741对非亲缘关系供、受者HLA高分辨基因分型结果分析

目的 研究造血干细胞捐献者资料库供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1位点等位基因高分辨全相合及不相合的概率.方法 采用基因测序分型(sequence based typing,SBT),序列特异性寡核苷酸探针(sequence-specific oligo nucleotide probes,SSOP),聚合酶链反应序列特异性引物(sequence-specific primers,SSP)对741对HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合的无关供、受者进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因高分辨检测.结果 HLA-A、HLA-B、HLA-Cw、HLA-DRB1、HLA-DQB1基因位点高分辨分型供、受者全相合的概率为0.1916(142/741);1个等位基因不相合的概率为0.1930(143/741),不相合的位点频率次序为:HLA-A＞-Cw＞-DQB1＞-B＞-DRB1;2个等位基因不相合的概率为0.2362(175/741).其中仅在一个位点(loci)上的概率为0.0175(13/741),位于两个位点上的概率为0.2186(162/741),以A+Cw组合位点不相合的概率最高,其次以B+Cw和DRB1+DQB1组合位点次之.结论 对判断无关供、受者HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1低分辨全相合,而HLA-A、HLA-B、HLA-DRB1、HLA-Cw、HLA-DQBI高分辨基因分型全相合或部分相合的概率有重要参考价值,并且不仅能提高非亲缘造血干细胞移植的成功率,还有助于提高造血干细胞捐献者资料库数据的使用率.     

HLA命名和Ⅱ类基因分型

<正> 1991年11月在日本横滨召开了第11届国际组织相容性讨论会,会后世界卫生组织HLA系统因子命名委员会重新修改了HLA命名;另一方面,HLAⅡ类的基因分型方法已有重大进展。现就这两方面的内容介绍如下。     

GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究

目的 :进一步探索GVHD的发病机理 ,提高临床移植疗效。方法 :采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验和混合淋巴细胞培养方法 ;基因分型采用PCR SSP方法 ,对基因亚型进行DNA测序 ,再进行HLA三维结构模拟。结果 :① 4名骨髓移植患者中 ,例 1供 受体间HLA Ⅰ、Ⅱ类血清学分型相合 ,DQB1基因亚型不同 ,例 2、3、4均有 1个Ⅰ类抗原 (分别为HLA A、B和A)血清学分型不合和 1个基因亚型不同。HLA三维结构模拟例 1、3、4供 受者差别明显 ,骨髓移植后发生了Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;例 2三维结构模拟差别不明显 ,仅发生Ⅰ度GVHD ;② 4个病例供 受体间HLA分子分别相差 14、17、2 0、12个氨基酸 ,相差数量与GVHD无相关性 ;3例重度GVHD供 受体的HLA分子三维结构均在抗原结合区的β转角处出现明显差异 ,而 1例轻度GVHD则无明显差异。 结论 :当异基因骨髓移植供 受体间HLA基因亚型不同时 ,移植后发生GVHD的程度与HLA分子三维结构差别大小有密切关系 ;三维结构的差别又与差异氨基酸所处的位置有关 ;GVHD与抗原氨基酸差别的数量多少没有直接关系。     

流式磁珠反向SSO法HLA分型结果判读影响因素及解决对策的研究

目的研究流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1分型结果判读中出现的常见问题,并提出相应的解决策略。方法对3 219名随机抽取的深圳市无关造血干细胞供者及组织配型患者的DNA采用流式磁珠反向SSO法进行HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,模棱两可结果用PCR-序列特异性引物(Sequence Specific Primer,SSP)法及PCR-SBT测序方法等方法复核确认。结果3 219份样本中发现有95份(95/3 219)28种类型的模棱两可结果,其中HLA-A位点有3(3/28)种,HLA-B位点有25(25/28)种,91.6%的模棱两可结果其样本的荧光值在阳性控制线上,本研究观察到的模棱两可结果通过基因频率分析、PCR-SSP法及PCR-SBT基因测序等方法得以定型。结论建立流式磁珠反向SSO法HLA-A、B、DRB1基因分型模棱两可结果解决策略,对提高HLA数据分析的速度和分型的准确性有重要的意义。     

