RASSF1基因不同转录本在肺癌组织中的转录表达及临床意义

目的　探讨RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达情况及其临床意义。方法采用RT PCR方法检测 5 1例肺癌癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B及RASSF1CmRNA的表达情况。结果　 (1) 3种不同转录本在癌旁正常肺组织中均表达 ;在癌组织中 ,RASSF1A及RASSF1B存在较高的表达缺失 ,其表达缺失率分别为 5 4 .9% (2 8/ 5 1)和 37.3% (19/ 5 1) ,RASSF1C则全部表达。 (2 )RASSF1A表达与肺癌淋巴结转移及病理分期有关 ,淋巴结转移者及晚期病例均存在较高的RASSF1A表达缺失 (P <0 .0 5 )。 (3)RASSF1B和RASSF1C表达与肺癌分期、组织学类型、分化程度及吸烟指数等均无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论　RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达存在明显差异 ,其中转录本A与肺癌淋巴结转移及病理分期相关 ,是一新型肺癌抑癌基因。     

WT1基因不同转录本的生物学功能及其在造血分化中的作用

 WT1基因是转录因子白血病发病机制的研究热点之一。通过选择性剪接可以产生四种主要转录本,各转录本表达水平差异及相互之间比例改变可能与细胞增生、分化及凋亡等过程有关。WT1在正常骨髓中低表达而在白血病细胞中异常表达,提示其在造血分化过程中可能起重要作用。     

多药耐药基因及相关蛋白基因在急性白血病中的表达

多药耐药基因（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ,ｍｄｒ１）和多药耐药相关蛋白基因（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ—ａｓｏｃｉａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅ,ＭＲＰ）的过度表达是引起急性白血病（ＡＬ）多药耐药（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒ...     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL—60,K562生长的抑制作用

目的 探索肿瘤抑制基因Ｐ５２对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法 选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０,Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果 ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ ｃＤＮＡ表达。     

钙黏蛋白相关基因在慢性粒细胞白血病中的表达及其作用

目的研究钙黏蛋白（Cad）相关基因在慢性粒细胞白血病（CML）不同发展时期患者骨髓单个核细胞（BM-MNC）中的表达,探讨Cad相关基因在CML发展中的作用。方法收集2013年12月至2014年12月长治医学院附属和济医院收治的48例CML患者的骨髓标本,其中慢性期29例,进展期19例。应用实时定量反转录一聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测所有患者BM-MNC中上皮型钙黏蛋白（E．Cad）和神经元型钙黏蛋白（N-Cad）基因的相对表达量,并对结果进行分析。结果CML患者BM-MNC中均可检测到E-Cad、N-Cad基因的表达。E-Cad基因在CML进展期患者中的相对表达量低于慢性期患者（0．20±0．35比1．19±0．87,P〈0．01）,而N-Cad基因在进展期患者中的相对表达量高于慢性期患者（0．89±0．45比0．57±0．47,P〈0．05）。E-Cad基因表达与外周血原始细胞比例呈负相关（r=-0．705,P〈0．01）。结论E-Cad、N-Cad基因表达与CML的疾病进展相关,其表达水平可作为评估疾病进展风险的指标之一。     

Fhit基因在白血病中的表达

目的探讨Fhit基因在白血病中异常表达的临床意义及其机制。方法收集白血病患者骨髓117例,非白血病患者骨髓28例作为对照组,采用RT-PCR检测Fhit基因mRNA的表达情况、甲基化特异性PCR（MSP）检测Fhit基因启动子区的甲基化情况;探讨临床各因素与FhitmRNA及基因异常甲基化结果的关系以及Fhit基因甲基化状态与其基因mRNA表达之间的关系。结果117例白血病患者中,60例（51.28%）不表达Fhit mRNA的白血病骨髓中有45例存在Fhit基因启动子区甲基化,57例（48.72%）白血病骨髓Fhit mRNA阳性表达,仅8例存在甲基化;对照组中Fhit基因mRNA表达27例（96.43%）,均未见甲基化现象。Fhit基因在白血病组中mRNA的表达以及甲基化状态与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。在临床各参数中,Fhit基因mRNA的表达和甲基化与幼稚细胞多少和肝脾、淋巴结肿大有关,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Fhit基因的甲基化可能导致其基因的沉默使其mRNA减少或缺失,在白血病的发病机制中起一定作用,Fhit基因甲基化的检测对白血病的诊断和疗效判定可能有一定意义。     

