内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中的表达

目的 :研究内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在乳癌中表达及与淋巴结转移的关系。方法 :采用免疫组化S P法检测 60例乳癌中eNOS和iNOS的表达。结果 :eNOS和iNOS阳性在乳癌中表达率分别为 75 0 %和71 7%。在淋巴结转移组和无淋巴结转移组中eNOS阳性表达率分别为 66 7%和 83 3 % ,两组间差异无统计学意义 (χ2 =2 2 2 ,P >0 0 5) ,而iNOS在淋巴结转移和无转移组中阳性表达率分别为 53 3 %和 90 0 % ,两组间差异有统计学意义 (χ2 =9 93 ,P <0 0 1 )。结论 :内皮型、诱导型一氧化氮合酶在乳腺癌中高表达 ;iNOS的表达与乳腺癌的淋巴转移相关     

一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊娠高血压综合征

妊娠高血压综合征是产科严重的并发症,是引起孕产妇和围生儿死亡的主要原因之一,其病因及发病机理目前尚不十分清楚.近年,越来越多的研究表明,一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶表达异常与妊娠高血压的发病有着密切的关系.国内外学者对此领域进行了一些大量研究,但仍存在着争议.现就一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶与妊高征的发病关系作一综述.     

人内皮型一氧化氮合酶基因在小鼠肺内的表达

目的 观察人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)重组腺病毒感染小鼠肺组织后heNOS基因在小鼠肺组织内的表达.方法 采用反转录PCR(RT-PCR)法克隆heNOS基因,利用体外连接法构建复制缺陷型heNOS重组腺病毒表达载体;免疫组织化学分析heNOS在小鼠肺组织内的表达情况.结果 (1)序列分析表明,克隆所得heNOS基因片段含有完整开放阅读框架,与GenBank中heNOS DNA序列(*163729)同源性达99.93%.(2)该基因在转染细胞中能表达具有生物活性功能的NOS蛋白.(3)体外连接法成功构建出复制缺陷型heNOS重组腺病毒转移载体.(4)滴入heNOS重组腺病毒后,小鼠肺血管内皮细胞、平滑肌细胞、细支气管上皮细胞内heNOS阳性表达明显增加.结论 本实验成功构建的复制缺陷型heNOS重组腺病毒转移载体,能经呼吸道转移至肺组织,并在小鼠肺血管、支气管和肺泡上皮细胞表达所需的目的 蛋白heNOS.     

姜黄素对急性肺损伤大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)模型大鼠肺组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法:雄性SD大鼠采用随机数字表法分为对照组、急性肺损伤模型组及姜黄素治疗组。采用一次性气管内滴注内毒素4 mg/kg制备急性肺损伤模型大鼠,治疗组于造模前15 min腹腔注射姜黄素200 mg/kg,于造模后3、6、12 h及24 h取肺组织,观察并比较各组肺组织形态学改变,并检测肺湿/干重比、肺含水量和肺组织中NO的含量,real-time PCR及免疫印迹法检测iNOS和eNOS的mRNA和蛋白表达。结果:模型组大鼠肺湿/干重比、肺组织含水量及NO含量均较对照组明显升高,iNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著上调,而eNOS的mRNA和蛋白表达量较对照组显著下调。与模型组相比,姜黄素治疗组肺湿/干重比、肺含水量、NO含量均明显降低,iNOS的mRNA和蛋白表达量明显下调,eNOS的mRNA和蛋白表达量明显上调。结论:姜黄素可下调内毒素致急性肺损伤模型大鼠肺组织iNOS表达,并匕调eNOS表达。     

神经型一氧化氮合酶羧基末端结合配体CAPON的研究进展

正内皮衍生小分子气体一氧化氮(nitric oxide,NO)因阐明了NO在心血管系统中是具有重要调节作用。随后的研究揭示了NO参与多种病理生理过程,包括血管舒张、神经传递、巨噬细胞街道的细胞毒性、胃肠道平滑肌舒张及支气管扩张~[1]。在生物体内,NO的生成过程需要关键酶一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的参与,将L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)和分子氧作为底物,由还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸     

内皮型一氧化氮合酶基因与冠心病的研究进展

由血管内皮产生的一氧化氮（NO）是心血管系统中抗冠状动脉粥样硬化、血栓形成，维持正常血管舒缩反应必不可少的保护因子。一氧化氮合酶作为合成NO的关键酶，其基因发生变异，对NO的生成具有重要的影响。本文将对内皮型一氧化氮合酶基因多态性与冠心病的研究进展作一综述。     

