小檗胺对高钾,去甲肾上腺素及咖啡因引起大鼠心肌细胞内钙动拮？…

AIM: To study the effects of berbamine (Ber) on intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) mobilized by KCl depolarization, norepinephrine (NE), and caffeine. METHODS: [Ca2+]i was measured with fluorescent intensity (FI) by confocal microscope in single cultured cardiomyocytes of newborn rats loaded with Fluo 3-AM 2 mumol.L-1. RESULTS: FI value of [Ca2+]i in control level was 248 +/- 70 in the presence of extracellular calcium 1.5 mmol.L-1 and was not changed by Ber 3-30 mumol.L-1. KCl (60 mmol.L-1)- and NE (30 mumol.L-1)-induced [Ca2+]i mobilizations were inhibited (P < 0.01) by Ber 30 mumol.L-1, similar to that of verapamil (Ver). The inhibitory effect of Ber on [Ca2+]i induced by KCl was further increased (P < 0.05) in the presence of egtazic acid 3 mmol.L-1, but that on [Ca2+]i induced by NE was not changed. The [Ca2+]i mobilized by caffeine 80 and 160 mumol.L-1 in D-Hanks' solution was not affected (P > 0.05) by Ber and Ver. CONCLUSION: Ber possessed the antagonistic effects on [Ca2+]i increases via voltage-dependent Ca2+ channel and receptor-operated Ca2+ channel in newborn rat cardiomyocytes, but without effect on intracellular Ca2+ release.     

小檗胺对ATP诱导的培养平滑肌及心肌细胞内游离钙动员的影响

目的:研究小檗胺(Ber)对ATP诱导的细胞内钙动员的作用。方法:以Fura 3-AM负载培养的VSMC和心肌细胞,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化。结果:(1)ATP使VSMC和心肌细胞内钙升高,但VSMC核区不明显。(2)Ber对静息荧光强度无影响,但降低ATP升高的胞内钙(P<0.01),Ber 100μmol·L~(-1)延长达峰值的时间(P<0.01),并不能完全抑制ATP升高的胞内钙。(3)在无外钙时,Ber对ATP诱导的胞内钙升高无抑制作用(P>0.05)。(4)Ber的作用与维拉帕米(Ver)相似。结论:ATP引起细胞外钙内流和内钙释放,Ber可阻断ATP引起的外钙内流,对其内钙释放无影响。     

小檗胺对ATP诱导的培养平滑肌及心肌细胞内游离钙动员的影响

目的：研究小檗胺（Ｂｅｒ）对ＡＴＰ诱导的细胞内动员的作用。方法：以Ｆｕｒａ３－ＡＭ负载培养的ＶＳＭＣ和心肌细胞,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化。结果：（１）ＡＴＰＣ使ＶＳＭＣ和心肌细胞内钙升高,但ＶＳＭＣ核区不明显。（２）Ｂｅｒ对静息荧光强度无影响,但降低ＡＴＰ升高的胞内钙（Ｐ〈０．０１）,Ｂｅｒ１００μｍｏｌ．Ｌ＾－１延长达峰值的时间（Ｐ〈０．０１）,并不能完全抑制ＡＴＰ升高的胞内钙。（３     

小檗胺对培养的HeLa细胞内游离钙浓度的作用

AIM: To study the involvement of Ca2+ signaling and the effects of berbamine (Ber) on intracellular calcium concentration ([Ca2+]i) elevated in cultured HeLa cells. METHODS: [Ca2+]i was measured by confocal microscopy in single HeLa cell loaded with Fluo 3-AM. The change of [Ca2+]i was represented by fluorescent intensity (FI). RESULTS: (1) In the presence of extracellular Ca2+ 1.3 mmol.L-1, the resting level of FI was 186 +/- 44, n = 49 cells from all control experiments, and KCl, NE, caffeine, and calcimycin (Cal) all induced [Ca2+]i elevations in cultured HeLa cells. (2) The resting level of FI was not affected by pretreatment with Ber. The FI increased by KCl 60 mmol.L-1, NE 100 micromol.L-1, and Cal 30 micromol.L-1 were attenuated (P < 0.05 or P < 0.01), the slope and the time to peak of FI increase were decreased and prolonged. (3) In the absence of extracellular Ca2+, caffeine 80 mmol.L-1-induced [Ca2+]i mobilization was not inhibited by Ber 100 micromol.L-1 pretreatment. (4) These effects of Ber were similar to those of verapamil (Ver) 10 mumol.L-1. CONCLUSION: Although it was derived from cervical cancer, the HeLa cells which were belong to the nonexcitable cell possessed the similar biological properties with excitable cells, and Ca2+ also played a crucial role in signal transduction processes.     

