膀胱癌P53,ras基因表达的研究

膀胱癌ｐ５３、ｒａｓ基因表达的研究吴长利，赵玉干，马腾骧天津市医科大学第二医院（天津市３００２１１）近年来实验研究表明，单一癌基因的活化与突变不能诱发肿瘤的发生与进展［１］。因此，肿瘤的发生与发展可能是多阶段、多基因协同作用的共同结果［２］。本文试图...     

Osteoglycin基因表达对小鼠肝癌细胞MMPs分泌能力的影响

[目的]探讨osteoglycin表达与肿瘤细胞分泌MMPs的关系。[方法]构建osteo-glycin真核表达载体osteoglycin反义表达载体,分别转染至小鼠肝癌Hca-F细胞及Hca-P细胞,评价淋巴环境中Hca-F细胞及Hca-P细胞表达osteoglycin与其分泌MMPs的关系。[结果]在含有淋巴结匀浆的培养环境中,转染osteoglycin真核表达载体的Hca-F细胞分泌MMPs显著降低;转染osteoglycin反义表达载体的Hca-P细胞分泌MMPs显著增加。[结论]高表达osteoglycin降低小鼠肝癌Hca-F细胞淋巴环境中MMPs分泌能力,低表达os-teoglycin提高小鼠肝癌Hca-P细胞淋巴环境中MMPs分泌能力。抑制肿瘤细胞MMPs分泌能力可能是osteoglycin调控转移机制之一。     

p21对肝癌细胞中survivin转录的影响及调控机制的探讨

目的 研究细胞周期依赖性激酶抑制蛋白p21对人肝癌细胞survivin转录抑制的调控作用,并探讨其相应机制.方法 使用多柔比星处理人肝癌细胞株HepG2,采用脂质体法将质粒pEGFP-C2-p21导入HepG2细胞,用G418筛选转染后的HepG2-p21和HepG2-pEGFP细胞;采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测p21、p53和survivin的mRNA表达;采用流式细胞仪分析转染后细胞周期的变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后E2F-1和p300的mRNA表达.结果 经多柔比星处理后,HepG2细胞中p21和p53 mRNA的表达先增高,然后逐渐降低;survivin mRNA的表达则相反.转染后,HepG2-p21细胞中p21 mRNA的表达明显增高,分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的2100.1倍和980.9倍;survivin mRNA的表达却明显降低,分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的0.5%和0.6%;p53 mRNA的表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测显示,HepG2-p21细胞的细胞周期明显阻滞在G0/G1期.HepG2-p21细胞中E2F-1和p300 mRNA的表达水平分别为0.75±0.04和0.18 ±0.06,与HepG2和HepG2-pEGFP细胞比较,含量均明显减低(P＜0.05).结论 p21可能通过抑制survivin的转录调控因子E2F-1和p300 mRNA的表达,从而抑制细胞中survivin的表达,并导致细胞出现G0/G1期阻滞.     

早期生长反应基因1敲除对肝癌组织基因表达谱的影响

目的：对比观察早期生长反应基因1（EGR-1）敲除大鼠与野生大鼠肝癌模型基因表达谱的变化,探讨EGR-1基因是否参与调控肝癌的生长与转移。方法：应用cDNA表达芯片对EGR-1基因敲除大鼠和野生大鼠肝癌模型的癌标本组织抽提的mRNA进行芯片杂交,并对两者的基因表达谱进行对比分析。将同一基因在一个模型中的表达高于另一个模型的3倍以上作为基因差异表达的判断标准。结果：野生大鼠肝癌模型与EGR-1敲除大鼠肝癌模型相比较,前者有25条已知基因和2条未知基因表达上调,而后者有41条已知基因和23条未知基因表达上调;其中包括与细胞增殖和肿瘤转移相关的重要基因。结论：EGR-1基因敲除可引起大鼠肝癌模型基因表达谱的明显变化;EGR-1很可能参与了肝癌细胞生长与转移的调控。     