BRCA1基因在白血病中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　研究白血病患者的乳腺癌易感基因1（BRCA1）的表达水平及临床意义。方法　采用荧光定量反转录-聚合酶链（RT-PCR）方法检测急性淋巴细胞白血病（ALL-L2）患者18例（初治13例,复发5例）、慢性粒细胞白血病（CML）慢性期患者20例、健康对照15名中的BRCA1的表达。结果　初治ALL患者13例中,BRCA1 mRNA表达减低或缺失6例（46.1 %）,初治ALL组表达水平低于健康对照组（P＜0.05）;ALL完全缓解9例中,BRCA1 mRNA表达减低3例（33.3 %）,ALL完全缓解患者表达水平高于初治ALL组（P＜0.05）,与健康对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;ALL复发组5例,BRCA1 mRNA表达全部减低或缺失,ALL复发组表达水平低于健康对照组（P＜0.05）,与初治ALL组差异无统计学意义（P＞0.05）。CML患者BRCA1 mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论　BRCA1在不同类型白血病中的表达不同,提示其与白血病的预后密切相关,并可指导临床诊断和治疗。     

黏蛋白1基因在白血病中的表达及其临床意义

 目的　探讨各种类型白血病中黏蛋白1（MUC1）基因的表达及其在临床诊断、预后及治疗上的意义。方法　运用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对白血病患者42例和非血液恶性疾病患者或正常人24例的骨髓中MUC1基因的表达进行检测。结果　急性白血病MUC1基因的表达率（43.3 %）显著高于对照组（8.3 %）（P＜0.01）,慢性白血病MUC1基因的表达率（54.5 %）亦高于对照组（8.3 %）（P＜0.05）。急性白血病MUC1基因表达阳性者完全缓解率（16.7 %）低于阴性表达者的完全缓解率（75.0 %）,差异有统计学意义（P＜0.05）。血液学完全缓解（CR）患者10例中检测出MUC1基因表达5例。结论　MUC1基因作为一种肿瘤标志物,在各种类型、亚型白血病患者中高表达,可辅助白血病的诊断,MUC1基因表达的RT-PCR分析法监测白血病微小残留病,较常规血细胞形态学具有更高的敏感性,可为白血病预后的观测指标。     

EDAG在白血病细胞系K562中的细胞内自激因子作用

目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无血清培养条件下,过表达EDAG的K562细胞的增生能力明显高于两组对照细胞,并且有c—myb和bcl-2mRNA表达的显著上调。结论过表达的EDAG可以起细胞内自激因子作用。为核蛋白异常表达可以起细胞内自激因子作用提供了实验证据。     

EDAG-1在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达

背景与目的：EDAG-1(embryonic develop associated gene1,EDAG-1)定位于9q22,在造血细胞特异表达,并与造血调控关系密切。本研究通过检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞中的表达和编码区基因结构,探讨EDAG-1与白血病和淋巴瘤发病的关系。方法：选用白血病或淋巴瘤细胞株共15种,采用RT-PCR法检测表达EDAG-1基因的细胞株,并回收该基因cDNA编码区片段,构建相应的重组质粒并测序分析编码区突变情况。通过Northern blot和Western blot分别确证EDAG-1 mRNA和蛋白在白血病和淋巴瘤细胞株中的表达情况,利用Southern blot检测EDAG-1在白血病细胞和淋巴瘤细胞株中基因重排和扩增情况。结果：红系(K-562、HEL)、巨核系(DAMI、MEG-01)、Jurkat细胞在mRNA、蛋白水平均高表达EDAG-1,但其编码区结构未发现异常,也没有EDAG-1基因组的扩增和重排。发现HL-60细胞缺失EDAG-1,HuT78细胞EDAG-1发生重排。结论：EDAG-1可能与红系、巨核系白血病的发病机制有关,该基因激活的机制可能与编码区突变无关。     