中国南北方汉族急性淋巴细胞白血病患者HLA基因分型特征

目的 研究中国南北方汉族急性淋巴细胞白血病(ALL)患者人群中人类白细胞抗原(HLA)-A,B,DRB1等位基因的分布特征.方法 根据11个南方省区556名南方汉族和18个北方省区644名北方汉族ALL患者的HLA-A,B,DRB1表型数据,采用最大似然性方法分别计算两个群体的HLA-A,B,DRB1等位基因和单倍型频率并采用卡方检验方法比较其分布特征.结果 南北方汉族ALL患者群体中,A*02,A*11,A*24,A*33,B*13,B*46,B*51,B*60,B*62,DRB1*04,DRB1*08,DRB1*09,DRB1*11,DRB1*12,DRB1*14和DRB1*15均比较常见,另外B*58,B*62和B*75仅在南方群体中较高,而A*30,B*35,B*61和DRB1*07则仅常见于北方患者,7个A,12个B和5个DRB1等位基因的分布存在显著性差异.结论 中国南北方汉族ALL患者人群HLA-A,B,DRB1等位基因的分布有其自身特征,此研究数据可作为ALL患者群体的HLA相关研究和应用的参考数据.     

人类白细胞抗原（HLA）与地中海贫血疾病相关的探讨

地中海贫血(地贫)是我省儿童多见的遗传性疾病之一。当前地贫的研究已达分子学水平,但多是与红细胞关联的研究,而与人类白细胞抗原(HLA)关联的报道少。我们为了探讨HLA与地贫疾病相关性,对120例地贫病人进行了HLA分型,其结果报告如下。对象和方法     

STR系统与HLA系统检测在亲权试验中的应用

亲权试验方法有多种 ,常规应用的是红细胞血型系统、HL A (Hum an L eucocyte Antigen,人类白细胞抗原 )系统的检测 ,而近几年运用较多的是短串联重复序列 (short tardemrepeat,STR)系统的检测方法。现将 HL A系统及 STR系统两种检测法在亲权试验中的运用结果报告如下。材料与方法1　样品来源　 1998～ 2 0 0 1年做亲权鉴定 6 2 6个案例涉及1917人的静脉血液标本。2　方法2 .1　 HL A系统的检测 :用 ONE L AMBDA公司的免疫磁珠提取淋巴细胞 (用血量为 2 0 0 0μl) ;用 ONE L AMBDA公司的 HL A单克隆抗原板试剂盒检测。2 .2…     

血站HLA实验室现状调查和分析

目的调查分析国内血站HLA实验室的现状,以促进HLA在输血医学领域的发展。方法采用调查表问卷方式,调查表经专业人员设计,对填写人员进行培训,然后收集调查表进行数据分析。结果在调查分析的24个实验室中,HLA实验室在依托单位属于独立科室的比例为16.67%,单一实验室的面积范围为200—1 800 m~2。24个实验室从事HLA检测工作的人员为173人,单个实验室人员数量范围为2—14人。大多数实验室配置有测序设备,具有HLA高分辨分型能力, 2017年24个实验室的HLA基因分型样本为39 177例。24个实验室中只有11个实验室开展HLA抗体筛查检测。结论血站HLA实验室具有一定的检测能力,但各HLA实验室间发展存在明显不平衡。     

人类白细胞抗原系统分型技术及其应用的现状分析和展望

人类白细胞抗原(HLA)在移植免疫、人类遗传学、疾病关联、药物组学、输血医学等领域中发挥重要的作用。下一代测序(NGS)技术已应用于HLA基因分型,不同分型策略和结果指定信息系统的分型准确率存在差异。已公布的中国人群HLA常见等位基因和确认等位基因,存在明显的人群分布特点,可作为国内HLA基因分型指定的参考标准。供者特异性抗-HLA在实体器官移植、造血干细胞移植中具有重要的作用,准确鉴定出这种抗体有助于提升移植患者存活率。HLA、MICA和KIR与疾病关联研究中大部分报道病例数较低,今后需要多中心合作的大样本分析。血站系统HLA实验室多数已具有高分辨分型能力,但发展存在不均衡现象,整体上规模偏小。国内初步建立了血小板捐献者HLA基因型数据库,其库容量的扩展可与中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)的发展协同规划。     

供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型的无关供者外周血造血干细胞移植32例回顾分析

目的探讨供、患者的人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1基因高分辨相合及亚型相合,无关供者外周血造血干细胞移植后效果的情况,为临床造血干细胞移植治疗选择适配供者提供理论依据。方法采用PCR-SSP或SBT技术对供、患者HLA-A、B、DRB1的基因进行高分辨分型,定期随访患者在造血干细胞移植后状况,统计分析移植后效果。结果32例患者与供者的HLA低分辨分型结果完全相合,HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型全相合的患者与HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型不相合的患者,造血干细胞植活和两年半内的移植存活率比较,无统计学差异。结论HLA低分辨分型结果完全相合是临床医生选择造血干细胞移植的重要条件之一,供、患者HLA-A、B、DRB1高分辨分型是外周血造血干细胞移植治疗前组织配型不可少的实验之一,但HLA-A、B、DRB1基因高分辨分型错配对无关供者外周血造血干细胞移植的造血干细胞植活和两年半内的移植存活率影响较小,HLA基因高分辨分型可以帮助临床医生选择合适的供者。     

