人肺癌细胞株抗脱落凋亡特性的分析

目的：研究肺癌细胞A549、Spc-A1、PLA801及Calu-3抗脱落凋亡的特性，为研究肺癌细胞抗脱落凋亡的机制提供理论依据。方法：应用形态学观察，流式细胞术结合PI及AnnexinV—FITC双标记染色法及Western blot法观察4株肺癌细胞脱落凋亡的特性。结果：脱落培养12h后，4株肺癌细胞有不同形态学变化；流式细胞仪检测发现Calu-3悬浮培养24h后，凋亡率与贴壁培养24h的凋亡率有明显差别；而A549等3种肺癌细胞系与贴壁培养的对照组相比较，其凋亡率无显著性差异，Western blot结果也验证了上述结果。结论：肺癌细胞Calu-3属于脱落凋亡细胞，而A549、Spc-A1、PLA801属于抗脱落凋亡细胞。     

人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合研究

目的 探讨用杂交瘤技术制备树突状细胞疫苗的方法。研究树突状细胞，肿瘤细胞之融合细胞的形态及表型特征。方法 用PEC法将免疫磁珠法分离获得的人外周血树突状细胞与人肺鳞癌细胞株LTEP78融合，瑞氏一姬姆萨染色观察树突状细胞、LTEP78细胞及其融合细胞的形态结构，SP免疫细胞化学染色法检测融合细胞的分子表达。结果 分离的树突状细胞能高表达HIJA—DR分子，而LTEP78细胞则不表达；将树突状细胞与ITEP78细胞按10：1比例融合后，两者的细胞膜、细胞质依次融合，获得的融合细胞仍能表达HLA-．DR分子。结论人树突状细胞与人肺鳞癌细胞的融合是一个动态过程，通过将两者融合，人肺癌细胞获得了人树突状细胞表达的HLA-DR分子，从而增强了其免疫原性，为人树突状细胞疫苗的研制奠定了基础。     

胸水腺癌细胞中期染色体扫描电镜样品制作方法

胸水细胞染色体分析已普遍作为恶性胸水细胞诊断与鉴别诊断的重要辅助方法[1]。文献上胸水细胞染色体分析及观察方法多为光镜[1·2],受其分辨率和观察范围的限制,难以进一步了解和分析染色体结构。本文用胸水腺癌细胞直接制备中期染色体SEM样本的方法,效果较好。     

小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合的研究

目的 使肺癌细胞表达共刺激分子,探讨其作为疫苗的可能性。方法 小鼠骨髓细胞在体外经GM－CSF和TNF－α诱导,使之成为成熟树突状细胞（BmDC)。将其与小鼠Lewis肺癌细胞AL9901融合,并以S－P免疫细胞化学染色法检测融合细胞和BmDC上有关分子的表达。结果 通过GM－CSF和TNF－α诱导获得BmDC,以诱导5d时收获为佳。获得的BmDC能高表达B7－1和CD40分子,与肺癌细胞融合后,获得的融合细胞仍能高表达B7－1和CD40分子。结论 通过将小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合,使肺癌细胞获得了BmDC表达的B7－1和CD40分子,从而提高了其免疫原性,为制备肺癌疫苗奠定了基础。     

胃癌细胞抗脱落凋亡的分子机制

目的探求胃癌细胞抗脱落凋亡的信号转导机制。方法用soft agar实验观察信号分子抑制剂对胃癌细胞非锚定生长的影响,流式细胞仪检测信号分子抑制剂对脱落培养胃癌细胞周期的影响及凋亡诱导作用,Western印迹检测胃癌细胞脱落培养后相关信号分子表达水平及活性的变化。结果信号分子抑制剂genistein、AG17和AG825完全抑制了胃癌细胞集落的形成、阻滞细胞于细胞周期的不同时期,而且诱导细胞脱落凋亡的作用比较明显;而LY、PD和SB作用细胞后,所形成的细胞集落与对照组相比略小、数目略少,亦阻滞细胞于细胞周期的不同时期,但是诱导细胞脱落凋亡的比例较低。Western印迹检测发现,胃癌细胞脱落培养24 h后,细胞的蛋白酪氨酸磷酸化水平明显增加,ERK的表达水平无显著差异,但是ERK-p水平显著升高。结论蛋白酪氨酸激酶、HER2激酶、ERK激酶和PDGFR激酶途径是胃癌细胞抗脱落凋亡的重要信号通路和信号分子。PI-3K途径和p38MAPK分子与胃癌细胞锚定非依赖性增殖密切相关,与胃癌细胞的锚定非依赖性存活无关。     

蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用

目的 :检测蛋白酪氨酸磷酸酶SHP - 2在IL - 1所促发的细胞移动中的作用。方法 :首先构建重组质粒SHP - 2 -GFP以及SHP - 2C >S -GFP ,并分别转入MCF - 7乳腺癌细胞中 ,建立两种细胞株 ,即 :SHP - 2 -GFP -MCF - 7和SHP - 2C >S -MCF -7。利用细胞移动实验、细胞粘附实验、免疫沉淀、蛋白印迹等生物学实验方法 ,从形态学、蛋白表达量、磷酸化水平等方面分析细胞形态变化、E -钙粘蛋白和基质金属蛋白酶MMP - 1、9在 3种细胞株中的表达情况和细胞因子IL - 1刺激后 3种细胞株中的表达情况 ,进而分析SHP - 2蛋白酪氨酸磷酸酶…     

人胚胎干细胞抑制人肝癌细胞系SK-Hep1增殖并促进凋亡

目的探究在人胚胎干细胞hESCs与人肝癌细胞系SK-Hep1共培养微环境中,hESCs对SK-Hep1人肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法建立hESCs与SK-Hep1人肝癌细胞系的非接触式共培养体系,将与hESCs共培养的SK-Hep1细胞作为实验组,单独培养的SK-Hep1细胞作为对照组。MTT法检测SK-Hep1细胞的增殖能力;Transwell小室法检测SK-Hep1的侵袭与迁移能力;Hoechst33258染色后观察共培养后SK-Hep1细胞核的变化;流式细胞术检测SK-Hep1细胞凋亡率。结果与hESCs共培养后,SK-Hep1细胞的增殖能力受到抑制,随着时间增加,抑制效果越显著(P0.05);细胞侵袭、迁移穿过Transwell小室的数量显著减少(P0.05);发生核固缩、变形和浓染的SK-Hep1细胞较对照组增多;细胞凋亡比率较对照组显著增加(P0.05)。结论人胚胎干细胞对SKHep1人肝癌细胞系有抑制作用。     

卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌与他莫西芬敏感性及MAPK、Akt活性和ER特异性位点磷酸化水平的关系

目的:分析比较4种常见的人上皮性卵巢癌细胞系(A2780、CAOV-3、SKOV-3和ES-2)IL-6、IL-8分泌与他莫西芬(TAM)敏感性及MAPK、Akt活性和雌激素受体(ER)特异性位点磷酸化水平的关系,探讨IL-6、IL-8诱导卵巢癌细胞对内分泌治疗产生耐药的机制。方法:RT-PCR及ELISA法检测IL-6、IL-8的表达,MTT法分析卵巢癌细胞对TAM的敏感性,免疫印迹法测定MAPK、Akt活性及ER特异性位点的磷酸化水平。结果:(1)4种卵巢癌细胞除A2780细胞外均组成性分泌IL-6和IL-8,二者转录水平与其蛋白水平基本一致;(2)4种卵巢癌细胞对TAM的敏感性不同,其中A2780细胞最敏感,CAOV-3、SKOV-3和ES-2细胞则有不同程度的耐药性,其耐药倍数分别为4.99、3.76和2.66;(3)4种卵巢癌细胞的MAPK、Akt活性存在差异,CAOV-3细胞的二者活性最强,SKOV-3细胞的MAPK活性弱于ES-2细胞,而其Akt活性则强于ES-2细胞,A2780细胞未检测到二者有活性;(4)ER的第167位丝氨酸(Ser167)在四种卵巢癌细胞中均存在不同程度的磷酸化,ER的第118位丝氨酸(Ser118)除A2780细胞外亦存在不同程度的磷酸化。结论:卵巢癌细胞IL-6、IL-8的自分泌水平与其对TAM的敏感性呈负相关,与其MAPK、Akt活性和ER特异性位点(Ser167、Ser118)的磷酸化水平相一致。     

肝癌细胞稳定转染B7.1后的免疫学特性

目的 探讨赋予肝癌细胞第二信号分子Ｂ７．１增强癌细胞与淋巴细胞之间的识别与激活作用,从而达到增强淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤或抑制作用。方法 利用逆转录方法,转染Ｂ７．１分子至包装细胞系ＰＡ３１７。筛选获得高滴度的克隆后,以病毒上清感染肝癌细胞,使其表达Ｂ７．１分子,最后以ＬＤＨ释放法测定ＬＡＫ细胞的细胞毒活性。结果 肝癌细胞可稳定表达Ｂ７．１分子,阳性率达９４．３％,未转染的细胞无表达,其所诱发的Ｌ     