ADVANCES IN THE STUDY ON LEUKEMIA STRAINS AND LEUKEMIA CELL LINES IN CHINA

ＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＴＨＥＳＴＵＤＹＯＮＬＥＵＫＥＭＩＡＳＴＲＡＩＮＳＡＮＤＬＥＵＫＥＭＩＡＣＥＬＬＬＩＮＥＳＩＮＣＨＩＮＡＣｈｅｎｇＬｉ；程立；ＹｉｎＬｉａｎｈｕａ；殷莲华（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，ＳｈａｎｇｈａｉＭ...     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

 目的 探讨WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 运用RT-PCR方法检测 WT1基因在50例白血病患者中的表达。结果 急性髓细胞白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）WT1表达阳性率分别为77.3 %（17／22）和54.5 %（6／11）。慢性粒细胞白血病（CML）慢性期WT1表达均阴性,急变期55.6 %（5／9）表达阳性。WT1阳性患者化疗缓解率低于阴性患者（分别为31.3 %和69.2 %,P <0.05）。结论 WT1在白血病患者中高表达,可作为临床评估预后、检测微小残留病（MRD）的标志。     

人急性淋巴细胞白血病细胞系的研究进展

急性淋巴细胞白血病(ALL)是一组来自B系或T系淋巴前体细胞的恶性克隆性疾病.ALL不仅在儿童急性白血病中最为常见,亦占成年人急性白血病的20％,其恶性程度高,治疗效果差,缓解率低.有关生物学特性及药理学的研究对改善ALL患者生存率及提高生命质量具有重要作用.来源于ALL患者的人ALL细胞系为探索ALL的发生、演变机制和相关药物研发提供了不可替代的细胞模型.目前已建立的人ALL细胞系几乎涵盖大部分ALL的免疫分型及特异性染色体异常,对推动ALL遗传学诊断及靶向治疗进展起到重要作用.文章对人ALL细胞系的建系进展,尤其是携带费城染色体及MLL基因重排的人ALL细胞系进行综述.     

Relationship between cyclin D1 and p21(Waf1/Cip1) during differentiation of human myeloid leukemia cell lines

Expression of cell cycle-regulating genes was studied in human myeloid leukemia cell lines ML-1, ML-2 and ML-3 during induction of differentiation in vitro. Myelomonocytic differentiation was induced by phorbol ester (12-o-Tetradecanoyl-phorbol-13-acetate, TPA), tumor necrosis factor (TNF) or interferon γ (INFγ), or their combination. Differentiation (with the exception of TNF alone) was accompanied by inhibition of DNA synthesis and cell cycle arrest. Inhibition of proliferation was associated with a decrease in the expression of cdc25A and cdc25B, cdk6 and Ki-67 genes, and with increased p21^Waf1/Cip1 gene expression, as measured by comparative RT-PCR. Expression of the following genes was not changed after induction of differentiation: cyclin A1, cyclin D3, cyclin E1 and p27^Kip1. Surprisingly, cyclin D1 expression was upregulated after induction by TPA, TNF with IFNγ or BA. Cyclin D2 was upregulated only after induction by BA. The results of the expression of the tested genes obtained by comparative RT-PCR were confirmed by quantitative real-time (RQ) RT-PCR and Western blotting. Quantitative RT-PCR showed as much as a 288-fold increase of cyclin D1 specific mRNA after a 24 h induction by TPA. The upregulation of cyclin D1 in differentiating cells seems to be compensated by the upregulation of p21^Waf1/Cip1.

These results, besides others, point to a strong correlation between the expression of cyclin D1 and p21^Waf1/Cip1 on the one hand and differentiation on the other hand in human myeloid leukemic cells and reflect a rather complicated network regulating proliferation and differentiation of leukemic cells.     

蛋白酶体抑制剂联合亚砷酸对白血病细胞株NB4的凋亡诱导效应

目的 观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(BOR)联合急性早幼粒细胞白血病(APL)凋亡诱导剂亚砷酸(ATO)对NB4细胞株的作用.方法 BOR单独及联合ATO作用于NB4细胞,应用MTT法观察细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;RT-PCR方法检测survivin mRNA的表达.结果 MTT法显示BOR对NB4细胞具有生长抑制作用,且能增强ATO对细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测可见明显凋亡峰及G2/M期细胞周期阻滞;RT-PCR检测发现两药单独应用均能下调survivin mRNA的表达,联合作用时具相加效应.结论 ATO与BOR联合作用较单独作用有更强的细胞杀伤及诱导细胞凋亡活性,细胞周期G2/M期的阻滞及survivin mRNA表达的下降是蛋白酶体抑制剂及亚砷酸对白血病细胞株联合诱导凋亡的可能机制.     

