非缺失型HbH病因突变类型的研究

采用选择性聚合酶链反应扩增技术及等位基因特异寡核苷酸探针斑点杂交，分析了１２例经血液学检测及基因图谱分析确认为非缺失型ＨｂＨ病的样品。结果显示，１２例非缺失型ＨｂＨ病样品中，Ｈｂ Ｃｏｎｓｔａｎｔ Ｓｐｒｉｎｇ８例（６６．７％），Ｈｂ广西２例（１６．７％），２例为未知突变类型（１６．７％），对这２例未知样品的ａ２基因外显子Ⅲ及其旁侧的突变热点区域进行了扩增、克隆和测序，结果发现这２例的ａ２基因密码     

应用PCR－ASO方法对广东地区非缺失型HbH病的检测

为筛查广东地区ＨｂＨ病的基因型，用两对引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）选择性扩增α２珠蛋白基因外显子Ⅲ３１８ｂｐＤＮＡ片段和３２７ｂｐＤＮＡ片段，从７２例广东籍，经血液学确诊为ＨｂＨ病的ＤＮＡ标本中筛查出非缺失型ＨｂＨ病１０例，占ＨｂＨ病的１３．９％；缺失型ＨｂＨ病６２例，占ＨｂＨ病的８６．１％。非缺失型ＨｂＨ病α２珠蛋白基因外显子Ⅲ３１８ｂｐＰＣＲ产物，用两对寡核苷酸探针（ＨｂＣＳ－正常和Ｈｂ广西－正常）进行斑点杂交，检出ＨｂＣＳ８例，Ｈｂ广西２例。提示广东地区ＨｂＨ病以基因缺失型为主，非缺失型ＨｂＨ病基因突变大多发生在α２基因     

ARMS法快速鉴定中国人非缺失型α地中海贫血基因型

已报道的非缺失型α地中海贫血（地贫）基因点突变类型有３０多种,迄今在中国人中只鉴定出２种突变基因,即ＨｂＣｏｎｓｔａｎｔＳｐｒｉｎｇ（ＨｂＣＳ）和ＨｂＱｕｏｎｇＳｚｅ（ＨｂＱＳ）,以ＨｂＣＳ多见,两者共占ＨｂＨ病的４５．８％～５８．９％。用聚合酶链反...     

应用PCR—ASO方法对广东地区非缺失型Hb H病的检测

为筛查广东地区Ｈｂ Ｈ病的基因型，用两对引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）选择性扩增α２球蛋白基因外显子Ⅲ３１８ｂｐＤＮＡ片段和３２７ｂｐＤＮＡ片段，从７２例广东籍，经血液学确诊为Ｈｂ Ｈ病的ＤＮＡ标本中筛查出非缺失型Ｈｂ Ｈ病１０例，占Ｈｂ Ｈ病的１３．９％；缺失型Ｈｂ Ｈ病６２例，占Ｈｂ Ｈ病的８６．１％。非缺失型Ｈｂ Ｈ病α２珠蛋白基因外显子Ⅲ３１８ｂｐ ＰＣＲ产物，用两对寡核苷酸探针（Ｈｂ ＣＳ－     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

两种常见葡萄糖－6－磷酸脱氢酶基因突变检测及临床分析

通过扩增葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）基因第１０，１１，１２，１３外显子６３９ｂｐＤＮＡ片段结合寡核苷酸探针斑点杂交技术，在４０例广西籍Ｃ６ＰＤ缺陷者中检测中国人常见Ｇ６ＰＤ突变ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）。结果检出ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）男性半合子１２例，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）男性半合子１０例，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）女性纯合子１例，ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）女性双重杂合子１例。ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）突变的频率为３１．０％，ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）突变的频率为３１．０％。ｃＤＮＡ１３７６（Ｇ→Ｔ）和ｃＤＮＡ１３８８（Ｇ→Ａ）两种突变均可导致新生儿高胆红素血症、急性溶血、遗传性非球形细胞性溶血性贫血、无症状基因突变携带者等临床表现。     

对142例β地中海贫血基因携带者进行缺失型α地中海贫血1基因分析

目的了解广东地区常见的β地中海贫血（地贫）与α地贫１复合存在的发生率。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１４２例经筛查确定为轻型β地贫的成人血样ＤＮＡ进行α地贫１基因检测,阳性者又应用突变引物ＰＣＲ特异扩增或用等位基因特异寡核苷酸探针反向点杂交（ＡＳＯ／ＲＤＢ）技术,确定其β地贫基因突变类型。结果１４２例中有１３例轻型β地贫样本同时合并有α地贫１基因,占总数的９１５％,其β地贫基因的突变类型分别是：ＣＤ４１４２（－ＴＣＴＴ）突变５例,ＩＶＳ２６５４（Ｃ→Ｔ）突变３例,ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变２例,ＣＤ７１７２（＋Ａ）、ＣＤ４３（Ｇ→Ｔ）和－２８（Ａ→Ｇ）突变各１例。结论β地贫复合α地贫１的双重杂合子在轻型β地贫个体中的发生率较高,是该地区在地贫的遗传咨询和产前诊断工作中值得重视的一个问题。     

