不同荧光染料对3种储存温度下血小板的标记效果

目的:研究5-氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA)、碘代3,3'-二己氧基羰花青[DiOC6(3)]和抗血小板膜糖蛋白(G P)I bβ抗体衍生物对3种储存温度下血小板的标记效果,以期找出1种受温度因素影响小的血小板荧光标记物.方法:取C57小鼠的全血制备富血小板血浆,分3组(室温组、4℃组和冷冻组)保存.保存24 h后...     

一种稀土荧光化合物的合成及光谱性质研究

目的 研制新型时间分辨荧光免疫分析螯合剂.方法 以4,4'-二溴-6,6'-二溴甲基-2,2'-联吡啶为起始反应原料设计合成出一种新型化合物4,4'-二(对氨基苯乙炔基)-6,6'-二(N,N-二(叔丁氧基羰甲基)氨甲基)-2,2'-联吡啶,并对其结构进行确认.结果 将该化合物与铕离子结合形成的稀土荧光化合物的荧光性质进行研究,表明其主要发射波长为595 nm(5D0-7F1)、618nm(5D0-7F2),荧光寿命为643μs.当荧光溶液放置72h,荧光强度值无明显变化.在该荧光体系下,Eu3+浓度分析检测范围为10-5～10-11 mol/L.结论 该荧光化合物结构有较好的稳定性,为固相时间分辨免疫体系奠定了基础,具有广泛的应用前景.     

ABA放射免疫测定法

<正> ABA(Abscisic Acid,脱落酸)是一种抑制型植物激素。它的结构是3-甲基-5(1'-羟基-4'-氧-2'6'6'-三甲基-2'-环己烯)顺反型2,4-戊二烯酸,分子量264.32,含量为5—200ng·g~(-1)植物鲜重。1984年10月,我们研制成功 ABA 的 RIA 法,国内迄今未见类似报道。ABA 免疫原系用碳化二亚胺法,由 ABA 与 BSA(牛血清白蛋白)缩合产生,每个 BSA 分子上偶联4个ABA 分子。免疫原经 Freund 完全佐剂乳化,于兔背皮内多点(80—100穴)免疫,制成抗体。用~3H-ABA 竞争性放射分析试样的 ABA,与气液色谱一电子捕获器法相比,本法的灵敏度更高(可测 1ng·ml~(-1)至10pg·ml~(-1)),r=0.9997;专一性强;重复性好(100份试样,每份4次重复,变异系数仅为3.47%);标本回收率≥96.0%;可测定少至1～10mg 植物鲜重内的 ABA;分析快速简便,全过程可在6小时内完成。本法的各项指标均已达国际上同类工作的水平。目前,本法已被应用于植物营养、代谢与遗传生理等研究领域,收效甚佳。我们正在研制 ABA 放射免疫试剂盒(包括 ABA 抗体、标准 ABA、~3H-ABA 等试剂),准备向外提供。     

同侧记录的正中神经体感诱发电位与脑卒中后上肢运动功能的关系

目的:探讨正中神经体感诱发电位(SEP)N20'用于脑卒中上肢运动功能评估的可行性。方法:纳入2019年7月至2020年1月就诊于上海市瑞金康复医院42例首次发病、病程1～3个月的脑卒中患者进行双上肢SEP检测,检查前对患侧上肢采用简化Fugl-Meyer运动功能评分(FMA)及改良Barthel指数(MBI)评估患者日常生活活动能力。将患侧肢体对侧大脑皮层记录的SEP记为N20,将患侧肢体的同侧大脑皮层记录的上肢SEP记为N20'。研究N20'潜伏期、波幅与FMA及MBI评分的关系。结果:①N20波未引出时N20'均未引出,而N20引出时仍有18.9%(7/37例)N20'波未引出;N20异常患者N20'均异常,而N20正常患者63.0%(17/27例)N20'异常。②N20'异常患者FMA和MBI评分低于N20'正常者(P0.05)。N20与N20'潜伏期分别与上肢FMA评分呈负相关,且后者相关性更大(r=-0.375, P=0.023; r=-0.414, P=0.020)。③N20(-)N20'(-)组FMA评分明显高于N20(-)N20'(+)组及N20(+)N20'(+)组(P0.05),3组MBI评分差异无统计学意义(P0.05)。④基底节脑卒中N20'未引出率占所有N20'未引出的90.9%(10/11例),基底节脑卒中N20'异常率为95.0%(19/20例)。不同部位脑卒中患者MBI评分差异具有统计学意义(P0.05)。结论:N20'波可作为观察偏瘫侧上肢功能的一种客观量化的电生理指标。N20结合N20'相对于单一记录N20能更好地反映当前患侧上肢的运动功能情况。     