小檗胺对培养的HeLa细胞内游离钙浓度的作用(英文)

目的:研究Ca~(2 )信号传导是否参与Hela细胞的信号传导过程以及小檗胺(Ber)对HeLa细胞内钙浓度([Ca~(2 )]_i)变化的影响。方法:Fluo 3-AM负载HeLa细胞,共聚焦法测定[Ca~(2 )]_i,结果以荧光强度(FI)表示。结果:(1)有外钙时,HeLa细胞静息FI为186±44,KCl、NE、Cal,及咖啡因均升高HeLa细胞的[Ca~(2 )]_i。(2)Ber处理后,静息FI无影响,但抑制KCl、NE和Cal引起的[Ca~(2 )]_i升高(P<0.01),FI变化的速率减慢,达峰值的时间延长。(3)无外钙时,咖啡因诱导的[Ca~(2 )]_i升高不被Ber抑制。(4)Ber的上述作用与Ver的作用相似。结论:HeLa细胞属于非兴奋性细胞,但部分生物学特征与兴奋性细胞相似,Ca~(2 )同样在其信息转导中发挥重要作用。     

家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究(英文)

观察小檗胺 ( Ber)对高钾除极 ,Bay K8644,5-羟色胺 ( 5- HT)及咖啡因升高细胞内钙水平( [Ca2 + ]i)的影响。以 Fluo- 3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 ( VSMC) ,共聚焦显微术测定[Ca2 + ]i,结果以荧光强度 ( FI)表示 .结果 :( 1 )在细胞外钙为 1 .3mmol· L-1时 ,VSMC胞浆静息 FI明显高于核区 ,且不受 Ber的影响 . ( 2 ) Ber 1 0 -1 0 0 μmol·L-1预处理可抑制 KCl60 mmol·L-1或Bay K86441 0 0 μmol·L-1升高的 [Ca2 + ]i,抑制 5-HT 1μmol· L-1升高 [Ca2 + ]i 的持续相 ,但不影响[Ca2 + ]i 的一过性升高。维拉帕米 1 0 μmol· L-1具有相似作用 . ( 3)在无钙 Hanks液中 ,Ber预处理对咖啡因 1 0 0 mmol·L-1升高的 [Ca2 + ]i 无明显抑制作用。结果表明 ,Ber可阻断外钙内流 ,但不抑制内钙释放 ,这可能与 Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关 .     

家兔主动脉血管平滑肌细胞内钙动员及小檗胺作用的共聚焦研究

观察小檗胺 (Ber) 对高钾除极,Bay K8644,5-羟色胺 (5-HT) 及咖啡因升高细胞内钙水平 (［Ca²⁺］_i) 的影响。以Fluo-3/AM负载家兔培养的主动脉平滑肌细胞 (VSMC),共聚焦显微术测定［Ca²⁺］_i,结果以荧光强度(FI)表示. 结果：(1) 在细胞外钙为1.3 mmol·L^-1时, VSMC胞浆静息FI明显高于核区, 且不受Ber的影响. (2) Ber 10-100 μmol·L^-1预处理可抑制KCl 60 mmol·L^-1或Bay K8644 100 μmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i,抑制5- HT 1 μmol·L^-1升高［Ca²⁺］_i的持续相,但不影响［Ca²⁺］_i的一过性升高。维拉帕米10 μmol·L^-1具有相似作用. (3) 在无钙Hanks液中,Ber预处理对咖啡因100 mmol·L^-1升高的［Ca²⁺］_i无明显抑制作用。结果表明,Ber可阻断外钙内流,但不抑制内钙释放,这可能与Ber阻断电压依赖性钙通道和受体依赖性钙通道的作用有关.     