内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达,并以GAPDH为内标,用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达,脑中最多、肾脏次之、心脏较少;在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中,检测到eNOS基因的表达,其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞;培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。     

神经型一氧化氮合酶在1型糖尿病大鼠肾皮质中的表达

目的观察1型糖尿病大鼠肾皮质内神经型一氧化氮合酶(nNOS)的表达变化。方法采用一次性腹腔注射大量链脲佐菌素(STZ)的方法建立1型糖尿病大鼠模型。分别在成模后的第1,2,4周3个时间点处死动物,采用亚硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量;采用免组织化学染色法观察nNOS在肾皮质的表达;采用Western blot方法测定nNOS在肾皮质含量的变化。结果1周病程时糖尿病模型组大鼠肾皮质NO表达水平低于对照组(P<0.05),2周病程时高于对照组(P<0.05),4周病程时显著高于对照组(P<0.01)。nNOS在肾皮质中的表达部位主要在致密斑,在肾小管中也有少量的表达。糖尿病模型组大鼠肾皮质nNOS含量在1周病程时低于正常对照组,2周病程时与正常对照组无显著性差异,4周病程时高于正常对照组。结论在1型糖尿病大鼠肾脏病变的早期,肾皮质内NO的减少主要是由于nNOS合成减少造成的。     

氨甲蝶呤抑制小鼠巨噬细胞一氧化氮合酶表达

研究氨甲蝶呤（MTX）在小鼠巨噬细胞（RAW264.7)对一氧化氮合酶（NOS）表达的抑制作用。本试验应用内毒素（LPS）、干扰素（IFNr)、MTX、二氨基－羟基嘧啶（DAHP），四氢生物喋呤（BH4）刺激8h后，用Northern杂交检测NOS mRNA水平和GTP－CH-1 mRNA水平表达，并用Griess reaction方法检测NO2^-/NO3^-浓度，用Duch方法测定GTP－CH－1活性值。我们发现，MTX在小鼠巨噬细胞（RAW264.7)对NOS mRNA水平和GTP－HC－1 mRNA水平表达有轻度抑制作用，对NO2^-/NO3^-浓度和GTP－CH－1活性抑制作用较弱。MTX和DAHP联合应用不仅对NOS mRNA水平和GTP－CH－1 mRNA水平表达抑制作用较强，而且对NO2^-/NO3^-浓度和GTP－CH－1活性抑制较大。BH4的加入可以减少MTX和DAHP对一氧化氮（NO)生成的抑制作用。     

小鼠早中期胚胎组织中RNA结合基序蛋白10、caspase-9和内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达

目的:观察小鼠早中期胚胎组织中RNA结合基序蛋白10(RBM10)、caspase-9和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达和定位,初步探究三者相关性。方法:取7.5～9.5d孕鼠胚胎包埋切片,行免疫组织化学法检测RBM10、caspase-9和eNOS的表达。结果:免疫组织化学结果显示,RBM10主要表达于7.5d的胚胎细胞核、原始消化管细胞核内,8.5 d的胚胎各胚层细胞核内(头部与体壁细胞阳性表达显著)、滋养层及胚外中胚层细胞核内,9.5 d的合体滋养层细胞核、部分胚胎上皮细胞细胞核;且在7.5、8.5 d和9.5 d的蜕膜细胞核均有阳性表达。Caspase-9主要表达于7.5 d的靠近体蒂位置处羊膜上皮、胚胎体壁细胞胞质,8.5 d的胚胎羊膜上皮胞质,9.5 d的胚胎原始消化管、原始心壁等上皮细胞胞质。eNOS主要表达于7.5、8.5、9.5 d的滋养层毛细血管内皮细胞胞质,另外在8.5 d的合体滋养层内侧即胚外中胚层细胞之间的毛细血管内皮可见阳性表达。各组8.5 d、9.5 d RBM10、caspase-9和eNOS表达差异均有统计学意义。结论:RBM10可能在促进血管形成方面与eNOS有相关性。     

小鼠肾脏发生发育中BAX的表达

目的 探讨小鼠肾脏发育过程中促凋亡蛋白BAX的表达.方法 选取胚龄16、18d和出生后1、3、5、7、14、21d的小鼠共54只,应用免疫组织化学、免疫荧光技术并结合体视学分析方法观察树脂切片上小鼠不同发育时期BAX的表达.结果 BAX的表达主要出现在近端小管,随着发育的不断进行,BAX的表达由皮质的近髓质区逐渐发展到中层皮质区,最后出现在浅层皮质区.BAX的面数密度从E16d到P3d逐渐升高,随后下降,在P7d又逐渐升高.结论 小鼠肾脏发育过程中BAX的表达与近端小管的发育密切相关,可能影响近端小管的存活、分化和成熟.     