核因子-κB p65反义寡核苷酸对溃疡性结肠炎肠黏膜单个核细胞细胞因子表达的影响

探讨 NF- κB p6 5反义寡核苷酸对溃疡性结肠炎肠黏膜单个核细胞 NF- κB p6 5的表达以及对细胞因子释放的影响。3例溃疡性结肠炎患者 (未用过任何与溃疡性结肠炎治疗相关的药物 ,符合 1993年太原会议溃疡性结肠炎诊断标准 )的活检组织被用于固有层单个核细胞 (L PMC)的分离和培养 ,并用 NF- κB p6 5反义寡核苷酸 (A-SON:5 '- GGAACAGTTCGTCCATGG- 3')及错义寡核苷酸 (MSON:5 '- GGAACAGTTCGTCTATGG- 3')和地塞米松 (EDX)进行干预。采用 :1Western蛋白印迹分析检测 NF-κB p6 5蛋白表达情况 ;2逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测 IL- 1βm RNA和 IL- 8m RNA的表达 ;3酶联免疫吸附试验 (EL ISA)测定 IL- 1β,IL- 8的分泌水平。结果显示 ,NF-κB p6 5反义寡核苷酸可明显减少 L PMC的 NF-κB p6 5表达 ,阻断 L PS刺激引起的 IL - 1βm RNA和 IL -8m RNA的表达的增强以及两种细胞因子分泌水平均的增高 ,其作用明显强于地塞米松 (P<0 .0 5 )。结论认为 :NF-κB p6 5反义寡核苷酸有可能作为治疗溃疡性结肠炎的新基因药物 ,为治疗溃疡性结肠炎开辟了一条新途径     

CircRNA在自身免疫疾病中的研究进展

CircRNA是一类缺乏5'-帽和3'-polyA尾的共价环状非编码RNA,由前体RNA下游3'末端与上游5'末端反向剪接(backsplicing)而成,具有稳定、丰富、保守、特异表达等特点,包括外显子circRNA(ecircRNA)、内含子circRNA(ciRNA)、外显子-内含子circRNA(EIciRNA)。在沉寂了一段时间后,随着高通量测序技术的进步,近来大量circRNA被鉴定,重新受到研究者的重视。本文综述了自身免疫疾病中circRNA研究的进展,包括其在诊断及疾病分层中的应用以及可能的致病机制等。     

人胚胎三叉神经节神经元的躯体定位

目的:应用1,1′-双十八烷-3,3,3′,3′-四甲基吲哚羰花青-高氯酸盐(DiI)追踪技术研究人胚胎发出眼神经、上颌神经及下颌神经的神经元在三叉神经节内的解剖定位.方法:对胎龄20周以上的6个胎儿标本进行灌注固定后,分别于标本的眼、上颌、下颌神经处植入DiI染色晶体.37℃恒温箱放置3个月,等待DiI染色晶体扩散,再根据神经走向切片,荧光显微镜下观察发出3支神经的神经元在三叉神经节内的解剖定位.结果:人胚胎三叉神经节是沿内外方向分布的细胞团.发出眼神经的神经元位于神经节的前内侧,下颌神经的神经元位于神经节的后外侧,上颌神经的神经元位于两者之间.结论:人胚胎发出眼神经、上颌神经及下颌神经的神经元在三叉神经节内以内外局部定位方式排列.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷对胶质瘤细胞系U251凋亡的调节

目的甲基化与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)对胶质瘤细胞系凋亡的调节。方法将浓度分别为10μM、25μM和50μM的5-氮杂-2'-脱氧胞苷加入胶质瘤细胞系U251细胞中,应用RT-PCR法检测U251细胞系经不同浓度的5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞内胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的表达,应用流式细胞术(AnnexinV-FITC染色)检测不同药物浓度处理组中U251细胞的凋亡率。结果 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后,U251细胞内caspase-3的转录水平明显上调(P<0.01),具有较为明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示U251细胞经5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理后细胞的凋亡率显著上调,且具有剂量依赖性。结论 5-氮杂-2'-脱氧胞苷处理具有剂量依赖性上调胶质瘤细胞系U251caspase-3表达,促进细胞凋亡。     

慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定联慢性乙型肝炎患者应用拉米夫定联合α-干扰素治疗前后血清HA、PⅢP和ALT水平变化的临床意义

抗病毒治疗是慢性乙型肝炎(CHB)治疗的关键.拉米夫定(2'-3'-二脱氧-3'-硫化胞嘧啶)是一种新一代的核苷类抗病毒药物.因其疗效高、价格低廉、副作用小而广泛应用于CHB的治疗.其降酶和使HBV-DNA转阴的疗效已经得到临床的肯定[1].本文观察52例CHB经拉米夫定联合α-干扰素治疗前后血清HA、PⅢP和ALT水平的变化,现将结果报告如下.     