ANALYSIS OF APOPTOSIS BY DNA END LABELING METHOD (TDT) IN LEUKEMIA CELL LINES HL-60 AND U937

Apoptosisisakindofcelldeathrecognizablebyaseriesofspecializedchangesinmorphological,biochemicalandmolecularbiologicalforms.Apoptosisisanactiveprocessofcelldestruction,characterizedbycellshrinkage,chromatinaggregationwitheXtensivegenomicfragmentation,crescentbodyformingbychromosomepyknosisalongthenuclearmargin.Intheapoptosis,endouncleaseasedependentCa2 andMg2 isactivated,thisenzymemakechromosomedegradedatthelinkersectionstofragmentsequivalenttosingleandmultiplenucleosomes.Thelatterarerevealeda…     

Fas在6种泌尿生殖系统肿瘤细胞系中的表达

背景与目的：在肿瘤细胞中Fas蛋白的表达是研究治疗肿瘤及判断愈后的重要基础,本研究检测Fas在泌尿生殖系统恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用流式细胞直接免疫荧光法、Western blot和Nortern杂交对6种泌尿生殖恶性肿瘤细胞系[膀胱癌（T24,EJ,BIU-87）、肾癌（GRC-1,RCC-949）、前列腺癌（PC-3M)和一种原代培养正常肾间质成纤维细胞Fas分子的表达进行了检测。结果：直接免疫荧光流式细胞术检测细胞表面Fas在6种泌尿生殖恶性肿瘤细胞系均有表达,阳性率波动于16.51%-49.13%,但与原代培养的正常肾间质成纤维细胞（阳性率77.98%)相比,其阳性细胞百分率较低,细胞表面特异性免疫荧光强度较弱;6种泌尿生殖肿瘤细胞系Fas蛋白的表达均可用Western blot法检测到一条分子量约48kDa的清晰条带,但表达强度不同,以BIU-87细胞最弱,而T24细胞最明显;只有在BIU-87细胞系中未能用Northern杂交检测到Fas mRNA的表达,其它细胞系均有不同程度的表达,以PC-3M、T24细胞系较强、GRC-1、RCC-949细胞系次之,EJ细胞仅有微弱表达,正常肾间质成纤维细胞RFb表达较强的Fas mRNA。结论：Fas广泛表达于泌尿生殖系恶性肿瘤培养细胞和正常细胞中,但在肿瘤中的表达情况明显低于正常细胞,这可能是泌尿生殖系统恶性肿瘤的产生和进展的重要原因之一。     

Poly(ADP-ribose) polymerase-1 polymorphisms, expression and activity in selected human tumour cell lines

Background:

Poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1) is a DNA-binding enzyme activated by DNA breaks and involved in DNA repair and other cellular processes. Poly(ADP-ribose) polymerase activity can be higher in cancer than in adjacent normal tissue, but cancer predisposition is reported to be greater in individuals with a single-nucleotide polymorphism (SNP) V762A (T2444C) in the catalytic domain that reduces PARP-1 activity.

Methods:

To resolve these divergent observations, we determined PARP-1 polymorphisms, PARP-1 protein expression and activity in a panel of 19 solid and haematological, adult and paediatric human cancer cell lines.

Results:

There was a wide variation in PARP activity in the cell line panel (coefficient of variation, CV=103%), with the lowest and the highest activity being 2460 pmol PAR/10⁶ (HS-5 cells) and 85 750 pmol PAR/10⁶ (NGP cells). Lower variation (CV=32%) was observed in PARP-1 protein expression with the lowest expression being 2.0 ng μg⁻¹ (HS-5 cells) and the highest being 7.1 ng μg⁻¹ (ML-1 cells). The mean activity in the cancer cells was 45-fold higher than the mean activity in normal human lymphocytes and the PARP-1 protein levels were 23-fold higher.

Conclusions:

Surprisingly, there was no significant correlation between PARP activity and PARP-1 protein level or the investigated polymorphisms, T2444C and CA.