IP₆可通过降低线粒体膜电位,上调细胞色素C水平,激活caspase-3途径,促进人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

The inhibitory effect of dibutyryl cyclic AMP on docosahexaenoic acid-induced apoptosis in HL-60 cells through activation of the phosphatidylinositol-3 kinase pathway

Objective Docosahexaenoic acid (DHA) is known as a chemopreventive substance for cancers. Previously we reported that DHA induces apoptosis in HL-60 cells. The aim of this study was to clarify the role of phosphatidylinositol 3-kinase (PI3-kinase)/Akt signaling during DHA-induced apoptosis in HL-60 cells. Methods The inhibitory effects of dibutyryl cAMP (db-cAMP) or LY294002 (a specific inhibitor of the PI3-kinase/Akt pathway) on DHA-induced apoptosis in HL-60 cells were evaluated by the appearance of apoptosis, and from the activities of caspases (3 and 8), the phospholylation of Akt, and cleavage of Bid using DNA indexes, emzymatic measurement of fragmented substrates, and Western blotting, respectively. Results The pre-incubation of db-cAMP reduced the activation of caspasses (3 and 8) during the occurrence of DHA-induced apoptosis in HL-60. However, the inhibition of PI3-kinase/Akt signaling by LY294002 resulted in recovery of the caspases’ activities, appearance of apoptotic cells, and cleavage of the Bid molecule when LY294002 was co-treated with db-cAMP before the occurrence of DHA-induced apoptosis in HL-60. It was also confirmed that LY294002 strongly inhibited phospholylation of Akt during db-cAMP induced-reduction of DHA-induced apoptosis in HL-60. Conclusion We demonstrated that DHA-induced apoptosis was sensitive to the modulation of PI3-kinase activity by treatment with db-cAMP or LY294002. These results may provide new insights into the mechanisms of the anti-cancer activity of DHA.