编码人肝脂解激活受体跨膜域和配体结合域的基因cDNA片段的克隆及表达

目的和方法 :研究发现肝细胞膜apoCIII受体在性质、分布及功能上与人肝脂解激活受体 (lipolysisstimulatedreceptor,LSR)极为相似 ,因此我们拟克隆、表达LSR基因cDNA中编码跨膜域与配体结合域的片段 ,以进一步探讨LSR与apoCIII及VLDL的结合特性 ,确定LSR的结构是否与apoCIII受体具有同源性。本研究以大鼠肝脏LSRcDNA序列为基础 ,通过同源性分析寻求到与大鼠肝LSRcDNA序列具最高同源性的人肝mRNA序列XM - 0 2 86 70 ,并以其为模板设计一对引物 (P1:5 '-ATATAAGCT TATGCTGCCCTGTACCTACCAGATG - 3';P2 :5 '-…     

2007-2012年北京市流感样病例和流感病原学监测

目的 阐明2007-2012年北京市流行性感冒(流感)流行特征和病原学监测结果.方法 使用“北京市医疗机构传染病监测预警系统”中二级以上医院流感样病例数和百分比的周数据以及流感病原学监测周数据,分析流感样病例发病趋势和流感病毒构成情况.结果 2007-2012年,北京市二级以上医院共监测流感样病例3,045,527例,其中流感样病例百分比2.11％.期间共检测标本49,868件,检出阳性标本8,289件,其中甲型H1N1亚型573件(6.91％)、甲型H3N2亚型2,578件(31.10％)、甲型H1N1流感2,021件(24.38％)、B型Victoria系945件(11.40％)、B型Yamagada系681件(8.22％).各年度流感病毒亚型构成不同:2007-2008年度主要为B型Yamagada系(60.36％)和甲型H3N2亚型(23.68％),2008-2009年度为甲型H1N1亚型(78.63％),2009-2010年度为甲型H1N1流感(40.28％)和甲型H3N2亚型(20.29％),2010-2011年度为甲型H3N2亚型(64.34％)和甲型H1N1流感(23.44％),2011-2012年度为B型Victoria系(57.28％)、B型Yamagada系(20.80％)和甲型H3N2亚型(18.66％),2012-2013年度为甲型H3N2亚型(77.40％)和甲型H1N1流感(20.36％).结论 近年来,甲型H1N1亚型、甲型H3N2亚型、甲型H1N1流感、B型Victoria系和B型Yamagada系均有流行,且各年度优势毒株不一.     

3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶活性影响机制的研究

目的探讨黄酮类化合物3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶活性的影响。方法采用3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素作为抑制剂,以改进后的铜皂法测定脂肪酶活性,测定3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素的浓度与脂肪酶活性的关系,得出该化合物对脂肪酶活性影响,并测定其IC50值。结果该化合物对碱性脂肪酶活性的抑制作用为非竞争性抑制,其IC50为3.17×10-7mol/L。米氏常数K m=100 mmol/L,抑制常数K i=2.7×10-7mol/L。结论 3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶的抑制机制是其与酶的活性部位以外的基团作用而导致酶活性降低,呈非竞争性抑制。     

2004-2008年我国流行的A型流感病毒抗原性及HA1基因特性的研究

目的 了解我国2004-2008年A(H1N1、H3N2)型流感病毒流行情况、抗原性和基因特性变异关系,了解疫苗株与我国流行株之间抗原性变化情况.方法 选择2004年以来我国分离的A(H1N1、H3N2)型流感病毒进行抗原性及HA1区基因序列,通过比对HA1蛋白位点变异情况,分析我国流感病毒抗原性及基因特性变化情况.结果 A(H1N1)亚型流感毒株抗原性2004-2007年分离的A(H1N1)亚型流感病毒的抗原性与疫苗株A/New Caledonia/20/1999(H1N1)类似;2008年我国流行的A(H1N1)亚型毒株的抗原性与2008-2009年北半球的流感疫苗株A/Brisben/59/2007(H1N1)类似.2004-2005年分离的A(H3N2)亚型流感病毒的抗原性与疫苗株A/Fujian/411/12002(H3N2)比较发生了变异;2006-2007年我国流行的H3N2毒株与A/Wiscansin/67/2006(H3N2)类似,2008年我国流行的H3N2毒株与疫苗株A/Brisben/10/2006(H3N2)类似.结论 2004-2008年我国流行的A(H1N1、H3N2)亚型流感病毒的抗原性和基因特性发生了改变.     

