降钙素经ERK—MAPK信号通路调控成骨细胞核心结合因子a1mRNA表达

目的研究降钙素对成骨细胞核心结合因子a1（cbfa1）mRNA表达情况以及细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路在这一过程中的作用。方法取24h内新生SD大鼠颅骨培养成骨细胞,分别加入不同浓度降钙素（O．01、0．1、1ng／mL）和一定浓度ERK特异性抑制剂U0126进行干预,应用RT-PCR技术检测成骨细胞cbfa1 mRNA的表达情况;应用Western Blotting技术检测phos-ERK1／2蛋白表达情况;采用Independent-Samples检验法分析比较各组间总体均值差异。结果加入0．01、0．1、1ng／mL的降钙素干预后,成骨细胞表面cbfa1 mRNA的表达随降钙素浓度的增加而增强．且中、高浓度组与空白对照组比较差异具有非常显著意义（P〈0．01）,此外降钙素刺激了phos-ERK1／2蛋白的表达。U0126可阻断以上所有效应。结论降钙素可上调成骨细胞cbfa1 mRNA的表达。且ERK-MAPK信号通路参与了此过程。     

降钙素对大鼠颅骨成骨细胞调控作用的体外观察

背景:降钙素是强有力的破骨细胞抑制剂,可直接、快速而广泛地抑制骨吸收,近年来有学者报道其有促进骨折愈合的功能,推测降钙素对成骨细胞也有直接的作用.目的:体外观察降钙素对大鼠成骨细胞的药理作用,分析其是否通过细胞外信号调节激酶信号通路产生.设计、时间及地点:分组对照观察,于2007-06/2008-05在南京医科大学药理学实验室完成.材料:选用新牛SD大鼠,分离培养颅骨成骨细胞.方法:取第2代成骨细胞进行分组实验:0.01μg/L降钙素组、0.1 μg/L降钙素组、1 μg/L降钙素组分别加入不同剂量降钙素进行干预,U0126+1 μ9g/L降钙素组提前30 min加入100 μmol/L的细胞外信号调节激酶抑制剂U0126,并设空白对照组.主要观察指标:通过四甲基偶氮唑盐比色法、对硝基苯磷酸盐法和钙结节茜素红染色法分别检测降钙素对成骨细胞的增殖、分化、矿化能力的影响;应用反转录-聚合酶链反应技术检测促骨形成关键基因核心结合因子a1 mRNA的表达情况;应用Western Blotting技术检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达情况.结果:加入0.01,0.1,1 μg/L的降钙素干预后,成骨细胞的增殖、分化、矿化能力以及核心结合因子a1 mRNA的表达均随降钙素剂量增加而增强,且0.1,1 μg/L组与空白对照组比较差异具有显著意义(P<0.05～0.01);此外降钙素促进了磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达(P<0.05).U0126可阻断以E所有效应(P<0.05～0.01).结论:降钙素可能通过细胞外信号调节激酶信号通路调控促骨形成关键基因核心结合因子al mRNA的表达,进而促进成骨细胞的增殖、分化、矿化能力.     

肠三叶因子激活ERK1/2信号通路促进胃黏膜上皮细胞增殖和迁移

目的：研究ITF对胃黏膜上皮细胞增殖和迁移的影响,及ERK1/2信号通路在其中的作用。方法：以GES-1细胞为研究对象,用Western blot检测ITF对ERK1/2信号通路的作用,以不同浓度ITF及ERK1/2信号通路抑制剂U0126处理GES-1细胞,用CCK-8检测细胞增殖,用细胞穿孔实验观察细胞迁移。比较不同浓度ITF对GES-1细胞增殖和迁移的影响,及ERK1/2信号通路在其中的作用。结果：ITF提高了pERK1/2蛋白的表达水平,U0126抑制了ITF激活的pERK1/2蛋白的表达。与对照组比较,在细胞培养的24h后,ITF以剂量依赖的方式促进了GES-1细胞的增殖和迁移。U0126抑制了ITF对GES-1细胞的促增殖和迁移作用。结论：肠三叶因子通过激活ERK1/2信号通路促进胃黏膜上皮细胞增殖和迁移。     

