缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

OBJECTIVE: To investigate the effect of hypoxia on the viability of rat brain astrocytes in vitro and determine the optimal duration of hypoxic treatment for studying the biological behavior of the in vitro cultured cells in response to hypoxia. METHODS: Rat astrocytes were cultured and identified by glial fibrillary acidic protein (GFAP) immunofluorescent staining. After incubation with 5%; CO(2)+95%; N(2) for different time to induce hypoxia, the cells were harvested and observed microscopically for morphological changes and counting of the dead cells. The culture media of the cells were also collected and pO(2), concentrations of glucose and lactate as well as lactate dehydrogenase (LDH) activity were analyzed. RESULTS: As the hypoxia prolonged, the astrocytes appeared swollen and floating in the medium with some becoming necrotic. Compared with the cells in the control group, the changes in the number of necrotic cells, concentrations of glucose and lactate, and LDH activity in the cells of the hypoxic group were significantly different after 10 h of hypoxia (P<0.05). However, the flat and polygonal morphology of the astrocytes almost remained unchanged after 8 h of hypoxia in spite of significant changes in the concentrations of glucose and lactate and LDH activity. CONCLUSION: Hypoxia induced injury and necrosis of rat brain astrocytes in vitro, and 8 h of hypoxia can be the optimal time point for studying the biological behaviors of the cells in response to hypoxia.     

1,6-二磷酸果糖对缺氧缺血性脑病新生儿内环境的影响

目的探讨早期用1,6-二磷酸果糖(FDP)对窒息后机体内环境的恢复是否有帮助。方法在常规治疗的基础上对62例HIE患儿于生后48 h内加用FDP,剂量为250 mg/(kg·d),30 min内静脉滴注完,疗程为7 d, 而对照组62例仅为常规治疗。所有观察对象分别在治疗前、后采血检测血清酶(CK,CK-MB,LDH,AST,HBDH)并于入院24 h内、第3,7天行新生儿危重病例评分。结果治疗前两组患儿血清酶值比较差异无显著性(P> 0.05);治疗后两组血清酶值较治疗前均有所下降,但FDP组下降明显,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。中重度HIE,第3天FDP组非危重比率明显大于对照组(P<0.05)。结论早期用FDP能有效促进血清酶恢复到正常,尽早逆转患儿的危重状况,保证机体内环境的稳定。     

1,6-二磷酸果糖治疗新生儿缺氧缺血性脑病

目的　探讨 1,6—二磷酸果糖 (FDP)治疗新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)的疗效。方法　选择 2 0 0 0年 10月至 2 0 0 2年 3月本院收治新生儿HIE6 0例。随机分为两组 ,即FDP治疗组和对照组。应用FDP5～ 7d后查头颅CT。结果　临床疗效 ,治疗组有效率 89.3% ,对照组为 6 4 .6 % ,两组有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。头颅CT ,治疗组异常率 17.9% ,对照组为4 3.8%有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　FDP能显著改善HIE患儿临床症状 ,促进脑细胞代谢和脑功能恢复     

缺氧对体外培养的大鼠脑星形胶质细胞存活的影响

目的 研究缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞活性及损伤的影响,确定星形胶质细胞体外培养的最佳缺氧时间点以对其进行深入研究。方法 体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞,纤维酸性蛋白免疫荧光染色鉴定。通以5%CO₂+95%N₂混合气体造成缺氧,分别观察缺氧不同时间段星形胶质细胞光镜下的形态变化,死亡细胞数目,培养上清液的氧分压、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化。结果 星形胶质细胞在缺氧条件下,随着时间延长,细胞逐渐出现肿胀、漂浮和坏死。与对照组相比,缺氧10h组死亡细胞数、葡萄糖和乳酸盐的浓度及乳酸脱氢酶(LDH)活性的变化均有明显差异(P<0.05),且与缺氧时间呈正相关,其中缺氧组细胞培养上清液中葡萄糖浓度比对照组明显降低,而乳酸盐浓度和LDH活性则明显升高,而缺氧8h组虽然葡萄糖和乳酸盐的浓度及LDH活性的变化明显,但星形胶质细胞保存着多突触的形态。结论 缺氧可致体外培养的鼠脑星形胶质细胞损伤甚至死亡,缺氧8h可作为以体外培养的鼠脑星形胶质细胞为研究对象的缺氧生物学研究的最佳时间点。     

瘦素对缺血缺氧损伤脑星形胶质细胞凋亡的影响

目的 研究瘦素对缺血缺氧/复氧损伤星形胶质细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 制作缺血缺氧大鼠脑皮质星形胶质细胞损伤模型,MTT法检测星形胶质细胞活力;采用Annexin V-FITC试剂盒检测星形胶质细胞凋亡;RT-PCR和Western blot方法检测凋亡相关基因bcl-2、bax、caspase-3的表达.结果 与缺血缺氧损伤组比较,瘦素干预组星形胶质细胞存活率升高(P<0.01)、凋亡率下降(P<0.01);抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调(P<0.01),促凋亡基因bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平下调(P<0.01),呈剂量依赖性.结论 瘦素能够使凋亡相关基因bcl-2表达上调、bax和caspase-3表达下调,从而抑制缺血缺氧损伤星形胶质细胞发生凋亡.     