小檗胺对ROCC介导的血管平滑肌细胞内游离钙的影响

目的　研究小檗胺 (BA)对受体调控性Ca2 +通道介导的家兔胸主动脉血管平滑肌细胞内游离钙 ([Ca2 +]i)的影响。方法　家兔主动脉血管平滑肌以Fluo 3/AM负载 ,通过激光扫描共聚焦显微镜 (LSCM )测定 [Ca2 +]i。结果　在细胞外Ca2 +存在的条件下 ,BA 30 μmol·L-1不影响静息[Ca2 +]i;但对去甲肾上腺素 (NE) 30mmol·L-1、5 羟色胺 (5 HT) 1μmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高有明显的抑制作用。在无胞外钙时 ,对咖啡因 40mmol·L-1诱导的 [Ca2 +]i 升高没有作用。结论　BA对ROCC激活后的外钙内流有明显的抑制作用 ,对内钙释放没有影响。其作用与维拉帕米相似     

小檗碱对培养的新生大鼠心肌细胞内游离钙含量的影响

采用Ｃａ２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子的荧光探针，利用ＡＲ－ＣＭ－ＭＩＣ阳离子测定系统。检测了培养新生大鼠心肌细胞内游离钙的浓度，并观察了小檗碱对去甲肾上腺素，Ｈ２Ｏ２，高Ｃａ２＋及高Ｋ＋引起细胞内钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化的影响。小檗碱对心肌细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ无明显影响，能浓度依赖地抑制去甲肾上腺素和Ｈ２Ｏ２引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高。小檗碱５０μｍｏｌ·Ｌ－１能抑制高Ｋ＋引起的［Ｃａ２＋］ｉ的升高，而小剂量（１－１０μｍｏｌ·Ｌ－１）则无作用。对搏动细胞，小檗碱能抑制其［Ｃａ２＋］ｉ瞬间变化的最大值，对最小值则无作用。     

细胞内游离钙与柯萨奇病毒B_3诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡(英文)

目的:探讨[Ca~(2 )]_i在柯萨奇病毒(CV)B_3诱导心肌培养细胞凋亡中的作用。方法:DNA裂点检测法(3'-末端标记)及扫描电镜检测细胞凋亡,Fluo3-AM负载心肌细胞,共聚焦显微镜观察[Ca~(2 )]_i荧光强度变化,结果:感染24 h,心肌细胞内CVB_3的浓度达峰值,感染10 h未见凋亡的心肌细胞,17,24和36 h凋亡细胞分别为5％,60％和90％,感染17 h心肌[Ca~(2 )]_i浓度达峰值,电镜结果提示凋亡的特征,结论:CVB_3可诱导培养心肌细胞的凋亡过程,细胞内Ca~(2 )参与凋亡细胞的信息转导过程,并在凋亡早期发挥重要作用。     

维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱拮抗TNFα诱导单个内皮细胞胞内游离Ca^2＋浓度的增高

目的：研究肿瘤坏死因子（TNFα）对单个内皮细胞胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的影响及维拉帕米（Ver)、噻庚啶（Cyp)和山莨菪碱（Ani)对TNFα介导休克和Cyp、Ani的抗休克的机制。方法：人脐静脉内皮细胞株（ECV304）接种于35mm含有2mL DMEM培养基的组织培养盘中培养,Fluo-3/AM负载细胞,激光扫描共聚集显微技术测定单个内皮细胞[Ca^2 ]i。结果：TNFα使单个内皮细胞[Ca^2 ]i呈剂量依赖性升高,在60s内达到峰值,然后下降并保持在基础水平之上。共聚焦扫描图像显示细胞核区[Ca^2 ]i升高比胞浆区明显,下降比胞浆区慢。维拉帕米1和2,噻庚啶30和60或山莨菪碱20和40μmol/L均能显著抑制由TNFα 1.2nmol/L诱导的单个内皮细胞[Ca^2 ]i升高。结论：TNFα介导休克的重要机制;维拉帕米、噻庚啶和山莨菪碱对TNFα诱导的[Ca^2 ]i升高有拮抗作用,可能是噻庚啶和山莨菪碱抗休克作用的机制之一。     

苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响

目的:比较苦参碱、青蒿素和粉防己碱对分离的豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响。方法:用酶解法急性分离的豚鼠心室肌细胞先用Fluo 3-AM负载,然后用激光扫描共聚焦法检测单个豚鼠心室肌细胞胞浆钙的荧光强度。结果:(1)KCl 60mmol·L~(-1)可升高心室肌细胞胞浆钙荧光强度,其荧光强度从299±19升高到1389±325(P<0.01)。(2)苦参碱和青蒿素在浓度为100μmol·L~(-1)可使KCl 60mmol·L~(-1)引起的外钙内流增多,其荧光强度分别从301±14和299±16升高到1495±320和1646±308(P<0.05)。(3)粉防己碱1、10及100μmol·L~(-1)和维拉帕米10μmol·L~(-1)可抑制KCl引起的外钙内流。(4)在正常细胞外液中,苦参碱1、10和100μmol·L~(-1)可使细胞内荧光强度增强,其荧光强度分别从303±27,300±32,296±19上升到441±96,504±112,643±126(P<0.05)。(5)在无钙细胞外液中,粉防己碱1和10μmol·L~(-1)可明显抑制咖啡因20mmol·L~(-1)引起的胞浆钙升高(P<0.05)。结论:苦参碱、青蒿素和粉防己碱对豚鼠心室肌细胞胞浆钙的影响不同。青蒿素和苦参碱可加强电压依赖性钙内流,而粉防己碱与维拉帕米作用相似,抑制这种钙内流。苦参碱本身可以促进外钙内流。     

大蒜新素对分离大鼠脑细胞内游离Ca~(2 )的影响

目的:观察大蒜新素对不同刺激剂所致分离大鼠脑细胞内游离钙的影响。方法:以Fura 2-AM为细胞内游离钙的荧光指示剂,用AR-CM-MIC阳离子测定系统,直接测定了分离新生大鼠脑细胞内游离钙([Ca~(2 )]_i)值,观察了大蒜新素的影响。结果:大蒜新素对脑细胞静息[Ca~(2 )]_i无明显影响,大蒜新素1-100μmol·L~(-1)能剂量依赖性地抑制高K~ 和谷氨酸引起的[Ca~(2 )]_i升高,其中IC_(50)分别为59.7和69.9μmol·L~(-1),高剂量大蒜新素100μmol·L~(-1)能抑制去甲肾上腺素引起的[Ca~(2 )]_i升高。结论:大蒜新素对高K~ 、去甲肾上腺素及谷氨酸引起的[Ca~(2 )]_i升高的抑制作用可能是其抗脑缺血作用机制之一。     

银杏提取物对过氧化氢损伤的培养大鼠心肌细胞的保护作用

目的:探讨银杏叶提取物(GbE)对过氧化氢损伤的培养心肌细胞的保护作用及其机制。方法:比色法测定乳酸脱氢酶活性;戊巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化物含量;透射电镜下观察细胞超微结构。结果:过氧化氢导致心肌细胞LDH释放从(2166±247)U·L~(-1)增至(5180±648)U·L~(-1),MDA含量从每10~6细胞(3.5±0.2)nmol增至(7.2±0.4)nmol;心肌细胞超微结构受到严重损伤。加GbE使LDH释放从(5180±648)U·L~(-1)降至(3496±386)U·L~(-1);MDA生成由每10~6细胞(7.2±0.4)nmol降至(4.8±0.9)nmol并减轻心肌超微结构的损伤。结论:GbE通过清除氧自由基保护过氧化氢损伤的心肌细胞。