Osteoglycin基因表达对小鼠肝癌细胞转移能力的影响

背景与目的:osteoglycin隶属富含亮氨酸小分子蛋白多糖基因家族成员,参与细胞生长、分化过程的调控.本研究探讨osteoglycin表达与肿瘤细胞转移的关系.方法:构建osteoglycin真核表达载体及反义表达载体,分别转染至小鼠肝癌Hca-F细胞及Hea-P细胞,用RT-PCR及Western印迹法分析osteoglycin表达.体外实验评价osteoglycin表达对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响;体内实验观察osteoglycln表达对肿瘤细胞淋巴道转移能力的影响.结果:高表达osteoglycin可显著降低Hea-F细胞迁移能力(高、低表达osteoglycin细胞通过PET膜数量分别为45±6及90±5,P<0.01)及侵袭能力(高、低表达osteoglycin细胞通过PET膜数量分别为25±7及65±10,P<0.01),体内实验显示其淋巴结转移率显著下降[高、低表达osteoglycin细胞淋巴结转移率分别为53.3%(16/30)及80%(24/30),P<0.05].有效抑制osteoglycin表达后,可显著提高Hca-P细胞迁移能力(低、高表达osteoglycin细胞通过PET膜数量分别为46±7及15±6,P<0.01)及侵袭能力(低、高表达osteoglyein细胞通过PET膜数量分别为31±8及8±4,P<0.01),体内实验显示其淋巴结转移率显著增高[低、高表达osteoglycin细胞淋巴结转移率分别为46.7%(14/30)及20%(6/30),P<0.05].结论:高表达osteoglycin降低小鼠肝癌Hca-F细胞转移能力,低表达osteoglycin提高小鼠肝癌Hca-P细胞转移能力.osteoglycin可能作为转移抑制基因参与肿瘤淋巴结转移过程的调控.     

EGF+61基因多态性与肝细胞肝癌易感性的Meta分析

目的:系统评价表皮生长因子(EGF)+61基因多态性与肝细胞肝癌(HCC)易感性的关系.方法:计算机检索PubMed、MEDLINE和中国期刊全文数据库(CJFD)及万方数据库1980-2011年发表的有关EGF+ 61基因多态性与HCC易感性关系的相关文献.要求所纳入文献均为相关的病例对照研究,基因型在对照群体中的分...     

肝细胞肝癌中T细胞转录因子4基因表达及突变

目的 :研究人T细胞转录因子 4(hTcf 4 )基因在肝细胞肝癌中表达及突变和肝癌发生发展的关系。方法 :用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)检测了 32例肝癌组织及癌旁组织中hTcf 4基因表达 ,并用聚合酶链反应 -单链构像多态性分析 (PCR SSCP)方法检测了肝癌组织中hTcf 4外显子 1、4、9、15的突变情况。结果 :hTcf 4mRNA在癌组织及癌旁组织中表达率分别为 90 .6 %和 71.9%。且癌组织中表达水平明显高于癌旁组织 [(0 .71±0 .13)vs (0 .2 9± 0 .0 5 ) ,P <0 .0 0 1]。同时 ,此基因在包膜不完整及有转移的癌组织表达增高更为显著。 32例肝癌中仅检测到 2例hTcf 4基因外显子 15突变 ,突变率为 6 .2 5 %。结论 :hTcf 4基因在肝细胞肝癌 ,尤其伴转移肝癌组织中表达增高 ,并与肝癌侵袭转移有关 ,而该基因突变与肝癌关系不密切。     

阿霉素对不同转移能力肝癌细胞及肝癌干细胞相关基因表达的影响

目的 探讨阿霉素（adriamycin, ADM）对不同转移能力肝癌细胞及肝癌干细胞相关基因表达的影响。方法　利用MTT法检测ADM对人肝癌细胞系MHCC97-L、HCCLM3的抑制作用,计算各自的半数致死浓度（median lethal dose, LD50）;Western blot法检测ADM作用下人肝癌细胞系MHCC97-L、HCCLM3中干细胞基因Nanog、Oct-4、Sox2、ARID1A、Wnt5b的表达,并分析干细胞基因在两种细胞中表达变化的差异。结果 ADM浓度越高,对人肝癌细胞的抑制作用越明显,其对MHCC97-L和HCCLM3的半数致死浓度分别为0.4212 μmol/L和0.5249 μmol/L;随着ADM（LD50）作用时间的延长,MHCC97-L和HCCLM3中Wnt5b的表达水平先升高后降低,Nanog蛋白的表达先降低后升高,Sox2在HCCLM3中表达水平逐渐升高。Wnt5b和Nanog 4 h内在低转移能力肝癌细胞系MHCC97-L中的表达变化均值均小于其在高转移能力肝癌细胞系HCCLM3时的表达变化均值,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ADM可促进MHCC97-L和HCCLM3细胞的凋亡,且对MHCC97-L的作用强于HCCLM3;干细胞相关基因Wnt5b与肝癌细胞的恶性程度呈负相关;Nanog和Sox2均与肿瘤的转移密切相关,且Nanog和Sox2可能与肝癌耐药密切相关。     