TNF-α通过ERK信号通路刺激骨髓间充质干细胞表达VCAM-1

本研究目的在于探讨TNF-α对人骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSC）血管细胞黏附分子．1（vascularcelladhesionmolecule1,VCAM-1）表达的影响及与ERK信号通路的关系。应用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离人BMMSC,并对其进行表面抗原表达及诱导分化鉴定。用不同浓度的TNF-α刺激BMMSC,流式细胞术检测其表面VCAM-1表达及ERK信号通路抑制剂U0126对BMMSCVCAM-1表达的影响,用Westernblot检测ERK通路活性的变化。结果表明,分离培养的BMMSC表达CD29、CD69、CD44、CDl05,不袁达CD34、CD45;BMMSC可诱导分化为成骨细胞及脂肪细胞;BMMSC膜上的VCAM-1表达随着TNF-α浓度的增加而增加;经U0126预处理后TNF-α刺激的BMMSC膜上的VCAM-1表达减少;TNF—α增加BMMSCERK信号通路的活化程度,U0126抑制TNF-α对ERK活性的作用。结论：TNF-α可能通过ERK信号通路刺激MSC表扶VCAM-1。     

硼替佐米减弱小鼠骨髓瘤细胞所致成骨细胞凋亡的作用

本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米在骨髓瘤骨病(myeloma bone disease,MBD)病理状态下对成骨细胞的影响。以小鼠骨髓瘤细胞RPMI8226与小鼠成骨细胞MC-3T3E1共培养和上清干预培养的方式,模拟体内骨髓瘤骨病状态,采用改良四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测硼替佐米对MC-3T3E1细胞的增殖抑制,Annexin V/PI染色流式细胞术检测MC-3T3E1细胞的凋亡,RT-PCR及Western blot法比较加入硼替佐米后MC-3T3E1细胞成骨相关基因及蛋白Runx2/cbfa1、OSX(osterix)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)的表达变化。结果表明:较高浓度的硼替佐米对成骨细胞MC-3T3E1的增殖抑制呈剂量依赖性,48小时IC50为38.1 nmol/L。低浓度(5 nmol/L)硼替佐米对单独培养的MC-3T3E1增殖无明显影响(p0.1),但可使与骨髓瘤细胞RPMI8226共培养及上清干预培养的MC-3T3E1凋亡比例分别降低24.6%和32.5%,并且促使成骨细胞相关基因osx、ocn的mRNA及蛋白表达增加(p0.05),而Runx2/cbfa1无明显变化(p0.05)。结论:低剂量硼替佐米可通过活化成骨细胞内部机制减弱骨髓瘤细胞引起的成骨细胞凋亡,增强Runx2/cbfa1通路中成骨细胞相关基因osx、ocn mRNA及蛋白的表达,可能在骨髓瘤骨病中保护成骨细胞,维持成骨细胞生存。     

过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞成脂分化的影响与作用机制

目的:探讨基因修饰过表达VCAM-1对小鼠间充质干细胞(MSC)成脂分化能力的影响与作用机制。方法:将稳定过表达VCAM-1的MSC细胞(MIGR1-VCAM-1)和转入空载体的MSC细胞(MIGR1)分别向脂肪细胞诱导分化,以原位油红O染色和real-time PCR检测成脂分化能力与相关关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达;Western blot检测相关信号通路P38、ERK和JNK通路的活化。利用信号通路抑制剂处理MSC,观察其成脂分化能力的变化。结果:无论是自分化组还是诱导分化组,过表达VCAM-1的MIGR1-VCAM-1/MSC与对照组MIGR1/MSC相比,脂滴变大,脂肪细胞数量显著增加(P0.01);同时在mRNA水平调控成脂分化的关键转录因子C/EBPα和PPARγ表达显著上调;Western blot检测相关信号通路,结果表明JNK通路在VCAM-1调控成脂分化中明显下调,P38及ERK通路则显著上调;加入通路抑制剂后,JNK通路抑制可显著上调MIGR1-VCAM-1/MSC成脂分化能力,脂肪数量明显增加(P0.01),且相关转录因子C/EBPα和PPARγ的mRNA表达也显著上升;而抑制P38及ERK通路则使MIGR1-VCAM-1/MSC的C/EBPα和PPARγ的mRNA表达水平下调,脂滴及脂肪细胞数则更小、更少。结论:过表达VCAM-1可促进小鼠MSC成脂分化,VCAM-1可能通过抑制JNK信号通路,活化P38及ERK通路促进小鼠MSC成脂分化能力。     