小鼠胚胎心脏发育期T型钙离子通道的表达

目的 检测哺乳动物心脏中T型钙离子通道α1亚基在小鼠胚胎心脏发育过程中表达部位和时间的分布特征。 方法 对小鼠胚胎心脏发育关键时期（Ｅ9.5至胚胎E18.5共9d）的胚胎进行连续切片,用RT-PCR和免疫组织化学的方法对α1G和α1H蛋白进行阳性检测。 结果 α1H从胚胎期10.5d左右开始表达并一直延续到发育晚期（E18.5）,而α1G则从E11.5d延续到E18.5;免疫组织化学的结果显示,T型钙离子通道主要在心肌层以及左右传导束支稳定表达,而在心内膜垫以及心室肌小梁的心内膜内皮和间充质细胞中不表达。 结论 T型钙离子通道对于心肌细胞以及心脏传导组织的形成起到了一定的作用。     

Bcl-2在小鼠肾脏发生发育中的表达

目的 探讨小鼠肾脏发育过程中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达. 方法 选取胚龄16(E16d)、18d和出生后1d(P1d)、3、5、7d、14和21d的昆明小白鼠共54只,应用免疫组织化学技术并结合体视学分析方法,观察小鼠肾脏不同发育时期树脂切片上Bcl-2的表达. 结果 在小鼠肾脏发育过程中,Bcl-2的阳性表达主要出现在近端小管,从E18 d到P1 d,Bcl-2阳性表达肾小管面数密度的增长速度最快,在P7d之后,Bcl-2阳性表达肾小管面数密度的增长速度的变化不大. 结论 在肾的早期发育过程中,Bcl-2主要影响了近端小管的存活或死亡.     

Expression patterns of ShcD and Shc family adaptor proteins during mouse embryonic development

The Src homology and collagen (Shc) proteins function as molecular adaptors in signaling pathways mediated by a variety of cell surface receptors. Of the four mammalian Shc proteins, ShcD is the least characterized. To this end, ShcD expression was documented and compared to that of other Shc family proteins. In the developing mouse embryo, expression of ShcD overlaps with that of other Shc proteins in the central nervous system, with specific distribution in post‐mitotic neurons. In addition, robust ShcD expression is seen within differentiated epithelial cells of several organs, as well as in skeletal and cardiac muscle, and various tissues of neural crest origin. Interestingly, all Shc family members are expressed in hypertrophic chondrocytes, the first report of Shc protein expression in the developing skeleton. The unique tissue distribution patterns of Shc proteins likely contribute to their complex tissue‐specific signaling functions during embryogenesis. Developmental Dynamics, 2011. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

血管生成素-1及其受体Tie-2在小鼠肾发育中的表达

目的:观察血管生成素-1(Ang-1)及其受体Tie-2在小鼠肾发育过程中的表达特征、作用及相互关系.方法:采用免疫组织化学和免疫印迹技术检测胚龄14、16、18 d胎鼠和生后1、3、7、14、21、42 d仔鼠Ang-1和Tie-2的表达.结果:Ang-1在胚龄14 d胎鼠肾的未分化间充质细胞中呈微弱表达,随着胚(日)龄的增加,表达逐渐增强,主要分布在肾小体,间质血管以及肾小管中.Tie-2于胚龄14 d首先出现在肾间质,以后随着肾的发育,出现在肾小体以及间质血管中.结论:Ang-1和Tie-2在小鼠肾发育过程中,对肾小体毛细血管的形成、间质血管的发育及血管稳定性的维持均发挥着重要作用.     