缺氧诱导因子-1在缺氧诱导一氧化氮合成酶基因表达中的作用

目的 研究缺氧诱导因子-1(HIF-1)在一氧化氮合成酶基因缺氧诱导反应中的作用。方法 体外合成具有HIF-1特异结合位点的DNA片段(红细胞生成素3'-增强子片段),借助脂质体,转入培养的鼠主动脉内皮细胞和肺微血管细胞,用半定量RT-PCR方法测定诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)mRNA。结果 (1)大鼠主动脉内皮细胞、肺微血管内皮细胞在常氧下培养,有iNOS基因表达;(2)缺氧能诱导这两种细胞iNOS基因表达增加;(3)野生型EPO3'-增强子片段能阻断缺氧对内皮细胞iNOS基因表达的诱导作用,而突变片段则无此作用。结论 在iNOS基因序列中,可能存在EPO3'-端增强子片段,其参与内皮细胞的缺氧反应。     

IFN-γ通过激活JAK/STAT信号通路上调手足口病患儿OAS1表达

目的:探讨干扰素γ(IFN-γ)是否可以通过激活Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路上调手足口病(HFMD)患者2',5'-寡聚腺苷酸合成酶1(OAS1)的表达,从而发挥抗病毒感染的作用.方法:收集140例儿童手足口病和60例健康对照儿童外周血标本,RT-qPCR和Western blo...     

腹透液的生物相容性对2', 5'-寡腺苷酸合成酶活性的影响

目的：观察使用商业腹透液时2', 5'-寡腺苷酸合成酶活性的动态变化和腹膜病理改变,探讨长期腹膜透析腹透液生物相容性对机体免疫功能影响和腹膜间皮的病理改变。方法：①使用3种常用腹透液建立腹膜透析动物模型;②用纸层析法动态测定实施和停止腹膜透析时,2', 5'-寡腺苷酸合成酶活性的消长;③在光镜下观察腹膜间皮病理变化。结果：腹膜透析时,各腹膜透析组和生理盐水组2', 5'-寡腺苷酸合成酶活性均升高;停止腹膜透析,生理盐水组2', 5'-寡腺苷酸合成酶活性恢复正常,各腹膜透析组则持续降低;在腹膜透析时,各腹膜透析组均发生程度不等的间皮细胞脱落、腹膜增厚和急、慢性炎症细胞浸润;而Baxter组无急性炎症发生。随着停止腹膜透析时间延长,腹膜透析组病理改变逐渐修复。结论：长期腹膜透析时,腹膜透析液对机体免疫功能均有长时间抑制,并造成不同程度的腹膜病理改变。腹透液的非生物相容性是导致机体免疫功能降低,腹膜损伤的重要因素。     

Effect of structural domain Ⅱ of HCV 5' noncoding region on its translation initiation activity

Objective To examine the role of domain Ⅱ of hepatitis C virus(HCV) 5'noncoding region (5'NCR) in its translation initiation activity. Methods The fragment of HCV 5' NCR with deletions of 5'-proximal 118 nucleotides were amplified with PCR, then was used to substitute for the full length HCV 5'NCR of plasmid pCMVNCRIuc, a firefly luciferase(Flue) eukaryotic expression plasmid regulated by HCV 5' NCR, to generate recombinant plasmid pCN1-d3, pCMVNCRIuc, pCN1-d2 (modified pCMVNCRluc with deletions of HCV 5' NCR nt1-43) and pCN1-d3 were transfected into HepG2 cells with liposome transfection protocol, respectively, and the relative luciferase activity was measured to analyze the regulatory effect of the truncated 5'NCR on Fluc gene expression. Meanwhile the Fluc mRNA levels were detected by RT-PCR. Results The recombinant plasmid was successfully constructed. The Fluc mRNA levels of the 3 plasmids were not significantly different(P 0.05), and there were also no significant difference between the relative luciferase activity of plasmids pCN1-d2 and pCMVNCRluc(P 0.05). However, that of pCN1-d3 was decreased significantly(P < 0.01, compared with pCN1-d2 or pCMVNCRluc). Conclusion Structural domain Ⅱ of HCV 5' NCR plays an important role in itstranslation initiation activity.     