ERK1/2阻滞剂U0126抑制高频磁刺激引起的星形胶质细胞迁移

目的:目的:研究不同剂量U0126对高频磁刺激促进星形胶质细胞迁移作用的影响,为选择合适的阻滞剂量提供依据。方法:24只SD大鼠制作为脊髓损伤模型,按U0126浓度随机分为对照组(0mg/kg)、低剂量组(0.1mg/kg)、中剂量组(0.2mg/kg)及高剂量组(0.4mg/kg)各6只,U0126注射24h后4组均每日给予磁刺激,频率10Hz、强度1.52T,刺激量30脉冲,于第14天,大鼠处死,采用图像分析系统观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白-2(MAP-2)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达及脊髓损伤空洞体积的变化。结果:与对照组比较,低、中及高剂量组脊髓损伤空洞体积随着U0126剂量的增加逐渐增大,GFAP、ERK1/2的阳性表达逐渐减弱(均P0.05),高剂量组与低剂量组间差异有显著性(P0.05);中剂量组差异不明显。4组病灶区域MAP-2均呈阴性表达。结论:不同剂量的U0126可抑制磁刺激引起的星形胶质细胞的迁移。0.2mg/kg既可以完全抑制EPK信号通路,又可以减少U0126的用量,因此是一个较合适的剂量。     

AngⅡ诱导大鼠AFB表型转化、增殖及迁移的作用及其机制研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞(AFB)表型转化、增殖及迁移的作用和机制。方法采用Western Blot法检测AngⅡ诱导的ERK1/2磷酸化水平及AFB表型转化的标志产物平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达、其增殖能力应用CCK-8法检测,迁移能力应用Transwell及划痕实验进行观察;在抑制ERK1/2磷酸化后对上述结果的影响。结果 AngⅡ能诱导AFB表型转化,10-7 mol/L AngⅡ刺激24、48h后α-SMA蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05),且48h略高于24h。AFB在10-7 mol/L AngⅡ刺激10min左右ERK1/2磷酸化水平明显提高,差异有统计学意义(P0.05),随后逐渐降低,而总ERK1/2蛋白表达水平未见明显变化。U0126预处理能明显降低AngⅡ诱导的α-SMA蛋白表达及ERK1/2磷酸化水平增高,差异均有统计学意义(P0.05);U0126预处理能抑制AFB的增殖及迁移能力。结论AngⅡ能诱导AFB表型转化、增殖及迁移,ERK1/2磷酸化在其中具有重要作用,U0126能降低ERK1/2磷酸化水平,阻断相关信号通路,从而抑制AFB表型转化、增殖及迁移能力。     

MAPK/FOXA2介导香烟烟雾提取物对支气管上皮细胞分化的影响

目的:探讨吸烟对支气管上皮细胞分化的影响及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/叉头框转录因子A2(FOXA2)信号通路在此过程中发挥的作用。方法:培养BEAS-2B细胞,分为空白对照组、香烟烟雾提取物(CSE)处理组、CSE+ERK抑制剂U0126处理组、CSE+JNK抑制剂SP600125处理组、CSE+p38抑制剂SB203580处理组。ELISA测定各组磷酸化的ERK1/2、JNK、p38蛋白的水平;实时荧光定量PCR检测FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的mRNA水平;用Western印迹检测FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的蛋白水平。结果:与空白对照组相比,用CSE的细胞中磷酸化的ERK1/2、JNK、p38蛋白水平明显升高(P0.05),而FOXA2、E-cadherin、CD44、ZO-1的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P0.05);CSE处理同时采用ERK、JNK或p38抑制剂处理显著改善上述基因及蛋白表达的变化(P0.05)。结论:吸烟可影响支气管上皮细胞分化,而MAPK/FOXA2信号通路在此过程中发挥重要调节作用。     