表皮生长因子对小鼠肾小管发育中细胞增殖的影响

目的:观察小鼠肾小管发育中细胞增殖和表皮生长因子(EGF)的表达特征,探讨 EGF 对小鼠肾小管发育中细胞增殖的影响.方法:应用 5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记增殖细胞.应用免疫组织化学、免疫荧光、免疫印迹技术并结合体视学方法检测生后 1、3、5、6、7、14、21、28、40 d 小鼠肾小管 BrdU 阳性细胞和 EGF 的表达.结果:EGF 于生后6 d表达在肾小管上皮细胞,之后随着日龄的增加表达渐增;BrdU 阳性细胞于生后1 d表达,14 d达高峰,之后随着日龄增加而逐渐减少;生后14 d之后 EGF 与细胞增殖表达趋势完全相反.结论:推测 EGF 在生后小鼠肾发育中对肾小管的分化和成熟起重要作用,但并不促进细胞增殖.     

Expression patterns of the Wtx/Amer gene family during mouse embryonic development

WTX/AMER1 is a novel negative regulator of the WNT/β‐catenin pathway with mutations detected in Wilms' tumors and an X‐linked sclerosing bone dysplasia. WTX/AMER1 (Fam123b) shares several domains of homology with two other recently identified proteins: AMER2 (Fam123a) and AMER3 (Fam123c). Here, we describe an in‐depth expression analysis of all three members of this gene family during mouse embryonic development. All genes were strongly expressed in the central as well as the peripheral nervous system, thus suggesting important roles of this gene family during neurogenesis. Specific expression was found in the retina, inner ear, and nasal epithelium. Outside of the nervous system Wtx/Amer1 showed the broadest expression domains including cephalic and limb mesenchyme, skeletal muscle, bladder, gonads, lung bud, salivary glands, and the kidneys. The widespread expression pattern of Wtx/Amer1, together with its role as a modulator of the Wnt signaling pathway, suggest that Wtx/Amer1 serves pleiotropic roles during mammalian organogenesis. Developmental Dynamics 239:1867–1878, 2010. © 2010 Wiley‐Liss, Inc.     

增殖细胞核抗原在小鼠生后肾脏发育中的表达

目的：观察小鼠出生后肾脏发育过程中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达特征,探讨出生后小鼠肾脏发育过程中细胞增殖的规律。方法：应用免疫组织化学技术检测小鼠出生后1、3、7、14、21、28和70d肾脏PCNA的表达。结果：小鼠出生后1～70d,皮质中的生肾区、肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中的肾小管和集合管PCNA阳性细胞的表达具有一定的规律,早期PCNA阳性表达丰富,随着肾脏发育逐渐成熟而表达减弱直至消失。在70d成年小鼠肾脏中,没有检测到PCNA阳性细胞。结论：出生后小鼠肾脏皮质中的生肾区、肾小体、肾小管、髓放线以及髓质中小管的细胞增殖规律是由高逐渐降低的,直至成年完全停止。     

转录因子Nkx2.5、ISL-1表达与小鼠胚胎心的早期发育

目的:探讨转录因子Nkx2.5和ISL-1的表达与小鼠胚胎早期心发育的关系.方法:胚龄7.5～13d小鼠胚胎连续石蜡切片,用抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、抗心肌肌球蛋白重链(MHC)、抗转录因子ISL-1、抗Nkx2.5抗体,进行免疫组织化学显色.结果:转录因子Nkx2.5在胚龄7.5d生心板表达早于心肌特异性蛋白MHC及SMA.随心外形建立,Nkx2.5在心各部表达逐渐增强.胚龄9d, Nkx2.5阳性表达从原始心管动脉端延伸至心包腔背侧脏壁中胚层及咽周围轴旁中胚层.Isl-1开始表达于胚龄8d原始心管心背系膜及前肠腹侧脏壁中胚层间充质,阳性细胞数量在11～12d达顶峰,形成前肠腹侧连接流出道远端和心房背侧壁的ISL-1阳性细胞带.11～12d,流出道远端出现Nkx2.5和MHC阴性,ISL-1、SMA阳性表达区.胚龄13d后,Nkx2.5和ISL-1在心和前肠腹侧间充质的表达强度下降.结论:Nkx2.5是原始生心区心肌前体细胞早期分化的标记蛋白,在第2生心区表达限于胚龄9d、咽周脏壁和轴旁中胚层心肌前体细胞亚群.第2生心区标记蛋白ISL-1主要表达在胚龄8～12d前肠腹侧脏壁中胚层心肌前体细胞,并向心管添加心肌细胞,参与流出道发育及心管成襻.11d后,第2生心区间充质细胞开始分化为升主动脉和肺动脉干平滑肌.