荧光染色法观察MPPa光动力诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨MPPa光动力作用诱导鼻咽癌细胞凋亡的生物学效应.材料与方法:应用Hoechst33258细胞核荧光染色法观察MPPa光动力作用对鼻咽癌细胞凋亡的影响.结果:MPPa光动力作用实验组出现核凝聚、凋亡小体的人鼻咽癌细胞株CNE2细胞明显多于单纯光照射组、单纯MMPa光敏剂处理组和假照射组,而单纯光照组、单纯MMPa光敏剂处理组和假照射组三对照组中出现核凝聚、凋亡小体的细胞非常少见.结论:进一步证实了MPPa光动力作用能有效诱导人鼻咽癌细胞株CNE2细胞凋亡.     

华蟾素诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨华蟾素对人膀胱癌细胞株BIU87细胞凋亡的影响.方法:采用MTT法测定华蟾素对体外膀胱癌细胞的抑制作用,倒置显微镜、TUNEL法观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;半定量RT-PCR法检测凋亡相关基础Bcl-2、bax、caspase-3mRNA表达的变化,比色法测定caspase-3活性变化.结果:MTT法显示,华蟾素对膀胱癌细胞有显著的增殖抑制作用与华蟾素的浓度和作用时间有关,0.2 mg/L华蟾素作用72 h可以杀死50%以上的细胞;可诱导BIU87细胞凋亡,细胞周期停滞在S-和G2期;凋亡相关基因Bcl-2表达减少,bax无明显变化,caspase-3表达及活性增高.结论:华蟾素在体外有较强的抗膀胱癌作用,细胞凋亡的发生可能与细胞周期阻滞,Bcl-2和caspase-3基因表达及活性变化有关.     

原发性肝癌细胞原代培养制备过程中细胞分离方法的改良

细胞培养是研究肝癌细胞各种特性的常用方法。原发性肝癌细胞原代培养可使肝癌细胞最大程度地保持其在体内的各种生物和遗传学特性，有利于对肝癌的发病机制及其防治进行研究。原代培养对分离和培养肝癌细胞的技术要求较高，目前常采用胰蛋白酶分离细胞法，机械分离细胞法...     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的 …

观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞的生长影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｍｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况。     

环孢素A对膀胱癌细胞系FasL表达的调节及免疫学作用

目的 探讨环孢素A（CSA）对膀胱癌BIU－87细胞表达FasL的调节作用。方法 CSA分别与BIU－87和Jurkat T细胞共同培养，以MTT法检测2种细胞的存活数。再将CSA与BIU－87细胞和Jurkat T细胞共同培养，以免疫组化和免疫荧光流式细胞术检测BIU－87细胞FasL的表达；以FCM分析Jurkat T细胞的凋亡。结果 CSA≤50μg/mL时对两细胞系均无毒性作用（P＞0．05）；CSA作用后的BIU－87细胞FasL阳性表达百分率和平均荧光指数及FasL介导Jurkat T细胞凋亡百分率与对照组间有显著性差异（P＜0．01）。结论 CSA≤50μg/mL时对BIU－87和Jurkat T细胞的活性和增殖无影响，但能使BIU－87细胞FasL的表达下调，阻止膀胱癌细胞对机体免疫的逃逸作用。     

槲皮素诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的作用

目的:检测槲皮素体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,并探讨线粒体在诱导凋亡机制中的作用.方法:采用酸性磷酸酶法检测细胞增殖抑制率;丫啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)荧光染色观测细胞形态结构变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位（△ψm）.结果:槲皮素对人宫颈癌Hela细胞有明显的增殖抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.经槲皮素作用48 h后,AO/EB染色可见细胞呈凋亡形态学改变.100 μmol/L槲皮素作用Hela细胞24、48 h后,与对照组相比线粒体膜电位下降.结论:槲皮素体外能抑制人宫颈癌Hela细胞生长,引起线粒体膜电位下降,诱导细胞凋亡.     