高聚金葡素对中晚期肝癌患者多药抗药性基因表达及NK细胞活性 …

研究高聚金葡素对中晚期肝癌患者多药抗药性（ＭＤＲ）基因表达及ＮＫ细胞活性的影响，结果显示化疗联合高聚金葡素治疗（５０例）较单纯化疗组（３０例）可明显抑制ＭＤＲ基因过度表达，升高ＮＫ细胞活性，临床疗效显著优于对照组，副反应发生率明显降低。     

表皮生长因子及其受体在胃癌患者中的表达

采用放射免疫法测定２６例胃癌病人血清、尿液ＥＧＦ水平，同时采用免疫组化ＳＡＢＣ法检测胃粘膜组织切片中ＥＧＦＲ染色的阳性率，并与正常对照进行比较分析。结果表明：胃癌患者血清和尿ＥＧＦ水平均显著高于正常对照（３．７２±１．８３μｇ／Ｌ与１．７７±０．６０μｇ／Ｌ，Ｐ＜０．０１；１８．４４±１７．８８ｎｇ／ｍｇ与５．１９±６．３７ｎｇ／ｍｇ，Ｐ＜０．０１），胃粘膜组织切片ＥＧＦＲ染色阳性率也明显高于正常对照（７３％与１１％，Ｐ＜０．０１）。胃癌病人中，ＥＧＦＲ染色阳性者血清ＥＧＦ水平显著高于ＥＧＦＲ阴性者（Ｐ＜０．０５），但两者尿ＥＧＦ水平无显著性差异。胃癌患者血清、尿ＥＧＦ水平与胃癌大小、分化程度及淋巴结转移无显著性相关。     

EGF和EGFR在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究表皮生长因子(EG F)及其受体(EG FR)在肝细胞癌(H C C)组织中的表达及其与临床病理的关系。方法应用免疫组化S蛳P方法检测55例H C C患者癌组织及癌旁肝组织中EG F和EG FR的表达情况。结果在55例H C C患者癌组织及其癌旁组织中,EG F阳性表达率分别为54.55%(30/55)和76.36%(42/55),两者差异有显著性(P<0.05);EG FR阳性表达率分别为58.18%(32/55)和36.36%(20/55),两者差异有显著性(P<0.05)。EG FR在H C C组织中的阳性表达率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移、术后复发等显著相关,而与肿瘤直径、肿瘤数目、血清AFP水平以及分化程度无明显关系。EG F阳性表达率与各临床病理参数无关。结论EG F可能与H C C的发生、发展无关;而EG FR与H C C的发生、发展有关,可作为预测H C C复发、转移的参考指标。     

慢性胆囊炎和胆囊癌组织中EGF、EGFR的表达及其意义

背景与目的:表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)及其受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)在肿瘤形成过程中起着重要作用,胆结石胆囊炎与胆囊癌关系密切,本研究通过观察EGF、EGFR在慢性胆囊炎、胆囊癌中的表达,探讨两者与胆囊癌发生的关系。方法:采用免疫组化SABC法检测手术切除的41例胆囊癌、26例单纯增生、14例不典型增生和10例正常胆囊组织中EGF、EGFR及增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达。结果:EGF、EGFR阳性表达率在胆囊癌(63.4%、70.7%)、不典型增生(71.4%、85.7%)中分别高于单纯增生(15.4%、27%)和正常胆囊组织(0%、0%)(P<0.01);PCNA评分有随胆囊粘膜病变程度的加重而递增的趋势,在正常胆囊组织、单纯增生、不典型增生和胆囊癌中分别为1.0、1.0、1.9288±0.9972和3.0488±0.669,(P<0.01);EGF、EGFR表达与PCNA的表达有统计学意义(P<0.05),EGF、EGFR、PCNA的表达与胆囊癌TNM分期无统计学意义(P>0.05)。结论:EGF、EGFR的表达参与胆囊癌的发生,与细胞增殖活性相关。     