1,6-二磷酸果糖心肌保护的研究进展

1，6-二磷酸果糖(FDP)在能量代谢过程中是葡萄糖及糖原氧化供能的重要中间产物，对于保证糖酵解顺利进行具有非常重要的意义，在临床得到普遍应用。除此之外，FDP还具有稳定细胞膜、减轻炎症反应、抑制氧自由基、抑制细胞凋亡等作用，对细胞结构及功能具有明确的保护作用。近年来FDP在心肌细胞保护及心脏功能恢复方面研究较多，也证明了其有效性，作者对此作一综述。     

1,6二磷酸果糖治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察

为了探讨1,6二磷酸果糖（FDP）在新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）急性期治疗中所起的作用及临床意义,对50例新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）急性期患儿随即分为两组（分别为25例）,常规治疗为对照组,观察组为常规治疗的基础上加用1,6二磷酸果糖（FDP）治疗。结果用确切概率法进行统计分析。结果显示治疗组有效（评分4—7分组、0—3分组分别93％、90％）高于对照组（评分4-7分组、0～3分组分别40％、30％）,差异有显著性（P〈0．05）。表明治疗组病例应用FDP治疗后,临床症状、体征均迅速改善,疗效确切、安全,未发现任何毒副作用,值得临床应用。     

1,6-二磷酸果糖联合复方丹参注射液佐治新生儿缺氧缺血性脑病

目的　观察 1,6 -二磷酸果糖 (FDP)联合复方丹参注射液治疗新生儿缺氧缺血性脑病 (HIE)的疗效。方法　对住院的 96例HIE分为治疗组 5 0例 ,对照组 46例 ,两组患儿均给予常规综合治疗 ,治疗组在此基础上加用FDP 2 5 0mg/kg·d ,0 .5h内静脉滴注 ,复方丹参注射液 3ml加入 5 %葡萄糖溶液中静脉滴注 ,7d为 1疗程。观察两组临床疗效 ,14d后CT检查情况 ,出院时新生儿行为神经测定 ,进行统计学分析。结果　治疗组临床疗效明显优于对照组 (P <0 .0 5 ) ,有效病例临床症状消失时间明显短于对照组 (P <0 .0 5 ) ,CT检查正常率明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,出院时NBNA评分显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　在常规治疗HIE的基础的加用 1,6 二磷酸果糖及复方丹参注射液可明显提高疗效 ,对降低HIE病死率、致残率有一定的临床价值。     

1,6-二磷酸果糖对犬体外循环中肺缺血-再灌注损伤保护作用的研究

目的探讨不同剂量1,6-二磷酸果糖(Fructose-1,6-d iphosphatin,FDP)对犬体外循环(Card iop-u lmonary Bypass)肺缺血-再灌注(Ischem ia-reperfusion,IR)损伤的作用效果和可能机制。方法建立犬体外循环IR损伤模型,将18只健康杂种犬随机分为三组:FDP大剂量组,FDP小剂量组,生理盐水对照组,每组各6只。在体外循环转机前(T1),阻断升主动脉30 m in(T2)、45 m in(T3),开放升主动脉45m in(T4),90m in(T5)检测各组肺组织Na /K -ATP酶活力、Ca2 /Mg2 -ATP酶活力超氧化物歧化酶(Superoxide d ismutase)活力、黄嘌呤氧化酶(xanth ine oxidase)活力、丙二醛(M alond ialdehyde)含量。体外循环转机前和结束时取右下肺组织测定肺湿/干比(W/D)值。结果(1)生理盐水对照组与FDP小剂量组肺组织比较:上述指标差别无显著性意义(P>0.05)。(2)生理盐水对照组和FDP大剂量组比较,肺组织SOD活力、Na /K -ATP酶活力和Ca2 /Mg2 TP酶活力水平均明显降低(P<0.05);肺组织肺湿/干重比值、XOD活力和MDA含量水平均明显增高(P<0.05)。(3)FDP大剂量组和FDP小剂量组比较:肺组织SOD活力、Na /K -ATP酶活力和Ca /Mg2 -ATP酶活力水平均明显增高(P<0.05);肺组织肺湿/干重比值、XOD活力和MDA含量水平均明显降低(P<0.05)。结论(1)犬CPB中持续静滴大剂量1,6-二磷酸果糖(1 300mg/kg)可通过调节细胞ATP酶活力、SOD活力、XOD活力较大程度减轻肺组织缺血-再灌注损伤。(2)犬CPB中持续静滴小剂量1,6-二磷酸果糖(325mg/kg)对肺组织缺血-再灌注损伤无保护作用。     