HLA区域SNPs的检测及应用

人类白细胞抗原（HLA）是迄今为止发现的最复杂的人类基因系统。HLA区域单核苷酸多态性（SNPs）的分布频率高于人类整个基因组水平。目前可用多种方法检测SNPs,其中基于杂交原理的基因芯片方法极具价值。本文主要对HLA区域SNPs的检测方法及其在基因关联分析、法医学及致病基因的搜寻中的应用等方面进行综述。     

五种HLA低分辨率基因分型试剂的对比分析

目的：比较五种HLA低分辨率分型试剂的检测效果。方法：用五种HLA分型试剂分别检测7份标准品，分析比较各种试剂的检测结果。结果：五种分型试剂基因检出率均为100％，无漏检。分辨率较好，均能达到低分辨率的要求。但试剂A和D特异性略低于其它试剂。结论：储备两种分型试剂以弥补彼此的不足。     

血站单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库的调查和分析

目的调查分析国内血站系统单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库情况,以促进其建库发展和应用。方法制定调查表并经专业人员审定,培训调查人员后依据实际情况填写表单,然后收集数据进行分析。结果调查的24个血站中,有18个建立了血小板献血者HLA和HPA基因型数据库,合计有25 240人;2017年HLA或HPA基因型配合应用总共为137例。有5个血站建立了CD36抗原阴性筛查数据库。入库标本进行了HLA-A,-B位点检测,而HPA系统检测范围不同血站存在差异,其中9个血站只检测HPA 1-6, 15, 21w系统。13个血站采用聚合酶链反应核苷酸特异性引物技术检测HPA系统基因型。13个血站开展HPA抗体检测,6个血站开展CD36抗体检测。结论血站已建立一定规模的单采血小板献血者HLA和HPA基因型数据库,但其应用存在明显不足。     

甘肃酒泉地区人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性研究

目的研究中国造血干细胞捐献者资料库甘肃分库汉族捐献者HLA-A、B、DRB1等位基因频率分布特征。方法采用反向特异性寡核苷酸探针杂交法(PCR-SSO)基因分型技术,对甘肃酒泉地区215份健康无血缘关系的汉族人群的人类白细胞抗原(HLA-A、-B、-DRB1)等位基因进行基因分型。结果在受检人群中共检出54种HLA特异性基因,A*02(32.47%)、A*11(20.62%)、A*24(14.95%)、B*15(15.72%)、B*40(13.4%)、DRB1*09(16.49%)、DRB1*12(15.46%)、DRB1*04(11.86%)和DRB1*15(10.57%)为本地区汉族人群的优势基因,其中A位点检出以往国内报道较少的A*74等位基因。结论甘肃酒泉汉族人群HLA-A、B、DRB1等位基因的分布特征接近北方汉族人群,与中国汉族人总体分布特征相似。未发现群体特有的基因,但具有其自身分布特征。这为不同地区、不同人群有可能在中国造血干细胞库甘肃地区汉族捐献者中寻找到HLA相合的供者提供了依据。     