p21和IGF-II在肝癌、肝硬化组织中表达的研究

目的　探讨 p2 1、IGF II在肝硬化、肝细胞癌 (HCC)中表达的意义及其与肝细胞不典型增生(LCD)的关系。方法　用免疫组化S P法检测单纯肝硬化、癌旁肝硬化及肝细胞癌 (HCC) p2 1、IGF II表达情况。结果　p2 1、IGF II在癌旁肝硬化和单纯肝硬化组织中的阳性表达率 (92 .86 %和 75 % ;6 8%和 74 % )与HCC(5 4 .5 5 %和 36 .36 % )相比差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。IGF II与p2 1阳性表达存在相关关系。HBsAg阳性或伴LCD改变的肝硬化 ,p2 1、IGF II阳性率均高于HBsAg阴性或不伴有LCD改变的肝硬化 (P <0 .0 5 )。结论　 (1)在肝细胞癌变演化过程中 p2 1、IGF II可能发挥协同作用。 (2 )LCD可能是一群具有肿瘤增殖潜能的癌前细胞群 ,尤其有 p2 1、IGF II共同过度表达者 ,有发生HCC的高度危险。     

Epidermal growth factor competes with EGF receptor inhibitors to induce cell death in EGFR-overexpressing tumor cells

Epidermal growth factor receptor (EGFR) signaling plays an important role in cell growth and differentiation. Mutations in the EGFR gene and EGFR gene amplifications have been associated with increased responsiveness to selective EGFR tyrosine kinase inhibitors (EGFR-TKIs). By contrast, EGF may also stimulate apoptosis in tumor cells, depending on EGFR and Her2 (erbB-2) expression levels. In the present study, we investigated cellular responses after EGFR activation by EGF, or inhibition by cetuximab and gefitinib. EGF treatment induced a near-immediate increase in p38 MAPK phosphorylation together with inactivation of ERK1/2. In contrast, gefitinib- and cetuximab-induced phosphorylation of p38 MAPK was much delayed, and gefitinib also induced a delayed activation of ERK1/2. EGF induced progressive cell death of A431 cells with prolonged treatment, whereas cetuximab- or gefitinib-treated cells showed temporary growth arrest and subsequent re-growth. Moreover, in combination treatment experiments, cetuximab or gefitinib competitively inhibited EGF-induced cell death. Normal WI38-VA13 cells did not display any noticeable changes in cell proliferation in response to EGF, gefitinib or cetuximab. EGF-induced death signaling is apparently irreversible: EGF induced significant EGFR phosphorylation/internalization and activated caspase-3, -8 and -9, effects that were not observed in cetuximab- or gefitinib-treated cells. Collectively, these results indicate that EGF may be a more potent cytotoxic agent than EGFR blockers in EGFR-overexpressing cancer cells.     

卵巢癌细胞PCDGF的表达与意义

目的研究人卵巢癌细胞PCDGF的表达,探讨其与卵巢癌恶性表型的关系.方法应用半定量RT-PCR和Western blot分别检测3株卵巢癌细胞中PCDGF mRNA和蛋白表达水平.单层细胞增殖实验测定3株卵巢癌细胞的增殖能力;Boyden小室体外侵袭实验测定不同细胞株的侵袭能力.结果 3株卵巢癌细胞PCDGF转录和翻译水平呈同步变化(P<0.05),均为SW626最高,A2780稍低,Skov-3最低.而其增殖、侵袭能力亦为SW626最强, A2780次之, Skov-3最弱.结论 3株卵巢癌细胞PCDGF mRNA和蛋白表达水平与其增殖、侵袭能力呈正相关(前者r1=0.97, r2=0.89,后者r1=0.85,r2=0.84),提示PCDGF在卵巢癌发生演进中可能作为独立因素起多种作用,有望成为治疗的新靶点.     