卵巢癌细胞中ERK1／2的表达及其与细胞凋亡的关系

目的研究细胞外信号调节激酶ERK1／2在卵巢癌细胞SKOV3中的表达及其与细胞相关凋亡蛋白的关系。方法用MTY检测17β-E2对细胞的增殖情况,用MEK1／2通路抑制剂U0126在不同浓度、不同时间处理细胞后,RT—PCR检测细胞ERK1mRNA、ERK2mRNA、caspase．3mRNA的表达。结果浓度为10^-5mol／L17β-E2作用1h可显著促进细胞增殖[（5．7±0．23）％],与对照组[（3．5±0．45）％]相比,P=0．000。ERK1／2在卵巢癌中高表达,随着U0126处理细胞浓度的增加及时间的延长,ERK1的表达逐渐降低,与对照组相比,P值分别为0．176、0．009、0．002、0．000;ERK2的表达逐渐降低,与对照组相比,P值分别为0．010、0．000、0．000、0．000;caspase-3的表达逐渐增加,与对照组相比,P值分别为1．000、0．290、0．090、0．003。结论ERK1／2与卵巢癌的发生发展有关,抑制ERK1／2的表达可抑制细胞增殖,增加细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子α干预小鼠成骨细胞cbfa1/runx2基因的表达

背景：肿瘤坏死因子α可降低牙周膜纤维细胞碱性磷酸酶的活性,抑制牙周膜纤维细胞向成骨细胞的功能转化。目的：观察肿瘤坏死因子α对小鼠成骨细胞生长及cbfa1/runx2基因表达的影响。方法：取生长良好的小鼠成骨细胞系MC3T3/E1细胞,分别以20,40,60,80μg/L的肿瘤坏死因子α进行干预,以正常培养的细胞作为对照。采用RT-PCR法检测MC3T3/E1细胞cbfa 1/runx2mRNA的表达;PNPP法测定碱性磷酸酶活性;MTT法检测细胞活力。结果与结论：正常培养的MC3T3/E1细胞cbfa1/runx2 mRNA呈阳性表达,随着肿瘤坏死因子α浓度的增高,其表达水平逐渐下降。同时MC3T3/E1细胞活力和碱性磷酸酶活性也随肿瘤坏死因子α浓度的增高而下降。提示肿瘤坏死因子α可抑制MC3T3/E1细胞生长,而cbfa1/runx2可能参与了成骨细胞的分化过程。     

模拟失重状态下成骨细胞胰岛素样生长因子1基因表达与降钙素的干预

背景：航天飞行、长期卧床等低重力负荷状态会引起骨吸收和骨形成的代谢紊乱,导致骨质疏松。有研究显示降钙素有直接促进成骨细胞增殖的作用,并可增加成骨细胞胰岛素样生长因子1mRNA的表达。目的：观察降钙素和体外模拟失重状态对成骨细胞功能及胰岛素样生长因子1基因表达的影响。方法：采用二次酶消化法提取新生SD大鼠颅骨的成骨细胞,凝胶化形成成骨细胞海藻酸钠微包囊后进行实验。实验分为正常重力组、模拟失重组、模拟失重＋降钙素（10,40,80IU/L）组。将细胞置于模拟失重三维回转培养器中培养72h后,检测成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性;采用RT-PCR方法检测胰岛素样生长因子1、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA的表达。结果与结论：与正常重力组比较,模拟失重组细胞增殖率及培养基中碱性磷酸酶活性均明显降低（P〈0.01）,胰岛素样生长因子1、骨钙素、碱性磷酸酶mRNA表达减少,凋亡增多;与模拟失重组比较,模拟失重＋降钙素组细胞增殖率,胰岛素样生长因子1、骨钙素、碱性磷酸酶mRNA表达均有所增加,但无剂量依赖关系。说明降钙素可通过上调胰岛素样生长因子1mRNA表达改善模拟失重条件下成骨细胞的增殖与分泌功能。     