趋化因子受体CXCR4在人肺癌高转移细胞株的表达和意义

目的：以人肺癌高、低转移细胞株95D、95C为研究对象，研究趋化因子受体CXCR4的表达及其在肿瘤细胞体外转移潜能中的作用和意义。方法：采用RT-PCR检测95D、95C细胞CXCR4 mRNA的表达情况；以PMA活化肿瘤细胞，研究CXCR4 mRNA表达水平与细胞活性状态的关系；应用钙离子内流实验验证其表达是否具有功能；通过趋化实验观察CXCR4特异性配件SDF-α和裸鼠组织匀浆液对95D细胞的趋化迁移作用；通过MTT法测定95D细胞对SDF-1α作用的增殖反应。结果：95D细胞功能性地高表达趋化因子受体CXCR4，且其表达水平与细胞活性状态有关；CXCR4特异性配件SDF-1α和裸鼠肺、淋巴结组织匀浆均可在体外趋化95D细胞的迁移，SDF-1α还可促进95D细胞的增殖。结论：95D细胞功能性高表达趋化因子受体CXCR4可能与人肺癌细胞株95D的体外高转移潜能有关。     

α5和β1整合素亚基在肺腺癌细胞系凋亡中的作用

整合素作为细胞外基质蛋白(ECM)的受体,参与细胞的生长、增殖及凋亡的调节。当其被ECM激活后,则可刺激细胞产生生存信号并抑制细胞凋亡。如果整合素与ECM的结合导致细胞内原癌基因的持续激活,肿瘤细胞则可不需要黏附于ECM而生长,因此,其与肿瘤细胞的侵袭性生长及转移等密切相关[1]。为探讨α5、β1整合素亚基对体外培养的人肺腺癌细胞系GLC-82凋亡的作用,研究中我们以α5、β1整合素亚基,观察了GLC-82细胞的凋亡。1材料和方法1.1材料人肺腺癌细胞株GLC-82引自中国医学科学院肿瘤研究所。鼠抗人抗α5整合素亚基mAb1956Z购于CHEMI…     

在恒定切应力场中切应力损伤癌细胞的研究

本文报道了流体切应力对癌细胞的破坏。实验结果表明:在恒定切应力场中,切应力对癌细胞有极强烈的破坏作用。在假定同株癌细胞群体与切应力作用有关的各性质是均一的条件下,可以认为存活率与时间的关系为指数关系,即存活率V=e(-kt)(k为常数,t为时间),此结论与实验结果十分吻合。本文研究了癌细胞在恒定切应力场中存活率与温度的关系,揭示了癌细胞存活率的变化反映了膜的流变性质的变化,膜的相变导致了存活率的剧烈变化。并通过实验证实细胞的骨架系统影响着细胞的变形能力。本文还探讨了切应力破坏癌细胞的机制,提出了切应力破坏癌细胞的模型,并指出切应力对细胞膜的破坏是致死癌细胞的主要原因。     

人卵巢癌细胞HLA分子与其相关基因表达的研究

目的：探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系。方法：采用Western blot，免疫组化和流式细胞术，检测卵巢癌细胞中HLA分子表达，以RT-PCR技术，分子卵巢癌细胞TAP，LMP和MHCⅡ类分子反式激活蛋白（CⅡTA）基因表达。结果：被检测的11株卵巢癌细胞中，HLA-I类分子异常的表达率达为45%，而HLA-I类分子表达的异常与TAP1，TAP2，LMP2和LMP74种基因表达的异常有关，卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-Ⅱ类分子的表达与CⅡTA基因的表达一致。组成性或诱导性表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，经IFNγ作用后，其HLA-I，-Ⅱ类分子的表达增强；而诱导后仍不表达CⅡTA基因的肿瘤细胞，其HLA分子的表达无增强作用。结论：卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷，是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素。提示CⅡTA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-Ⅰ，-Ⅱ类分子的表达。     

肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）诱导肺癌细胞凋亡的研究

目的　研究肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）对肺癌细胞株（A549）的致凋亡作用及其作用机理，为临床应用TIL治疗肺癌提供依据.方法　从肺癌病人胸水中用淋巴细胞分离液分离提取出TIL细胞，在含1000U/mlIL-2的完全培养基中培养20天后，将TIL细胞与靶细胞（肺癌细胞株）共同培养24小时，将培养细胞制成细胞涂片，经福尔马林固定，用原位末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧三磷酸嘧啶（duTP）末端标记法（TUNEL）原位的方法进行肺癌凋亡细胞的标记.结果　肺癌肿瘤细胞凋亡指数（%）经TIL作用组的凋亡指数为8.56±0.84，对照组凋亡指数为2.10±0.86，两组之间差别有非常显著性（p<0.01）.结论　TIL细胞诱导肺癌细胞的凋亡可能是TIL细胞对肺癌细胞杀伤作用的机理之一.