基因治疗靶向载体研究进展（二）

针对基因治疗安全性,国内外研究的重点之一,是寻找理想的靶向表达载体。作了构建靶向转录载体和靶向转录载体外,有利用可诱导的自动２了成人工合成的转录因子,构建靶向诱导系统,以诱导目的基因按一定的时相表达。本文综述有关基因治疗靶向诱导载体的研究进展。     

肿瘤基因治疗的病毒载体研究进展

采用病毒载体进行基因转移是目前肿瘤基因治疗中的主要技术手段。本文主要介绍逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒、痘苗病毒等载体的特性、载体构建、目的基因的表达调控、靶向性方面的研究进展，探讨不同载体的优势与不足，以期在基因治疗的实施中选择合适的载体进行基因转移。     

AFP启动子调控PNP载体的构建及分析

目的分别构建三种启动子调控的大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)基因表达载体,检测、分析三者的表达差异.方法构建三种启动子调控的PNP基因表达载体.将三个PNP基因载体转染不同细胞株,检测PNP基因在各细胞株中表达,分析三者表达的特点.结果AF 0.3和[HRE]AF调控的PNP基因在AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而且后者在AFP阴性肝癌细胞中也实现了靶向性表达.结论三种PNP基因表达载体的成功构建为利用PNP/MeP-dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗打下坚实的基础.     

肿瘤靶向基因输送载体的研究进展

基因治疗是通过引入外源性核酸永久或暂时取代缺陷基因的一种新兴技术。肿瘤的基因治疗是继化学治疗之后的一种极有潜力的治疗方法。近年来，全球进行了大量的肿瘤基因治疗临床试验。但基因治疗常常因缺乏选择性产生非特异性毒性。基因输送载体是肿瘤基因治疗的关键，理想的基因输送载体应该对靶细胞具备高效的基因转导性能，并对人体安全性高。如何提高基因输送的靶向性，开发高效低毒的基因输送载体是目前肿瘤基因治疗的一项重要挑战。国内外学者进行了大量研究开发新型靶向性载体和技术来提高基因表达的特异性。本文总结了目前常用的肿瘤靶向基因输送载体及相应的输送策略。     

两种甲胎蛋白启动子调控下PNP基因载体的克隆和表达差异性分析

目的:分别构建甲胎蛋白(α- fetoprotein,AFP)启动子AF 0 3和AFP杂合启动子[HRE]AF调控的 PNP基因表达载体,检测并分析两者的表达差异性。方法: 将AF 0 3和[HRE]AF启动子插入载体 pcDNA- 3 .0 中,构建肝癌特异表达载体pAF- 0. 3 和 p[HRE]AF;将 PNP基因分别插入 pAF -0 .3 和 p[HRE] AF中,构建两启动子调控的 PNP基因表达载体;通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。用脂质体介导法将两重组体转染不同细胞株,RT PCR检测 PNP基因在各细胞株中表达,分析两者表达的特点。结果: 两目的片段均正确插入相应载体,pAF- 0 3/PNP中的 PNP基因在 AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达,而p[HRE] AF/PNP 中的 PNP 基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了靶向性表达。结论: 两种 PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效、特异性的治疗载体。两者的成功构建为利用PNP/Mep -dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗奠定了坚实的基础。     

基因治疗载体的研究进展

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗功的关键.基因治疗载体的研究从逆成转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等,其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等.但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的,还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体.     

肿瘤靶向基因治疗中基因转移系统的研究

目的基因定向导入靶细胞并有效表达是涉及肿瘤基因治疗安全性与有效性的关键之一.本文从基因定向转移技术及表达载体的改建、调控等几个方面对肿瘤靶向基因治疗中的基因转移系统作一综述.     

靶向mrp1基因shRNA表达载体构建

目的:构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体.方法:根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2.1U6-neo质粒上,构建重组载体.经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果.结果:成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体.结论:为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础.     

两种甲胎蛋白启动子调控下PNP基因载体的克隆和表达差异性分析

目的：分别构建甲胎蛋白(α-fetoprotein，AFP)启动子AF0．3和AFP杂合启动子[HRF]AF调控的PNP基因表达载体，检测并分析两者的表达差异性。方法：将AF0．3和[HRE]AF启动子插入载体pcDNA3．0中，构建肝癌特异表达载体pAF0．3和p[HRE]AF；将PNP基因分别插入pAF0．3和p[HRE]AF中，构建两启动子调控的PNP基因表达载体；通过酶切、PCR及测序鉴定各重组体。用脂质体介导法将两重组体转染不同细胞株．RT-PCR检测PNP基因在各细胞株中表达，分析两者表达的特点。结果：两目的片段均正确插入相应载体，pAF0．3/PNP中的PNP基因在AFP阳性肝癌细胞中实现了靶向性表达，而p[HRE]AF/PNP中的PNP基因则在AFP阳性和阴性肝癌细胞中实现了靶向性表达。结论：两种PNP基因表达载体是肝癌基因治疗中新型、高效、特异性的治疗载体。两者的成功构建为利用PNP Mep-dR系统进行肝癌的靶向性基因治疗奠定了坚实的基础。     