1,6-二磷酸果糖钙盐的制备研究

目的研究1,6-二磷酸果糖(FDP)钙盐3种制备方法对收率和钙盐中FDP含量的影响。方法采用直接沉淀法、乙醇沉淀法、离子交换树脂法3种方法制备FDP钙盐并测定钙盐中的FDP含量。结果直接沉淀法收率86％、钙盐的FDP含量为22.3％;乙醇沉淀法收率92％、钙盐的FDP含量为43．8％;离子交换树脂法收率42％、钙盐的FDP含量为48．7％。结论3种钙盐制备方法各有优点。生产时可根据需要选用合适的方法。     

CD147、MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在不同级别的脑胶质瘤中的表达及其意义

目的探讨CD147、MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在胶质瘤中的表达及其相关性,方法采用免疫组织化学法对78例石蜡包埋的胶质瘤组织和12例正常脑组织进行标记和分析。结果CD147、MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的阳性率分别为62%、66%、64%、75%、59%、59%,采用Spearm an进行相关性分析,他们与胶质瘤的恶性程度均呈正相关（rs=0.2671-0.5631,P〈0.05）,CD147与MMP-1、MMP-2和MMP-9呈正相关（rs=0.3481-0.4951,P〈0.05）。结论CD147、MMPS、TIMPs可以作为临床判断胶质瘤预后的分子生物学标志。     

P2X_7受体在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后表达下调

目的 了解P2X_7受体在新生大鼠缺氧缺血型脑损伤后的表达变化.方法 选择出生7 d的SD大鼠建立新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型,通过Western blot和免疫组化检测缺氧缺血前后脑皮层、白质、海马P2X_7受体表达.结果 缺氧缺血后2 h,患侧皮层、白质和海马P2X_7受体蛋白较假手术对照组明显下调(P<0.05,P<0.01);免疫组化也显示患侧皮层、白质和海马P2X_7,受体表达下降.结论 P2X_7受体可能参与了新生鼠缺氧缺血性脑损伤过程.     

MMP-1、MMP-2、MMP-9在脑胶质瘤中的联合检测及其意义

目的：探讨MMP-1、MMP-2、MMP-9在胶质瘤中的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学法对78例石蜡包埋的胶质瘤组织和12例正常脑组织进行标记和分析。结果：MMP-1、MMP-2、MMP-9在正常脑组织中几乎不表达;而在胶质瘤中的阳性率分别为66%、64%、75%,联合检测率为62%,采用Spearm an进行相关性分析,它们与胶质瘤的恶性程度均呈正相关（rs=0.2671～0.5631,P〈0.05）。结论：联合检测这3个指标对判断胶质瘤的恶性程度和侵袭能力具有重要的意义。     

The effect of stunned myocardium on heart function and the protection of fructose－1，6－diphosphate on it

Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔｕｎｎｅｄｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｏｎｈｅａｒｔｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｏｆｆｒｕｃｔｏｓｅ－１，６－ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｏｎｉｔ￥ＣｈｅｎＡｉｈｕａ（陈爱华）；ＱｉａｎＸｕｅｘｉａｎ（钱学贤）；ＷｕＨ...     

MDI301调节MMP-1、MMP-2、TIMP-1和前胶原蛋白的表达

目的:检测MDI301对正常细胞和高糖细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和I、III型前胶原蛋白表达的影响。探讨MDI301对糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗潜力。方法:采用Real time PCR检测人成纤维细胞中MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达水平;ELISA方法检测细胞培养基中TIMP-1蛋白表达量;Western blot检测I型和III型前胶原蛋白表达水平。结果:MDI301能降低高糖细胞中MMP-1和MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),增加TIMP-1 mRNA和细胞培养上清中TIMP-1蛋白的表达(P<0.05);同时还能增加高糖细胞中I和III型前胶原蛋白的表达量(P<0.05)。结论:MDI301可能会对糖尿病患者体内MMP-1、MMP-2、TIMP-1和I、III型前胶原蛋白的表达有相似的作用,使其有望用于糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗。     