塞来昔布抑制肝癌细胞株增殖及其机制的实验研究

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721是否有抑制增殖、诱导凋亡作用并初步探讨其作用机制。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的塞来昔布作用后细胞增殖活力改变;流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及细胞周期变化;免疫组化观察Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达情况。结果:MTT法显示随着塞来昔布浓度和作用时间增加,细胞增殖抑制率上升;流式细胞仪测定空白对照组未见明显凋亡峰,塞来昔布组出现凋亡峰,凋亡率随着时间及药物浓度变化而变化,二者呈正相关;免疫组化显示经塞来昔布干预后,凋亡蛋白Bax表达增加,而Bcl-2表达减少,并随时间和药物浓度变化而明显。结论:塞来昔布抑制SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。其作用机制之一可能是通过减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,从而启动细胞凋亡途径。     

Relationship between VEGF, EGF and invasion, metastasis of gastric cancer cells

Objective: To investigate the relationship between expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), epidermal growth factor (EGF) and the biological properties of gastric cancer cells such as invasion and metastasis.Methods: RT-PCR was performed to semi-quantitatively detect the mRNA expressions of EGF, EGFR, VEGF and VEGFR in four kinds of gastric cancer cell lines BGC823, MGC803, HGC27 and SGC7901, which were classified by their differentiation degree in our experiment. We obtained cell line growth curves from MTT assays. The migration of gastric cancer cells was observed under inverted phase contrast microscope. The changes of invasion and adhesion were detected by a Transwell assay.Results: The growth rates slowed down sequentially in MGC803, HGC27, BGC823 and SGC7901(P＜0.05). The ability of migration, invasion and adhesion were reduced sequentially, and the difference was significant. The expressions of EGF, EGFR, VEGF and VEGFR were significantly stronger in MGC803 and HGC27 than in BGC823 and SGC7901 cells, and the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion: The expressions of VEGF and EGF had close relationship with the properties of migration, adhesion and invasion of gastric cancer cells in vitro. Thus, targeting VEGF and EGF may be a potential therapeutic strategy for inhibiting peritoneal metastasis of gastric cancer.     

小鼠AFPcDNA真核表达载体的构建、表达及体外抗肝癌免疫活性的检测

背景与目的:探索肝癌细胞的突变基因产物——具有潜在抗原性的异常蛋白质而无法形成有效免疫原的机理,寻找肝癌的特异性抗原,并在此基础上研制出治疗肝癌的DNA疫苗将对肝癌的免疫学治疗产生积极的影响。本实验构建BALB/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突细胞(dendriticcells,DCs)中表达,并观察其在体外抗肝癌免疫中的作用。方法:采用RT-PCR方法自小鼠肝癌细胞株H22中扩增出具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉分泌性信号肽的AFP2cDNA,将该基因定向插入真核表达载体PEGF-N3中;同时培养经rmGM-CSF、rmIL-4诱导的小鼠骨髓细胞,体外获取大量DCs,脂质体转染PEGF-N3/AFP1、PEGF-N3/AFP2至DCs进行表达、鉴定。将DCs疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养,ELISA方法测定脾细胞γ-干扰素(IFN-γ)分泌活性,51Cr释放法测定脾淋巴细胞的特异性杀伤活性。结果:从H22中克隆到AFP1cDNA和AFP2cDNA,经测序完全正确,所构建的真核表达质粒PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2在小鼠DCs中获得稳定高效表达,其中PEGF-N3/AFP2明显刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)为5.12±1.46,明显高于空质粒组(1.42±0.73)。AFP2/DC疫苗对H22细胞的特异性杀伤活性[(88.15±16.47)%]明显高于空质粒组[(12.72±5.45)%]。结论:成功地构建了真核表达载体PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2,编码去掉分泌性信号肽的PEGF-N3/AFP2转染的DC,能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应。其机制可能为诱导肝癌细胞凋亡。     

RNA干扰技术抑制A549细胞表皮生长因子受体表达的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术抑制非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)表达后,对A549细胞生物学特性的影响。方法体外化学合成EGFR序列特异性双链RNA(dsRNA),用Lipofectamine 2000转染A549细胞,采用Western blot技术和流式细胞仪检测EGFR的表达,并观察A549细胞周期、集落形成、化疗敏感性等生物学特性的改变。结果序列特异性dsRNA-EGFR可显著抑制A549细胞EGFR表达;dsRNA-EGFR组细胞生长抑制率为85．0％,集落形成抑制率63．3％;细胞周期分析结果表明,dsRNA-EGFR组G0～G1期细胞数较对照组增加了12．7％,进入S期的细胞数较对照组减少了6．6％。转染dsRNA-EGFR后,可将A549细胞对顺铂的敏感性提高约4倍。结论dsRNA-EGFR可有效抑制A549细胞EGFR的表达,并将更多的细胞阻滞在G0～G1期,抑制细胞增生,显著增加细胞对顺铂的敏感性。RNAi可能为NSCLC的基因治疗提供新策略。