应用限制性内切酶分析PCR产物快速诊断Hb CS基因突变

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）选择性扩增包括ＨｂＣＳ突变（ＴＡＡ→ＣＡＡ）位点在内的ａ２珠蛋白基因片段，利用与该点突变密切相关的天然Ｔｒｕ９１位点和由ＰＣＲ引物介导出和人工ＨｉｎｆＩ位点的变化可识别ＨｂＣＳ突变等位基因和野生型等位基因。ＰＣＲ产物直接经Ｔｒｕ９１或ＨｉｎｆＩ消化及电泳分析后即可对样品ＤＮＡ中是否存在ＨｂＣＳ空变及其基因型作出诊断。此法简便、省时，可用于基因筛查和产前诊断。     

１０ ３１３ 例新生儿听力与耳聋易感基因联合筛查结果分析

摘要：目的 对扬州地区 １０ ３１３ 例新生儿进行听力与耳聋易感基因联合筛查，探讨该地区常见耳聋基因突变位点分布及联合 筛查的意义。方法 对２０１８ 年３ 月至２０２０ 年１２ 月在扬州市妇幼保健院出生的１０ ３１３ 例新生儿进行听力与耳聋易感基因联 合筛查。听力筛查包括耳声发射和自动听性脑干反应；耳聋易感基因检测采用 ＰＣＲ 导流杂交法，检测 ４ 个常见耳聋易感基因 的 １３ 个位点，包括 ＧＪＢ２ 基因（ｃ． ３５ｄｅｌＧ，ｃ． １７６ｄｅｌ１６，ｃ． ２３５ｄｅｌＣ，ｃ． ２９９ｄｅｌＡＴ，ｃ． １５５ｄｅｌＴＣＴＧ），ＳＬＣ２６Ａ４ 基因（ｃ． ２１６８Ａ ＞ Ｇ， ｃ．９１９ ２Ａ＞Ｇ，ｃ．１２２９Ｃ＞Ｔ），ＧＪＢ３ 基因（ｃ．５３８Ｃ＞Ｔ），线粒体 １２ＳｒＲＮＡ（ｍ．１５５５Ａ＞Ｇ，ｍ．１４９４Ｃ＞Ｔ）和线粒体 ｔＲＮＡ （ｍ．７４４５Ａ＞Ｇ， ｍ．１２２０１Ｔ＞Ｃ）。应用 Ｓａｎｇｅｒ 测序对单个位点基因筛查阳性的听力损失患儿进行验证。结果 １０ ３１３ 例新生儿中听力初筛通 过率为８７．２６％，复筛为 ８１．６１％，检出听力损失者 ３８ 例。共检出耳聋基因突变 ５７７ 例，携带率为 ５．５９％，ＧＪＢ２、ＳＬＣ２６Ａ４、ＧＪＢ３ 和 １２ＳｒＲＮＡ 基因的检出率分别为 ３． ０３％、１． ８９％、０． ２４％ 和 ０． ３２％。联合筛查发现耳聋易感基因突变组听力损失发生率 （２．７７％）明显高于阴性组（０．２３％）。结论 突变位点 ＧＪＢ２ ｃ．２３５ｄｅｌＣ 和 ＳＬＣ２６Ａ４ ｃ．９１９ ２Ａ＞Ｇ 是扬州地区新生儿耳聋易感基 因的主要突变类型。大规模开展听力与耳聋易感基因联合筛查提高了新生儿聋病或高危聋儿的检出率，有利于聋病的防治 和干预。     

银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌p53基因的突变

目的建立银染单链构象多态性技术检测原发性肝癌ｐ５３基因突变。方法用银染及单链构象多态性（ＳＳ－ＳＳＣＰ）技术检测１６９例原发性肝癌的癌变及癌旁正常组织ｐ５３基因第７，８外显子（Ｅ７，Ｅ８）的突变，并进行ＤＮＡ测序，鉴定突变位点。结果４例患者ｐ５３基因Ｅ７中第２４９号密码子第３号碱基发生了Ｇ：Ｃ→Ｔ：Ａ的颠换（ＡＧＧ→ＡＧＴ），２例患者Ｅ８中第２７３号密码子第１号碱基发生了Ｃ：Ｇ→Ｔ：Ａ的转换（ＣＧＴ→ＴＧＴ），总的突变率达３８％（６／１６）；６例ｐ５３基因突变的癌变组织中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的整合率为５／６，８例未发生ｐ５３基因突变的癌变组织中ＨＢＶ的整合率仅为１／８，两者相比差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论ｐ５３基因突变是原发性肝癌发生发展过程中的常发事件，且与ＨＢＶ的慢性感染密切相关。进一步研究有利于探讨原发性肝癌的发病机制，并为基因治疗提供依据。