抑制胞浆型磷脂酶A2活性对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞分泌瘦素的影响

目的 通过改变胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的活性,检测细菌脂多糖(LPS)及Ca2+载体A23187诱导的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)上清液中瘦素(Leptin)水平的变化,探讨在体外炎症状态下cPLA2活性与细胞分泌Leptin的关系.方法 体外培养ECV-304细胞.实验1:将细胞分为空白对照组,LPS 3个浓度5、10、20 μg/ml刺激组,Ca2+载体A23187 3个浓度0.1、 1.0、10.0 μmol/L刺激组共7个组,分别作用6、12、24 h后收集上清液.实验2:根据实验1结果将细胞分为空白对照组,LPS 20 μg/ml刺激组,cPLA2特异性抑制剂AACOCF3 3个浓度0.1、1.0、10.0 μmol/L与LPS合用刺激组,丝裂素活化蛋白激酶上游激酶1/2(MEK1/2)抑制剂 U0126 3个浓度0.1、1.0、5.0 μmol/L与LPS合用刺激组共8个组,在LPS刺激前1 h加入AACOCF3或U0126,LPS刺激24 h后收集上清液.采用放射免疫分析法检测Leptin水平.结果 实验1:随LPS刺激浓度增加和时间延长,细胞释放Leptin浓度逐渐减少,LPS 20 μg/ml组作用24 h后Leptin浓度(ng/ml)较空白对照组显著下降(0.540±0.109比0.823±0.048,P<0.05).但A23187对细胞分泌Leptin并无显著影响.实验2:LPS刺激能使细胞分泌Leptin浓度(ng/ml)明显下降(0.558±0.069比0.825±0.067,P<0.05);而用不同浓度AACOCF3或U0126干预后,细胞分泌Leptin的浓度(ng/ml)有所回升,且呈浓度依赖性(AACOCF3 0.1、1.0、10.0 μmol/L组分别为0.673±0.135、 0.723±0.055、 0.797±0.062;U0126 0.1、 1.0、5.0 μmol/L组分别为0.698±0.112、 0.862±0.184、0.935±0.145),AACOCF3 1.0 μmol/L、10.0 μmol/L组和U0126 1.0 μmol/L、5.0 μmol/L组Leptin浓度均显著高于LPS 20 μg/ml刺激组(均P<0.05).结论 在由LPS诱导的体外炎症状态下,Leptin的分泌与cPLA2的活性具有一定的关系.

Abstract：

Objective To determine Leptin levels in supernatant fluid of culture of human umbilical vein endothelial cells (ECV-304) after being challenged by lipopolysaccharide (LPS) and calcium ion vector A23187, and to explore the possible relation between Leptin release and cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) activity in an inflammatory cell model. Methods ECV-304 cells were cultured in vitro. Experiment 1: the cells were divided into seven groups: blank control group, LPS 5, 10, 20 μg/ml stimulation groups, A23187 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L stimulation groups. The supernatants were collected at 6, 12 and 24 hours. Experiment 2: according to the results of experiment 1, the cells were divided into eight groups: blank control group, LPS 20 μg/ml stimulation group, the inhibitor of cPLA2 AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, the inhibitor of mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated protein kinase kinase 1/2 (MEK1/2) U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, with AACOCF3 or U0126 added 1 hour before the addition of LPS, and the supernatants were collected 24 hours after the addition of LPS. Leptin level was determined by radioimmunoassay. Results Experiment 1: with increase in LPS concentration and prolongation of time, Leptin release was decreased gradually. After 24 hours of interaction the concentration of Leptin (ng/ml) in LPS 20 μg/ml group was decreased significantly compared with the blank control group (0.540±0.109 vs. 0.823±0.048, P<0.05). However, A23187 had no significant effect on Leptin release. Experiment 2: LPS rendered cells to release less Leptin (ng/ml: 0.558±0.069 vs. 0.825±0.067, P<0.05); by adding AACOCF3 or U0126 in different concentration before adding LPS rendered the cells to release more Leptin (ng/ml), and it showed concentration-dependent (the AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L groups were 0.673±0.135, 0.723±0.055, 0.797±0.062, respectively; the U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L groups were 0.698±0.112, 0.862±0.184, 0.935±0.145, respectively). The release of Leptin in AACOCF3 1.0 μmol/L, 10.0 μmol/L and U0126 1.0 μmol/L, 5.0 μmol/L groups was significantly higher than LPS 20 μg/ml stimulation group (all P<0.05). Conclusion There is a possible relation between Leptin release and cPLA2 activity in inflammatory cells induced by LPS.     

重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖及骨代谢的调节

背景：结核杆菌热休克蛋白10是引起骨结核骨质溶解和吸收主要因素之一,抑制成骨细胞的增殖。核因子κB受体活化因子配体及骨保护素是影响骨代谢的重要指标。目的：观察重组结核杆菌热休克蛋白10对人成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性和核因子κB受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达的影响。方法：将人骨髓基质干细胞定向诱导分化筛选为成骨细胞,取第3代细胞,用含质量浓度为0.1,1,10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10培养液培养,对照组成骨细胞正常培养。结果与结论：MTT 实验结果显示,与对照组相比,不同质量浓度重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性（P＜0.05）。RT-PCR实验显示,与对照组相比,不同质量浓度的重组结核杆菌热休克蛋白10均增加成骨细胞中核因子κB受体活化因子配体mRNA表达（P＜0.01）,降低护骨素mRNA表达（P＜0.01）,均呈剂量依赖性,质量浓度10 mg/L的重组结核杆菌热休克蛋白10作用最明显（P＜0.01）。结果证实,重组结核杆菌热休克蛋白10抑制成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性,通过调节核因子κB 受体活化因子配体mRNA及骨保护素mRNA表达而影响骨代谢。     