云南地区肾移植受者BK 病毒感染与HLA 等位基因相关性分析

目的　研究云南地区肾移植受者BK 病毒（BK virus,BKV）感染与人类白细胞抗原（human leukocyteantigen,HLA）等位基因HLA-B,HLA-DR 抗原分布频率,探讨肾移植受者BKV 感染与HLA-B,HLA-DR 抗原之间的相关性。方法　选取昆明市第一人民医院自2017 年6 月～ 2020 年12 月肾移植受者399 例为研究对象,按照BKV感染与否分为BKV 感染组(n=126) 和BKV 未感染组(n=273)。应用聚合酶链反应序列特异性引物技术（polymerasechain reaction sequence specific primer,PCR-SSP）检测HLA-B 和HLA-DR 等位基因,用SPSS 软件分析肾移植受者BKV 感染尿液阳性HLA-B 和HLA-DR 抗原分布频率,比较HLA-B 和HLA-DR 抗原与BKV 感染不同结局的关系。结果　BKV 未感染组检出的HLA-B 等位基因有33 种,占比大于10% 的基因型有7 种,分别为 HLA-B*13（16.85%）,HLA-B*46（19.41%）,HLA-B*51（10.62%）,HLA-B*55（10.62%）,HLA-B*60（17.58%）,HLA-B*62（24.91%）和HLA-B*75（16.48%）;BKV 感染组中检出的 HLA-B 等位基因有25 种,其中占比大于10% 的基因型有5 种,分别为HLA-B*46（24.60%）,HLA-B*55（10.32%）,HLA-B*60（24.60%）,HLA-B*62（22.22%）和HLA-B*75（15.87%）。BKV 未感染组检出的HLA-DR 等位基因有14 种,其中占比大于10% 的基因型有7 种,分别为 HLA-DR*4（30.40%）,HLA-DR*8（15.75%）,HLA-DR*9（20.15%）, HLA-DR*11（12.45%）,HLA-DR*12（42.12%）, HLA-DR*14（20.15%）和HLA-DR*15（25.27%）;BKV 感染组中检出的 HLA-DR 等位基因有14 种,其中占比大于5% 的基因型有8 种,分别为 HLA-DR*4（27.78%）, HLA-DR*8（18.25%）, HLA-DR*9（16.67%）, HLA-DR*11（11.11%）,HLA-DR*12（42.86%）,HLA-DR*13（11.90%）,HLA-DR*14（23.81%）和HLA-DR*15（19.84%）。HLA-B*13 等位基因在BKV 未感染组检出率高于BKV感染组（χ2=4.642,P=0.031）;HLA-DR*17 等位基因在BKV感染组的检出率高于BKV未感染组（χ2=4.791,P=0.029）。结论　云南地区肾移植受者 HLA-B*13 等位基因可能是抗BKV 的保护因子;而HLA-DR*17 等位基因可能与BKV 感染的机会呈正相关。     

中国满族人群HLA-A、B、DRB1基因和单倍型的多态性分析

目的研究中国满族人群HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型的多态性。方法根据2 183名满族骨髓捐献者的HLA-A、B、DRB1基因分型数据,采用最大似然性方法计算HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型频率。结果满族人群中共检出18个HLA-A、44个HLA-B和15个HLA-DRB1等位基因,其常见等位基因为A*02、A*11、A*24、A*30、A*33、B*13、B*35、B*46、B*51、B*40(B60)、B*40(B61)、B*15(B62)、DRB1*04、DRB1*07、DRB1*08、DRB1*09、DRB1*11、DRB1*12、DRB1*13、DRB1*14和DRB1*15。A*30-B*13、A*02-DRB1*15、B*13-DRB1*07和A*30-B*13-DRB1*07分别为其最常见A-B、A-DRB1B-DRB1和A-B-DRB1单倍型,31条A-B、24条A-DRB1和27条B-DRB1单倍型频率≥0.01,32条A-B-DRB1单倍型频率≥0.005。14条A-B、3条A-DRB1、14条B-DRB1和38条A-B-DRB1单倍型呈现强连锁不平衡格局(ALD≥0.40)。结论中国满族人群HLA-A、B、DRB1等位基因和单倍型的分布比较接近北方汉族人群并具有其自身分布特点。     

20596名汉族造血干细胞供者HLA多态性统计学分析

目的了解中国汉族人群中HLA-A,B,DRB1基因和单体型频率分布特征。方法采用聚合酶链反应-序列特异性引物和序列特异性寡核苷酸探针技术,对20596名健康汉族无关供者进行HLA基因分型,并翻译为相应的抗原特异性;采用最大数学预期值算法(expectation-maximization,EM)计算HLA基因和单体型频率,并统计相关的遗传参数。结果20596名汉族无关供者中,频率>0.1的A、B、DRB1座位特异性分别为A2、A11、A24,B46、B13、B60,DR9、DR12、DR4、DR15;频率>0.05的A-B、B-DRB1单体型为A2-B46、A33-B58、A30-B13、B46-DR9、B13-DR7,频率>0.03的A-B-DRB1单体型为A30-B13-DR7、A2-B46-DR9、A33-B58-DR17;频率>7.27×10-5的有意义两座位单体型中,A30-B13、A69-B52、A33-B58、B8-DR17连锁不平衡强度最高(RLD>0.8)。结论中国汉族人群HLA基因和单体型多态性较为丰富,其频率分布数据和相关遗传参数为临床移植供者的选择、资料库志愿者招募策略的制定提供了重要参考。