Survivin靶向microRNA表达载体的构建和鉴定

目的：设计并构建Survivin靶向的microRNA表达载体，观察其对Survivin基因的抑制作用。方法：以Survivin为靶基因，根据pPRIME载体要求，设计针对Survivin的microRNA序列，PCR扩增获得目的片段并克隆到载体中，序列正确的载体脂质体转染Hela细胞，RT—PCR和Western blotting检测其对Survivin的抑制作用。结果：用Xho I和EcoR I双酶切鉴定、DNA测序证实构建的microRNA表达载体序列正确，后者在mRNA和蛋白水平上均能明显抑制Hela细胞中Survivin的表达。结论：Survivin靶向microRNA表达载体构建成功，并能抑制靶基因的表达，为其在肿瘤基因治疗中的应用奠定了基础。     

靶向mrp1基因shRNA表达载体构建

目的：构建靶向mrp1基因的shRNA表达载体。方法：根据mrp1基因序列设计并合成编码shRNA的DNA模板,将其定向克隆到psilencer2．1U6-neo质粒上,构建重组载体。经菌落PCR和DNA测序分析检测重组载体构建结果。结果：成功构建靶向mrp1基因shRNA表达载体。结论：为进一步研究mrp1基因在肺癌多药耐药中的作用以及探索肺癌的基因治疗奠定了基础。     

厌氧菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究进展

实体瘤内存在低氧坏死区域，故可利用具有超低氧特性的厌氧菌作为肿瘤基因治疗的转移载体。研究表明厌氧菌作为基因载体肿瘤靶向性较强，且使用较安全，是一种新型的基因治疗转移载体。现综述厌氧菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究进展。     

肿瘤基因治疗的靶向性策略

肿瘤基因治疗的靶向性问题直接关系到治疗的成败。这种靶向性的策略包括目的基因对肿瘤细胞的靶向转移，目的基因在肿瘤细胞中的特异表达，以及基因修饰细胞分泌的肿瘤靶向治疗分子。对现有病毒或非病毒载体进行改造，由与载体融合的抗体或配体与肿瘤表面抗原或受体的相互作用可以实现目的基因的靶向转移；肿瘤或组织特异性调控元件的应用，以及一些物化、生理因素的诱导则能使治疗基因特异地在肿瘤细胞中表达并发挥作用。     

靶向腺病毒

本文介绍了靶向腺病毒与传统腺病毒载体相比之优势以及两种不同的靶向腺病毒构建策略,靶向腺病毒需要满足两个条件,一是去除天然嗜性,二是靶向新受体。有两种途径可以到这一目的,“双组分体系”中,腺病毒与双特异分子结合,该双特异分子可同时去除天然嗜性和靶向新受体。“单组分体系”中,病毒颗粒经基因修饰后,不再与天然受体结合,并加入了新配基。双组分体系可灵活地通过某特受体而达到靶向效果,单组分体系则更适于作用为基因治疗药物。     

载体重靶向与肿瘤基因治疗

病毒载体的靶向性问题是肿瘤基因治疗中的重要研究热点,靶向病毒载体是提高肿瘤基因治疗安全性和有效性的重要途径。载体的靶向策略很多．载体重靶向就是其中重要的一种。本文就近年来在肿瘤基因治疗领域中关于载体重靶向问题的研究进展进行综述,并试图对载体重靶向的途径和研究策略进行归纳和总结。     

厌氧菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究进展

实体瘤内存在低氧坏死区域，故可利用具有趋低氧特性的厌氧茵作为肿瘤基因治疗的转移载体。研究表明厌氧茵作为基因载体肿瘤靶向性较强，且使用较安全，是一种新型的基因治疗转移载体。现综述厌氧菌作为肿瘤基因治疗转移载体的研究进展。     

基因治疗载体的研究进展

载体携带目的基因的靶向高效表达是基因治疗成功的关键。基因治疗载体的研究从逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒和慢病毒等病毒载体发展到如今还处在研究阶段的人工染色体载体、细菌载体等，其中病毒载体又新出现了牛痘病毒、杆状病毒、EB病毒、水疱性口炎病毒、人巨细胞病毒、肝炎病毒以及杂交体病毒载体等。但是现有的载体都还不能达到长期稳定表达外源基因的目的，还需要对现有载体做进一步的改进或开发出新的载体。     

基因治疗中非病毒载体的基因导入方法

随着基因治疗研究的深入,人们发现,基因治疗的关键是选择恰当的载体及导入方法,使目的基因获得靶向性导入,稳定有效的表达,可控性增强。目前用于基因治疗的载体有两种:病毒载体和非病毒载体。虽然基因治疗的临床实验研究多采用病毒载体,但是不同的病毒载体由于各自存在许多不足     

厌氧菌肿瘤靶向性和体内安全性研究进展

肿瘤的基因治疗是现代肿瘤治疗的一大热点，而基因载体的靶向性问题和安全性问题一直是基因治疗发展和应用中的障碍。早在150年前趋乏氧区定植和增殖且非致病性的厌氧菌就开始被用于肿瘤治疗，但结果并不明确，而且对细菌毒性感染无力控制，使得这方面的研究一度处于低谷。最近几年，随着肿瘤特异性靶向菌株的发现和基因组序列测定技术、基因工程技术的发展，人们对厌氧菌的兴趣重燃，将它用于基因治疗的载体领域。现就厌氧菌肿瘤靶向性和体内安全性研究进展作一综述。     

骨肉瘤基因治疗的研究进展

与手术、化疗等骨肉瘤传统的治疗方法不同,骨肉瘤的基因治疗是通过基因工程的方法逆转癌细胞的恶性状态而达到治疗目的.近年来,有关骨肉瘤基因治疗的研究在基因治疗方法、基因载体、载体导入途径和靶向调控等方面取得了一些进展,基因治疗有望成为一种治疗骨肉瘤较理想的方法.