Effect of structural domain Ⅱ of HCV 5' noncoding region on its translation initiation activity

Objective To examine the role of domain Ⅱ of hepatitis C virus(HCV) 5'noncoding region (5'NCR) in its translation initiation activity. Methods The fragment of HCV 5' NCR with deletions of 5'-proximal 118 nucleotides were amplified with PCR, then was used to substitute for the full length HCV 5'NCR of plasmid pCMVNCRIuc, a firefly luciferase(Flue) eukaryotic expression plasmid regulated by HCV 5' NCR, to generate recombinant plasmid pCN1-d3, pCMVNCRIuc, pCN1-d2 (modified pCMVNCRluc with deletions of HCV 5' NCR nt1-43) and pCN1-d3 were transfected into HepG2 cells with liposome transfection protocol, respectively, and the relative luciferase activity was measured to analyze the regulatory effect of the truncated 5'NCR on Fluc gene expression. Meanwhile the Fluc mRNA levels were detected by RT-PCR. Results The recombinant plasmid was successfully constructed. The Fluc mRNA levels of the 3 plasmids were not significantly different(P 0.05), and there were also no significant difference between the relative luciferase activity of plasmids pCN1-d2 and pCMVNCRluc(P 0.05). However, that of pCN1-d3 was decreased significantly(P < 0.01, compared with pCN1-d2 or pCMVNCRluc). Conclusion Structural domain Ⅱ of HCV 5' NCR plays an important role in itstranslation initiation activity.     

Effect of structural domain Ⅱ of HCV 5' noncoding region on its translation initiation activity

Objective To examine the role of domain Ⅱ of hepatitis C virus(HCV) 5'noncoding region (5'NCR) in its translation initiation activity. Methods The fragment of HCV 5' NCR with deletions of 5'-proximal 118 nucleotides were amplified with PCR, then was used to substitute for the full length HCV 5'NCR of plasmid pCMVNCRIuc, a firefly luciferase(Flue) eukaryotic expression plasmid regulated by HCV 5' NCR, to generate recombinant plasmid pCN1-d3, pCMVNCRIuc, pCN1-d2 (modified pCMVNCRluc with deletions of HCV 5' NCR nt1-43) and pCN1-d3 were transfected into HepG2 cells with liposome transfection protocol, respectively, and the relative luciferase activity was measured to analyze the regulatory effect of the truncated 5'NCR on Fluc gene expression. Meanwhile the Fluc mRNA levels were detected by RT-PCR. Results The recombinant plasmid was successfully constructed. The Fluc mRNA levels of the 3 plasmids were not significantly different(P 0.05), and there were also no significant difference between the relative luciferase activity of plasmids pCN1-d2 and pCMVNCRluc(P 0.05). However, that of pCN1-d3 was decreased significantly(P < 0.01, compared with pCN1-d2 or pCMVNCRluc). Conclusion Structural domain Ⅱ of HCV 5' NCR plays an important role in itstranslation initiation activity.     

Effect of structural domain Ⅱ of HCV 5' noncoding region on its translation initiation activity

Objective To examine the role of domain Ⅱ of hepatitis C virus(HCV) 5'noncoding region (5'NCR) in its translation initiation activity. Methods The fragment of HCV 5' NCR with deletions of 5'-proximal 118 nucleotides were amplified with PCR, then was used to substitute for the full length HCV 5'NCR of plasmid pCMVNCRIuc, a firefly luciferase(Flue) eukaryotic expression plasmid regulated by HCV 5' NCR, to generate recombinant plasmid pCN1-d3, pCMVNCRIuc, pCN1-d2 (modified pCMVNCRluc with deletions of HCV 5' NCR nt1-43) and pCN1-d3 were transfected into HepG2 cells with liposome transfection protocol, respectively, and the relative luciferase activity was measured to analyze the regulatory effect of the truncated 5'NCR on Fluc gene expression. Meanwhile the Fluc mRNA levels were detected by RT-PCR. Results The recombinant plasmid was successfully constructed. The Fluc mRNA levels of the 3 plasmids were not significantly different(P 0.05), and there were also no significant difference between the relative luciferase activity of plasmids pCN1-d2 and pCMVNCRluc(P 0.05). However, that of pCN1-d3 was decreased significantly(P < 0.01, compared with pCN1-d2 or pCMVNCRluc). Conclusion Structural domain Ⅱ of HCV 5' NCR plays an important role in itstranslation initiation activity.