附加二氮嗪与1,6-二磷酸果糖心麻痹液对冷保存大鼠心脏能量代谢的作用

目的观察附加二氮嗪(DZ)与1,6-二磷酸果糖(FDP)心麻痹液对冷保存大鼠心肌能量代谢的作用.方法42只SD大鼠随机分为4组,正常对照组6只;其余各组每组12只,分别为STH组(单纯St.ThomasⅡ号液),DF组(St.ThomasⅡ号液 DZ 50 μmol/L FDP 5 mmol/L),DF 5-HD组(St.ThomasⅡ号液 DZ50μmol/L FDP5mmol/L 5-羟基葵酸盐100μmol/L),在4℃条件下保存心脏6 h后,6只取左心室,测定心肌ATP、ADP、AMP含量,计算能荷;提取线粒体,测定线粒体内游离Ca2 浓度([Ca2 ]m)及线粒体呼吸功能;另外6只建立离体左心工作模型,再灌注30 min后,测量上述指标.结果与正常对照组比较,冷保存后STH组心肌ATP含量及能荷显著下降,[Ca2 ]m显著增高,线粒体Ⅲ态呼吸速率(ST3)及呼吸控制比(RCR)明显降低(P＜0.01);再灌注后心肌ATP含量及能荷没有明显改善,[Ca2 ]m进一步增高,RCR进一步降低(P＜0.01).DF组各项指标显著优于STH组(P＜0.01);线粒体ATP敏感性钾通道阻断剂5-HD可部分降低附加DZ与FDP的保护效果.结论附加DZ与FDP可显著改善St.Thomas液冷保存大鼠心脏的能量代谢.     

高压氧对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑转化生长因子β_1表达的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)在新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)后的表达及高压氧(HBO)疗对TGF-β1表达的影响. 方法 56只7日龄Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组,HIBD组和HBO组.HIBD组和HBO组根据不同的时间点又随机分为1 d,3 d,5 d三个亚组,每组8只.用免疫组化方法 检测各组大鼠大脑皮层TGF-β1表达. 结果 正常对照组未见阳性细胞表达;HIBD模型组TGF-β1的表达明显增强,高峰在损伤后的3 d;HBO组TGF-β1的表达均较HIBD组下降(P<0.01). 结论 TGF-β1参与了HIBD过程,其可能是脑组织病理损伤严重程度的又一标志.高压氧疗可降低新生大鼠HIBD后脑皮层TGF-β1的表达.     

MMP-2、MMP-9及TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达

目的 探讨金属基质蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1在非黑色素性皮肤癌中的表达.方法 取皮肤癌手术切除标本40份,进行免疫组化检测MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-2、TIMP-1的表达.结果 MMP-2、MMP-9在非黑色素皮肤癌中的表达的阳性率、染色强度、表达强度均显著高于正常皮肤.TIMP-2、TIMP-1在非黑色素皮肤癌中的表达的阳性率、染色强度、表达强度均显著低于正常皮肤.结论 基质金属蛋白酶（MMP）在非黑色素性皮肤癌中呈高表达,基质金属蛋白酶组织抑制因子呈低表达,两者比例失衡与皮肤癌的浸润和转移有关.     

HIBD新生大鼠海马神经元血红素加氧酶-1的表达及纳洛酮的干预作用

目的:研究新生大鼠脑缺氧缺血(hypoxia-ischemia,H/I)后血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)活性和蛋白表达的变化?海马神经元凋亡及纳洛酮注射液的干预作用?方法:新生7日龄SD大鼠随机分为3组:假手术组(S)?生理盐水对照组(C)?纳洛酮干预组(N)?每组按照观测的时间点(H/I后3 h?6 h?12 h?24 h?3 d?7 d)分为6个亚组,每个亚组8只?用Rice法制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)模型?将大鼠断头取右侧海马组织匀浆,Western blot 方法测HO-1蛋白表达,分光光度计法检测HO-1活性变化,用TUNEL染色法检测海马CA1区的细胞凋亡?结果:① Western blot 显示S组海马HO-1表达很弱,各时间点表达无差异(P > 0.05),C组和N组右侧海马HO-1表达在H/I后3 h即明显增加(P < 0.01),24 h达到峰值,3 d后明显下降,7 d接近S组,但仍较正常偏高(P < 0.01),N组在12 h?24 h?3 d?7 d海马HO-1表达均较C组高(P < 0.01)?② C组和N组右侧海马HO-1活性在H/I后3 h即明显增加(P < 0.01),H/I后24 h海马HO-1活性达到峰值,3 d后明显下降,7 d接近S组(P = 0.168),N组在12 h?24 h?3 d海马HO-1活性均较C组高(P < 0.01)?③TUNEL显示S组各时间点右侧海马CA1区仅见少量凋亡细胞,H/I后3 h C组和N组右侧海马神经元凋亡细胞数即明显增加(P < 0.01),24 h达到高峰,3 d开始下降,7 d时仍高于S组(P < 0.01),N组凋亡数在24 h?3 d?7 d这3个时间点上均较C组明显下降(P < 0.01)?结论:H/I后脑海马组织细胞中HO-1活性及蛋白表达均增加,与H/I后海马组织的细胞凋亡趋势相一致,在时间上吻合,表明HO-1参与了新生大鼠H/I后细胞凋亡的病理过程,纳洛酮注射液能够促进HO-1的表达及活性,抑制神经元凋亡,发挥神经保护作用?