骨关节炎软骨细胞对白细胞介素18的炎症应答

目的探讨IL-18 对骨关节炎软骨细胞的作用。方法取骨关节炎患者的膝关节软骨,进行原代细胞培养。不同浓度的IL-18（0,50,150,300 ng/mL）刺激软骨细胞,RT-PCR检测TNFα和COX-2 mRNA的表达,ELISA检测TNFα、PGE2的水平。应用IL-1 受体阻断剂（IL-1Ra）+IL-18 干预软骨细胞,检测软骨细胞COX-2 的表达量和培养液中PGE2的水平。提取软骨细胞RNA,测定IL-18受体的表达。结果对于COX-2和TNFα,300 ng/mL组和150 ng/mL组mRNA的表达量显著高于对照组（P<0.01,P<0.05）。50、300 ng/mL组的PGE2水平显著高于对照组（P<0.05）。150、300 ng/mL组的TNFα蛋白的浓度显著高于对照组（P<0.05）,IL-1Ra 组的PGE2浓度高于对照组（P<0.01）,但是低于IL-18 组（P<0.01）。软骨细胞能够检测到IL-18 受体的表达。结论IL-18诱导软骨细胞产生炎症应答,这种作用和IL-1β有关但不完全依赖IL-1β。       

ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用

目的研究在哮喘大鼠气道平滑肌细胞ASMC（airway smooth muscle cell）中ERK信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法原代培养ASMC,实验设未干预组（A组）、ERK阻断剂（U0126）组（B组）、PDGF组（C组）、PDGF＋ERK阻断剂组（D组）。B组又分为B1组、B2组、B3组、B4组,加入浓度分别为0．1μmol／L、1μmol／L、5μmol／L、10μmol／L的U0126;C组又分为C1组、C2组、C3组、C4组,加入浓度分别为1μg／L、10μg／L、25μg／L、50μg／L的PDGF—BB。免疫组化法测ERK。蛋白的表达（仅测A、B4、C4、D组）,RT—PCR法测其mRNA表达。结果ASMC中ERK,蛋白表达B4组显著低于A组（P〈0．01）,C4组显著高于A组（P〈0．01）,D组与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;B1组、B2组、B3组．B4组ERK,mRNA表达均显著低于A组（P〈0．01）,U0126以浓度依赖性的方式抑制PDGF—BB诱导ASMC中ERK的活化;C1组、C2组、C3组、C4组ERK1 mRNA表达均显著高于A组（P〈0．01）,ERK1 mRNA的表达与PDGF—BB存在明显的浓度依赖关系,D组则与A组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PDGF可剂量依赖地激活哮喘大鼠ASMC内的ERK通路,ERK通路参与了PDGF诱导的ASMC增殖的细胞内信号转导过程。     

骨形成蛋白-7对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化的影响

目的探讨骨形成蛋白-7(BMP-7)对晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的影响。方法晚期糖基化终产物诱导发生上皮-间叶转化的体外培养大鼠腹膜间皮细胞,分别经含5 ng/mL及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基和含10 ng/mL BMP-7及80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基培养48 h,以含80 mmol/L晚期糖基化终产物的M199培养基为对照,应用实时定量PCR法检测间皮细胞E-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(Collagen I)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达;应用Western印迹法检测E-cadherin、α-SMA蛋白的表达;应用ELISA法检测间皮细胞TGF-β1、VEGF蛋白表达水平。结果 BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin mRNA和E-cadherin蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。BMP-7作用后,上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮α-SMA、Collagen I、TGF-β1、VEGFmRNA和α-SMA、TGF-β、VEGF蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论 BMP-7能上调上皮-间叶转化的大鼠腹膜间皮细胞E-cadherin表达和下调α-SMA、Collagen I、TGF-β、VEGF表达,BMP-7能逆转晚期糖基化终产物诱导大鼠腹膜间皮细胞EMT。